離子色譜法測定甲磺酸甲酯含量的方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了離子色譜法測定甲磺酸甲酯含量的方法及應(yīng)用。甲磺酸甲酯在堿性條件下加熱水解生成甲磺酸和甲醇，以電導(dǎo)檢測器為檢測手段，經(jīng)過陰離子交換柱分離后經(jīng)過抑制器，然后通過檢測甲磺酸的含量從而得到甲磺酸甲酯的含量。本發(fā)明首次利用離子色譜法對甲磺酸甲酯進行檢測，甲磺酸甲酯在堿性條件下能夠完全水解，將甲磺酸甲酯在最佳的水解條件水解后，利用離子色譜儀對溶液進行分離檢測；所需儀器設(shè)備簡單，成本低廉，避免了使用色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，簡化了操作過程，降低了成本。本方法的整體穩(wěn)定性，重現(xiàn)性理想，測定數(shù)據(jù)準確可靠，可以廣泛應(yīng)用于生物制藥、藥代動力學(xué)研究、食品安全等領(lǐng)域。
【專利說明】離子色譜法測定甲磺酸甲酯含量的方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種測定甲磺酸甲酯的新方法，特別是離子色譜法測定甲磺酸甲酯含量的方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]甲磺酸甲酯(methylmethanesulfonate,MMS)是一種能夠損傷DNA的燒化劑，主要使嘌呤堿基上的氮、氧原子發(fā)生甲基化，導(dǎo)致DNA雙鏈斷裂、點突變。所以甲磺酸甲酯是一種直接致突變物，具有致癌性，對甲磺酸甲酯準確的測定具有非常重要的意義，尤其是在藥物中的含量。目前測定甲磺酸甲酯的方法主要有液相色譜-質(zhì)譜法和氣相色譜質(zhì)譜法，但是這兩種方法的操作都比較繁瑣，尤其是氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)不僅操作繁瑣，檢測成本也很高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了離子色譜法測定甲磺酸甲酯含量的方法及應(yīng)用。
[0004]一種離子色譜法測定甲磺酸甲酯含量的方法，甲磺酸甲酯在堿性條件下加熱水解生成甲磺酸和甲醇，以電導(dǎo)檢測器為檢測手段，經(jīng)過陰離子交換柱分離后經(jīng)過抑制器，然后通過檢測甲磺酸的含量從而得到甲磺酸甲酯的含量。
[0005]一種所述的方法測定齊多夫定中的甲磺酸甲酯含量，步驟如下:
1)標準溶液的配制:稱取甲磺酸0.1g置于IOmL的容量瓶中，加入去離子水定容；
2)淋洗液配制:6.3mmol / LNaHCO3 和 1.7mmol / LNa2CO3 的混合液；
3)標準曲線制作:采用逐級稀釋的方法配制不同濃度標準溶液色譜進樣分析，得線性回歸方程為Y = 8.71781X-1.77812，線性相關(guān)系數(shù)R = 0.9994 ；
4)甲磺酸甲酯的前處理:稱取甲磺酸甲酯0.1g置于IOmL的容量瓶中，加入2mL甲醇待甲磺酸甲酯溶解后加入去離子水定容置刻度；甲磺酸甲酯的水解條件為:PH值為10、水解溫度為80°C、水解時間為15min ；
5)測定:淋洗液由泵輸送流經(jīng)陰離子交換柱，所述的步驟4)中甲磺酸甲酯水解后的產(chǎn)物進入分離系統(tǒng)，在陰離子交換柱上被分離，流經(jīng)抑制器，最后進入檢測器檢測后得色譜峰，對色譜峰面積處理后得實驗數(shù)據(jù)；
6)實際樣品的測定:用所述的步驟4)中樣品前處理的方法將齊多夫定水溶液配制好，進行水解，水解液色譜進樣；進樣量:30μ L，泵的流速為0.5mL / min。
