一種提取中藥陳皮中的黃酮類有效成分的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提取中藥陳皮中的黃酮類有效成分的方法，所述黃酮類有效成分為橙皮苷、川陳皮素、桔皮素中的一種或兩種以上，所述方法為：取陳皮藥材粉末和分子篩吸附劑，以質(zhì)量比1：0.25～3比例混合，加入研缽中研磨，取固相萃取小柱，底部加入篩板，用研磨好的固體填充小柱，將填料填實(shí)后頂部再加入篩板，將填好的小柱置于固相萃取儀上，取洗脫劑，注入小柱內(nèi)，打開固相萃取儀的抽氣泵，對小柱進(jìn)行洗脫，底部用離心管收集洗脫液，洗脫結(jié)束后，將離心管內(nèi)洗脫液渦旋、離心，取上層清液即為黃酮類有效成分提取液。本發(fā)明采用分子篩作為吸附劑，結(jié)合基質(zhì)固相分散萃取技術(shù)，能高效、環(huán)保地提取和檢測陳皮藥材中的黃酮類有效成分。
【專利說明】一種提取中藥陳皮中的黃酮類有效成分的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然藥物提取檢測領(lǐng)域。它涉及一種中藥的微量提取方法，具體地說， 它涉及由分子篩作為吸附劑，結(jié)合基質(zhì)固相分散萃取技術(shù)，用來提取微量的中藥陳皮中黃 酮類有效成分的新方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 陳皮為蕓香科植物橘（Citrus reticulata Blanco)及其栽培變種的干燥成熟果 皮。陳皮具有燥濕化痰、理氣健脾的功效，其藥材中含有大量活性成分。除揮發(fā)油外，陳皮 主含黃酮類成分。而其中的黃酮類成分又可分為黃酮苷類和多甲氧基黃酮類兩大類型。其 中，黃酮苷類主要為二氫黃酮類成分，如橙皮苷、柚皮苷等，這類成分具有清除氧自由基、抗 脂質(zhì)氧化、抗癌、抗菌、抗炎、抗病毒、延緩衰老等作用；另一類活性成分多甲氧基黃酮類，則 主要有川陳皮素、橘皮素等，這類成分有抗動脈粥樣硬化和降低血清膽固醇、抗癌、抗真菌 等藥理活性。陳皮中所含黃酮類成分中，含量最高的是二氫黃酮類成分--橙皮苷，其次是 多甲氧黃酮類中的川陳皮素和橘皮素的含量為高。
[0003] 目前，對中藥進(jìn)行提取分析的方法層出不窮。固相萃?。⊿olid-Phase Extraction，簡稱SPE)，作為近年發(fā)展起來一種樣品預(yù)處理技術(shù)，與傳統(tǒng)的樣品前處理方法 相比，分析物與干擾組分的分尚更有效，分析物的回收率更1?，省時、省力、操作簡單。故而 SPE廣泛地應(yīng)用在食品、環(huán)境、醫(yī)藥、化工、商檢等領(lǐng)域。當(dāng)然，SPE的局限性也是顯而易見： 易堵塞、易產(chǎn)生縫隙降低提取效率、截面積小、流量低、重復(fù)性差等。
[0004] 鑒于上述局限，諸多建立在SPE基礎(chǔ)上的新型提取方法，也就應(yīng)運(yùn)而生。包括磁性 固相萃取、分子印跡固相萃取、分散液相微萃取、中空纖維液相微萃取、單滴液相微萃取和 基質(zhì)固相分散萃取等。相比傳統(tǒng)的固相萃取方法，這類新型萃取方法具有的優(yōu)勢也更為明 顯，例如使用有機(jī)溶劑量少、對環(huán)境污染小、萃取時間短、萃取效率簡潔高效等。其中具有代 表性的就有基質(zhì)固相分散萃?。∕SPD)。
[0005] 基質(zhì)固相分散萃?。∕SPD)是近年來國內(nèi)外研究的一個熱門領(lǐng)域。與傳統(tǒng)的SPE不 同，MSH)是將樣品與固相吸附劑（C18反相硅膠、弗羅里硅土等）直接混合研磨，將樣品研磨 成為微小的碎片分散在固相吸附劑中。然后將此混合物填入固相萃取柱，用適當(dāng)?shù)娜軇?目標(biāo)化合物洗脫下來，目前文獻(xiàn)報(bào)道的基質(zhì)固相分散萃取技術(shù)，特別是針對天然產(chǎn)物領(lǐng)域， 其藥材量和吸附劑的量以及洗脫劑的用量較大，尤其洗脫劑用量在10mL以上，對環(huán)境會造 成污染。
