檢測用堿性橙Ⅱ標(biāo)準樣品的制備方法
【專利摘要】檢測用堿性橙Ⅱ標(biāo)準樣品的制備方法，涉及一種檢測用標(biāo)準樣品的制備方法，在三口反應(yīng)瓶內(nèi)加入水、鹽酸和苯胺，攪拌；滴加亞硝酸鈉溶液，用碘化鉀淀粉試紙確定反應(yīng)終點；加入尿素除去多余的亞硝酸鈉；在另一三口反應(yīng)瓶內(nèi)加入水、間苯二胺，攪拌，升溫至間苯二胺全部溶解，隨后加入水結(jié)晶，過濾，鹽析過濾后干燥得產(chǎn)品；粗品經(jīng)過重結(jié)晶分離后，洗脫液氮吹后干燥的純品；取粗品與硅膠攪拌均勻后，裝柱后依次用石油醚潤洗、二氯甲烷洗滌后，用二氯甲烷/甲醇洗脫目的物；該方法制得的標(biāo)準樣品解決我國檢測用標(biāo)準品依賴進口，為我國食品安全檢驗檢測提供全面實物標(biāo)準保障，為我國各級政府食品安全監(jiān)控提供了技術(shù)支撐。
【專利說明】檢測用堿性橙II標(biāo)準樣品的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測用標(biāo)準樣品的制備方法，特別是涉及一種檢測用堿性橙II標(biāo)準樣品的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]標(biāo)準樣品是具足夠均勻的一種或多種化學(xué)的、物理的、生物學(xué)的、工程技術(shù)的或感官的等性能特征，經(jīng)技術(shù)鑒定，并附有說明有關(guān)性能數(shù)據(jù)證書的一批樣品。是以其性質(zhì)與供試樣品進行比較的質(zhì)量均一的實物樣品，并且有適合使用目的的純度。
[0003]堿性橙II是一種偶氮類堿性工業(yè)染料，俗名“王金黃”、“塊黃”等。一般用于腈綸纖維的染色和織物的直接印花，也用于蠶絲，羊毛和棉纖維的染色，還用于皮革、紙張、羽毛、草、木、竹等制品的染色。過量攝取、吸入以及皮膚接觸該物質(zhì)均會造成急性和慢性的中毒傷害，為致癌物。根據(jù)我國的相關(guān)標(biāo)準，該物質(zhì)并未列入食品添加劑范圍之內(nèi)。由于堿性橙II比其它水溶性染料如檸檬黃、日落黃等更易于在豆腐以及一些水產(chǎn)品上染色且不易褪色，一些不法商販用該物質(zhì)對豆制品等食品進行染色，以求獲得更好的賣相，欺騙消費者。
[0004]因此，及時準確判斷食品中是否存在這種非食用色素，建立快速、準確的食品中非食用色素堿性橙II的測定方法是非常必要的。而進行定量方法的開發(fā)就需要高純度的標(biāo)準品，采用標(biāo)準樣品，才能保證檢測結(jié)果在國際交往中的準確性、可比性、可溯源性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種檢測用堿性橙II標(biāo)準樣品的制備方法，該方法制得純度高、含量準確、均勻性和穩(wěn)定性均符合要求的標(biāo)準樣品，解決我國檢測用標(biāo)準品依賴進口，為我國食品安全檢驗檢測提供全面實物標(biāo)準保障，為我國各級政府食品安全監(jiān)控提供了技術(shù)支撐。
[0006]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
檢測用堿性橙II標(biāo)準樣品的制備方法，其所述方法包括堿性橙II的合成與純化過程:在三口反應(yīng)瓶內(nèi)加入水、鹽酸和苯胺，攪拌；滴加亞硝酸鈉溶液，用碘化鉀淀粉試紙確定反應(yīng)終點；加入尿素除去多余的亞硝酸鈉，將此重氮液放入冰箱中冷藏；在另一三口反應(yīng)瓶內(nèi)加入水、間苯二胺，攪拌，升溫至間苯二胺全部溶解，然后降溫并以鹽酸調(diào)節(jié)PH值，緩慢加入重氮液，繼續(xù)攪拌至重氮液完全反應(yīng)，隨后加入水，升溫加入鹽酸，攪拌均勻，靜置，結(jié)晶，過濾，鹽析過濾后干燥得產(chǎn)品；粗品經(jīng)過重結(jié)晶分離后，采用薄層色譜進行分離，甲醇與二氯甲烷比列為1-J時，樣品進行硅膠柱凈化，甲醇與三氯甲烷混合液梯度洗脫，洗脫液氮吹后干燥的純品；取粗品與硅膠攪拌均勻后，裝柱后依次用石油醚潤洗、二氯甲烷洗滌后，用二氯甲烷/甲醇洗脫目的物；將上述制得堿性橙II標(biāo)準品，用棕色瓶進行分裝，每瓶10 mg共115瓶,編號后置于室溫、通風(fēng)密封保存即可。
[0007]所述的檢測用堿性橙II標(biāo)準樣品的制備方法，所述堿性橙II的合成與純化:在三口反應(yīng)瓶內(nèi)加入水10mL、36%的鹽酸14 g和苯胺3.5 g，攪拌；保持反應(yīng)瓶內(nèi)為0_5°C，于Ih之內(nèi)滴加入30%的亞硝酸鈉溶液20 mL，加完繼續(xù)反應(yīng)30 min，用碘化鉀淀粉試紙確定反
