細(xì)胞分析儀及細(xì)胞分析方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種能精確辨別凝集細(xì)胞和非凝集細(xì)胞的細(xì)胞分析儀。細(xì)胞分析儀（10）具有：檢測(cè)部件，讓包含細(xì)胞核被有選擇地染色的所述宮頸部位細(xì)胞的測(cè)定試樣流入流動(dòng)室，用激光照射流過(guò)所述流動(dòng)室的所述測(cè)定試樣，檢測(cè)所述測(cè)定試樣發(fā)出的熒光；信號(hào)處理部件，根據(jù)所述檢測(cè)部件輸出的熒光信號(hào)獲取反映熒光信號(hào)波形高度的第一值、反映熒光信號(hào)波形的棱線長(zhǎng)度的第二值和反映測(cè)定對(duì)象細(xì)胞核的DNA含量的第三值；及分析部件，根據(jù)所述信號(hào)處理部件獲取的所述第一值、所述第二值和所述第三值，從所述測(cè)定試樣所含測(cè)定對(duì)象細(xì)胞中分出異常細(xì)胞。
【專利說(shuō)明】細(xì)胞分析儀及細(xì)胞分析方法
[0001] 本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?00880113752. 1、申請(qǐng)日為2008年10月24日、名稱為"細(xì)胞 分析儀及細(xì)胞分析方法"的由同一 申請(qǐng)人:提交的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
[0002]

【技術(shù)領(lǐng)域】： 本發(fā)明涉及一種細(xì)胞分析儀及細(xì)胞分析方法。更詳細(xì)地說(shuō)，是涉及一種用激光照射流 經(jīng)流動(dòng)室的測(cè)定試樣，利用該測(cè)定試樣發(fā)出的光對(duì)測(cè)定試樣中所含細(xì)胞進(jìn)行分析的細(xì)胞分 析儀和細(xì)胞分析方法。
[0003]

【背景技術(shù)】： 例如，國(guó)際公開(kāi)第2006/103920號(hào)公報(bào)上曾經(jīng)公布過(guò)，用激光照射含有待測(cè)細(xì)胞的測(cè) 定試樣，并利用該測(cè)定試樣發(fā)出的散射光和熒光測(cè)定各細(xì)胞大小和形狀的流式細(xì)胞技術(shù) 法。在此流式細(xì)胞技術(shù)法中，用鞘液包裹著含待測(cè)細(xì)胞的測(cè)定試樣，在鞘流室內(nèi)形成細(xì)流， 使細(xì)胞排成一列通過(guò)。以此可以防止數(shù)個(gè)細(xì)胞同時(shí)通過(guò)鞘流室檢測(cè)區(qū)。
[0004] 然而，細(xì)胞有時(shí)會(huì)在測(cè)定試樣中凝集，一旦發(fā)生凝集細(xì)胞(數(shù)個(gè)細(xì)胞凝集而成)，將 很難正確得出測(cè)定試樣中各細(xì)胞大小和形狀等信息。
[0005] 因此，國(guó)際公開(kāi)第2006/103920號(hào)公報(bào)上公布的分析儀，檢測(cè)激光照射的測(cè)定試 樣發(fā)出的前向散射光，用所得前向散射光信號(hào)波形的差分積分值和該信號(hào)波形的峰值之 t匕，判斷信號(hào)波形是否存在波谷，判別凝集細(xì)胞和非凝集細(xì)胞(沒(méi)有數(shù)個(gè)細(xì)胞凝集，僅作為 單一細(xì)胞存在)。
[0006] 然而，從細(xì)胞中檢出的前向散射光的信號(hào)波形高度會(huì)隨細(xì)胞的凝集狀態(tài)和細(xì)胞的 流動(dòng)方向等發(fā)生變化，在前向散射光的信號(hào)波形中，其波峰和波谷的部分有時(shí)不甚清晰。因 此，在國(guó)際公開(kāi)第2006/103920號(hào)公報(bào)上記述的分析儀在提高辨別凝集細(xì)胞和非凝集細(xì)胞 的精度上是有限的。
[0007]


【發(fā)明內(nèi)容】
： 本發(fā)明鑒于上述情況，提供一種能精確辨別凝集細(xì)胞和非凝集細(xì)胞的細(xì)胞分析儀和細(xì) 胞分析方法。
[0008] 本發(fā)明第一方面涉及的細(xì)胞分析儀是一種分析生物試樣中所含待測(cè)細(xì)胞的細(xì)胞 分析裝置，其特征之一是包括：檢測(cè)部件，讓由生物試樣和色素制備的測(cè)定試樣流入流動(dòng) 室，用激光照射流過(guò)該流動(dòng)室的測(cè)定試樣，檢測(cè)該測(cè)定試樣發(fā)出的熒光；信號(hào)處理部件，根 據(jù)此檢測(cè)部件輸出的熒光信號(hào)獲取反映熒光信號(hào)波形高度的值和反映熒光信號(hào)波形棱線 長(zhǎng)度的值；及分析部件，根據(jù)上述信號(hào)處理部件獲取的上述反映熒光信號(hào)波形高度的值和 上述反映熒光信號(hào)波形棱線長(zhǎng)度的值，辨別數(shù)個(gè)細(xì)胞凝集而成的凝集細(xì)胞和非凝集細(xì)胞。
[0009] 本發(fā)明第二方面涉及的細(xì)胞分析儀是一種分析生物試樣所含待測(cè)細(xì)胞的細(xì)胞分 析裝置，包括：檢測(cè)部件，讓由生物試樣和色素制備的測(cè)定試樣流入流動(dòng)室，用激光照射流 過(guò)該流動(dòng)室的測(cè)定試樣，檢測(cè)該測(cè)定試樣發(fā)出的熒光；信號(hào)處理部件，根據(jù)此檢測(cè)部件輸出 的熒光信號(hào)獲取反映熒光信號(hào)波形高度的第一值、反映熒光信號(hào)波形棱線長(zhǎng)度的第二值和 反映待測(cè)細(xì)胞核的DNA含量的第三值；及分析部件，根據(jù)上述信號(hào)處理部件獲取的上述第 一值、上述第二值和上述第三值，從測(cè)定試樣所含待測(cè)細(xì)胞中區(qū)分出異常細(xì)胞。
[0010] 本發(fā)明第三方面涉及一種細(xì)胞分析方法，其特征在于：該方法包括四個(gè)步驟：第 一步驟，混合生物試樣和色素，制備測(cè)定試樣；第二步驟，使制備的測(cè)定試樣流進(jìn)流動(dòng)室，激 光照射流經(jīng)該流動(dòng)室的測(cè)定試樣，檢測(cè)該測(cè)定試樣發(fā)出的熒光；第三步驟，根據(jù)上述熒光生 成的熒光信號(hào)，獲取反映熒光信號(hào)波形高度的值和反映熒光信號(hào)波形棱線長(zhǎng)度的值；第四 步驟，根據(jù)上述反映熒光信號(hào)波形高度的值和上述反映熒光信號(hào)波形棱線長(zhǎng)度的值，辨別 數(shù)個(gè)細(xì)胞凝集而成的凝集細(xì)胞和非凝集細(xì)胞。
