專利名稱：一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法
—種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAIc的多通道毛細管電泳檢測方法技術(shù)領(lǐng)域
本項發(fā)明涉及一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法。
背景技術(shù)：
目前對糖化血紅蛋白的檢測一直都存在檢測通量低，成本高或者準確度低的情況。
例如免疫法的準確度較差，成本也比較高；離子交換色譜方法準確度很高，但是沒有辦法實現(xiàn)高通量測試，而且實驗成本也很高，普通病人難以接受。本發(fā)明旨在建立一套高通量，高速度，能夠同時檢測多個樣品的陣列毛細管電泳方法，以滿足糖化血紅蛋白檢測的要求。
多通道毛細管電泳技術(shù)已經(jīng)成功應(yīng)用于DNA測序系統(tǒng)，但是將多通道毛細管電泳系統(tǒng)用于糖化血紅蛋白ffiAlc指標檢測在國內(nèi)尚無報道；目前國內(nèi)，已有將單根毛細管電泳方法用于糖化血紅蛋白ffiAlc檢測的報道，但此方法通量過低，無法滿足大量樣本檢測的要求。本方法將科研工作中使用的多通道毛細管電泳技術(shù)與單道毛細管電泳糖化血紅蛋白檢測技術(shù)結(jié)合在一起，既解決了糖化血紅蛋白ffiAlc檢測的難題，又大大提高了檢測的通量與速度，滿足了檢測實驗室的要求。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明用于糖化血紅蛋白HbAlc相對含量測定高通量及快速測定。本發(fā)明使用多根毛細管的陣列作為分離通道可以同時對多個血液樣品中的糖化血紅蛋白HbAlc進行分析和檢測，并自動對結(jié)果進行分析，生成報告。
本發(fā)明提供一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，使用陣列毛細管和光陣列檢測裝置同時對多個樣品進行糖化血紅蛋白 HbAlc檢測。
優(yōu)選的，所述檢測方法包括以下步驟
I)將分離緩沖液充入陣列毛細管中的各毛細管中作為分離環(huán)境；
2)將各樣品同時加入到陣列毛細管中的各毛細管的前端；
3)當樣品進入毛細管陣列中的各毛細管前端后，將陣列毛細管的兩端更換為分離緩沖液；
4)在毛細管兩端施加電壓作為分離驅(qū)動力；
5)通過檢測光源和光陣列檢測器對毛細管中的樣品進行糖化血紅蛋白HbAlc檢測；
6)根據(jù)步驟5)所得檢測數(shù)據(jù)計算得出各樣品中的糖化血紅蛋白HbAlc的含量。
更優(yōu)選的，所述毛細管陣列中毛細管內(nèi)徑20-100微米，有效分離長度10-50厘米。
更優(yōu)選的，所述毛細管陣列中毛細管的數(shù)量為4-48根，所述毛細管為無涂層石英毛細管或內(nèi)壁有涂層的中性石英毛細管。
更優(yōu)選的，所述毛細管每根的內(nèi)徑和長度均保持一致。
進一步的，所述4-48根毛細管構(gòu)成毛細管陣列作為分離通道，可以對4-48個樣品同時進樣進行電泳分離和檢測。
更優(yōu)選的，所述各毛細管的前部互相平行，末端集合到一處。
更優(yōu)選的，在步驟I)前，在構(gòu)成所述陣列毛細管的毛細管內(nèi)壁制備涂層。
更優(yōu)選的，所述涂層為聚陽離子涂層和聚陰離子涂層所構(gòu)成的雙層涂層。
更優(yōu)選的，制備所述雙層涂層的方法為先用聚陽離子溶液沖洗毛細管，再用聚陰離子溶液沖洗毛細管。
