一種阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用，抗體針對的抗原為阪崎腸桿菌外膜蛋白A（Outer?Membrane?ProteinA，OmpA）；本發(fā)明提供了針對OmpA抗原的多克隆抗體為基礎(chǔ)研制的檢測阪崎腸桿菌的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒和免疫磁珠-PCR檢測試劑盒。本發(fā)明提供的阪崎腸桿菌的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒和免疫磁珠-PCR檢測試劑盒可用于食品、臨床及環(huán)境檢測領(lǐng)域中阪崎腸桿菌的免疫學(xué)檢測，具有精確性高、靈敏度高、操作簡便、處理量大等特點，適合大量樣本的篩查。
【專利說明】—種阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及食源性病原微生物檢測領(lǐng)域中的多克隆抗體的制備與應(yīng)用，具體涉及一種阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用。
[0002]
【背景技術(shù)】[0003]阪崎腸桿菌iEn terobac ter sakazaki? )是一類周生鞭毛、能運動、無芽孢的革蘭陰性細菌，在一定條件下可引起人和動物致病。阪崎腸桿菌原稱黃色陰溝桿菌(YellowPigmented Enterobacter, 2008年Iverson依據(jù)生理生化特性將該菌劃分為一
個新的屬-克羅諾桿菌屬)。目前國際上公認的克羅諾桿菌屬細菌
共有 7 個種，包括 C sakazaki1、C.malonaticus、C.dublinensis、C.muytJensii^ C.turicensis.、C.condimenti 取 C.universalis ^, ^Φ C.sakazaki1.、C.malonaticus和C.turicensis與新生兒致病密切相關(guān)。
[0004]阪崎腸桿菌能引起各年齡段人群的感染，特別是新生兒、嬰幼兒及免疫力低下的人群。因能引起嚴重的新生兒腦膜炎、菌血癥和壞死性小腸結(jié)腸炎，并可能遺留嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，死亡率高達40%-80%。2002年國際食品微生物標準化委員會把阪崎腸桿菌列為“嚴重危害特定人群，危害生命或慢性實質(zhì)性后遺癥或長期影響”的一種致病菌。阪崎腸桿菌的外膜蛋白A (Outer membrane protein A, OmpA)在遺傳上具有較高的保守性,并且暴露于菌體表面，具有高的免疫原性，不僅可激發(fā)機體的體液免疫，而且還可誘導(dǎo)細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，因而可作為一種良好的免疫原。
[0005]目前，國內(nèi)外檢測阪崎腸桿菌的方法有生理生化鑒定和分子生物學(xué)檢測法。微生物快速檢測技術(shù)是食源性致病菌檢測方法的發(fā)展趨勢，其中基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測技術(shù)具有良好的發(fā)展前景。酶聯(lián)免疫吸附檢測方法(Enzyme-linked immuosorbentassay, ELISA)是目前免疫學(xué)檢測方法中應(yīng)用最為廣泛，技術(shù)最為成熟的方法。然而，目前尚未有針對阪崎腸桿菌開發(fā)的ELISA檢測試劑盒，因此迫切需要一種能夠應(yīng)用于食品安全檢測領(lǐng)域中的阪崎腸桿菌ELISA檢測試劑盒。此外，免疫磁珠富集技術(shù)在食源性致病菌快速檢測領(lǐng)域中的發(fā)展迅速。免疫磁珠富集技術(shù)能夠從環(huán)境、臨床和食品樣品中富集致病菌等病原體，提供靈敏、快速、有效的富集分離方法，具有廣闊的發(fā)展前景。
[0006]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]解決的技術(shù)問題:本發(fā)明的目的在于為了克服以上現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一種阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體，并基于該抗體設(shè)計出了阪崎腸桿菌ELISA檢測試劑盒和免疫磁珠-PCR檢測試劑盒，用于檢測樣本中是否存在阪崎腸桿菌。
[0008]技術(shù)方案