[0011] 本發(fā)明第四方面涉及一種細(xì)胞分析方法，其特征在于：該方法包括四個(gè)步驟：第 一步驟，混合生物試樣和色素，制備測(cè)定試樣；第二步驟，使制備的測(cè)定試樣流入流動(dòng)室，激 光照射流經(jīng)該流動(dòng)室的測(cè)定試樣，檢測(cè)該測(cè)定試樣發(fā)出的熒光；第三步驟，根據(jù)上述熒光生 成的熒光信號(hào)，獲取反映熒光信號(hào)波形高度的第一值、反映熒光信號(hào)波形棱線長(zhǎng)度的第二 值和反映待測(cè)細(xì)胞核DNA含量的第三值；第四步驟，根據(jù)上述第一值、上述第二值和上述第 三值，從測(cè)定試樣所含待測(cè)細(xì)胞中區(qū)分出異常細(xì)胞。
[0012]

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】： 圖1為本發(fā)明的細(xì)胞分析儀一實(shí)施方式的斜視說(shuō)明圖； 圖2為圖1所示細(xì)胞分析儀的結(jié)構(gòu)框圖； 圖3為構(gòu)成系統(tǒng)控制裝置的電腦的框圖； 圖4為光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)圖； 圖5為通過(guò)聚焦光斑的細(xì)胞的說(shuō)明圖； 圖6為以待測(cè)細(xì)胞熒光信號(hào)波形差分積分值除以峰值的商為縱坐標(biāo)、以側(cè)向散射光信 號(hào)的脈沖寬度為橫坐標(biāo)的散點(diǎn)圖； 圖7為單一細(xì)胞的信號(hào)波形圖； 圖8為2個(gè)細(xì)胞組成的凝集細(xì)胞的信號(hào)波形圖； 圖9為3個(gè)細(xì)胞組成的凝集細(xì)胞的信號(hào)波形圖； 圖10為以從測(cè)定試樣獲得的前向散射光信號(hào)峰值為縱坐標(biāo)、前向散射光信號(hào)脈沖寬 度為橫坐標(biāo)的散點(diǎn)圖； 圖11為系統(tǒng)控制裝置CPU處理過(guò)程的流程圖； 圖12為系統(tǒng)控制裝置CPU進(jìn)行細(xì)胞分析處理的流程圖； 圖13為光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)的側(cè)視圖； 圖14為光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)的平面圖； 圖15為以從測(cè)定試樣獲得的側(cè)向熒光信號(hào)的脈沖面積為橫坐標(biāo)的直方圖； 圖16為系統(tǒng)控制裝置的CPU進(jìn)行第二細(xì)胞分析處理的流程圖； 圖17為系統(tǒng)控制裝置的CPU進(jìn)行第三細(xì)胞分析處理的流程圖； 圖18為在測(cè)定試樣流動(dòng)方向上的光束形狀的顯示圖。
[0013]

【具體實(shí)施方式】： 下面參照附圖，詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的細(xì)胞分析儀及細(xì)胞分析方法的實(shí)施方式。
[0014] [細(xì)胞分析儀的整體結(jié)構(gòu)] 圖1為本發(fā)明一實(shí)施方式涉及的細(xì)胞分析儀10的斜視說(shuō)明圖。此細(xì)胞分析儀10用于 讓含采自患者的細(xì)胞的測(cè)定試樣流過(guò)流動(dòng)室，激光照射流經(jīng)此流動(dòng)室的測(cè)定試樣，檢測(cè)、分 析測(cè)定試樣發(fā)出的光(前向散射光、側(cè)向熒光等)，以此判斷上述細(xì)胞中是否含有癌細(xì)胞和 異型細(xì)胞。具體而言，細(xì)胞分析儀10用于用宮頸部位的上皮細(xì)胞篩查宮頸癌。細(xì)胞分析儀 10包括進(jìn)行試樣測(cè)定的儀器主體12、連接此儀器主體12并分析測(cè)定結(jié)果的系統(tǒng)控制裝置 13。
[0015] 如圖2所示，細(xì)胞分析儀10的儀器主體12包括用于從測(cè)定試樣檢測(cè)細(xì)胞及其核 大小等信息的光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)3、信號(hào)處理電路4、測(cè)定控制系統(tǒng)16、電機(jī)、操作設(shè)備、電磁閥 等驅(qū)動(dòng)設(shè)備17和各種傳感器18。信號(hào)處理電路4包括對(duì)前置放大器(無(wú)圖示)放大的光學(xué) 檢測(cè)系統(tǒng)3的輸出信號(hào)進(jìn)行放大和濾波等處理的模擬信號(hào)處理電路、將模擬信號(hào)處理電路 輸出的信號(hào)轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號(hào)的A/D轉(zhuǎn)換器，以及對(duì)數(shù)字信號(hào)進(jìn)行一定波形處理的數(shù)字信號(hào) 處理電路。測(cè)定控制系統(tǒng)16在處理傳感器18的信號(hào)的同時(shí)，控制驅(qū)動(dòng)設(shè)備17的動(dòng)作，以 此進(jìn)行測(cè)定試樣的吸移和測(cè)定。當(dāng)篩查宮頸癌時(shí)，可以使用對(duì)采自患者宮頸的細(xì)胞(上皮細(xì) 胞）進(jìn)行離心(濃縮)、稀釋(清洗)、攪拌（Tapping)和碘化丙啶（PI)染色等眾所周知的處理 方式所制備的試樣作為測(cè)定試樣。將所制測(cè)定試樣放入試管，放置在儀器主體12的吸移管 (無(wú)圖示)下面，由該吸移管吸移供給流動(dòng)室。上述PI染色用含有色素的熒光染色劑碘化丙 啶（PI)進(jìn)行。PI染色是有選擇地對(duì)核染色，因此可以檢測(cè)出核發(fā)出的熒光。
[0016][測(cè)定控制系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)] 測(cè)定控制系統(tǒng)16包括微處理器20、存儲(chǔ)器21、I/O控制器22、傳感器信號(hào)處理電路23、 控制驅(qū)動(dòng)設(shè)備的驅(qū)動(dòng)電路24和外部通信控制器25等。存儲(chǔ)器21由ROM、RAM等構(gòu)成，ROM 中裝有控制驅(qū)動(dòng)設(shè)備17的控制程序和執(zhí)行控制程序所需的數(shù)據(jù)。微處理器20可將控制程 序下載到RAM或直接從ROM執(zhí)行。
[0017] 傳感器18的信號(hào)通過(guò)傳感器信號(hào)處理電路23和I/O控制器22傳送到微處理器 20。微處理器20通過(guò)執(zhí)行控制程序，可以按照傳感器18的信號(hào)通過(guò)I/O控制器22和控制 驅(qū)動(dòng)部件的驅(qū)動(dòng)電路24控制驅(qū)動(dòng)設(shè)備17。
[0018] 微處理器20處理過(guò)的數(shù)據(jù)和需要微處理器20處理的數(shù)據(jù)通過(guò)外部通信控制器25 與系統(tǒng)控制裝置13等外部設(shè)備進(jìn)行傳輸。