更優(yōu)選的，在制備涂層前，使用強酸和/或強堿溶液對陣列毛細管中的毛細管進行處理。
更優(yōu)選的，所述強酸和/或強堿溶液對陣列毛細管中的毛細管進行處理、聚陽離子和聚陰離子溶液沖洗毛細管、分離緩沖液充入毛細管的過程均通過壓力完成，所述強酸和強堿溶液、聚陽離子和聚陰離子溶液、分離緩沖液均從毛細管陣列的末端進入，從前端排出到廢液池。
更優(yōu)選的，所述強酸溶液選自鹽酸緩沖液或硝酸緩沖液，所述強酸溶液的濃度為0.01—lmol/L。
更優(yōu)選的，所述強堿溶液選自氫氧化鈉水溶液或氫氧化鋰水溶液，所述強堿溶液的濃度為0. 01-lmol/L。
更優(yōu)選的，所述聚陽離子溶液為含有聚陽離子的水溶液，選自聚凝胺水溶液、聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液、白蛋白水溶液，其濃度為0. OOl-Iwt%。
更優(yōu)選的，所述聚陰離子溶液為含有聚陰離子的水溶液，選自聚丙烯酸水溶液、聚苯乙烯磺酸鈉水溶液、硫酸軟骨素水溶液，其濃度為0. 001-lwt%。
由于無涂層的毛細管會將樣品吸附到毛細管的內(nèi)表面，通常不能夠分離出糖化血紅蛋白HbAlc的峰，從而不會出峰。所以本發(fā)明在無涂層毛細管管壁上使用聚陰離子涂層和聚陽離子涂層以達到控制血液樣品中的蛋白在毛細管內(nèi)壁吸附，并加快糖化血紅蛋白的出峰速度的目的。本發(fā)明所涉及的多通道毛細管電泳系統(tǒng)使用無涂層毛細管組成的毛細管陣列作為分離通道，以達到降低測試成本，同時保持毛細管的較長使用壽命的目的。但本發(fā)明所涉及的多通道毛細管電泳系統(tǒng)也可以直接使用內(nèi)壁有涂層的毛細管陣列作為分離通道(例如可選用聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、聚吡咯烷酮等涂層的毛細管)，也可在內(nèi)壁有涂層的毛細管上再使用聚陰離子涂層或聚陽離子涂層。
更優(yōu)選的，所述分離緩沖液的pH值為3-5。
更優(yōu)選的，所述步驟2)中的各樣品中含有電滲流標記物。
更優(yōu)選的，以所述電滲流標記物的出峰時間為基準，得出糖化血紅蛋白及非糖化血紅蛋白所對應(yīng)的峰，對峰值進行積分得到樣品中糖化血紅蛋白的含量。
更優(yōu)選的，以所述電滲流標記物的出峰時間為基準，得出糖化血紅蛋白及非糖化血紅蛋白所對應(yīng)的峰，對糖化血紅蛋白及非糖化血紅蛋白所對應(yīng)的峰的峰值進行積分并計算后得到樣品中糖化血紅蛋白的含量。CN 102539512 A
更優(yōu)選的，所述計算的公式為糖化血紅蛋白(mol% )含量=糖化血紅蛋白峰值/ (糖化血紅蛋白峰值+非糖化血紅蛋白峰值)*100 %。
更優(yōu)選的，所述步驟3)中電滲流標記物為二甲亞砜；所述二甲亞砜與樣品的體積比為 I : 1-30。
更優(yōu)選的，所述步驟3)中的樣品包括血樣和溶血劑，所述血樣與溶血劑的體積比為I : 1-3，所述溶血劑可以為市場上可買到的商品化溶血劑。
更優(yōu)選的，所述步驟3)中各樣品同時加入到毛細管陣列中的各毛細管的前端的方法為電壓方式或壓力方式。
更優(yōu)選的，所述樣品的進樣量為l-100nL。
更優(yōu)選的，所述步驟4)中施加電壓的方式為將電極插入毛細管兩端的分離緩沖液中或直接接在毛細管兩端。
更優(yōu)選的，所述步驟4)中所施加的電壓為恒定直流電，且U = 10_30kV。