[0006] 基質(zhì)固相分散萃取的核心因素是吸附劑。吸附劑種類的不同將直接影響實(shí)驗(yàn)效 果。近年來，用于基質(zhì)固相分散萃取的吸附劑材料種類繁多。目前，選作基質(zhì)固相分散萃取 的吸附劑包括：弗羅里硅土、C18反相硅膠、氧化鋁等。
[0007] 1932年，McBain提出了"分子篩"的概念。分子篩是指其內(nèi)部具有均勻的微孔，其 孔徑與一般分子大小相當(dāng)?shù)囊活愇镔|(zhì)。由于分子篩的特殊內(nèi)部結(jié)構(gòu)，使得其比表面積十分 龐大，故而分子篩的應(yīng)用非常廣泛，例如可以作選擇性吸附劑、高效干燥劑、催化劑、離子交 換劑等。
[0008] 截止目前，基于微量體系的基質(zhì)固相分散萃取技術(shù)，在整個分析化學(xué)領(lǐng)域中未見 報(bào)道，且以分子篩作為吸附劑，并結(jié)合基質(zhì)固相分散萃取技術(shù)，在中藥的活性成分提取檢測 方面也尚未見報(bào)道，該方法對于中藥陳皮的提取檢測這一研究領(lǐng)域更是一片空白。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于尋求一種比以往更加高效環(huán)保的中藥提取檢測技術(shù)，使其應(yīng)用 于陳皮藥材提取檢測。發(fā)明要點(diǎn)在于創(chuàng)造性地將分子篩作為吸附劑，并應(yīng)用在基質(zhì)固相分 散萃取領(lǐng)域。分子篩作為基質(zhì)固相分散萃取的吸附劑與陳皮藥材中的目標(biāo)分子吸附結(jié)合， 可使目標(biāo)分子從藥材粉末中快速提取、收集，且本發(fā)明在一個微量體系中實(shí)施，相比藥典的 提取方法，本發(fā)明的有機(jī)溶劑使用量大大減少。
[0010] 本發(fā)明具體提供了一種以分子篩作為吸附劑，結(jié)合基質(zhì)固相分散萃取技術(shù)，提取 為微量中藥藥材中目標(biāo)分子的方法?？捎糜谔崛z測微量陳皮藥材中的黃酮類有效成分。 [0011] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
[0012] 一種提取中藥陳皮中的黃酮類有效成分的方法，所述黃酮類有效成分為橙皮苷、 川陳皮素、桔皮素中的一種或兩種以上，所述方法包括以下步驟：
[0013] 取陳皮藥材粉末和分子篩吸附劑，以質(zhì)量比1 :0. 25?3比例混合，加入研缽中研 磨，取固相萃取小柱，底部加入篩板，用研磨好的固體填充小柱，將填料填實(shí)后頂部再加入 篩板，將填好的小柱置于固相萃取儀上，取洗脫劑，注入小柱內(nèi)，打開固相萃取儀的抽氣泵， 對小柱進(jìn)行洗脫，底部用離心管收集洗脫液，洗脫結(jié)束后，將離心管內(nèi)洗脫液渦旋、離心，取 上層清液即為黃酮類有效成分提取液；
[0014] 本發(fā)明所述分子篩吸附劑可于市場上直接購買獲得，本發(fā)明實(shí)施例中所用的分子 篩吸附劑購于南京先豐納米材料科技有限公司，型號為SBA-15。
[0015] 所述陳皮藥材粉末和分子篩吸附劑的質(zhì)量比為1 :〇. 25?3,優(yōu)選為1:1。
[0016] 所述研磨的時間為110s-190s，優(yōu)選為150s。
[0017] 所述固相萃取小柱有不同體積規(guī)格，根據(jù)陳皮藥材粉末和分子篩吸附劑研磨后固 體的體積量來選擇合適體積的固相萃取小柱即可，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。
[0018] 所述的洗脫劑優(yōu)選甲醇、乙醇、乙腈、丙酮或乙酸乙酯，優(yōu)選為甲醇。
[0019] 所述洗脫劑的體積用量優(yōu)選以陳皮藥材粉末的質(zhì)量計(jì)為0. 016?0. 032mL/mg，優(yōu) 選0· 02mg/mL。所述離心優(yōu)選在13000rpmin離心5min。