[0006]水解后的甲磺酸在0.5 — IOmg / L的范圍內(nèi)具有線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為0.9994，檢出限為0.1Omg / L，加標回收率為92.06 % -97.28 %，相對標準偏差(RSD) 0.80%。
[0007]—種所述的方法的應(yīng)用，應(yīng)用于食品、環(huán)境、藥代動力學(xué)分析領(lǐng)域的能夠完全水解的酯類物質(zhì)。[0008]本發(fā)明的有益效果:
本發(fā)明首次利用離子色譜法對甲磺酸甲酯進行檢測，甲磺酸甲酯在堿性條件下能夠完全水解，將甲磺酸甲酯在最佳的水解條件(最佳的PH值、溫度和水解時間)水解后，利用離子色譜儀對溶液進行分離檢測；本方法所需儀器設(shè)備簡單，成本低廉，避免了使用色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，大大的簡化了操作過程，降低了成本。本方法的整體穩(wěn)定性，重現(xiàn)性理想，測定數(shù)據(jù)準確可靠，可以廣泛應(yīng)用于生物制藥、藥代動力學(xué)研究、食品安全等領(lǐng)域。目前國內(nèi)外尚無關(guān)于離子色譜法測定甲磺酸甲酯的報道。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0009]圖1是甲磺酸標準品的離子色譜圖(0.05mmol / L)；
圖2是甲磺酸甲酯隨pH值變化的水解曲線圖；
圖3是甲磺酸甲酯隨水解時間變化的水解曲線圖；
圖4是甲磺酸甲酯隨溫度變化的水解曲線圖；
圖5是0.05mmol / L甲磺酸甲酯(在最佳水解條件下水解后)色譜圖。
具體實施方案
[0010]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步具體說明。
[0011]離子色譜法測定齊多夫定中甲磺酸甲酯的含量:
具體步驟如下:
1、標準溶液的配制:精確稱取甲磺酸0.1g置于IOmL的容量瓶中，加入去離子水定容至刻度；精確稱取甲磺酸甲酯0.1g置于IOmL的容量瓶中，加入適量甲醇待甲磺酸甲酯全部溶解后加入去尚子水定各至刻度；
2、標準曲線制作:采用逐級稀釋的方法配制不同濃度標準溶液；
3、樣品前處理:精確稱取齊多夫定IOmg置于IOmL的容量瓶中，加入去離子水溶解、定容至刻度，在溫度80°C、pH值10、時間15min進行水解。
[0012]4、淋洗液的選擇:試驗不同濃度的淋洗液配比,最終確定為:6.3mmol / L NaHC03、
1.7mmo1 / LNa2CO3.5、水解條件的優(yōu)化:試驗不同pH值、水解溫度、水解時間對甲磺酸甲酯水解率的影響。甲磺酸甲酯隨時間變化水解率曲線見附圖3、隨pH值變化曲線見附圖4、隨溫度變化曲線見附圖5。最終確定最佳水解條件為:溫度80°C、pH值10、時間15mmin ；
6、標準溶液色譜圖:進樣量:30yL，分別取0.05mmol/ L甲磺酸和甲磺酸甲酯(在最佳水解條件下水解后)進樣，得到甲磺酸標樣色譜圖(附圖1)和甲磺酸甲酯標樣色譜圖。
[0013]7、實際樣品的測定:進樣量:30 μ L,栗的流速為0.5mL / min。在以上試驗條件下，利用本發(fā)明可以實現(xiàn)對齊多夫定中甲磺酸甲酯的測定。
實施例
[0014]I實驗部分
1.1儀器與試劑
IC2010離子色譜儀(東曹生物科技有限公司)、SuperIC-AZ分析柱、2510Branson超聲波清洗器(美國Branson Ultrasonics公司)甲磺酸(分析純)、甲磺酸甲酯(分析純)、碳酸鈉(分析純)、碳酸氫鈉(分析純)、氫氧化鈉(分析純)、甲醇(分析純)。齊多夫定來自浙江新華制藥廠。
[0015]1.2色譜條件
色譜柱:TSKgel SuperIC-AZ 淋洗液:6.3mmol / L NaHC03U.7mmol / LNa2C03 抑制膠:TSKsupperss IC-A。流速:0.5mL / min檢測器:電導(dǎo)器溫度:40°C 進樣量:30 μ L