更優(yōu)選的，所述步驟5)中的光源是波長為180_600nm的紫外或可見光源。
更優(yōu)選的，所述紫外或可見光源是鹵素燈或LED光源，所述光陣列檢測器包括多個光檢測器，并且所述光檢測器與毛細管一一匹配，所述光陣列檢測器為PMT或CCD檢測器所組成的光陣列檢測器。
更有選的，所述峰值為紫外吸收峰值。
由于毛細管陣列的兩端施加了高直流電壓(10_30kV)，在高直流電壓作用下，每根毛細管中的血液蛋白會在電場力作用下開始電泳，但是由于電泳速度差異，糖化血紅蛋白 HbAlc會與其他種類蛋白質(zhì)分開。所述毛細管陣列中毛細管的平行段的尾部設(shè)有透明檢測窗口，所述有效分離長度為毛細管入口到檢測窗口之間的距離。由于各毛細管的有效分離長度均相等，所以各樣品的電泳條件基本相同，也就是說各樣品中相同組分到達透明檢測窗口的時間基本相同。檢測光源發(fā)出的光信號垂直于檢測窗口，并通過檢測窗口到達與該檢測窗口對應(yīng)的光檢測器，當電滲流標記物、糖化血紅蛋白HbAlc和其他種類蛋白通過透明檢測窗口的時候，與該檢測窗口對應(yīng)的光陣列檢測器中的光檢測器會記錄下各組分的響應(yīng)值并將檢測數(shù)據(jù)發(fā)送至信號分析單元，信號分析單元將所得數(shù)據(jù)處理后得出各組分的吸收峰峰值。


圖I為本發(fā)明原理示意圖(以單根毛細管為例)
圖2為本發(fā)明檢測結(jié)果示意圖(以單根毛細管為例)具體實施方式
本發(fā)明所涉及的多通道毛細管電泳系統(tǒng)可使用無涂層毛細管組成的毛細管陣列作為分離通道，以達到降低測試成本，同時保持毛細管的較長使用壽命的目的。所述毛細管陣列包括4-48根彈性石英毛細管(無涂層，內(nèi)徑20-100微米，長度10-50cm)，各毛細管的前部互相平行，末端集合到一處。本發(fā)明還同時在毛細管內(nèi)壁形成聚陽離子和聚陰離子涂層，以加快糖化血紅蛋白的出峰速度。所述樣品中各組分的含量通過紫外/可見光光陣列檢測器檢測。
本發(fā)明原理的原理如圖I所示(以單根毛細管為例)。如圖I所示本發(fā)明原理示意圖，包括進樣單元、光學(xué)檢測單元和信號分析單元8，所述進樣單元與所述光學(xué)檢測單元相配合，所述光學(xué)檢測單元與信號分析單元8電連接。
進一步的，所述光學(xué)檢測單元包括檢測光源7、光陣列檢測器3和陣列毛細管束， 所述陣列毛細管束與所述進樣單元相配合，檢測光源7和光陣列檢測器3與所述陣列毛細管束相配合。
進一步的，構(gòu)成所述陣列毛細管束的毛細管9的內(nèi)壁上設(shè)有聚陽離子涂層和聚陰離子涂層。
進一步的，所述陣列毛細管束由4-48根毛細管9構(gòu)成。
進一步的，所述構(gòu)成陣列毛細管束的毛細管9之間相互平行，毛細管9的一端為前端I、另一端為末端2 ;且末端2匯集至一處。
進一步的，所述構(gòu)成陣列毛細管束的毛細管9上設(shè)有透明檢測窗口 10，透明檢測窗口 10位于毛細管9的平行部分，透明窗口 10的位置與檢測光源7相配合。
進一步的，所述構(gòu)成陣列毛細管束的毛細管9為內(nèi)徑20-100微米。
下面結(jié)合具體實施例進一步闡述本發(fā)明，應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護范圍。
實施例I :
選用10根彈性石英毛細管(內(nèi)徑20微米，長30cm)和金屬電極構(gòu)成毛細管陣列。 在毛細管陣列后部設(shè)有透明檢測窗口，使用紫外光對毛細管中分離得到的蛋白質(zhì)組分進行定性和定量檢測。