[0019][系統(tǒng)控制裝置的結(jié)構(gòu)] 圖3為系統(tǒng)控制裝置13的框圖。系統(tǒng)控制裝置13由個(gè)人電腦等組成，主要由主機(jī)27、 顯示器28和輸入設(shè)備29構(gòu)成。主機(jī)27主要由CPU27a、R0M27b、RAM27c、硬盤(pán)27d、讀取裝 置27e、輸出輸入接口 27f、圖像輸出接口 27g構(gòu)成。以上這些均通過(guò)總線27h連接，可互相 通信。
[0020] CPU27a可執(zhí)行存儲(chǔ)在R0M27b的計(jì)算機(jī)程序和讀到RAM27C中的計(jì)算機(jī)程序。 R0M27b由掩模（Mask) ROM、PROM、EPROM、EEPR0M等構(gòu)成，存儲(chǔ)由CPU27a執(zhí)行的計(jì)算機(jī)程序 及其所用數(shù)據(jù)等。RAM27c由SRAM和DRAM等構(gòu)成。RAM27c用于讀取存儲(chǔ)在R0M27b和硬盤(pán) 27d的計(jì)算機(jī)程序。另外，它還可以作為CPU27a執(zhí)行這些計(jì)算機(jī)程序時(shí)的工作空間。
[0021] 硬盤(pán)27d裝有操作系統(tǒng)和應(yīng)用程序等供CPU27a執(zhí)行的各種計(jì)算機(jī)程序以及執(zhí)行 計(jì)算機(jī)程序所需的數(shù)據(jù)。比如硬盤(pán)27d裝有美國(guó)微軟公司制售的windows (注冊(cè)商標(biāo)）等 提供圖形用戶界面的操作系統(tǒng)。硬盤(pán)27d還裝有辨別凝集粒子和非凝集粒子的計(jì)算機(jī)程序 及其用于執(zhí)行計(jì)算機(jī)程序的數(shù)據(jù)。
[0022] 硬盤(pán)27d還裝有操作程序，該程序負(fù)責(zé)傳送細(xì)胞分析儀10向測(cè)定控制系統(tǒng)16下 達(dá)的測(cè)定指令(動(dòng)作命令)，接受并處理儀器主體12測(cè)定的測(cè)定結(jié)果，顯示處理的分析結(jié)果 等。此操作程序在上述操作系統(tǒng)上執(zhí)行。
[0023] 讀取裝置27e由軟驅(qū)、⑶-ROM驅(qū)動(dòng)器或DVD-ROM驅(qū)動(dòng)器等構(gòu)成，可讀取存儲(chǔ)于便 攜型存儲(chǔ)介質(zhì)的計(jì)算機(jī)程序或數(shù)據(jù)。輸入輸出接口 27f由比如USB、IEEE1394、RS - 232C 等串行接口、SCSI、IDE、IEEE1284等并行接口以及由D/A轉(zhuǎn)換器和A/D轉(zhuǎn)換器等組成的模 擬信號(hào)接口構(gòu)成。輸入輸出接口 27f連接由鍵盤(pán)和鼠標(biāo)構(gòu)成的輸入設(shè)備29,用戶可以用輸 入設(shè)備29直接向電腦輸入數(shù)據(jù)。另外，輸入輸出接口 27f與儀器主體12連接，可以與儀器 主體12相互傳輸數(shù)據(jù)等。
[0024] 圖像輸出接口 27g與由IXD或CRT等構(gòu)成的顯示器28連接，將與從CPU27a接收 的圖像數(shù)據(jù)相應(yīng)的映象信號(hào)輸出到顯示器28。顯示器28按照輸入的映像信號(hào)顯示圖像(畫(huà) 面)。
[0025] [光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)] 圖4為光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)3的結(jié)構(gòu)圖。圖中，透鏡系列(光學(xué)系統(tǒng))52將光源半導(dǎo)體激光器 53發(fā)出的激光聚焦于流經(jīng)流動(dòng)室51的測(cè)定試樣，聚光鏡54將測(cè)定試樣中細(xì)胞發(fā)出的前向 散射光聚光于散射光檢測(cè)器光電二極管55。為簡(jiǎn)單明了，上述透鏡系列52僅圖不了單一的 透鏡，但更詳細(xì)地如圖13和圖14所示，可以形成從半導(dǎo)體激光器53 -側(cè)起、由準(zhǔn)直鏡52a、 柱面透鏡系列（平凸柱面透鏡52b+雙凹柱面透鏡52c)和聚光鏡系列(聚光鏡52d+聚光鏡 52e)構(gòu)成的透鏡群結(jié)構(gòu)。
[0026] 如圖13所示，從側(cè)面看光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)3,則半導(dǎo)體激光器53發(fā)出的放射狀激光被 準(zhǔn)直鏡52a變?yōu)槠叫泄猓鋸街蓖ㄟ^(guò)平凸柱面透鏡52b和雙凹柱面透鏡52c，由聚光鏡52d 和聚光鏡52e聚焦于流經(jīng)流動(dòng)室51的測(cè)定試樣中的第一聚焦點(diǎn)A。
[0027] 另一方面，如圖14所示，從上方俯瞰光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)3,則半導(dǎo)體激光器53發(fā)出的放 射狀激光被準(zhǔn)直鏡52a變?yōu)槠叫泄?，由平凸柱面透鏡52b向與測(cè)定試樣流動(dòng)垂直的方向收 攏，并由雙凹柱面透鏡52c向與測(cè)定試樣流動(dòng)垂直的方向散射，由聚光鏡52d和聚光鏡52e 聚焦于流動(dòng)室51后方的第二聚焦點(diǎn)B。
[0028] 通過(guò)這種透鏡系列52,在第一聚焦點(diǎn)A的光束形狀(從半導(dǎo)體激光器53 -側(cè)看到 的光束形狀)為向測(cè)定試樣流動(dòng)方向收縮，向測(cè)定試樣流向垂直方向延伸的長(zhǎng)橢圓形。具體 而言，一個(gè)順流經(jīng)流動(dòng)室51的測(cè)定試樣流向的直徑為3?8μ m、垂直于測(cè)定試樣流向的 直徑為30(Γ600μ m的聚焦光斑，在順測(cè)定試樣流向通過(guò)的平面上形成其第一聚焦點(diǎn)A，并 照射在流經(jīng)流動(dòng)室51的測(cè)定試樣上。
[0029] 關(guān)于透鏡系列52不限定于上述結(jié)構(gòu)，也可以適當(dāng)變更。
[0030] 另一個(gè)聚光鏡56將上述細(xì)胞和細(xì)胞核的側(cè)向散射光和側(cè)向熒光聚焦于分色鏡 57。分色鏡57將側(cè)向散射光反射到散射光檢測(cè)器光電倍增管58,讓側(cè)向熒光穿過(guò)熒光檢 測(cè)器光電倍增管59。這些光反映測(cè)定試樣中細(xì)胞及其核的特征。光電二極管55、光電倍增 管58和光電倍增管59將檢測(cè)出的光轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，分別輸出前向散射光信號(hào)（FSC)、側(cè)向 散射光信號(hào)（SSC)和側(cè)向熒光信號(hào)（SFL)。這些信號(hào)由無(wú)圖示的前置放大器放大后，輸送到 前述信號(hào)處理電路4 (參照?qǐng)D2)。
