一種藥物組合物中西紅花的含量測(cè)定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種藥物組合物中西紅花的含量測(cè)定方法，為解決復(fù)雜藥物組合物中西紅花的含量難以測(cè)定問(wèn)題，本發(fā)明采用體積比為（30-45）:5:（50-65）的甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨為流動(dòng)相，采用高效液相色譜法測(cè)定。本發(fā)明的流動(dòng)相為多溶劑系統(tǒng)，并且采用緩沖鹽保持流動(dòng)相系統(tǒng)穩(wěn)定，增強(qiáng)洗脫能力。本發(fā)明提供的方法測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定，線性好，相關(guān)系數(shù)、分離度和理論塔板數(shù)均滿足測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)要求，對(duì)組方復(fù)雜的藥物組合物中的西紅花也有很好的檢測(cè)結(jié)果。
【專利說(shuō)明】一種藥物組合物中西紅花的含量測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種中藥復(fù)方制劑的含量測(cè)定方法，特別涉及一種藥物組合物中西紅花的含量測(cè)定方法，屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]西紅花又稱藏紅花、番紅花，鳶尾科植物番紅花Crocus sativus L.的柱頭，是一種名貴的中藥材，具有強(qiáng)大的生理活性，有鎮(zhèn)靜、祛痰、解痙作用。作為一種名貴藥材，很多種藥物組方中用到了西紅花，尤其在藏藥等民族藥中更為常見(jiàn)，如坐珠達(dá)西、仁青常覺(jué)、肝腸膠囊、珍龍醒腦膠囊、二十五味珊瑚丸等。
[0003]目前，對(duì)于西紅花的含量測(cè)定方法很多，如紫外分光光度法、高效液相色譜法等，其中高效液相色譜法(以下簡(jiǎn)稱HPLC)近幾年尤為普及。在使用HPLC對(duì)西紅花進(jìn)行含量測(cè)定的現(xiàn)有技術(shù)中，同時(shí)將西紅花苷I & II進(jìn)行定量檢測(cè)并以此作為評(píng)判西紅花含量的方法是2010版《中國(guó)藥典》推薦的方法，以甲醇-水(45:55)為流動(dòng)相。文獻(xiàn)《二十五味珊瑚丸中西紅花苷I & II的含量測(cè)定研究》(西藏大學(xué)學(xué)報(bào)-自然科學(xué)版，2012年27卷5期)也采用HPLC法，流動(dòng)相為甲醇:水=52:48。此外，2006年26卷第9期的《藥物分析雜志》刊登的《西紅花中西紅花苷-1和西紅花苷-2含量測(cè)定方法的建立》還提供了另外一種測(cè)定西紅花藥材的HPLC流動(dòng)相條件，采用乙腈和水為流動(dòng)相梯度洗脫。
[0004]上述HPLC測(cè)定西紅花藥材和組方簡(jiǎn)單的組合物中西紅花含量測(cè)定結(jié)果令人滿意，分離度較好，但對(duì)于部分組分復(fù)雜的藥物組合物，由于干擾成分多，容易出現(xiàn)拖尾、基線漂移、出峰時(shí)間不穩(wěn)定、分離度低等情況，對(duì)西紅花含量的測(cè)定有一定的影響。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明目的是提供一種藥物組合物中西紅花的含量測(cè)定方法。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0007]一種藥物組合物中西紅花的含量測(cè)定方法，步驟如下:
[0008]色譜條件與系統(tǒng)適用性:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨為流動(dòng)相，其體積比為(30-45):5: (50-65);檢測(cè)波長(zhǎng)為440nm ;理論板數(shù)按西紅花苷-1峰計(jì)算應(yīng)不低于4000 ；
[0009]西紅花對(duì)照溶液制備:精密稱取西紅花苷-1、西紅花苷-1I對(duì)照品，加體積百分比60%甲醇制成每Iml含30 ii g西紅花苷-1、15 u g西紅花苷-1I的混合溶液，即得；
[0010]供試品溶液制備:將含有西紅花的藥物組合物研細(xì)后取粉末l-3g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體積百分比60%甲醇25ml，稱定重量，冰浴中超聲處理20分鐘，放至室溫，再稱定重量，用體積百分比60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得;
[0011]測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各lOiil，注入液相色譜儀，照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D的高效液相色譜法測(cè)定，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算樣品中西紅花苷-1、西紅花苷-1I的總量。
[0012]本發(fā)明優(yōu)選的，一種藥物組合物中西紅花的含量測(cè)定方法，步驟如下:
[0013]色譜條件與系統(tǒng)適用性:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨為流動(dòng)相，其體積比為40:5:55 ;檢測(cè)波長(zhǎng)為440nm ;理論板數(shù)按西紅花苷-1峰計(jì)算應(yīng)不低于4000 ；
[0014]西紅花對(duì)照溶液制備:精密稱取西紅花苷-1、西紅花苷-1I對(duì)照品，加體積百分比60%甲醇制成每Iml含30 μ g西紅花苷-1、15 μ g西紅花苷-1I的混合溶液，即得；
[0015]供試品溶液制備:將含有西紅花的藥物組合物研細(xì)后取粉末2g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體積百分比60%甲醇25ml，稱定重量，冰浴中超聲處理20分鐘，放至室溫，再稱定重量，用體積百分比60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