彈性石英毛細管0. lmol/L NaOH水溶液處理后，再先后用聚陽離子(聚二烯丙基二甲基氯化銨，0. 5wt% )和聚陰離子(硫酸軟骨素，0. 5wt% )水溶液沖洗毛細管，得到雙層涂層。隨后將PH = 4的檸檬酸溶液充入毛細管作為分離環(huán)境。以上毛細管的各個沖洗、 涂層過程均通過壓力完成，并從毛細管陣列的末端進入(出口端，相對于進樣口的一端)， 從前端排出到廢液池，所述NaOH水溶液、聚陽離子水溶液、聚陰離子水溶液和檸檬酸溶液的溶液槽由連有控制元件的機械臂自動控制，也可通過手動控制。
將毛細管陣列的毛細管的入口端一一對應(yīng)的插入陣列樣品槽中，將50nL樣品以電壓或壓力方式同時進入毛細管陣列中毛細管的前端，所述樣品的調(diào)配體積比為血樣 溶血劑二甲亞砜=1:3:3。
將毛細管兩端接通為分離緩沖液系統(tǒng)并在毛細管上加10_30kV的恒定直流電壓作為分離驅(qū)動力，以驅(qū)動樣品中的各種蛋白以不同速度通過檢測窗口位置。所述陣列樣品槽和分離緩沖液系統(tǒng)由連有控制元件的機械臂自動控制，也可通過手動控制。
毛細管中流過的各蛋白組分通過紫外光陣列檢測器進行檢測，形成檢測圖譜，并記錄于軟件中。
將二甲亞砜作為電滲流的標記物，其他的各個峰的出峰時間與二甲亞砜作為參考，來確認各峰所代表的蛋白質(zhì)組分，其檢測結(jié)果如圖2所示(以單根毛細管為例)。將糖化血紅蛋白HbAlc及非糖化血紅蛋白HbAO的峰值進行積分,得到糖化血紅蛋白HbAlc的百分比例。
實施例2
選用4根彈性石英毛細管(內(nèi)徑50微米，長50cm)和金屬電極構(gòu)成毛細管陣列。 在毛細管陣列后部設(shè)有透明檢測窗口，使用紫外光對毛細管中分離得到的蛋白質(zhì)組分進行定性和定量檢測。
彈性石英毛細管lmol/L KOH水溶液處理后，再先后用聚陽離子(聚凝胺水溶液， Iwt% )和聚陰離子(聚丙烯酸水溶液，0. 001wt% )水溶液沖洗毛細管，得到雙層涂層。隨后將PH = 5的檸檬酸溶液充入毛細管作為分離環(huán)境。以上毛細管的各個沖洗、涂層過程均通過壓力完成，并從毛細管陣列的末端進入(出口端，相對于進樣口的一端)，從前端排出到廢液池，所述NaOH水溶液、聚陽離子水溶液、聚陰離子水溶液和檸檬酸溶液的溶液槽由連有控制元件的機械臂自動控制，也可通過手動控制。
將毛細管陣列的毛細管的入口端一一對應(yīng)的插入陣列樣品槽中，將IOOnL樣品以電壓或壓力方式同時進入毛細管陣列中毛細管的前端，所述樣品的調(diào)配體積比為血樣 溶血劑二甲亞砜=I : 9 : 21。
將毛細管兩端接通為分離緩沖液系統(tǒng)并在毛細管上加10_30kV的恒定直流電壓作為分離驅(qū)動力，以驅(qū)動樣品中的各種蛋白以不同速度通過檢測窗口位置。所述陣列樣品槽和分離緩沖液系統(tǒng)由連有控制元件的機械臂自動控制，也可通過手動控制。
毛細管中流過的各蛋白組分通過紫外光陣列檢測器進行檢測，形成檢測圖譜，并記錄于軟件中。
將二甲亞砜作為電滲流的標記物，其他的各個峰的出峰時間與二甲亞砜作為參考，來確認各峰所代表的蛋白質(zhì)組分。將糖化血紅蛋白ffiAlc及非糖化血紅蛋白HbAO的峰值進行積分，得到糖化血紅蛋白ffiAlc的百分比例與實施例I基本相同。
實施例3
選用30根彈性石英毛細管(內(nèi)徑75微米，長IOcm)和金屬電極構(gòu)成毛細管陣列。 在毛細管陣列后部設(shè)有透明檢測窗口，使用可見光對毛細管中分離得到的蛋白質(zhì)組分進行定性和定量檢測。
