一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，該試劑盒包括試劑R1、試劑R2和校準(zhǔn)品，試劑R1包含：緩沖液濃度為10～500mM，pH范圍是5.5～9.0；表面活性劑濃度為0.5～5g/L；電解質(zhì)濃度為5～50g/L；高分子促進(jìn)劑濃度為2～100g/L；防腐劑濃度為1～10g/L；試劑R2包含：緩沖液濃度為10～500mM，pH范圍是5.5～9.0；抗人α1-酸性糖蛋白抗體濃度為10～30％(w／v)；電解質(zhì)濃度為5～50g/L；防腐劑濃度為1～10g/L；穩(wěn)定劑濃度為5～50g/L；校準(zhǔn)品包含：α1-酸性糖蛋白抗原濃度為0.05～5.0g/L；穩(wěn)定劑濃度為5～50g/L；防腐劑濃度為1～10g/L。本試劑盒準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好、檢測(cè)快速、穩(wěn)定性強(qiáng)，能夠滿(mǎn)足臨床快速高通量檢測(cè)樣本的要求，具有很高的臨床應(yīng)用價(jià)值。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)免疫體外診斷領(lǐng)域，涉及一種免疫透射比濁檢測(cè)試劑盒，特別是涉及一種用免疫透射比濁法檢測(cè)血清中α 1-酸性糖蛋白含量的試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]α 1-酸性糖蛋白(α 1-acid glycoprotein, a 1-AGP, ΑΑΡ),分子量約 40000,是一種非特異性急性時(shí)相反應(yīng)蛋白(acute phase protein, APP),也是人類(lèi)血清中含糖量最多(含糖約45% )、酸性最強(qiáng)(PI為2.7?3.5)糖蛋白。主要由肝臟巨噬細(xì)胞和粒細(xì)胞產(chǎn)生，癌細(xì)胞也可合成。它與C反應(yīng)蛋白一起被認(rèn)為是反映炎癥活動(dòng)活急性狀態(tài)的敏感指標(biāo)。正常人血清AAP的值為450-950mg/L。在某些疾病中，特別是自身免疫性疾病中，其值升高很大。
[0003]α 1-酸性糖蛋白是目前較為敏感的急性期反應(yīng)的炎癥標(biāo)志物，是急性時(shí)相反應(yīng)物之一。其對(duì)炎癥、感染反應(yīng)早于體溫及白細(xì)胞數(shù)的變化，故廣泛用于臨床:(I) α 1-酸性糖蛋白含量升高:病理情況下，白介素I刺激吞噬細(xì)胞釋放出脂多聚糖，可促進(jìn)α 1-酸性糖蛋白的合成使血中水平升高，故α 1-酸性糖蛋白是一種最穩(wěn)定的早期呈陽(yáng)性的急性時(shí)相反應(yīng)物。如感染(炎癥)、外傷、燒傷、手術(shù)、急性心肌梗死時(shí)α 1-酸性糖蛋白含量升高。另外類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、克隆病、惡性腫瘤也增高，在癌轉(zhuǎn)移時(shí)升高更明顯。(2)α 1-酸性糖蛋白濃度降低:肝細(xì)胞病變晚期、腎病綜合癥或其他原因所致尿中濾過(guò)的蛋白質(zhì)量丟失、遺傳因素和營(yíng)養(yǎng)不良等疾病。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)中常用的α 1-酸性糖蛋白檢測(cè)方法是放射免疫分析法、酶聯(lián)免疫法。這些技術(shù)存在諸多不足，如需要特殊的設(shè)備，樣本需要預(yù)處理，不能上全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行批量檢測(cè)分析等。放射免疫分析存在放射線(xiàn)輻射和污染等問(wèn)題。酶聯(lián)免疫法應(yīng)用比較普遍，但該方法為非均相免疫檢測(cè)系統(tǒng)，測(cè)定過(guò)程較為繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，缺少單位測(cè)試運(yùn)行時(shí)間；自動(dòng)化程度不高，批間差和重復(fù)性相對(duì)較大；需要配備多種專(zhuān)門(mén)設(shè)備，一定程度上增加了成本。
[0005]隨著樣本檢驗(yàn)數(shù)量的不斷增加，臨床上迫切需要一種更為簡(jiǎn)便、快捷的方法來(lái)進(jìn)行規(guī)?；坎僮鳌Ｃ庖弑葷岱z測(cè)α 1-酸性糖蛋白可直接在全自動(dòng)生化分析儀上完成批量樣本分析，操作簡(jiǎn)單、可實(shí)現(xiàn)快速、高通量樣本的檢測(cè)。另外，為了提高試劑穩(wěn)定性，特別添加了一種穩(wěn)定劑用于改善試劑性能，可以保存更長(zhǎng)時(shí)間。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)與不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、能夠進(jìn)行批量樣本全自動(dòng)化檢測(cè)的免疫透射比濁法檢測(cè)α 1-酸性糖蛋白的試劑盒。