[0016]測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D的高效液相色譜法測(cè)定，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算樣品中西紅花苷-1、西紅花苷-1I的總量。
[0017]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下:
[0018]1.本發(fā)明對(duì)HPLC法測(cè)定藥物中西紅花含量的流動(dòng)相條件進(jìn)行了改進(jìn)，將常規(guī)使用的甲醇:水=45:55或52:48的二元流動(dòng)相，變?yōu)榧状?乙腈-0.05mol/L醋酸銨，其體積比為(30-45):5: (50-65)，以體積份數(shù)比40:5:55的甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨為優(yōu)選。
[0019]2.本發(fā)明的流動(dòng)相為多溶劑系統(tǒng)，并且采用緩沖鹽保持流動(dòng)相系統(tǒng)穩(wěn)定，增強(qiáng)洗脫能力，對(duì)于成分復(fù)雜的含有西紅花的藥物復(fù)合物，使用本發(fā)明的方法可以降低其它雜質(zhì)峰對(duì)西紅花的干擾，西紅花苷I和II的分離度較好，無(wú)拖尾，線性穩(wěn)定，結(jié)果準(zhǔn)確。
[0020]3.本發(fā)明提供的方法測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定，線性好，相關(guān)系數(shù)、分離度和理論塔板數(shù)均滿足測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)要求，對(duì)組方復(fù)雜的藥物組合物中的西紅花也有很好的檢測(cè)結(jié)果。
[0021]術(shù)語(yǔ)說(shuō)明:
[0022]西紅花的含量等于西紅花苷I和西紅花苷II的總含量。
[0023]坐珠達(dá)西、珍龍醒腦膠囊是中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)記載的藥品名稱。
[0024]仁青常覺(jué)、二十五味珊瑚丸是中華人民共和國(guó)2010年版藥典一部記載的藥品名稱。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0025]圖1是西紅花苷-1、西紅花苷-1I混合對(duì)照品溶液高效液相色譜圖；
[0026]圖2是坐珠達(dá)西供試品溶液中西紅花含量檢測(cè)的高效液相色譜圖；
[0027]圖3西紅花苷-1線性關(guān)系圖；
[0028]圖4是西紅花苷-1I線性關(guān)系圖；
[0029]其中，圖1、圖2的橫坐標(biāo)是時(shí)間，單位:分鐘(Minutes);縱坐標(biāo)是電壓，單位:伏特(Volts)0
【具體實(shí)施方式】[0030]下述實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說(shuō)明但不限于本發(fā)明。
[0031]實(shí)驗(yàn)例I HPLC對(duì)藥物組合物中西紅花進(jìn)行含量測(cè)定的條件選擇及方法學(xué)驗(yàn)證
[0032]以坐珠達(dá)西為例進(jìn)行條件選擇。
[0033]1.儀器、試藥和供試樣品
[0034]儀器:高效液相色譜儀:日立L-7110泵，日立-7420檢測(cè)器；島津AUW220D電子天平。
[0035]對(duì)照品:西紅花苷-1對(duì)照品(批號(hào):111588-200501 )、西紅花苷-1I對(duì)照品(批號(hào):100001-200504)。
[0036]樣品:坐珠達(dá)西(青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司)批號(hào):20090501、20090502、20090503。
[0037]2.流動(dòng)相選擇
[0038]使用現(xiàn)有技術(shù)中的流動(dòng)相，即甲醇-水或乙腈-水體系，測(cè)定成分復(fù)雜的藥物組合物中的西紅花含量，結(jié)果樣品主峰與雜質(zhì)峰分離度R小于1.5，峰不對(duì)稱度大于1.5，峰拖尾嚴(yán)重，無(wú)法得到準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，不能對(duì)樣品進(jìn)行含量的測(cè)定。本發(fā)明通過(guò)大量試驗(yàn)和分析發(fā)現(xiàn)，使用甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨的流動(dòng)相體系，色譜分離度良好，能克服其它藥味對(duì)西紅花測(cè)定的影響。
[0039]進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，流動(dòng)相選擇為甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨，其體積比為(30-45):5: (50-65)時(shí)能夠獲得較為滿意的檢測(cè)結(jié)果。根據(jù)出峰時(shí)間、分離度、拖尾現(xiàn)象等指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)，以體積份數(shù)比40:5:55的甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨作為流動(dòng)相，檢測(cè)結(jié)果最為理想。
[0040]3.耐用性試驗(yàn)
[0041]調(diào)整流動(dòng)相比例得到下列三種流動(dòng)相，分別對(duì)同一樣品進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果RSD%=1.78%，表明流動(dòng)性的調(diào)整對(duì)測(cè)定結(jié)果影響較小。
[0042]流動(dòng)相A=甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨，其體積比為30:5:65。