[0020] 進(jìn)一步，本發(fā)明方法針對微量樣品，優(yōu)選按以下步驟操作：
[0021] 稱取陳皮藥材粉末25mg、按照質(zhì)量比1:1稱取分子篩25mg，加入研缽中研磨150s， 取lmL規(guī)格固相萃取小柱，底部加入篩板，用研磨好的固體填充小柱，將填料填實(shí)后頂部再 加入篩板，將填好的小柱置于固相萃取儀上，取〇. 5mL甲醇，注入小柱內(nèi)，打開固相萃取儀 的抽氣泵，對小柱進(jìn)行洗脫，底部用1. 5mL規(guī)格離心管收集洗脫液，洗脫結(jié)束后，將離心管 內(nèi)洗脫液渦旋l〇s，后放入離心儀中，13000rpm離心5min，取上層清液即為黃酮類有效成分 提取液。
[0022] 本發(fā)明可通過超高效液相色譜儀（UPLC)測定陳皮藥材中有效成分的含量來表征 該基質(zhì)固相分散萃取方法的有效性。
[0023] 本發(fā)明制得的黃酮類有效成分提取液可用超高效液相色譜儀（UPLC)采樣分析， 得到提取液的液相色譜圖；
[0024] 然后以橙皮苷的對照品配制不同濃度的對照品溶液，按照提取液同樣條件用超高 效液相色譜儀檢測，獲得橙皮苷對照品的液相色譜圖，以橙皮苷對照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)， 以橙皮苷對照品的液相色譜圖中色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)制作橙皮苷素標(biāo)準(zhǔn)曲線，按同樣 方法制作川陳皮素標(biāo)準(zhǔn)曲線、桔皮素標(biāo)準(zhǔn)曲線；根據(jù)提取液的液相色譜圖中各色譜峰的峰 面積及各成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到提取液中橙皮苷、川陳皮素、桔皮素的含量，可相應(yīng)換 算得到提取的有效成分相對于陳皮藥材粉末的含量。
[0025] 因此本發(fā)明方法可用于檢測微量的陳皮藥材粉末中的黃酮類有效成分，具體的， 所述方法為：
[0026] 稱取陳皮藥材粉末25mg、按照質(zhì)量比1:1稱取分子篩25mg，加入研缽中研磨150s， 取lmL規(guī)格固相萃取小柱，底部加入篩板，用研磨好的固體填充小柱，將填料填實(shí)后頂部再 加入篩板，將填好的小柱置于固相萃取儀上，取〇. 5mL甲醇，注入小柱內(nèi)，打開固相萃取儀 的抽氣泵，對小柱進(jìn)行洗脫，底部用1. 5mL規(guī)格離心管收集洗脫液，洗脫結(jié)束后，將離心管 內(nèi)洗脫液渦旋l〇s，后放入離心儀中，13000rpm離心5min，取上層清液即為黃酮類有效成 分提取液；黃酮類有效成分提取液用超高效液相色譜儀采樣分析，得到提取液的液相色譜 圖；
[0027] 然后以橙皮苷的對照品配制不同濃度的對照品溶液，按照提取液同樣條件用超高 效液相色譜儀檢測，獲得橙皮苷對照品的液相色譜圖，以橙皮苷對照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)， 以橙皮苷對照品的液相色譜圖中色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)制作橙皮苷素標(biāo)準(zhǔn)曲線，按同樣 方法制作川陳皮素標(biāo)準(zhǔn)曲線、桔皮素標(biāo)準(zhǔn)曲線；根據(jù)提取液的液相色譜圖中各色譜峰的峰 面積及各成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到提取液中橙皮苷、川陳皮素、桔皮素的含量，可相應(yīng)換 算得到提取液中提取的有效成分相對于陳皮藥材粉末的含量。
[0028] 本發(fā)明檢測微量的陳皮藥材粉末中的黃酮類有效成分的檢測限可達(dá)橙皮苷 0· 04ng，川陳皮素0· 06ng，桔皮素0· 05ng，對微量樣品具有很好的提取檢測效果。