[0007]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是，一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，該試劑盒包括試劑R1、試劑R2和校準(zhǔn)品，所述試劑Rl包含如下組分:緩沖液，濃度為10?500mM，pH范圍是5.5?9.0 ;表面活性劑，濃度為0.5?5g/L ;電解質(zhì)，濃度為5?50g/L ;高分子促進(jìn)劑，濃度為2?100g/L ;防腐劑，濃度為I?10g/L ;所述試劑R2包含如下組分:緩沖液，濃度為10?500mM，緩沖液的pH范圍是5.5?9.0 ;抗人α 1-酸性糖蛋白抗體，濃度為10?30% (w / V);電解質(zhì),濃度為5?50g/L ;防腐劑,濃度為I?10g/L ;穩(wěn)定劑,濃度為5?50g/L ;所述校準(zhǔn)品包含如下組分:α 1-酸性糖蛋白抗原，濃度為0.05?5.0g/L ;穩(wěn)定劑，濃度為5?50g/L ;防腐劑，濃度為I?10g/L。
[0008]上述的一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，所述的緩沖液為T(mén)RIS緩沖液；所述的抗人α 1-酸性糖蛋白抗體選自兔抗人或羊抗人抗體，抗體種類(lèi)為多克隆抗體或單克隆抗體，抗體濃度為10?30% (w / v);所述的電解質(zhì)為氯化鈉；所述的高分子促進(jìn)劑為聚乙二醇(PEG)，分子量為6000?10000 ;所述表面活性劑選自Tween系列；所述防腐劑為疊氮鈉；所述穩(wěn)定劑選自海藻糖、蔗糖和牛血清蛋白中的一種或幾種。
[0009]上述的一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，所述的緩沖液優(yōu)選TRIS緩沖液，緩沖液濃度優(yōu)選20?lOOmM，緩沖液的pH值范圍優(yōu)選7.0?8.0 ;所述的抗人α 1-酸性糖蛋白抗體優(yōu)選兔抗人α 1-酸性糖蛋白多克隆抗體，抗體濃度優(yōu)選12?20%(w / V);所述的電解質(zhì)為氯化鈉，電解質(zhì)濃度優(yōu)選5?15g/L;所述的高分子促進(jìn)劑優(yōu)選PEG6000，濃度優(yōu)選50?100g/L ;所述的表面活性劑優(yōu)選TWeen20，濃度優(yōu)選I?5g/L ;所述的防腐劑優(yōu)選疊氮鈉，濃度優(yōu)選I?5g/L ;所述的穩(wěn)定劑優(yōu)選海藻糖，濃度為5?10g/L。
[0010]上述的一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，所述的校準(zhǔn)品包括α 1-酸性糖蛋白抗原0.05?5.0g/L、穩(wěn)定劑5?50g/L、防腐劑I?10g/L。
[0011]上述的一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，所述的α 1-酸性糖蛋白抗原濃度優(yōu)選0.1?3.0g/L,所述的抗原穩(wěn)定劑優(yōu)選牛血清白蛋白，濃度為10g/L,抗原防腐劑為lg/L疊氮鈉。
[0012]上述的一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，所述的校準(zhǔn)品制備成高濃度單點(diǎn)校準(zhǔn)品，在使用時(shí)用生理鹽水稀釋成6個(gè)不同濃度的參考校準(zhǔn)品，或者直接制備成6個(gè)不同濃度的參考校準(zhǔn)品。
[0013]本發(fā)明的一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒采用免疫比濁法是抗原抗體結(jié)合動(dòng)態(tài)測(cè)定方法，其基本原理是:樣本中的α 1-酸性糖蛋白抗原和試劑R2中的α 1-酸性糖蛋白抗體發(fā)生相應(yīng)的免疫反應(yīng)，形成不溶性的抗原-抗體復(fù)合物，使反應(yīng)液產(chǎn)生一定的濁度。反應(yīng)液中α 1-酸性糖蛋白抗體過(guò)量時(shí)，形成的免疫復(fù)合物的量隨著樣本中α 1-酸性糖蛋白抗原量的增加而增加，反應(yīng)液的濁度也相應(yīng)增加。在特定波長(zhǎng)下測(cè)定該復(fù)合物的吸光值，與校準(zhǔn)品標(biāo)定的校準(zhǔn)曲線(xiàn)比較，即可計(jì)算出樣本中的α 1-酸性糖蛋白的含量。
[0014]相較于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供的用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒具有如下優(yōu)點(diǎn)及有益效果:使用簡(jiǎn)便快速，能夠滿(mǎn)足臨床快速高通量檢測(cè)樣本的要求，檢測(cè)效率明顯提高，試劑更穩(wěn)定，適合臨床推廣。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015]圖1為本發(fā)明測(cè)定血清α 1-酸性糖蛋白含量的方法示意圖；