[0031] 如圖2所示，通過(guò)信號(hào)處理電路4進(jìn)行濾波處理和A/D轉(zhuǎn)換處理等信號(hào)處理所得 的前向散射光數(shù)據(jù)（FSC)、側(cè)向散射光數(shù)據(jù)（SSC)和側(cè)向熒光數(shù)據(jù)（SFL)由微處理器20通 過(guò)外部通信控制器25輸送至前述系統(tǒng)控制裝置13。系統(tǒng)控制裝置13根據(jù)前向散射光數(shù)據(jù) (FSC)、側(cè)向散射光數(shù)據(jù)（SSC)和側(cè)向熒光數(shù)據(jù)（SFL)繪制用于分析細(xì)胞及其核的散點(diǎn)圖和 直方圖。
[0032] 也可以用氣體激光代替上述半導(dǎo)體激光作為光源，但從低成本、小型且低耗電的 觀點(diǎn)來(lái)看，以采用半導(dǎo)體激光為宜，采用半導(dǎo)體激光不僅可以降低產(chǎn)品成本，還可以實(shí)現(xiàn)儀 器的小型化和省電。在本實(shí)施方式中使用的是有利于聚光的波長(zhǎng)較短的藍(lán)色半導(dǎo)體激光。 藍(lán)色半導(dǎo)體激光對(duì)PI等的熒光勵(lì)起波長(zhǎng)也有效。也可以使用半導(dǎo)體激光中低成本、長(zhǎng)壽 命、廠家穩(wěn)定供貨的紅色半導(dǎo)體激光。
[0033] 本實(shí)施方式用上述透鏡系列52 (圖4)等光學(xué)系統(tǒng)形成一定大小的聚焦光斑。具 體而言，在測(cè)定試樣上形成略呈橢圓形的聚焦光斑，其順測(cè)定試樣在流動(dòng)室51流向的直徑 為：Γ8μ m，垂直于測(cè)定試樣流向的直徑為30(Γ600μ m。圖5為細(xì)胞通過(guò)聚焦光斑的說(shuō) 明圖，圖中上下方向?yàn)闇y(cè)定試樣流經(jīng)流動(dòng)室51的流動(dòng)方向。在圖5中，右側(cè)的聚焦光斑是 用于檢測(cè)血液中的紅細(xì)胞和白細(xì)胞的普通儀器的聚焦光斑，左側(cè)的聚焦光斑為本實(shí)施方式 的細(xì)胞分析儀的光學(xué)系統(tǒng)所形成的聚焦光斑。制圖時(shí)聚焦光斑的長(zhǎng)方向尺寸比與之垂直方 向（圖中上下方向）的尺寸縮小了，但本實(shí)施方式實(shí)際的聚焦光斑截面形狀非常細(xì)長(zhǎng)。
[0034] 在本實(shí)施方式中，光電倍增管59檢測(cè)流經(jīng)流動(dòng)室的測(cè)定試樣發(fā)出的熒光，信號(hào)處 理電路4從光電倍增管59輸出的熒光信號(hào)獲取反映信號(hào)波形高度的值一熒光信號(hào)波形峰 值（PEAK)，同時(shí)獲取信號(hào)波形的差分積分值（DIV)作為反映信號(hào)波形棱線長(zhǎng)度的值。圖9 (b)為圖9 (a)的細(xì)胞C3的信號(hào)波形顯示圖，縱坐標(biāo)表示檢出熒光的強(qiáng)度，橫坐標(biāo)表示光 信號(hào)的檢出時(shí)間。如圖9 (b)所示，熒光信號(hào)波形(單點(diǎn)劃線）的峰值（PEAK)表示檢出熒光 的最大強(qiáng)度（圖中的PEAK)，熒光信號(hào)波形的差分積分值（DIV)表示強(qiáng)度大于基線1 (Base Linel)的熒光信號(hào)波形的長(zhǎng)度(點(diǎn)S~點(diǎn)T，點(diǎn)U~點(diǎn)V，點(diǎn)W~點(diǎn)X的波形長(zhǎng)度合計(jì))。系統(tǒng)控 制裝置13通過(guò)外部通信控制器25接收包括熒光信號(hào)波形的差分積分值（DIV)和熒光信號(hào) 波形峰值（PEAK)在內(nèi)的側(cè)向熒光數(shù)據(jù)，將熒光信號(hào)波形的差分積分值（DIV)除以熒光信號(hào) 波形峰值（PEAK)所得商（DIV/PEAK)與一定閾值進(jìn)行比較，辨別該細(xì)胞是凝集細(xì)胞還是非 凝集細(xì)胞。
[0035] 差分積分值是微分信號(hào)波形、將其絕對(duì)值加在一起所得的值，波形中沒(méi)有波谷的 信號(hào)差分積分值幾乎與其信號(hào)峰值的2倍值相同。另一方面，波形中有波谷的信號(hào)其差分 積分值大于該信號(hào)峰值2倍的值，波形中波谷越多，波谷越深，與峰值的2倍值之間的差也 越大。
[0036] 因此，系統(tǒng)控制裝置13考慮到疊加在信號(hào)上的噪聲等，將比"2"略大的值"2. 6" 作為辨別所測(cè)細(xì)胞是凝集細(xì)胞還是非凝集細(xì)胞的基準(zhǔn)值、即上述"一定閾值"。另外，一定 閾值不限于2. 6,最好是2. 2~3之間的值。熒光信號(hào)波形的差分積分值（DIV)除以熒光信號(hào) 波形峰值（PEAK)所得商（DIV/PEAK)大于一定閾值意味著熒光信號(hào)的波形中至少有一個(gè)波 谷，以此可以將待測(cè)細(xì)胞歸類為數(shù)個(gè)細(xì)胞凝集而成的凝集細(xì)胞。
[0037] 圖6為以待測(cè)細(xì)胞的熒光信號(hào)波形的差分積分值（DIV)除以峰值（PEAK)所得 商（DIV/PEAK)為縱坐標(biāo)、以側(cè)向散射光信號(hào)波形的脈沖寬度（SSCW)為橫坐標(biāo)的（DIV/ PEAK) - SSCW散點(diǎn)圖。在圖6中，分布在A所示區(qū)域內(nèi)的細(xì)胞其縱坐標(biāo)值(熒光信號(hào)波形 的差分積分值/峰值（DIV/PEAK))在約2~2. 6范圍內(nèi)，這些細(xì)胞是圖7 (a)所示那種單一 細(xì)胞(非凝集細(xì)胞)C1。圖7 (b)是細(xì)胞C1的信號(hào)波形的顯示圖。如圖7 (b)所示，單一細(xì) 胞時(shí)，信號(hào)波形的峰值為一個(gè)，但與前向散射光的信號(hào)波形（實(shí)線）和側(cè)向散射光的信號(hào)波 形(虛線）相比，熒光信號(hào)的波形(單點(diǎn)劃線）波峰很分明。
[0038] 在圖6,分布在B所示區(qū)域內(nèi)的細(xì)胞縱坐標(biāo)值約在3. 5~4. 2范圍內(nèi)，這些細(xì)胞是圖 8 (a)所示那種2個(gè)細(xì)胞凝集而成的凝集細(xì)胞C2。在圖6中，分布在C所示區(qū)域內(nèi)的細(xì)胞 縱坐標(biāo)值約在4. 5~7的范圍內(nèi)，這些細(xì)胞是圖9 (a)所示那種3個(gè)細(xì)胞凝集而成的凝集細(xì) 胞C3。圖8 (b)是細(xì)胞C2的信號(hào)波形的顯示圖。從圖8 (b)和圖9 (b)可以看出，與前向 散射光的信號(hào)波形和側(cè)向散射光的信號(hào)波形相比，突光信號(hào)的波形中，波峰和波谷的部分 都很分明。