一種阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體，所述多克隆抗體為將阪崎腸桿菌標準菌株Csakazakii ATCC29544的基因片段擴增，酶切，構(gòu)建到表達載體pET_32a ( + )中，得到重組質(zhì)粒pET32a ( + )- OmpA，再將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中，培養(yǎng)、誘導(dǎo)篩選得到正確表達的重組質(zhì)粒pET-32a ( + ) -OmpA,再將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21 (DE3)感受態(tài)細胞，培養(yǎng)、誘導(dǎo)表達，鑒定分離純化得到重組OmpA蛋白，將該蛋白免疫動物而獲得。
[0009]一種以上所述的阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體的制備方法，采用如下步驟進行: 步驟一，擴增阪崎腸桿菌標準菌株C sakazakii ATCC29544的基因片段； 步驟二，用連接酶將步驟一擴增得到產(chǎn)物與PMD19-T克隆載體進行連接，得到pMD19-T-0mpA重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細胞，培養(yǎng)并誘導(dǎo)篩選得到正確的pMD19-T-0mpA 重組質(zhì)粒；
步驟三，將步驟二篩選得到的正確的pMD19-T-0mpA重組質(zhì)粒酶切后回收目的片段，構(gòu)建到表達載體pET-32a ( + )中，得到重組表達質(zhì)粒pET32a ( + )_0mpA，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細胞，培養(yǎng)并篩選鑒定得到含有正確重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株；
步驟四，將步驟三鑒定得到的正確的重組表達質(zhì)粒pET-32a ( + )-0mpA轉(zhuǎn)化宿主菌大腸桿菌BL21 (DE3)感受態(tài)細胞，于LB培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，誘導(dǎo)表達，鑒定后進行分離純化，得到重組OmpA蛋白；
步驟五，將步驟四得到的重組OmpA蛋白進行動物免疫試驗，經(jīng)特異性驗證，分離純化抗血清，得到阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體。
[0010]所述的阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體的制備方法，步驟一中擴增阪崎腸桿菌OmpA的基因片段的引物對可以為OmpA-SF和OmpA-SR，其中OmpA-SF為SEQ ID N0.1所示，OmpA-SR 為 SEQ ID N0.2 所示。
[0011]所述的阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體的制備方法，步驟二中所述大腸桿菌感受態(tài)細胞優(yōu)選為大腸桿菌DH5a感受態(tài)細胞；所述連接酶優(yōu)選為T4 DNA連接酶，培養(yǎng)并誘導(dǎo)篩選的過程優(yōu)選為將擴增得到的核酸片段PMD19-T克隆載體于16 °C過夜連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a感受態(tài)細胞，涂布于含有X-Gal、IPTG、含50 yg/mL氨芐青霉素的LB平板上，倒置，37 1:培養(yǎng)過夜，挑取白色菌落于含50 yg/mL氨芐青霉素的液體LB培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)，提取質(zhì)粒，對重組質(zhì)粒分別進行酶切鑒定和PCR鑒定，將篩選出的陽性克隆進行測序分析，測序正確的即為所需重組質(zhì)粒。
[0012]所述的阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體的制備方法，所述大腸桿菌感受態(tài)細胞優(yōu)選為大腸桿菌DH5ci感受態(tài)細胞；培養(yǎng)并篩選鑒定過程可以為將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌涂布于含50 μ g/mL氨芐青霉素的LB平板上，倒置，37 1:培養(yǎng)過夜，挑取陽性克隆接種于50 mL含50 μ g/mL Amp的LB培養(yǎng)基中，37 °C振蕩培養(yǎng)過夜，收集細菌提取質(zhì)粒，進行PCR及雙酶切鑒定，得到含有正確重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。
[0013]所述的阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體的制備方法，步驟五中動物免疫試驗的過程可以為以步驟四純化得到的蛋白為免疫原，對成年雌性新西蘭大白兔采用6點皮下注射法進行免疫，免疫前I周取新西蘭大白兔耳緣靜脈血，分離血清作為陰性對照，每次免疫時取免疫原與等量的弗氏佐劑制成混合乳化劑，首次免疫后分別于第14、28和42天再加強免疫一次，免疫劑量為1.0 mL/次，免疫過程中，定期從免疫兔子的耳緣靜脈采血，分離血清，檢測血清中抗體效價。