[0029] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：
[0030] 1.本發(fā)明方法將基質(zhì)固相分散萃取技術(shù)用于中藥藥材的提取檢測，首次采用分子 篩這一獨(dú)特的吸附材料，具有獨(dú)創(chuàng)性，在國內(nèi)外的期刊專利中均未見報(bào)道，屬首例。
[0031] 2.本方法創(chuàng)造性地采用了微量體系下進(jìn)行提取檢測，無論是采用的藥材質(zhì)量還是 分子篩質(zhì)量，以及所使用的有機(jī)溶劑，用量極低。中國藥典中所述的提取方法為：取本品粗 粉約lg，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚（60_90°c )80mL，加熱回流2-3小時，棄去石 油醚，藥渣揮干，加甲醇80mL，再加熱回流至提取液無色，放冷，濾過，濾液置100mL量瓶中， 用少量甲醇分?jǐn)?shù)次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得?？蓽y得提取 液中含量為橙皮苷35. 9039mg/g、川陳皮素 7. 1693mg/g、桔皮素 5. 3440mg/g。相比藥典的提 取方法，本發(fā)明的方法使用的有機(jī)溶劑僅為0. 5mL甲醇，顯著減少了有機(jī)溶劑的使用和使 用有機(jī)溶劑之后對環(huán)境產(chǎn)生的污染，大大提高了環(huán)境保護(hù)效益。
[0032] 3.本方法在基質(zhì)固相分散萃取的洗脫環(huán)節(jié)，所消耗時間僅在2. 5min左右，這就使 得整個萃取流程效率高，而且整體流程快速便捷。
[0033] 4.本發(fā)明所述的分子篩材料，均具備一系列優(yōu)異突出的的物理化學(xué)性質(zhì)：比表面 積高，吸附效率比常規(guī)基質(zhì)固相分散萃取吸附劑的效率高，化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性良好，耐 酸堿腐蝕，對人體無毒、不污染環(huán)境，不燃，使得操作人員的實(shí)驗(yàn)環(huán)境安全可靠。
[0034] 5.本發(fā)明提供的實(shí)驗(yàn)效率高，操作環(huán)境安全，操作步驟簡潔明了，操作人員無需額 外培訓(xùn)即可進(jìn)行試驗(yàn)操作。
[0035] 即本發(fā)明創(chuàng)造性地提供了一種中藥的微量提取方法，該方法采用分子篩作為吸附 齊U，結(jié)合基質(zhì)固相分散萃取技術(shù)，能高效、環(huán)保地提取和檢測陳皮藥材中的黃酮類有效成 分。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0036] 圖1為本發(fā)明基質(zhì)固相分散萃取方法的工藝流程圖。
[0037] 圖2為考察不同種類吸附劑的基質(zhì)固相分散萃取效果柱狀圖。圖中，1、2、3分別代 表陳皮中不同的有效成分，分別為：1 :橙皮苷、2 :川陳皮素、3 :桔皮素。A、B、C、D代表不同 的吸附劑，分別為：A :分子篩、B :弗羅里硅土、C :C18反相硅膠、D :氧化鋁。
[0038] 圖3為考察藥材和分子篩之間不同質(zhì)量比例下的基質(zhì)固相分散萃取效果柱狀圖。 圖中，1、2、3分別代表陳皮中不同的有效成分，分別為：1 :橙皮苷、2 :川陳皮素、3 :桔皮素。 A、B、C、D、E代表不同的質(zhì)量比例（藥材：分子篩），分別為：A :4:1、B :2:1、C :1:1、D :1:2、 E :1:3。
[0039] 圖4為考察不同種類洗脫劑的基質(zhì)固相分散萃取效果柱狀圖。圖中，1、2、3分別代 表陳皮中不同的有效成分，分別為：1 :橙皮苷、2 :川陳皮素、3 :桔皮素。A、B、C、D、E代表不 同的洗脫液，分別為：A :甲醇、B :乙醇、C :乙腈、D :丙酮、E :乙酸乙酯。