[0039] 如上所述，與前向散射光的信號(hào)波形和側(cè)向散射光的信號(hào)波形相比，熒光信號(hào)的 波形其波峰和波谷的部分更分明，因此，可以精確地辨別是凝集細(xì)胞還是非凝集細(xì)胞。
[0040] 在本實(shí)施方式中，由于將在聚焦光斑處順著測(cè)定試樣流向的直徑調(diào)為:Γ8μπι，可 以提高細(xì)胞核檢測(cè)的S/N比。在本實(shí)施方式中，對(duì)細(xì)胞核實(shí)施ΡΙ染色，使用細(xì)胞核發(fā)出的 熒光信號(hào)，但是在ΡΙ染色中除細(xì)胞核以外，細(xì)胞膜也多少會(huì)被染色，殘余的用于染色的染 料會(huì)流到流動(dòng)室，從細(xì)胞核以外也會(huì)發(fā)出熒光。因此，作為熒光檢測(cè)器的光電倍增管59 (圖 4)可能檢測(cè)出細(xì)胞核以外發(fā)出的作為噪聲的熒光。然而，光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)3的透鏡系列52 使在聚焦光斑處順著測(cè)定試樣流向的直徑縮小為3~8 μ m，可以更明確地甄別細(xì)胞核發(fā)出的 熒光和細(xì)胞核以外發(fā)出的熒光。即，考慮細(xì)胞核的大?。?~7 μ m)將聚焦光斑的直徑縮小為 3~8 μ m，以此減少噪聲，使熒光信號(hào)脈沖的上升緣更尖銳，從而可以使波峰更加鮮明。
[0041] 要將聚焦光斑處的上述流向的直徑縮小到小于3μπι，就要縮短透鏡系列52的焦 距，激光在穩(wěn)定區(qū)域(焦點(diǎn)深度)的強(qiáng)度就會(huì)變?nèi)?。圖18為在測(cè)定試樣流動(dòng)方向上聚焦光斑 形狀的顯示圖。如圖18所示，焦點(diǎn)深度表示束徑達(dá)到在聚焦光斑上的束徑D的1. 1倍的區(qū) 域，束徑越大，光的強(qiáng)度就越弱。焦點(diǎn)深度變淺，將不能使激光穩(wěn)定地照射在2(Γ100 μ m大 小的細(xì)胞核上。另一方面，在上述流向上的直徑大于8 μ m，則檢測(cè)出細(xì)胞核以外發(fā)出的噪聲 熒光的比例會(huì)增大，從而熒光信號(hào)脈沖的上升緣變得平緩，熒光信號(hào)脈沖幅度的范圍變得 模糊，使測(cè)定精度下降。并且，大量細(xì)胞核同時(shí)從聚焦光斑內(nèi)通過(guò)的頻度增加，從這一點(diǎn)上 也會(huì)造成測(cè)定精度下降。因此，最好考慮到上述焦點(diǎn)深度，來(lái)選定聚焦光斑處測(cè)定試樣流動(dòng) 方向上的直徑。具體而言，最好形成的聚焦光斑使聚焦于測(cè)定試樣流動(dòng)方向上的激光焦點(diǎn) 深度為2(Γ110 μ m。要穩(wěn)定地向細(xì)胞核照射激光，以聚焦光斑的在上述流動(dòng)方向上的直徑為 3. 5 ~ 7. 5μηι 為 1?，4~7μηι Hi子。
[0042] 由于在聚焦光斑上垂直于測(cè)定試樣流向的直徑為30(Γ600 μ m范圍內(nèi)，可以讓宮 頸部位的全部上皮細(xì)胞(約60 μ m)從激光光束的穩(wěn)定區(qū)域(指設(shè)構(gòu)成高斯分布的激光峰值 強(qiáng)度為1，則強(qiáng)度達(dá)到〇. 95以上的區(qū)域）通過(guò)。以此可以從細(xì)胞中獲得穩(wěn)定的散射光，可 以精確地測(cè)定細(xì)胞大小。因垂直于流向上的直徑大于300 μ m，上述激光束的穩(wěn)定區(qū)域變寬， 可以從細(xì)胞中獲得穩(wěn)定的散射光。另一方面，由于垂直于流向方向上的直徑小于600 μ m，中 心附近的激光強(qiáng)度增強(qiáng)，可以獲得穩(wěn)定的散射光。要從細(xì)胞中獲得穩(wěn)定的散射光，最好垂直 于測(cè)定試樣流向上的直徑為350?550 μ m。
[0043] [異常細(xì)胞分類] 細(xì)胞的癌化和畸變會(huì)加速細(xì)胞的分裂，致使DNA含量比正常細(xì)胞增多。因此可以以此 DNA含量為細(xì)胞癌化和畸變的指標(biāo)。反映細(xì)胞核DNA含量的值可以用激光照射待測(cè)細(xì)胞發(fā) 出的熒光信號(hào)的脈沖面積(熒光量）（SFLI)來(lái)衡量。如圖9 (b)所示，熒光信號(hào)的脈沖面積 (熒光量）（SFLI)表示基線1 (Base Line 1)和熒光信號(hào)波形之間圍起來(lái)的部分的面積。信 號(hào)處理電路4從光電倍增管59輸出的熒光信號(hào)獲取熒光信號(hào)的脈沖面積(熒光量）（SFLI) 作為反映待測(cè)細(xì)胞核的DNA含量的值。系統(tǒng)控制裝置13判斷此熒光量是否超過(guò)一定閾值， 如果超過(guò)一定閾值，則將該細(xì)胞歸類于有異常DNA含量的癌化和畸變細(xì)胞。
[0044] 篩查宮頸癌中使用的樣本大部分為正常細(xì)胞，因此，當(dāng)以熒光信號(hào)的脈沖面積(熒 光量）為橫坐標(biāo)繪制圖15所示直方圖時(shí)，波峰出現(xiàn)在相當(dāng)于正常細(xì)胞的位置。此波峰位置 的熒光量反映正常細(xì)胞的DNA含量，因此，系統(tǒng)控制裝置13將顯示出其2. 5倍以上熒光量 的細(xì)胞歸類為異常細(xì)胞。
[0045] 可以想象，當(dāng)2個(gè)以上細(xì)胞相互凝集通過(guò)激光的光束斑點(diǎn)時(shí)，光電倍增管59將檢 出從多個(gè)細(xì)胞核發(fā)出的熒光，整體輸出大面積的脈沖。然而，如前所述，本實(shí)施方式可以利 用熒光信號(hào)波形的差分積分值除以峰值的商（DIV/PEAK)精確地排除凝集細(xì)胞生成的數(shù)據(jù)， 從而可以提高異常細(xì)胞(癌化和畸變細(xì)胞)的劃分精度。即可以防止誤將因?yàn)槟?xì)胞而被 作為含有大量DNA的細(xì)胞檢測(cè)出來(lái)歸類于異常細(xì)胞。
[0046] 測(cè)定試樣中有時(shí)除待測(cè)細(xì)胞以外還有粘液、血液殘?jiān)?、?xì)胞碎片等碎片。這些碎片 在測(cè)定試樣中過(guò)多，則該碎片發(fā)出的熒光會(huì)作為噪聲被檢測(cè)出來(lái)，降低測(cè)定精度。此時(shí)，上 述碎片比待測(cè)細(xì)胞尺寸小，信號(hào)處理電路4會(huì)從光電二極管55輸出的前向散射光信號(hào)獲取 前向散射光信號(hào)波形的脈沖寬度（FSCW)和前向散射光信號(hào)波形的峰值（FSCP)作為反映含 待測(cè)細(xì)胞的粒子大小的數(shù)個(gè)參數(shù)。如圖7 (b)所示，前向散射光信號(hào)波形的峰值（FSCP)表 示檢出的前向散射光的最大強(qiáng)度（圖中的FSCP)。前向散射光信號(hào)波形的脈沖寬度（FSCW) 表示強(qiáng)度大于基線2 (Base Line 2)的前向散射光信號(hào)波形的寬度。系統(tǒng)控制裝置13通 過(guò)外部通信控制器25從儀器主體12接收包括前向散射光信號(hào)波形的脈沖寬度（FSCW)和前 向散射光信號(hào)波形的峰值（FSCP)在內(nèi)的前向散射光數(shù)據(jù)。然后，系統(tǒng)控制裝置13使用前 向散射光信號(hào)波形的脈沖寬度（FSCW)和前向散射光信號(hào)波形的峰值（FSCP)繪制散點(diǎn)圖， 根據(jù)散點(diǎn)圖區(qū)分待測(cè)細(xì)胞和待測(cè)細(xì)胞以外的粒子(碎片)。