1.3溶液的配置
甲磺酸標準儲備液:取甲磺酸0.10g，置于IOOmL容量瓶中加去離子水定容至刻度，得濃度為1000mg / L，置于冰箱中備用。甲磺酸甲酯儲備液:取甲磺酸甲酯0.10g，置于IOOmL容量瓶加入適量乙醇使甲磺酸甲酯充分溶解，加去離子水定容至刻度，得濃度為1000mg /L,置于冰箱備用。
[0016]1.4樣品前處理
準確稱取齊多夫定樣品0.10g，置于IOOmL容量瓶中加入適量去離子水超聲溶解，加入去離子水定容至刻度，得濃度為1000mg / L0在pH值為10、溫度為80°C的條件下水解15min,直接進樣測定。
[0017]2結(jié)果與討論
2.1水解條件的優(yōu)化
甲磺酸甲酯在常溫及中性條件下比較穩(wěn)定，但在堿性條件下會發(fā)生水解，這也是我們試驗的理論根據(jù)，考慮到酯類物質(zhì)水解效率主要由溶液堿性、溫度和時間。因此我們對這三個水解條件進行優(yōu)化。水解率是根據(jù)相同摩爾濃度的甲磺酸和甲磺酸甲酯(水解后)的峰面積計算。水解率計算公式見公式(I)
【權(quán)利要求】
1.一種離子色譜法測定甲磺酸甲酯含量的方法，其特征在于，甲磺酸甲酯在堿性條件下加熱水解生成甲磺酸和甲醇，以電導(dǎo)檢測器為檢測手段，經(jīng)過陰離子交換柱分離后經(jīng)過抑制器，然后通過檢測甲磺酸的含量從而得到甲磺酸甲酯的含量。
2.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法測定齊多夫定中的甲磺酸甲酯含量，其特征在于，步驟如下: 1)標準溶液的配制:稱取甲磺酸0.1g置于IOmL的容量瓶中，加入去離子水定容； 2)淋洗液配制:6.3mmol/L NaHCO3 和 1.7mmoI/LNa2CO3 的混合液； 3)標準曲線制作:采用逐級稀釋的方法配制不同濃度標準溶液色譜進樣分析，得線性回歸方程為Y=8.71781Χ-1.77812，線性相關(guān)系數(shù)R=0.9994 ； 4)甲磺酸甲酯的前處理:稱取甲磺酸甲酯0.1g置于IOmL的容量瓶中，加入2mL甲醇待甲磺酸甲酯溶解后加入去離子水定容置刻度；甲磺酸甲酯的水解條件為:PH值為10、水解溫度為80°C、水解時間為15min ； 5)測定:淋洗液由泵輸送流經(jīng)陰離子交換柱，所述的步驟4)中甲磺酸甲酯水解后的產(chǎn)物進入分離系統(tǒng)，在陰離子交換柱上被分離，流經(jīng)抑制器，最后進入檢測器檢測后得色譜峰，對色譜峰面積處理后得實驗數(shù)據(jù)； 6)實際樣品的測定:用所述的步驟4)中樣品前處理的方法將齊多夫定水溶液配制好，進行水解，水解液色譜進樣；進樣量:30μ?，泵的流速為0.5mL/min。
3.根據(jù)權(quán)利 要求2所述的方法測定齊多夫定中的甲磺酸甲酯含量，其特征在于，水解后的甲磺酸在0.5-10mg/L的范圍內(nèi)具有線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為0.9994，檢出限為0.10mg/L，加標回收率為92.06%-97.28%，相對標準偏差(RSD) 0.80%。
4.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法的應(yīng)用，其特征在于，應(yīng)用于食品、環(huán)境、藥代動力學(xué)分析領(lǐng)域的能夠完全水解的酯類物質(zhì)。
【文檔編號】G01N30/88GK103728404SQ201310672837
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月12日
【發(fā)明者】陳梅蘭, 孫營營 申請人:浙江樹人大學(xué)