[0040] 圖5為考察不同體積洗脫劑的基質(zhì)固相分散萃取效果折線圖。圖中，1、2、3分別代 表陳皮中不同的有效成分，分別為：1 :橙皮苷、2 :川陳皮素、3 :桔皮素。圖中橫坐標(biāo)為洗脫 劑體積，單位mL。
[0041] 圖6為考察不同研磨時間的基質(zhì)固相分散萃取效果折線圖。圖中，1、2、3分別代表 陳皮中不同的有效成分，分別為：1 :橙皮苷、2 :川陳皮素、3 :桔皮素。圖中橫坐標(biāo)代表研磨 時間，單位s。
[0042] 圖7為考察研磨過程中水的加入量的不同，對基質(zhì)固相分散萃取效果影響的柱狀 圖。圖中，1、2、3分別代表陳皮中不同的有效成分，分別為：1 :橙皮苷、2 :川陳皮素、3 :桔皮 素。A、B、C、D代表不同的水加入量，分別為：A :不加水、B :加入5 μ L、C :加入10 μ L、D :力口 人 15 μ L。
[0043] 圖8為考察輔助吸附劑和分子篩之間加入比例，對基質(zhì)固相分散萃取效果影響的 折線圖。圖中，1、2、3分別代表陳皮中不同的有效成分，分別為 ：1 :橙皮苷、2 :川陳皮素、3 : 桔皮素。A、B、C、D代表不同的輔助吸附劑和分子篩之間的質(zhì)量比（輔助吸附劑：分子篩）， 分別為：A:不加輔助吸附劑、B:1 :4、C:1 :2、D:1:1。
[0044] 圖9為考察洗脫劑中乙酸的體積分?jǐn)?shù)，對基質(zhì)固相分散萃取效果影響的折線圖。 圖中，1、2、3分別代表陳皮中不同的有效成分，分別為：1 :橙皮苷、2 :川陳皮素、3 :桔皮素。 八、8、(：、034代表甲醇中不同的乙酸體積分?jǐn)?shù)，分別為4:不加乙酸、8:1%乙酸、(： ：2%乙 酸、D :3%乙酸、E :4%乙酸、F :5%乙酸。
[0045] 圖10為陳皮混合對照品的液相色譜圖。圖中，1、2、3分別代表陳皮中不同的有效 成分，分別為：1 :橙皮苷、2 :川陳皮素、3 :桔皮素。
[0046] 圖11為黃酮類有效成分提取液的液相色譜圖。圖中，1、2、3分別代表陳皮中不同 的有效成分，分別為：1 :橙皮苷、2 :川陳皮素、3 :桔皮素。

【具體實(shí)施方式】
[0047] 通過以下實(shí)例來對本發(fā)明所提供的檢測方法進(jìn)行更為詳細(xì)的描述。由于其應(yīng)用范 圍廣，故具體實(shí)施方案也多，下面將結(jié)合幾個實(shí)例的討論對本發(fā)明的內(nèi)容作進(jìn)一步的闡述。 [0048] 陳皮對照品溶液的制備方法具體步驟為：分別取橙皮苷、川陳皮素、桔皮素的對 照品適量，精密稱定，混合置棕色量瓶中，加甲醇制成每lmL含橙皮苷500 μ g、川陳皮素 500 μ g、桔皮素500 μ g的溶液，即得對照品溶液。
[0049] 本發(fā)明實(shí)施例中所用的分子篩吸附劑購于南京先豐納米材料科技有限公司，型號 為 SBA-15。
[0050] 實(shí)施例1
[0051] 稱取4份陳皮藥材粉末各25mg分別加入4組研缽中，并稱取不同種類的吸附劑 (分子篩、弗羅里硅土（Florisil)、C18反相硅膠、氧化鋁）各25mg，分別加入4組研缽中 與陳皮藥材粉末研磨150s。取4支lmL規(guī)格固相萃取小柱，底部均加入篩板，分別用研磨 好的固體填充小柱，將填料填實(shí)后頂部均加入篩板。將填好的4支小柱置于固相萃取儀上。 取0. 5mL甲醇，注入小柱內(nèi)，打開固相萃取儀的抽氣泵，對小柱逐一進(jìn)行洗脫。底部分別用 4個1. 5mL規(guī)格離心管收集。洗脫結(jié)束后，將每個離心管內(nèi)液體均渦旋10s，后放入離心儀 中，13000rpm離心5min。取上層清液，即為黃酮類有效成分提取液，分別取樣用超高效液相 色譜儀（UPLC)采樣分析。