[0047]圖10為以前向散射光信號(hào)波形的脈沖寬度（FSCW)為橫坐標(biāo)、前向散射光信號(hào)波 形的峰值（FSCP)為縱坐標(biāo)的FSCW - FSCP散點(diǎn)圖。碎片比待測(cè)細(xì)胞尺寸小，故反映粒子大 小的前向散射光信號(hào)波形的峰值（FSCP)和前向散射光信號(hào)波形的脈沖寬度（FSCW)也分別 比待測(cè)細(xì)胞小。在圖10中，分布在左下角的一群為碎片。因此，通過(guò)將G所示區(qū)域內(nèi)的細(xì) 胞作為以后的分析目標(biāo)，可以進(jìn)一步提高辨別是否為異常細(xì)胞的精確度。
[0048][細(xì)胞分析方法] 下面就用細(xì)胞分析儀10 (參照?qǐng)D1)對(duì)細(xì)胞分析方法的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行說(shuō)明。
[0049] 首先，使用者人工制備流入流動(dòng)室的測(cè)定試樣。具體而言，對(duì)從患者宮頸部位采集 的細(xì)胞(上皮細(xì)胞）進(jìn)行離心(濃縮)、稀釋(清洗)、攪拌（Tapping)和碘化丙啶（PI)染色等 眾所周知的處理，制備測(cè)定試樣。然后，使用者將制備的測(cè)定試樣裝入試管(無(wú)圖示)，將試 管放到儀器主體的吸移管(無(wú)圖示）下面。
[0050] 下面，參照?qǐng)D11和圖12說(shuō)明系統(tǒng)控制裝置13的處理流程。
[0051] 首先，接通系統(tǒng)控制裝置13的電源，于是系統(tǒng)控制裝置13的CPU27a對(duì)系統(tǒng)控制 裝置13內(nèi)的計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行初始化(步驟SI)。CPU27a判斷是否收到了使用者的測(cè)定指示 (步驟S2)，如果收到測(cè)定指示，則通過(guò)I/O接口 27f向儀器主體12傳送測(cè)定開(kāi)始信號(hào)(步驟 S3)。若未收到測(cè)定指示，則CPU27a將處理移至步驟S6。
[0052] 測(cè)定開(kāi)始信號(hào)一傳送到儀器主體12,在儀器主體12,裝在試管中的測(cè)定試樣便被 吸移管吸移到圖4所示的流動(dòng)室51中。流經(jīng)流動(dòng)室51的測(cè)定試樣受到激光光束照射，測(cè) 定試樣發(fā)出的前向散射光由光電二極管55檢出，側(cè)向散射光由光電倍增管58檢出，側(cè)向熒 光由光電倍增管59檢出。
[0053] 然后，光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)3輸出的前向散射光信號(hào)（FSC)、側(cè)向散射光信號(hào)（SSC)和突 光信號(hào)（SFL)被輸送到信號(hào)處理電路4,在信號(hào)處理電路4經(jīng)過(guò)一定處理所獲得的測(cè)定數(shù)據(jù) 通過(guò)外部通信控制器25傳送至系統(tǒng)控制裝置13。
[0054] 另一方面，系統(tǒng)控制裝置13的CPU27a判斷是否通過(guò)外部通信控制器25從儀器主 體12收到測(cè)定數(shù)據(jù)(前向散射光信號(hào)（FSC)、側(cè)向散射光信號(hào)（SSC)和熒光信號(hào)（SFL))(步 驟S4)，如果收到測(cè)定數(shù)據(jù)，則在將該測(cè)定數(shù)據(jù)存入硬盤(pán)27d之后，進(jìn)行細(xì)胞分析處理(步驟 S5)。如果未收到測(cè)定數(shù)據(jù)，CPU27a轉(zhuǎn)到步驟S6進(jìn)行處理。
[0055] 細(xì)胞分析處理結(jié)束后，CPU27a判斷是否收到關(guān)機(jī)指示(步驟S6)，如果收到關(guān)機(jī)指 示則結(jié)束處理。如果未收到關(guān)機(jī)指示，則CPU27a返回步驟S2的處理。
[0056] 下面參照?qǐng)D12說(shuō)明步驟S5的細(xì)胞分析處理。
[0057] 首先，CPU27a將從儀器主體12收到的前向散射光數(shù)據(jù)中前向散射光信號(hào)波形的 脈沖寬度（FSCW)和前向散射光信號(hào)波形的峰值（FSCP)從硬盤(pán)27d讀取到RAM27c (步驟 S501)，以讀取的脈沖寬度（FSCW)為橫坐標(biāo)，以峰值（FSCP)為縱坐標(biāo)，繪制圖10所示FSCW- FSCP散點(diǎn)圖（步驟S502)。然后，CPU27a將此散點(diǎn)圖內(nèi)G所示區(qū)域內(nèi)的細(xì)胞作為以后分析 的目標(biāo)。G所示區(qū)域外的粒子由此被作為待測(cè)細(xì)胞以外的碎片排除。
[0058] 接下來(lái)，CPU27a將待分析細(xì)胞的側(cè)向熒光數(shù)據(jù)中熒光信號(hào)波形的差分積分值 (DIV)和熒光信號(hào)波形的峰值（PEAK)從硬盤(pán)27d讀取到RAM27c，獲取熒光信號(hào)波形的差分 積分值（DIV)除以熒光信號(hào)波形的峰值（PEAK)所得商（DIV / PEAK)，同時(shí)將待分析粒子的 側(cè)向散射光數(shù)據(jù)中側(cè)向散射光信號(hào)波形的脈沖寬度（SSCW)從硬盤(pán)27d讀取到RAM27c (步 驟S503)。如圖8 (b)所不，側(cè)向散射光信號(hào)波形的脈沖寬度（SSCW)表不強(qiáng)度大于基線3 (Base Line 3)的側(cè)向散射光信號(hào)波形的寬度。CPU27a以熒光信號(hào)波形的差分積分值除以 峰值的商（DIV/PEAK)為縱坐標(biāo)，以側(cè)向散射光信號(hào)波形的脈沖寬度（SSCW)為橫坐標(biāo)，繪制 圖6所示（DIV/PEAK) - SSCW散點(diǎn)圖（步驟S504)。
[0059] CPU27a將熒光信號(hào)波形的差分積分值（DIV)除以熒光信號(hào)波形的峰值（PEAK)的 商（DIV / PEAK)與閾值2. 6比較，判斷分析目標(biāo)細(xì)胞是凝集細(xì)胞還是非凝集細(xì)胞。在此， 當(dāng)下列算式（1)成立時(shí)，該細(xì)胞為非凝集細(xì)胞，當(dāng)算式（1)不成立時(shí)，該細(xì)胞為凝集細(xì)胞。
