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一種糖化血紅蛋白免疫檢測(cè)的微流控芯片的制作方法與工藝

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一種糖化血紅蛋白免疫檢測(cè)的微流控芯片的制作方法與工藝
本發(fā)明涉及微流控芯片技術(shù)領(lǐng)域,提供了一種用于血清中糖化血紅蛋白免疫檢測(cè)的微流控芯片。

背景技術(shù):
糖尿病是一種終生性疾病,由于其高并發(fā)癥和高致死率,已成為世界各國(guó)的主要保健衛(wèi)生問(wèn)題。在臨床上糖尿病主要采用血糖參數(shù)的檢測(cè)來(lái)進(jìn)行判定,而血糖參數(shù)只代表抽血時(shí)的血糖水平,對(duì)確診有局限性。近年來(lái)的醫(yī)學(xué)研究證明:血液中的糖化血紅蛋白(HbA1c)濃度相對(duì)穩(wěn)定,其濃度值能準(zhǔn)確反映最近2~3個(gè)月期間的血糖水平,便于醫(yī)生對(duì)糖尿病進(jìn)行早期診斷。目前,糖化血紅蛋白的檢測(cè)主要通過(guò)大型的生化分析儀或離子交換高壓液相色譜儀完成,這些方法帶來(lái)了樣品消耗量大、操作程序復(fù)雜、儀器成本高等缺點(diǎn),并且往往需要配備實(shí)驗(yàn)室水平的操作環(huán)境和專(zhuān)業(yè)的技術(shù)操作人員,上述缺點(diǎn)則嚴(yán)重阻礙了糖尿病即時(shí)快速檢測(cè)的應(yīng)用及推廣。因此,開(kāi)發(fā)快速、直觀(guān)、攜帶方便、操作簡(jiǎn)便的用于糖化血紅蛋白的微型檢測(cè)系統(tǒng)成為當(dāng)前國(guó)內(nèi)外研究的重點(diǎn)。微流控芯片又稱(chēng)芯片實(shí)驗(yàn)室(LabonaChip),指的是一種在一塊幾平方厘米的芯片上構(gòu)建的生物或化學(xué)實(shí)驗(yàn)室。它把生物和化學(xué)領(lǐng)域中所涉及的反應(yīng)、分離、培養(yǎng)、分選、檢測(cè)等基本操作單元分別做成微/納米量級(jí)的構(gòu)件,集成到一塊很小的芯片上,由微通道形成網(wǎng)絡(luò),以可控流體貫穿整個(gè)系統(tǒng),用以實(shí)現(xiàn)常規(guī)生物或化學(xué)實(shí)驗(yàn)室的各種功能。由于微流控芯片技術(shù)具有進(jìn)樣量小、集成度高、易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化控制和高通量分析的特點(diǎn),使得在微流控芯片上進(jìn)行生化反應(yīng)操作較常規(guī)的分析樣品前處理更方便、快速、成本低廉。而且,高特異性的免疫反應(yīng)與微流控芯片強(qiáng)大的分離、檢測(cè)能力相結(jié)合將顯示出更為顯著的優(yōu)勢(shì),因此以藥物篩選或生化樣品分析為目的而進(jìn)行的酶反應(yīng)、免疫反應(yīng)、PCR反應(yīng)、酶聯(lián)免疫分析(ELISA)如能在微流控芯片上實(shí)現(xiàn),不僅將使樣品處理時(shí)間大幅縮短、試劑和儀器成本大幅降低、檢測(cè)分辨率和靈敏度顯著提高,而且將使得免疫反應(yīng)的現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)檢測(cè)成為可能。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的是提供一種可用于血清中糖化血紅蛋白免疫反應(yīng)及檢測(cè)的微流控芯片,采用外接的泵閥系統(tǒng)對(duì)進(jìn)樣、反應(yīng)和檢測(cè)過(guò)程中的流體運(yùn)作進(jìn)行操控,待測(cè)樣品通過(guò)進(jìn)樣池經(jīng)由微流體通道進(jìn)入反應(yīng)池,進(jìn)行免疫凝集反應(yīng),對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行光度分析,最終實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)便、快速的免疫反應(yīng)和檢測(cè)。本發(fā)明提供了一種用于血清中糖化血紅蛋白免疫檢測(cè)的微流控芯片,該芯片由進(jìn)樣池、微流體通道、反應(yīng)檢測(cè)池、廢液池和泵閥接口構(gòu)成。本發(fā)明提供了一種用于血清中糖化血紅蛋白免疫檢測(cè)的微流控芯片,所述的微流控芯片可以由玻璃、PDMS、PMMA、PET或PC等材料加工而成,芯片材料可以是單一的,也可以是上述材料的組合。本發(fā)明提供了一種用于血清中糖化血紅蛋白免疫檢測(cè)的微流控芯片,進(jìn)樣池、反應(yīng)檢測(cè)池、廢液池和泵閥接口由微流體通道串行聯(lián)接。本發(fā)明提供了一種用于血清中糖化血紅蛋白免疫檢測(cè)的微流控芯片,所述的反應(yīng)池和微流體通道具有避光特性。所述的避光特性是指構(gòu)成反應(yīng)池和微流體通道的材料對(duì)波長(zhǎng)600~800nm的可見(jiàn)光具有全吸收的性質(zhì),即該波長(zhǎng)特征的光無(wú)法通過(guò)芯片材料直接照射到樣品溶液上。