一種含有靈芝多糖制劑的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種含有靈芝多糖制劑的檢測方法，其特征是通過對制劑的粗多糖進(jìn)行醇沉提取，再用堿性硫酸銅純化后以苯酚硫酸顯色，照紫外-可見分光光度法的比色法測定制劑的靈芝多糖。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：采用特定的試劑，對制劑中的靈芝多糖進(jìn)行選擇性的沉淀，從而將其與糊精中所含多糖進(jìn)行分離，排除輔料干擾，達(dá)到對靈芝多糖的含量進(jìn)行準(zhǔn)確檢測的目的。該方法簡單、準(zhǔn)確、試劑易得，并且檢測成本低，可用于含有靈芝多糖制劑的檢測。
【專利說明】一種含有靈芝多糖制劑的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥制劑領(lǐng)域，涉及一種含有靈芝多糖制劑的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]靈芝為多孔菌科赤芝Ganoderma lucidum ( Leyss.ex Fr.) Karst.或紫芝 G.sinense Zhao, Xu et Zhang的干燥子實(shí)體,具有補(bǔ)氣安神、止咳平喘的功效。靈芝多糖是藥用真菌靈芝中的主要藥效成分之一，現(xiàn)代藥理研究表明，靈芝多糖具有顯著的提高免疫力和抗腫瘤、清除自由基、抗衰老等活性。目前已分離得到的靈芝多糖有200多種，其中大部分為葡聚糖，少數(shù)為α -葡聚糖，多糖鏈由三股單糖鏈構(gòu)成，是一種螺旋狀立體構(gòu)形物。靈芝多糖大多為雜多糖，即除含有葡萄糖外，大多還含有少量阿拉伯糖、木糖、巖藻糖、鼠李糖、半乳糖等其他單糖。含有靈芝多糖的藥物制劑在制備工藝中，加入了糊精等藥用輔料，而糊精的主要成分為由葡萄糖組成的多糖，與靈芝多糖的組成單元相似。目前常使用的硫酸苯酚法或者硫酸蒽醌法檢測含靈芝多糖制劑中靈芝多糖的含量，由于受輔料糊精的干擾，這些方法都會在檢測靈芝多糖的同時(shí)，將糊精中所含多糖一并檢測出，從而導(dǎo)致含量檢測數(shù)據(jù)比實(shí)際高，檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。目前，國內(nèi)總多糖含量測定主要采取紫外分光光度法進(jìn)行，經(jīng)典的顯色體系有苯酹-硫酸法(λ max=490nm)和蒽酮-硫酸法(Xmax= 630nm),均選擇無水葡萄糖為對照品。也有采用滴定法測定總多糖含量的，常用有斐林氏滴定法和間接碘量滴定法。在國外對多糖的質(zhì)量控制多采用高效凝膠色譜法測定多糖分子量及其分布，這也是對多糖產(chǎn)品質(zhì)控手段之一，其對純度較高的多糖產(chǎn)品質(zhì)量控制較好，能有效的評價(jià)該產(chǎn)品的真?zhèn)危珜τ谥饕嗵穷惓煞值撵`芝多糖制劑的質(zhì)量控制方法較少，由于它們所含的有效多糖是一大類，很難對其多糖含量、分子量分布范圍來評價(jià)藥材及其制劑質(zhì)量的真?zhèn)魏蛢?yōu)劣，該評價(jià)方式不能反映它們整體的內(nèi)在質(zhì)量變化，存在一定的不合理性和不科學(xué)性，且專屬性也較差。
[0003]因此，如何采用低成本的顯色法檢測靈芝多糖，而排除糊精等含有葡萄糖結(jié)構(gòu)單元的物質(zhì)的干擾，建立準(zhǔn)確、穩(wěn)定的含靈芝多糖制劑的檢測方法顯得尤為重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供了一種含有靈芝多糖制劑靈芝多糖含量的準(zhǔn)確測定方法，本發(fā)明的檢測方法能夠排除糊精等含有葡萄糖結(jié)構(gòu)單元物質(zhì)產(chǎn)生的干擾，檢測出的靈芝多糖含量準(zhǔn)確、穩(wěn)定，并且容易操作，檢測成本低。
[0005]本發(fā)明的方法是對顯色法的一種改進(jìn)，其原理是首先對藥物制劑中的粗多糖進(jìn)行醇沉提取，把糊精等低分子量的含有葡萄糖結(jié)構(gòu)單元物質(zhì)與高分子量的靈芝多糖分離，再用堿性硫酸銅純化后以苯酚硫酸顯色，照紫外-可見分光光度法中的比色法測定制劑中的靈芝多糖。
[0006]含有靈芝多糖制劑的檢測方法，包括如下步驟:
(I)稱取樣品2.5±0.5g，置于錐形瓶中，加水100ml，加熱回流提取35分鐘，靜置冷卻，離心，精密吸取IOml濾液置于離心管中，緩慢加入4倍體積的無水乙醇，混勻，在5000r/min下離心25分鐘，棄去上清液，殘?jiān)铀芙猓浦?5ml量瓶中，加水定容至刻度，即得粗多糖溶液；