[0060] DIV/PEAK ^ 2. 6
(1) CPU27a對(duì)非凝集細(xì)胞和凝集細(xì)胞分別計(jì)數(shù)(步驟S505)。
[0061] 然后，CPU27a將待分析細(xì)胞的側(cè)向熒光數(shù)據(jù)中反映待測(cè)細(xì)胞核DNA含量的值一表 示熒光信號(hào)脈沖面積的熒光量（SFLI)從硬盤(pán)27d讀取到RAM27c (步驟S506)，該熒光量是 反映待測(cè)細(xì)胞核DNA含量的值。CPU27a以熒光信號(hào)脈沖面積（熒光量）（SFLI)為橫坐標(biāo)， 繪制圖15所示直方圖(步驟S507)。在此直方圖中波峰出現(xiàn)在相當(dāng)于正常細(xì)胞的位置。
[0062] CPU27a判斷待分析細(xì)胞的熒光量（SFLI)是否超過(guò)圖15所示直方圖中波峰出現(xiàn)位 置的熒光量（SFLIP)的2. 5倍，即下列算式（2)是否成立。
[0063] SFLI 芎 SFLIP · 2. 5... (2) 在此，當(dāng)式（2)成立時(shí)，CPU27a將該細(xì)胞歸類于細(xì)胞核DNA含量異常的DNA含量異常細(xì) 胞，當(dāng)式（2)不成立時(shí)，將該細(xì)胞歸類于正常細(xì)胞。而且，CPU27a還對(duì)歸類為DNA含量異常 細(xì)胞的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)(步驟S508)。CPU27a從步驟S508獲取的DNA含量異常細(xì)胞的計(jì)數(shù)中 減去在步驟S505獲得的凝集細(xì)胞的計(jì)數(shù)，獲取異常細(xì)胞數(shù)(步驟S509)。
[0064] 接下來(lái)，CPU27a計(jì)算出步驟S505獲取的非凝集細(xì)胞數(shù)和步驟S509獲取的異常細(xì) 胞數(shù)的比率，獲取異常細(xì)胞比率(步驟S510)。此異常細(xì)胞比率是一個(gè)作為判斷細(xì)胞分析儀 10分析的樣本中是否存在一定數(shù)量以上的癌化和畸變細(xì)胞的指標(biāo)數(shù)值。比如，當(dāng)異常細(xì)胞 比率在1%以上時(shí)，說(shuō)明樣本中有一定數(shù)量以上的癌化和畸變細(xì)胞，受檢者由此可以知道自 己很可能受到癌癥侵襲。
[0065] CPU27a將步驟S510獲取的異常細(xì)胞比率與在步驟S502繪制的FSCW - FSCP散點(diǎn) 圖、在步驟S504繪制的（DIV/PEAK) - SSCW散點(diǎn)圖以及在步驟S507繪制的直方圖一起通過(guò) 圖像輸出接口 27g (圖3)顯示在系統(tǒng)控制裝置13的顯示器28上(參照?qǐng)D1)(步驟S511)。 CPU27a就是如上進(jìn)行細(xì)胞分析處理的。
[0066] 此次公開(kāi)的實(shí)施方式可以認(rèn)為在所有方面均為例示，絕無(wú)限制性。本發(fā)明的范圍 不受上述實(shí)施方式的說(shuō)明所限，僅由權(quán)利要求書(shū)的范圍所示，而且包括與權(quán)利要求范圍具 有同樣意思及權(quán)利要求范圍內(nèi)的所有變形。
[0067] 比如，本實(shí)施方式是判斷采自受檢者的樣本中是否有一定數(shù)量以上的宮頸部位的 癌化和畸變細(xì)胞，但本發(fā)明的細(xì)胞分析儀不限于此，也可以用于判斷采自受檢者的樣本中 是否有一定數(shù)量以上的口腔細(xì)胞、膀胱和咽喉等其他上皮細(xì)胞的癌化和畸變細(xì)胞、甚至臟 器的癌化和畸變細(xì)胞。
[0068] 又如，本實(shí)施方式在顯示器上顯示異常細(xì)胞比率，但本發(fā)明的細(xì)胞分析儀不限于 此，也可以在顯示異常細(xì)胞比率的同時(shí)，顯示受檢者是否受癌癥侵襲的文字表述。受檢者可 以據(jù)此更容易地了解自己是否很可能已受到癌癥侵襲。
[0069] 另外，本實(shí)施方式在獲得凝集細(xì)胞數(shù)后，獲取DNA含量異常細(xì)胞數(shù)，從DNA含量異 常細(xì)胞數(shù)減去凝集細(xì)胞數(shù)，求得異常細(xì)胞(癌化和畸變細(xì)胞）數(shù)，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限 于此。圖16為系統(tǒng)控制裝置13的CPU27a進(jìn)行第二細(xì)胞分析處理的流程圖。下面參照?qǐng)D 16就第二細(xì)胞分析處理進(jìn)行說(shuō)明。
[0070] 在第二細(xì)胞分析處理中，CPU27a在步驟S5001~5004進(jìn)行與圖12所示細(xì)胞分析處 理步驟S501?504相同的處理。
[0071] 接著，CPU27a在步驟S5003對(duì)待分析細(xì)胞作出上述式（1)是否成立的判斷，如果式 (1)成立，則該細(xì)胞作為非凝集細(xì)胞計(jì)數(shù)(步驟S5005)。
[0072] 然后，CPU27a將上述式（1)成立的非凝集細(xì)胞的熒光量（SFLI)從硬盤(pán)27d讀到 RAM27c (步驟S5006)。CPU27a以熒光量（SFLI)為橫坐標(biāo)繪制直方圖（步驟S5007)。
[0073] CPU27a將在步驟S5007繪制的直方圖中顯示出熒光量超過(guò)波峰出現(xiàn)位置的熒 光量（SFLIP) 2. 5倍的細(xì)胞劃歸為異常細(xì)胞(癌化和畸變細(xì)胞)，對(duì)該細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)(步驟 S5008)。
[0074] CPU27a在步驟S5009進(jìn)行與圖12所示細(xì)胞分析處理的步驟S510相同的處理，獲 取異常細(xì)胞比率。接著，CPU27a將步驟S5009獲取的異常細(xì)胞比率與在步驟S5002繪制的 FSCW - FSCP散點(diǎn)圖、在步驟S5004繪制的（DIV/PEAK) - SSCW散點(diǎn)圖以及在步驟S5007繪 制的直方圖一起通過(guò)圖像輸出接口 27g (圖3)顯示在系統(tǒng)控制裝置13的顯示器28上(參 照?qǐng)D1)(步驟S5010)。CPU27a就是如上進(jìn)行第二細(xì)胞分析處理的。
[0075] 圖17為系統(tǒng)控制裝置13的CPU27a進(jìn)行第三細(xì)胞分析處理的流程圖。下面參照 圖17就第三細(xì)胞分析處理進(jìn)行說(shuō)明。
[0076] 在第三細(xì)胞分析處理中，CPU27a在步驟S5000U50002進(jìn)行與圖12所示細(xì)胞分析 處理步驟S501、502相同的處理。