[0043]流動(dòng)相B=甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨，其體積比為45:5:50。
[0044]流動(dòng)相C=甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨，其體積比為40:5:55。
[0045]4.對(duì)照品制備
[0046]西紅花苷-1對(duì)照品貯備溶液:取西紅花苷-1對(duì)照品，精密稱定，加60%甲醇制成分別每Iml含65.8 μ g的溶液，即得。
[0047]西紅花苷-1I對(duì)照品貯備溶液:取西紅花苷-1I對(duì)照品，精密稱定，加60%甲醇制成分別每Iml含30.4 μ g的溶液，即得。
[0048]西紅花對(duì)照溶液:精密量取西紅花苷-1、西紅花苷-1I對(duì)照品貯備溶液，加60%甲醇制成分別每Iml含32.9 μ g和15.2 μ g的溶液，即得。
[0049]5.供試品溶液制備
[0050]取坐珠達(dá)西研細(xì)后粉末2g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入60%甲醇25ml，稱定重量，冰浴中超聲處理20分鐘，放至室溫，再稱定重量，用體積百分比60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
[0051]6.線性試驗(yàn)
[0052]精密量取西紅花苷-1對(duì)照品貯備溶液(65.8 μ g/ml) Iml、3ml、5ml、8ml、IOml，分別置IOml容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，各精密進(jìn)樣10 μ 1，采用優(yōu)選的流動(dòng)相C進(jìn)行含量測(cè)定，所得結(jié)果以峰面積(A)對(duì)對(duì)照品濃度(C)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果，在6.58yg/ml~65.80 μ g/ml范圍內(nèi)，西紅花苷-1的峰面積(A)與濃度(C)線性關(guān)系良好。得到回歸方程為:A=21172C-9555.5，相關(guān)系數(shù):R=0.9994。
[0053]精密量取西紅花苷-1 I對(duì)照品貯備溶液(30.4 μ g/ml) Iml、3ml、5ml、8ml UOml,分別置IOml容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，各精密進(jìn)樣10 μ L，采用優(yōu)選的流動(dòng)相C進(jìn)行含量測(cè)定，所得結(jié)果以峰面積(A)對(duì)對(duì)照品濃度(C)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果，在3.04 μ g/ml~30.40 μ g/ml范圍內(nèi)，西紅花苷-1I的峰面積(A)與濃度(C)線性關(guān)系良好。得回歸方程為:A=28716C-512.60，相關(guān)系數(shù):R=0.9998。
[0054]7.精密度試驗(yàn)
[0055]分別精密吸取西紅花對(duì)照品溶液10 μ 1，注入液相色譜儀，各連續(xù)測(cè)定6次，記錄峰面積并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD分別為0.56%，0.78%，結(jié)果顯示儀器精密度良好。
[0056]8.回收率試驗(yàn)
[0057]精密稱取同一樣品6份，精密加入西紅花苷-1、西紅花苷-1I對(duì)照品，測(cè)定其總含量，結(jié)果回收率為97.81%，RSD=L 12%，結(jié)果表明該測(cè)定方法穩(wěn)定，準(zhǔn)確度較好。
[0058]9.樣品測(cè)定
[0059]取坐珠達(dá)西3批，以流動(dòng)相C進(jìn)行含量測(cè)定并計(jì)算西紅花苷-1、西紅花苷-1I的總量，結(jié)果如下。
[0060]表1樣品含量測(cè)定結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種藥物組合物中西紅花的含量測(cè)定方法，特征在于，步驟如下: 色譜條件與系統(tǒng)適用性:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨為流動(dòng)相，其體積比為(30-45):5: (50-65);檢測(cè)波長(zhǎng)為440nm ;理論板數(shù)按西紅花苷-1峰計(jì)算應(yīng)不低于4000 ； 西紅花對(duì)照溶液制備:精密稱取西紅花苷-1、西紅花苷-1I對(duì)照品，加體積百分比60%甲醇制成每Iml含30 μ g西紅花苷-1、15 μ g西紅花苷-1I的混合溶液，即得； 供試品溶液制備:將含有西紅花的藥物組合物研細(xì)后取粉末l_3g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體積百分比60%甲醇25ml，稱定重量，冰浴中超聲處理20分鐘，放至室溫，再稱定重量，用體積百分比60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D的高效液相色譜法測(cè)定，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算樣品中西紅花苷-1、西紅花苷-1I的總量。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，流動(dòng)相為體積比為40:5:55的甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103529140SQ201310492217
【公開(kāi)日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年10月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月18日
【發(fā)明者】馬宏偉, 趙延霞, 孫緒丁, 任松鵬, 魏永義 申請(qǐng)人:山東阿如拉藥物研究開(kāi)發(fā)有限公司