應(yīng)終點。
[0008]所述的檢測用堿性橙II標(biāo)準樣品的制備方法，所述堿性橙II的合成與純化:在另一三口反應(yīng)瓶內(nèi)加入水12.5 mL、間苯二胺4.5 g，攪拌，升溫至65°C，至間苯二胺全部溶解，然后降溫至_4°C，并以36%的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至6-7，開始緩慢加入冷至_4°C的重氮液，維持三口瓶內(nèi)反應(yīng)溫度不大于_2°C，加完繼續(xù)攪拌至重氮液完全反應(yīng)，隨后加入水20 mL,升溫至95°C，加入36%的鹽酸0.3 g，攪拌均勻，靜置，結(jié)晶，過濾，鹽析過濾后于60°C干燥，得產(chǎn)品約10 go
[0009]所述的檢測用堿性橙II標(biāo)準樣品的制備方法，所述堿性橙II的合成與純化:粗品經(jīng)過重結(jié)晶分離后，采用薄層色譜進行分離，甲醇與二氯甲烷比列為1:7時，在薄層上主產(chǎn)物與其他雜質(zhì)得到分離；樣品進行硅膠柱凈化，甲醇與三氯甲烷混合液梯度洗脫，洗脫液氮吹后干燥的純品，取1.2 g粗品與25 g硅膠100-140目攪拌均勻后，裝柱后依次用100 mL石油醚潤洗、200 mL 二氯甲烷洗滌后，用200 mL的二氯甲烷/甲醇7:1洗脫目的物。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1為本發(fā)明堿性橙II標(biāo)準樣品的制備工藝示意圖；
圖2為本發(fā)明堿性橙II標(biāo)準樣品的液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0011]下面結(jié)合附圖所示實施例，對本發(fā)明作進一步詳述。
[0012]實施例1:
堿性橙II的合成與純化:在三口反應(yīng)瓶內(nèi)加入水10mL、36%的鹽酸14 g和苯胺3.5 g，攪拌；保持反應(yīng)瓶內(nèi)為0-5°C，于I h之內(nèi)滴加入30%的亞硝酸鈉溶液20 mL,加完繼續(xù)反應(yīng)30 min，用碘化鉀淀粉試紙確定反應(yīng)終點。加入尿素除去多余的亞硝酸鈉，將此重氮液放入冰箱中冷藏。
[0013]在另一三口反應(yīng)瓶內(nèi)加入水12.5 mL、間苯二胺4.5 g，攪拌，升溫至65°C，至間苯二胺全部溶解，然后降溫至-4°C，并以36%的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至6-7。開始緩慢加入冷至-4°C的重氮液，維持三口瓶內(nèi)反應(yīng)溫度不大于_2°C，加完繼續(xù)攪拌至重氮液完全反應(yīng)。隨后加入水20 mL，升溫至95°C，加入36%的鹽酸0.3 g，攪拌均勻，靜置，結(jié)晶，過濾，鹽析過濾后于60°C干燥，得產(chǎn)品約10 g。
[0014]粗品經(jīng)過重結(jié)晶分離后，采用薄層色譜進行分離，甲醇與二氯甲烷比列為1:7時，在薄層上主產(chǎn)物與其他雜質(zhì)得到很好的分離；樣品進行硅膠柱凈化，甲醇與三氯甲烷混合液梯度洗脫，洗脫液氮吹后干燥的純品。取1.2 g粗品與25 g硅膠(100-140目)攪拌均勻后，裝柱后依次用100 mL石油醚潤洗、200 mL 二氯甲烷洗滌后，用200 mL的二氯甲烷/甲醇(7:1)洗脫目的物。
[0015]將上述制得堿性橙II標(biāo)準品，用棕色瓶進行分裝，每瓶10 mg共115瓶，編號后置于室溫、通風(fēng)密封保存。
[0016]進行純度檢查及含量測定:
薄層色譜純查，HPLC純度檢查: 在堿性橙II標(biāo)準樣品的制備中，選擇HPLC峰面積歸一法進行含量測定。
[0017]所用儀器及條件:高效液相色譜儀(島津LC-20A)，配二極管陣列檢測器或可變波長紫外檢測器；色譜柱:C18 (250 mmX4.6mm, 5 ym)或相當(dāng)者。
[0018]操作條件:流動相:甲醇/ (20 mM)醋酸銨=70/30 ;流速:1.0 mL/min ;柱溫:25V ;檢測波長:410 nm ;進樣量:10 UL0
[0019]定量測定:測試液配置:準確稱取1.0 g的樣品，經(jīng)50 mL乙醇溶解，水稀釋定容后，配制成10 mg/L的樣液，在上述液相色譜法條件下進行面積歸一法定量。色譜條件應(yīng)保證試樣中所有雜質(zhì)能夠與待測物分離，并且堿性橙II的保留時間合適。進樣測定，計算試樣中堿性橙II純度。在所選擇的色譜條件下，堿性橙II保留時間為3.14 min。