[0077] CPU27a將步驟S50002獲取的待分析細(xì)胞的側(cè)向熒光數(shù)據(jù)中熒光信號(hào)波形的差分 積分值（DIV)、熒光信號(hào)波形的峰值（PEAK)和熒光信號(hào)的脈沖面積一熒光量（SFLI)從硬盤(pán) 27d讀到RAM27c，求熒光信號(hào)波形的差分積分值（DIV)除以熒光信號(hào)波形的峰值（PEAK)所 得的商（DIV/ PEAK)，同時(shí)，將待分析細(xì)胞的側(cè)向散射光數(shù)據(jù)中側(cè)向散射光信號(hào)波形的脈沖 寬度（SSCW)從硬盤(pán)27d讀到RAM27c (步驟S50003)。CPU27a繪制以熒光信號(hào)波形的差分 積分值除以峰值的商（DIV/ PEAK)為縱坐標(biāo)、以側(cè)向散射光信號(hào)波形的脈沖寬度（SSCW)為 橫坐標(biāo)的（DIV/ PEAK) - SSCW散點(diǎn)圖和以熒光信號(hào)脈沖面積(熒光量）（SFLI)為橫坐標(biāo)的 直方圖（步驟S50004)。
[0078] CPU27a判斷上述式（1)和式（2)是否都成立，當(dāng)上述式（1)和式（2)都成立時(shí)，將 該細(xì)胞劃歸為異常細(xì)胞(癌化和畸變細(xì)胞)，并對(duì)該細(xì)胞計(jì)數(shù)(步驟S50005)。在本步驟的處 理中，CPU27a將僅式（1)成立的細(xì)胞作為非凝集細(xì)胞計(jì)數(shù)。
[0079] CPU27a在步驟S50006進(jìn)行與圖12所示細(xì)胞分析處理的步驟S510同樣的處理， 獲取異常細(xì)胞比率。然后CPU27a將步驟S50006獲取的異常細(xì)胞比率與在步驟S50002繪 制的FSCW - FSCP散點(diǎn)圖、在步驟S50004繪制的（DIV/PEAK) - SSCW散點(diǎn)圖以及直方圖一 起通過(guò)圖像輸出接口 27g (圖3)顯示在系統(tǒng)控制裝置13的顯示器28上(參照?qǐng)D1)(步驟 S50007)。CPU27a就是如上進(jìn)行第三細(xì)胞分析處理的。
[0080] 細(xì)胞分析儀10用可染色待測(cè)細(xì)胞核的色素制備測(cè)定試樣，由檢測(cè)部件檢測(cè)該細(xì) 胞核發(fā)出的熒光。如前所述，從細(xì)胞發(fā)出的前向散射光信號(hào)波形中，根據(jù)細(xì)胞的凝集狀態(tài) 和細(xì)胞的流動(dòng)方向等，波形的峰谷部分有時(shí)不鮮明，但在熒光信號(hào)的波形中，峰谷部分很鮮 明，因此，利用此細(xì)胞核發(fā)出的熒光可以精確地判斷是凝集細(xì)胞還是非凝集細(xì)胞。
【權(quán)利要求】
1. 一種分析生物試樣所含宮頸部位細(xì)胞的細(xì)胞分析儀，包括： 檢測(cè)部件，讓包含細(xì)胞核被有選擇地染色的所述宮頸部位細(xì)胞的測(cè)定試樣流入流動(dòng) 室，用激光照射流過(guò)所述流動(dòng)室的所述測(cè)定試樣，檢測(cè)所述測(cè)定試樣發(fā)出的熒光； 信號(hào)處理部件，根據(jù)所述檢測(cè)部件輸出的熒光信號(hào)獲取反映熒光信號(hào)波形高度的第一 值、反映熒光信號(hào)波形的棱線長(zhǎng)度的第二值和反映測(cè)定對(duì)象細(xì)胞核的DNA含量的第三值； 及分析部件，根據(jù)所述信號(hào)處理部件獲取的所述第一值、所述第二值和所述第三值，從所述 測(cè)定試樣所含測(cè)定對(duì)象細(xì)胞中分出異常細(xì)胞。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞分析儀，其特征在于： 所述分析部件將所述第二值除以所述第一值所得的商小于第一閾值、所述第三值大于 第二閾值的細(xì)胞歸類為異常細(xì)胞。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞分析儀，其特征在于： 所述分析部件獲取熒光信號(hào)波形的峰值作為所述反映熒光信號(hào)波形高度的值，獲取熒 光信號(hào)波形的差分積分值作為所述反映熒光信號(hào)波形的棱線長(zhǎng)度的值。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞分析儀，其特征在于： 所述分析部件獲取熒光信號(hào)的脈沖面積作為所述反映測(cè)定對(duì)象細(xì)胞核的DNA含量的 值。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞分析儀，其特征在于： 所述分析部件將熒光信號(hào)的脈沖面積的直方圖中熒光量高于正常細(xì)胞的細(xì)胞歸類為 異常細(xì)胞。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞分析儀，其特征在于： 所述分析部件根據(jù)所述第一值和所述第二值判斷凝集細(xì)胞，并將所述凝集細(xì)胞的數(shù)據(jù) 排除。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞分析儀，其特征在于： 所述分析部件根據(jù)所述第一值和所述第二值的比判斷凝集細(xì)胞，并將所述凝集細(xì)胞的 數(shù)據(jù)排除。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞分析儀，其特征在于： 所述分析部件從根據(jù)所述第三值判斷出的DNA含量異常細(xì)胞的數(shù)量中減去根據(jù)所述 第一值和第二值判斷出的凝集細(xì)胞的數(shù)量，以此求出異常細(xì)胞的數(shù)量。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的細(xì)胞分析儀，其特征在于： 所述分析部件根據(jù)所述第一值和所述第二值獲取非凝集細(xì)胞的數(shù)量，根據(jù)所述非凝集 細(xì)胞的數(shù)量和所述異常細(xì)胞的數(shù)量獲取異常細(xì)胞的比率。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的細(xì)胞分析儀，其特征在于： 該細(xì)胞分析儀還具有顯示器，所述分析部件將所述異常細(xì)胞的比率顯示在所述顯示器 上。
【文檔編號(hào)】G01N15/14GK104122191SQ201410379120
【公開(kāi)日】2014年10月29日 申請(qǐng)日期:2008年10月24日 優(yōu)先權(quán)日:2007年10月29日
【發(fā)明者】石坂正樹(shù), 岸和希, 福田正和 申請(qǐng)人:希森美康株式會(huì)社