[0016]圖2為本發(fā)明實(shí)施例2的α1-酸性糖蛋白校準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；[0017]圖3為本發(fā)明試劑實(shí)施例2與實(shí)施例3穩(wěn)定性試驗(yàn)對(duì)比；
[0018]圖4為本發(fā)明試劑實(shí)施例2與實(shí)施例3穩(wěn)定性試驗(yàn)對(duì)比。
【具體實(shí)施方式】
[0019]以下就本發(fā)明提供的一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒做進(jìn)一步說(shuō)明。
[0020]實(shí)施例1
[0021]1.配制試劑:
[0022]試劑Rl:
[0023]
【權(quán)利要求】
1.一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，該試劑盒包括試劑R1、試劑R2和校準(zhǔn)品，其特征在于: 所述試劑Rl包含如下組分: 緩沖液，濃度為10~500mM，pH范圍是5.5~9.0 ; 表面活性劑，濃度為0.5~5g/L ； 電解質(zhì)，濃度為5~50g/L ； 高分子促進(jìn)劑，濃度為2~100g/L ； 防腐劑，濃度為I~IOg / L; 所述試劑R2包含如下組分: 緩沖液，濃度為10~500mM，緩沖液的pH范圍是5.5~9.0 ; 抗人α 1-酸性糖 蛋白抗體，濃度為10~30% (w / V); 電解質(zhì)，濃度為5~50g/L ； 防腐劑，濃度為I~10g/L ； 穩(wěn)定劑，濃度為5~50g/L ； 所述校準(zhǔn)品包含如下組分: α 1-酸性糖蛋白抗原，濃度為0.05~5.0g/L ； 穩(wěn)定劑，濃度為5~50g/L ； 防腐劑，濃度為I~10g/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，其特征在于: 所述的緩沖液為T(mén)RIS緩沖液； 所述的抗人α 1-酸性糖蛋白抗體選自兔抗人或羊抗人抗體，抗體種類(lèi)為多克隆抗體或單克隆抗體； 所述的電解質(zhì)為氯化鈉； 所述的高分子促進(jìn)劑為聚乙二醇(PEG)，分子量為6000~10000 ； 所述表面活性劑選自Tween系列； 所述防腐劑為疊氮鈉； 所述穩(wěn)定劑選自海藻糖、蔗糖和牛血清蛋白中的一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，其特征在于: 所述的緩沖液優(yōu)選TRIS緩沖液，緩沖液濃度優(yōu)選20~lOOmM，緩沖液的pH值范圍優(yōu)洗·7.0 ~8.0 ; 所述的抗人α 1-酸性糖蛋白抗體優(yōu)選兔抗人α 1-酸性糖蛋白多克隆抗體，抗體濃度優(yōu)選 12 ~20% (w / V); 所述的電解質(zhì)為氯化鈉，電解質(zhì)濃度優(yōu)選5~15g / L ; 所述的高分子促進(jìn)劑優(yōu)選PEG6000，濃度優(yōu)選50~100g/L ； 所述的表面活性劑優(yōu)選Tween20,濃度優(yōu)選I~5g/L ； 所述的防腐劑優(yōu)選疊氮鈉，濃度優(yōu)選I~5g/L ； 所述的穩(wěn)定劑優(yōu)選海藻糖，濃度為5~10g/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，其特征在于:所述的校準(zhǔn)品包括ct 1-酸性糖蛋白抗原0.05~5.0g/L、穩(wěn)定劑5~50g/L、防腐劑I~10g/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，其特征在于:所述的ct 1-酸性糖蛋白抗原濃度優(yōu)選0.1~3.0g/L,所述的抗原穩(wěn)定劑優(yōu)選牛血清白蛋白，濃度為10g/L,抗原防腐劑為lg/L疊氮鈉。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、4和5所述的一種用于檢測(cè)血清中酸性糖蛋白含量的試劑盒，其特征在于:所述的校準(zhǔn)品制備成高濃度單點(diǎn)校準(zhǔn)品，在使用時(shí)用生理鹽水稀釋成6個(gè)不同濃度的參考校準(zhǔn)品，或者直接制備成6個(gè)不同濃度的參考校準(zhǔn)品。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK103529221SQ201310496162
【公開(kāi)日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年10月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月22日
【發(fā)明者】路克國(guó), 溫云飛 申請(qǐng)人:青島金洋生物技術(shù)有限公司