[0020]儀器與設(shè)備:高效液相色譜儀(日本島津公司LC-20A)，紫外-可見分光光度儀(日本島津公司)，液質(zhì)質(zhì)聯(lián)用儀(美國AB公司)，IN0VA-600核磁共振儀(Varian公司)。
[0021]材料與試劑:濃鹽酸、苯胺、亞硝酸鈉、尿素、間苯二胺、對氨基苯磺酸鈉、2-萘酚、氯化鈉、乙二醇、4，4 一二甲氨基二苯甲烷、硫磺、氯化氨、分析純95%乙醇、分析純甲醇(上海安譜科學(xué)儀器有限公司)。液相用甲醇(色譜純，TEDIA COMPANY );水為去離子水。
【權(quán)利要求】
1.檢測用堿性橙II標(biāo)準樣品的制備方法，其特征在于，所述方法包括堿性橙II的合成與純化過程: 在三口反應(yīng)瓶內(nèi)加入水、鹽酸和苯胺，攪拌；滴加亞硝酸鈉溶液，用碘化鉀淀粉試紙確定反應(yīng)終點；加入尿素除去多余的亞硝酸鈉，將此重氮液放入冰箱中冷藏；在另一三口反應(yīng)瓶內(nèi)加入水、間苯二胺，攪拌，升溫至間苯二胺全部溶解，然后降溫并以鹽酸調(diào)節(jié)PH值，緩慢加入重氮液，繼續(xù)攪拌至重氮液完全反應(yīng)，隨后加入水，升溫加入鹽酸，攪拌均勻，靜置，結(jié)晶，過濾，鹽析過濾后干燥得產(chǎn)品；粗品經(jīng)過重結(jié)晶分離后，采用薄層色譜進行分離，甲醇與二氯甲烷比列為1:7時，樣品進行硅膠柱凈化，甲醇與三氯甲烷混合液梯度洗脫，洗脫液氮吹后干燥的純品；取粗品與硅膠攪拌均勻后，裝柱后依次用石油醚潤洗、二氯甲烷洗滌后，用二氯甲烷/甲醇洗脫目的物；將上述制得堿性橙II標(biāo)準品，用棕色瓶進行分裝，每瓶10 mg共115瓶,編號后置于室溫、通風(fēng)密封保存即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測用堿性橙II標(biāo)準樣品的制備方法，其特征在于，所述堿性橙II的合成與純化:在三口反應(yīng)瓶內(nèi)加入水10mL、36%的鹽酸14 g和苯胺3.5 g，攪拌；保持反應(yīng)瓶內(nèi)為0-5°C，于I h之內(nèi)滴加入30%的亞硝酸鈉溶液20 mL，加完繼續(xù)反應(yīng)30min,用碘化鉀淀粉試紙確定反應(yīng)終點。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測用堿性橙II標(biāo)準樣品的制備方法，其特征在于，所述堿性橙II的合成與純化:在另一三口反應(yīng)瓶內(nèi)加入水12.5 mL、間苯二胺4.5 g，攪拌，升溫至650C，至間苯二胺全部溶解，然后降溫至_4°C，并以36%的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至6_7，開始緩慢加入冷至_4°C的重氮液，維持三口瓶內(nèi)反應(yīng)溫度不大于_2°C，加完繼續(xù)攪拌至重氮液完全反應(yīng),隨后加入水20 mL，升溫至95°C，加入36%的鹽酸0.3 g，攪拌均勻，靜置，結(jié)晶，過濾，鹽析過濾后于60°C干燥，得產(chǎn)品約10 g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測用堿性橙II標(biāo)準樣品的制備方法，其特征在于，所述堿性橙II的合成與純化:粗品經(jīng)過重結(jié)晶分離后，采用薄層色譜進行分離，甲醇與二氯甲烷比列為1:7時，在薄層上主產(chǎn)物與其他雜質(zhì)得到分離；樣品進行硅膠柱凈化，甲醇與三氯甲烷混合液梯度洗脫，洗脫液氮吹后干燥的純品，取1.2 g粗品與25 g硅膠100-140目攪拌均勻后，裝柱后依次用100 mL石油醚潤洗、200 mL 二氯甲烷洗滌后，用200 mL的二氯甲烷/甲醇7:1洗脫目的物。
【文檔編號】G01N1/28GK103760002SQ201410030132
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2014年1月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月22日
【發(fā)明者】李乃潔, 蘇錫輝, 張凱, 周長民, 王志剛, 劉文城 申請人:沈陽產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院