本發(fā)明提供了一種用于血清中糖化血紅蛋白免疫檢測(cè)的微流控芯片,所述的檢測(cè)池四周具有避光特性,同時(shí)位于檢測(cè)光路上的檢測(cè)池的上下面具有特定波長(zhǎng)范圍的透光特性。所述的避光特性是指構(gòu)成檢測(cè)池四周的材料對(duì)波長(zhǎng)600~800nm的可見(jiàn)光具有全吸收的性質(zhì),而所述的特定波長(zhǎng)范圍的透光特性是指構(gòu)成檢測(cè)池上下面的材料對(duì)光度分析所使用的光源的透光率大于90%。本發(fā)明提供了一種用于血清中糖化血紅蛋白免疫檢測(cè)的微流控芯片,所述的反應(yīng)池預(yù)先固定有免疫反應(yīng)所需的抗原或抗體,固定方式可以是物理吸附、化學(xué)交聯(lián)、溶膠-凝膠包埋、微珠固定或膜固定等。本發(fā)明提供了一種用于血清中糖化血紅蛋白免疫檢測(cè)的微流控芯片,所述的進(jìn)樣池其容積大于反應(yīng)體系所需的各種溶液體積的最大值,以保證能夠完全容納所需添加的試劑。本發(fā)明提供了一種用于血清中糖化血紅蛋白免疫檢測(cè)的微流控芯片,所述的檢測(cè)池的深度即光度分析的檢測(cè)光程為0~10mm。本發(fā)明提供了一種用于血清中糖化血紅蛋白免疫檢測(cè)的微流控芯片,所述的廢液池其容積大于反應(yīng)體系所需的所有溶液體積的總和,以保證免疫凝集反應(yīng)和檢測(cè)過(guò)程中試劑不與外接的泵閥接口接觸,避免交叉污染。本發(fā)明基于微流控芯片技術(shù)平臺(tái),集樣品進(jìn)樣、免疫凝集反應(yīng)和光電檢測(cè)于一體,極大地簡(jiǎn)化了操作流程,降低了樣品和試劑消耗,并且不需要配備昂貴的儀器,極大地降低了使用成本,使現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)檢測(cè)成為可能,具有可預(yù)見(jiàn)的巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和社會(huì)價(jià)值。附圖說(shuō)明圖1一種用于單樣品的糖化血紅蛋白免疫反應(yīng)檢測(cè)芯片示意圖,(a)為該芯片的平面結(jié)構(gòu)示意圖,(b)為該芯片的立體結(jié)構(gòu)示意圖。其中:1為進(jìn)樣池,2為微流體通道,3為反應(yīng)檢測(cè)池,4為廢液池,5為泵閥接口,6為透明蓋片,7為遮光流體通道層,8為透明底板。圖2一種用于多樣品檢測(cè)的糖化血紅蛋白免疫反應(yīng)檢測(cè)芯片示意圖。其中:1’為進(jìn)樣池,2’為微流體通道,3’為反應(yīng)檢測(cè)池,4’為公共廢液池,5’為公共泵閥接口。具體實(shí)施方式下面的實(shí)施例將對(duì)本發(fā)明予以進(jìn)一步的說(shuō)明,但并不因此而限制本發(fā)明。實(shí)施例1一種用于單樣品的糖化血紅蛋白免疫反應(yīng)檢測(cè)芯片圖1是一種用于單樣品的糖化血紅蛋白免疫反應(yīng)檢測(cè)芯片示意圖。如圖1a所示,該芯片由一個(gè)進(jìn)樣池1、反應(yīng)檢測(cè)池3、廢液池4、泵閥接口5和微流體通道2構(gòu)成。其立體組成如圖1b所示,為了保證芯片內(nèi)部微通道和反應(yīng)池中的樣品溶液和反應(yīng)產(chǎn)物不受外界可見(jiàn)光與檢測(cè)光源的干擾,采用黑色PMMA板加工遮光層7來(lái)構(gòu)建微流體通道2和反應(yīng)檢測(cè)池3;檢測(cè)池需要對(duì)檢測(cè)光通透,所以由透明蓋板6和透明底板8組成。使用時(shí),反應(yīng)池3中預(yù)先固定所需的抗原或抗體,檢測(cè)時(shí)將待測(cè)血清樣品加入進(jìn)樣池1中,在外接泵的作用下經(jīng)由微流體通道進(jìn)入反應(yīng)池內(nèi)進(jìn)行免疫凝集反應(yīng),反應(yīng)終止后開(kāi)啟光電檢測(cè)器進(jìn)行比濁檢測(cè)。該實(shí)施例結(jié)構(gòu)是免疫反應(yīng)芯片的最小功能單元,適用于單樣品單指標(biāo)的檢測(cè)。實(shí)施例2一種用于多樣品的糖化血紅蛋白免疫反應(yīng)檢測(cè)芯片圖2是一種用于多樣品的糖化血紅蛋白免疫反應(yīng)檢測(cè)芯片示意圖。芯片結(jié)構(gòu)采用重復(fù)最小功能單元的布局,使用共同廢液池4’和泵閥接口5’。使用時(shí),反應(yīng)池3’中分別預(yù)先固定所需的抗原或抗體,檢測(cè)時(shí)將各待測(cè)血清樣品液分別順次加入進(jìn)樣池1’中,在共同外接泵的作用下經(jīng)由微流體通道2’分別進(jìn)入反應(yīng)池3’內(nèi)進(jìn)行免疫凝集反應(yīng),反應(yīng)終止后開(kāi)啟光電檢測(cè)器進(jìn)行比濁檢測(cè)。光電檢測(cè)器可以是陣列式一次性獲得多個(gè)檢測(cè)結(jié)果,也可以是單個(gè)檢測(cè)器移動(dòng)至不同檢測(cè)池而獲得檢測(cè)結(jié)果。該實(shí)施例可根據(jù)需要添加或減少功能單元的數(shù)量,能夠?qū)崿F(xiàn)一張芯片上同時(shí)檢測(cè)不同樣品的糖化血紅蛋白檢測(cè)。
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