[0014]一種阪崎腸桿菌免疫檢測試劑盒，含有以上所述的阪崎腸桿菌多克隆抗體。[0015]一種阪崎腸桿菌免疫磁珠-PCR檢測試劑盒，含有以上所述的阪崎腸桿菌多克隆抗體。
[0016]以上所述的阪崎腸桿菌免疫檢測試劑盒在檢測阪崎腸桿菌中的用途。
[0017]以上所述的阪崎腸桿菌免疫磁珠-PCR檢測試劑盒在檢測阪崎腸桿菌中的用途。
[0018]有益效果
本發(fā)明以阪崎腸桿菌OmpA為抗原通過基因克隆以及動物免疫的方法篩選并分離純化出阪崎腸桿菌OmpA的多克隆抗體，并且利用該抗體設(shè)計出了阪崎腸桿菌ELISA檢測試劑盒和免疫磁珠-PCR檢測試劑盒。
[0019]本發(fā)明制備的阪崎腸桿菌OmpA抗原的多克隆抗體特異性強，純度及效價高(大于
1.1X105)，可長期保存，適用于阪崎腸桿菌的免疫學(xué)檢測。
[0020]本發(fā)明提供的阪崎腸桿菌酶聯(lián)免疫檢測試劑盒和免疫磁珠-PCR檢測試劑盒，操作簡便，處理量大，適合大量樣本的篩查，可以明顯的縮短檢測周期，提高檢測效率。將其應(yīng)用于食品及環(huán)境檢測領(lǐng)域中阪崎腸桿菌的免疫檢測，將具有精確性高、靈敏度高等特點，因而具有應(yīng)用廣闊的前景。
[0021]
【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]圖1為OmpA基因PCR產(chǎn)物電泳圖譜，其中M為I kb DNA梯度條帶；1和2為PCR擴增的目標片段。
[0023]圖2為重組OmpA蛋白親和層析圖譜。
[0024]圖3為表達產(chǎn)物的SDS-PAGE分析，其中，M為蛋白marker ; I為不含pET_32a的大腸桿菌BL21 (DE3)誘導(dǎo)表達的全菌總蛋白(空載體誘導(dǎo)表達)；2為含pET-32a的重組大腸桿菌IPTG誘導(dǎo)的全菌總蛋白；3為重組菌誘導(dǎo)表達O h細胞破碎液上清；4為重組菌誘導(dǎo)表達16 h細胞破碎液上清；5-9為重組菌誘導(dǎo)表達16h后細胞破碎液上清，分別對應(yīng)圖3中收集到的1、2、3、4、5號樣品。
[0025]圖4為阪崎腸桿菌多克隆抗體親和層析圖譜。
[0026]圖5為親和層析純化阪崎腸桿菌多克隆抗體的SDS-PAGE分析圖，其中M為蛋白marker ；P為親和層析純化阪崎腸桿菌多克隆抗體。
[0027]圖6為免疫磁珠-PCR檢測嬰幼兒配方奶粉中的阪崎腸桿菌，其中M為蛋白marker ;P 為陽性菌株對照、C.sakazakii ATCC 29544) ;N 為陰性對照(ddH20) ;1_15 為嬰幼兒配方奶粉樣本。
[0028]
【具體實施方式】[0029] 實施例1
阪崎腸桿菌OmpA原核表達載體的構(gòu)建及其蛋白的分離純化
1.目的基因OmpA的擴增
參照GenBank中公布的阪崎腸桿菌OmpA的核苷酸序列(GQ845410.1)設(shè)計引物OmpA-SF (CCGGAATTCCGGATGAAAAAGACGGCTATC 下劃線部分為 ^boR I 位點，SEQ ID N0.1)和OmpA-SR (CCCAAGCTTGGGTTAAGCCTGCGGCTGAGTTAC 下劃線部分為 Η?η? III，SEQ ID N0.2)擴增OmpA基因。
[0030]以阪崎腸桿菌標準菌株C.sakazakii ATCC29544的基因組DNA為模板進行PCR擴增。PCR 反應(yīng)體系:10X pfu Buffer (含 15 mM Mg2+) 5 μ?, dNTP (2.5 μΜ)4 yL，引物OmpA-SF (2.5 μ Μ) 2 μ L，引物 OmpA-SR (2.5 μ Μ) 2 μ L, DNA 模板 I μ L, pfu (2.5U/μ L) I μ L，加ddH20補齊至50 μ L。PCR反應(yīng)條件是:預(yù)變性94 °C, 3 min ;變性溫度94°C,40 s ;退火溫度55 °C, 50 s ;延伸溫度72 °C，2 min ;35個循環(huán)后，72 °C延伸10 min。OmpA基因的PCR擴增PCR產(chǎn)物進行1.0 %瓊脂糖凝膠電泳分析，并回收產(chǎn)物。PCR產(chǎn)物電泳圖譜如圖1所示，可以看出在I kb左右有一條清晰、單一的電泳條帶，表明用本發(fā)明方法可以將阪崎腸桿菌OmpA基因擴增出來。
[0031]2.目的基因的克隆與測序
用T4 DNA連接酶將PCR產(chǎn)物與pMD19-T克隆載體于16 V過夜連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 α感受態(tài)細胞，涂布于含有X-Gal、IPTG、氨芐青霉素(含50 μ g/mL Amp)的LB平板上，倒置，37 °C培養(yǎng)過夜。次日挑取白色菌落于液體LB培養(yǎng)基(含50 μ g/mLAmp)，振蕩培養(yǎng)，提取質(zhì)粒。對重組質(zhì)粒分別進行酶切鑒定和PCR鑒定，將鑒定出的陽性克隆進行測序分析，篩選得到正確的pMD19-T-0mpA重組質(zhì)粒。