(2)精密吸取上述粗多糖溶液10ml，置于50ml離心管中，加入10%氫氧化鈉和銅試劑溶液混合溶液40ml，離心管置于90°C水浴40分鐘，取出放置10~15分鐘，在5000r/min轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，棄去上清液，殘?jiān)?0%硫酸轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，即樣品測試液；
所述的10%氫氧化鈉和銅試劑溶液混合溶液是將10%的氫氧化鈉20ml加入銅試劑溶液20ml中，混勻；
(3)準(zhǔn)確吸取樣品測試液2.0ml，置于25ml比色管中，加入5%苯酚試液Iml，混勻，加入濃硫酸5ml，比色管置于90°C水浴中15分鐘，取出，放置15分鐘，分光光度計(jì)490nm處以空白試劑為參比，Icm比色皿測定其吸光度為A，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算靈芝多糖含量；
計(jì)算公式為:
【權(quán)利要求】
1.一種含有靈芝多糖制劑的檢測方法，其特征在于，靈芝多糖的檢測方法包括如下步驟: (1)稱取樣品2.5±0.5g，置于錐形瓶中，加水100ml，加熱回流提取35分鐘，靜置冷卻，離心，精密吸取IOml濾液置于離心管中，緩慢加入4倍體積的無水乙醇，混勻，在5000r/min下離心25分鐘，棄去上清液，殘?jiān)铀芙猓浦?5ml量瓶中，加水定容至刻度，即得粗多糖溶液； (2)精密吸取上述粗多糖溶液10ml，置于50ml離心管中，加入10%的氫氧化鈉和銅試劑溶液混合溶液40ml，離心管置于90°C水浴40分鐘，取出放置10?15分鐘，在5000r/min轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，棄去上清液，殘?jiān)?0%硫酸轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，即樣品測試液； 所述的10%氫氧化鈉和銅試劑溶液混合溶液是將10%的氫氧化鈉20ml加入銅試劑溶液20ml中，混勻； (3)準(zhǔn)確吸取樣品測試液2.0ml，置于25ml比色管中，加入5%苯酚試液Iml，混勻，加入濃硫酸5ml，比色管置于90°C水浴中15分鐘，取出，放置15分鐘，分光光度計(jì)490nm處以空白試劑為參比，Icm比色皿測定其吸光度為A，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算靈芝多糖含量。
2.如權(quán)利要求1所述的含有靈芝多糖制劑的檢測方法，其特征在于，所述的銅試劑溶液的配制方法為:稱取1.5g五水合硫酸銅，IOg枸櫞酸鈉，加水溶解至330ml，混勻，制得銅試劑儲備液；取銅試劑儲備液100ml，加入固體無水硫酸鈉12g使其溶解，混勻，即得銅試劑溶液。
3.如權(quán)利要求1所述的含有靈芝多糖制劑的檢測方法，其特征在于，所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法是:精確吸取0、0.2,0.4,0.8、1.0、1.5ml葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液，重量含量為0.25mg/ml,分別置于25ml比色管中，精確補(bǔ)充水至2.0ml, 5%苯酹溶液Iml,混勻，加入濃硫酸5ml，混勻，比色管置于90°C水浴中15分鐘，取出于室溫下冷卻15分鐘，用分光光度計(jì)于490nm處以空白試劑為參比，Icm比色皿測定吸光度值；以葡聚糖濃度單位C,mg/ml為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線C=KA+B。
4.如權(quán)利要求1所述的含有靈芝多糖制劑的檢測方法，其特征在于，所述的空白試劑配制方法為:準(zhǔn)確吸取2.0ml水,加入5%的苯酹溶液Iml,混勻,加入濃硫酸5ml,混勻，比色管置于90°C水浴中15分鐘，取出于室溫下冷卻15分鐘，即得。
5.如權(quán)利要求1、3、4任一項(xiàng)所述的含有靈芝多糖制劑的檢測方法，其特征在于，所述的濃硫酸的重量含量為90-98%。
【文檔編號】G01N21/33GK103616339SQ201310547868
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月7日
【發(fā)明者】林廣 , 黃志權(quán), 王德芳, 周永強(qiáng), 倪夕科 申請人:培力(南寧)藥業(yè)有限公司