[0052] 實(shí)施例所用儀器為 Waters Acquity Uplc H-Class。色譜柱：ACQUITY UPLC?BEH C18，1.7ym，2.1X50mm(Waters)。檢測波長：283nm。柱溫：40°C。進(jìn)樣量：0.2yL。流速 0· 4mL/min，流動相：A :0· lv%甲酸水，B :甲醇。梯度洗脫：0?2min，30%?45% B ;2? 4min，45%?45% B ;4 ?6min，55%?70% B ;6 ?7min，70%?80% B ;7 ?8min，80%? 90% B，8 ?9min，90%?100% B，9 ?lOmin，100%?100% B，10 ?llmin，100%?30% B〇
[0053] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表1，表1中的數(shù)據(jù)為峰面積。
[0054] 表 1.
[0055]
[0056]

【權(quán)利要求】
1. 一種提取中藥陳皮中的黃酮類有效成分的方法，所述黃酮類有效成分為橙皮苷、川 陳皮素、桔皮素中的一種或兩種以上，其特征在于所述方法包括以下步驟： 取陳皮藥材粉末和分子篩吸附劑，以質(zhì)量比1 :〇. 25?3比例混合，加入研缽中研磨，取 固相萃取小柱，底部加入篩板，用研磨好的固體填充小柱，將填料填實(shí)后頂部再加入篩板， 將填好的小柱置于固相萃取儀上，取洗脫劑，注入小柱內(nèi)，打開固相萃取儀的抽氣泵，對小 柱進(jìn)行洗脫，底部用離心管收集洗脫液，洗脫結(jié)束后，將離心管內(nèi)洗脫液渦旋、離心，取上層 清液即為黃酮類有效成分提取液。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述分子篩吸附劑為SBA-15。
3. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述陳皮藥材粉末和分子篩吸附劑的質(zhì)量比 為 1:1。
4. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述研磨的時間為110s-190s。
5. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述研磨的時間為150s。
6. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的洗脫劑為甲醇、乙醇、乙腈、丙酮或乙 酸乙酯。
7. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的洗脫劑為甲醇。
8. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述洗脫劑的體積用量以陳皮藥材粉末的質(zhì) 量計(jì)為 0· 016 ?0· 032mL/mg。
9. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述洗脫劑的體積用量以陳皮藥材粉末的質(zhì) 量計(jì)為 〇· 〇2mg/mL。
10. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法按以下步驟操作： 稱取陳皮藥材粉末25mg、按照質(zhì)量比1:1稱取分子篩25mg，加入研缽中研磨150s，取 lmL規(guī)格固相萃取小柱，底部加入篩板，用研磨好的固體填充小柱，將填料填實(shí)后頂部再加 入篩板，將填好的小柱置于固相萃取儀上，取〇.5mL甲醇，注入小柱內(nèi)，打開固相萃取儀的 抽氣泵，對小柱進(jìn)行洗脫，底部用1. 5mL規(guī)格離心管收集洗脫液，洗脫結(jié)束后，將離心管內(nèi) 洗脫液渦旋l〇s，后放入離心儀中，13000rpm離心5min，取上層清液即為黃酮類有效成分提 取液。
【文檔編號】G01N1/28GK104297026SQ201410504708
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月27日
【發(fā)明者】曹君, 胡帥帥, 劉訓(xùn)高, 曹婉, 龐瀟卿, 代菡鑌, 達(dá)建華 申請人:杭州師范大學(xué)