[0032]3.重組表達載體的構(gòu)建和鑒定
經(jīng)篩選得到的pMD19-T-0mpA重組質(zhì)粒經(jīng)I /Hind III雙酶切后回收目的片段，并與表達載體pET-32a ( + )于16 1:連接過夜，構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pET32a ( + )-OmpA轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a感受態(tài)細胞，涂布于氨芐青霉素的LB平板上(含50 μ g/mL Amp)，倒置，37 V培養(yǎng)過夜。挑取陽性克隆接種于50 mL LB培養(yǎng)基中(含50 μ g/mL Amp)37 °C振蕩培養(yǎng)過夜，收集細菌提取質(zhì)粒，進行PCR及雙酶切鑒定，得到含有正確重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。
[0033]4.重組蛋白的誘導(dǎo)表達及鑒定
將鑒定得到的重組表達載體pET-32a ( + )-OmpA轉(zhuǎn)化宿主菌大腸桿菌BL21 (DE3)感受態(tài)細胞，涂布于Amp的LB平板上(含50 μ g/mL Amp)，倒置，37 °C培養(yǎng)過夜。挑取單菌落接種于液體LB培養(yǎng)基中(含有葡萄糖0.2% (w/v), Amp 50 Pg/mL)，30 V 100 r/min培養(yǎng)過夜。取5 mL種子液接種到100 mL新鮮液體LB培養(yǎng)基中(含有葡萄糖0.2% (w/v), Amp100 Pg/mL)，37 V 180 r/min 至 0D_ 值約為(λ 6 時，加 IPTG 至終濃度為 I mM，在 16 V條件下，誘導(dǎo)15 h左右。同時設(shè)陰性對照，SDS-PAGE檢測目的蛋白的表達。陽性菌株進行大量誘導(dǎo)，超聲裂解破碎后，分別收集上清和沉淀，進行SDS-PAGE，對融合蛋白進行可溶性分析?？扇苄苑治鲎C實大腸桿菌BL21 (DE3)表達的OmpA蛋白部分可溶性表達，SDS-PAGE分析表明在上清和沉淀均含有重組蛋白。為了保證重組蛋白的生物學(xué)活性，后續(xù)試驗中純化了細胞破碎液上清液中的重組蛋白。
[0034]5.阪崎腸桿菌OmpA的分離與純化 將誘導(dǎo)表達后1(T18 h后的菌液離心后，菌體用結(jié)合緩沖液重懸，超聲碎菌體后取上清，用GE Healthcare公司的Histrap HP親和層析柱純化,并采用GE公司的Akta快速蛋白液相色譜(FPLC)純化重組蛋白。用起始結(jié)合緩沖液A以1.00 mL/min的流速將HisTrapHP柱平衡5 min,上樣1_50 mL,結(jié)合洗脫緩沖液B，采用等度洗脫的方式將重組OmpA蛋白洗脫下來。洗脫程序如表1所示。重組OmpA蛋白的親和層析圖譜結(jié)果如圖2所示，主要有2個洗脫蛋白峰。收集不同洗脫濃度的洗脫液，將洗脫液進行SDS-PAGE分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)重組OmpA主要集中在第2個洗脫峰，即當洗脫緩沖液A為20%，洗脫緩沖液B為80%時，重組OmpA被大量洗脫下來。洗脫峰2的SDS-PAGE分析結(jié)果如圖3所示，結(jié)果表明親和層析純化后獲得了純度較高的重組OmpA蛋白。通過考馬斯亮藍比色法測定親和層析純化后的重組OmpA蛋白，然后將濃度較高的重組OmpA蛋白收集合并,再經(jīng)HiTrap Desalting脫鹽柱脫鹽和30 KDa超濾管濃縮后保存于-20°C備用。
[0035]表1.鎳柱親和層析洗脫程序
【權(quán)利要求】
1.一種阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體，其特征在于，所述多克隆抗體為將阪崎腸桿菌標準菌株C.sakazakii ATCC29544的基因片段擴增，酶切，構(gòu)建到表達載體pET_32a ( + )中，得到重組質(zhì)粒pET32a ( + )- OmpA，再將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中，培養(yǎng)、誘導(dǎo)篩選得到正確表達的重組質(zhì)粒pET-32a ( + ) -OmpA,再將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21 (DE3)感受態(tài)細胞，培養(yǎng)、誘導(dǎo)表達，鑒定分離純化得到重組OmpA蛋白，將該蛋白免疫動物而獲得。
2.—種權(quán)利要求1所述的阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體的制備方法，其特征在于，采用如下步驟進行: 步驟一，擴增阪崎腸桿菌標準菌株C sakazakii ATCC29544的基因片段； 步驟二，用連接酶將步驟一擴增得到產(chǎn)物與PMD19-T克隆載體進行連接，得到pMD19-T-0mpA重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細胞，培養(yǎng)并誘導(dǎo)篩選得到正確的pMD19-T-0mpA 重組質(zhì)粒； 步驟三，將步驟二篩選得到的正確的pMD19-T-0mpA重組質(zhì)粒酶切后回收目的片段，構(gòu)建到表達載體pET-32a ( + )中，得到重組表達質(zhì)粒pET32a ( + )_0mpA，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細胞，培養(yǎng)并篩選鑒定得到含有正確重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株； 步驟四，將步驟三鑒定得到的正確的重組表達質(zhì)粒pET-32a ( + )-0mpA轉(zhuǎn)化宿主菌大腸桿菌BL21 (DE3)感受態(tài)細胞，于LB培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，誘導(dǎo)表達，鑒定后進行分離純化，得到重組OmpA蛋白； 步驟五，將 步驟四得到的重組OmpA蛋白進行動物免疫試驗，經(jīng)特異性驗證，分離純化抗血清，得到阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟一中擴增阪崎腸桿菌OmpA的基因片段的引物對為OmpA-SF和OmpA-SR，其中OmpA-SF為SEQID N0.1 所示，OmpA-SR 為 SEQ ID N0.2 所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟二中所述大腸桿菌感受態(tài)細胞為大腸桿菌DH5a感受態(tài)細胞；所述連接酶為T4 DNA連接酶，培養(yǎng)并誘導(dǎo)篩選的過程為將擴增得到的核酸片段PMD19-T克隆載體于16 °C過夜連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 a感受態(tài)細胞，涂布于含有X-Gal、IPTG、含50 μ g/mL氨芐青霉素的LB平板上，倒置，37 °(:培養(yǎng)過夜,挑取白色菌落于含50 μ g/mL氨芐青霉素的液體LB培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)，提取質(zhì)粒，對重組質(zhì)粒分別進行酶切鑒定和PCR鑒定，將篩選出的陽性克隆進行測序分析，測序正確的即為所需重組質(zhì)粒。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟三中所述大腸桿菌感受態(tài)細胞為大腸桿菌DH5ci感受態(tài)細胞；培養(yǎng)并篩選鑒定過程為將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌涂布于含50 μ g/mL氨芐青霉素的LB平板上，倒置，37 1:培養(yǎng)過夜，挑取陽性克隆接種于50 mL含50 μ g/mL Amp的LB培養(yǎng)基中，37 °C振蕩培養(yǎng)過夜，收集細菌提取質(zhì)粒，進行PCR及雙酶切鑒定，得到含有正確重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的阪崎腸桿菌OmpA多克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟五中動物免疫試驗的過程為以步驟四純化得到的蛋白為免疫原，對成年雌性新西蘭大白兔采用6點皮下注射法進行免疫，免疫前I周取新西蘭大白兔耳緣靜脈血，分離血清作為陰性對照，每次免疫時取免疫原與等量的弗氏佐劑制成混合乳化劑，首次免疫后分別于第14、28和42天再加強免疫一次，免疫劑量為1.0 mL/次，免疫過程中，定期從免疫兔子的耳緣靜脈采血，分離血清，檢測血清中抗體效價。
7.一種阪崎腸桿菌免疫檢測試劑盒，其特征在于，含有權(quán)利要求1所述的阪崎腸桿菌多克隆抗體。
8.一種阪崎腸桿菌免疫磁珠-PCR檢測試劑盒，其特征在于，含有權(quán)利要求1所述的阪崎腸桿菌多克隆抗體。
9.權(quán)利要求7所述的阪崎腸桿菌免疫檢測試劑盒在檢測阪崎腸桿菌中的用途。
10.權(quán)利要求8所述的阪崎腸桿菌免疫磁珠-PCR檢測試劑盒在檢測阪崎腸桿菌中的用途。`
【文檔編號】G01N33/569GK103819557SQ201410089162
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年3月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月12日
【發(fā)明者】陸兆新, 李遠宏, 陳啟明, 曹林, 呂鳳霞, 別小妹 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)