彈性石英毛細管0. lmol/L KOH水溶液處理后，再先后用聚陽離子(白蛋白水溶液，0. Iwt% )和聚陰離子(硫酸軟骨素，0. 05wt% )水溶液沖洗毛細管，得到雙層涂層。隨后將PH = 3的檸檬酸溶液充入毛細管作為分離環(huán)境。以上毛細管的各個沖洗、涂層過程均通過壓力完成，并從毛細管陣列的末端進入(出口端，相對于進樣口的一端)，從前端排出到廢液池，所述NaOH水溶液、聚陽離子水溶液、聚陰離子水溶液和檸檬酸溶液的溶液槽由連有控制元件的機械臂自動控制，也可通過手動控制。
將毛細管陣列的毛細管的入口端一一對應(yīng)的插入陣列樣品槽中，將IOnL樣品以電壓或壓力方式同時進入毛細管陣列中毛細管的前端，所述樣品的調(diào)配體積比為血樣 溶血劑二甲亞砜=I 10 10。
將毛細管兩端接通為分離緩沖液系統(tǒng)并在毛細管上加10_30kV的恒定直流電壓作為分離驅(qū)動力，以驅(qū)動樣品中的各種蛋白以不同速度通過檢測窗口位置。所述陣列樣品槽和分離緩沖液系統(tǒng)由連有控制元件的機械臂自動控制，也可通過手動控制。
毛細管中流過的各蛋白組分通過可見光光陣列檢測器進行檢測，形成檢測圖譜， 并記錄于軟件中。
將二甲亞砜作為電滲流的標記物，其他的各個峰的出峰時間與二甲亞砜作為參考，來確認各峰所代表的蛋白質(zhì)組分。將糖化血紅蛋白ffiAlc及非糖化血紅蛋白HbAO的峰值進行積分，得到糖化血紅蛋白ffiAlc的百分比例與實施例I基本相同。
實施例4
選用48根彈性石英毛細管(內(nèi)徑100微米，長40cm)和金屬電極構(gòu)成毛細管陣列。 在毛細管陣列后部設(shè)有透明檢測窗口，使用紫外光對毛細管中分離得到的蛋白質(zhì)組分進行定性和定量檢測。
彈性石英毛細管0. 01mol/L NaOH水溶液處理后，再先后用聚陽離子(聚二烯丙基二甲基氯化銨，0. 001wt% )和聚陰離子(聚苯乙烯磺酸鈉水溶液，Iwt% )水溶液沖洗毛細管，得到雙層涂層。隨后將PH =5的檸檬酸溶液充入毛細管作為分離環(huán)境。以上毛細管的各個沖洗、涂層過程均通過壓力完成，并從毛細管陣列的末端進入(出口端，相對于進樣口的一端)，從前端排出到廢液池，所述NaOH水溶液、聚陽離子水溶液、聚陰離子水溶液和檸檬酸溶液的溶液槽由連有控制元件的機械臂自動控制，也可通過手動控制。
將毛細管陣列的毛細管的入口端一一對應(yīng)的插入陣列樣品槽中，將2nL樣品以電壓或壓力方式同時進入毛細管陣列中毛細管的前端，所述樣品的調(diào)配體積比為血樣溶血劑二甲亞砜=1:3:7。
將毛細管兩端接通為分離緩沖液系統(tǒng)并在毛細管上加10_30kV的恒定直流電壓作為分離驅(qū)動力，以驅(qū)動樣品中的各種蛋白以不同速度通過檢測窗口位置。所述陣列樣品槽和分離緩沖液系統(tǒng)由連有控制元件的機械臂自動控制，也可通過手動控制。
毛細管中流過的各蛋白組分通過紫外光陣列檢測器進行檢測，形成檢測圖譜，并記錄于軟件中。
將二甲亞砜作為電滲流的標記物，其他的各個峰的出峰時間與二甲亞砜作為參考，來確認各峰所代表的蛋白質(zhì)組分。將糖化血紅蛋白ffiAlc及非糖化血紅蛋白HbAO的峰值進行積分，得到糖化血紅蛋白ffiAlc的百分比例與實施例I基本相同。
實施例5
選用10根內(nèi)壁有聚丙烯酰胺涂層的彈性石英毛細管(內(nèi)徑20微米，長30cm)和金屬電極構(gòu)成毛細管陣列。在毛細管陣列后部設(shè)有透明檢測窗口，使用紫外/可見光對毛細管中分離得到的蛋白質(zhì)組分進行定性和定量檢測。
將毛細管陣列的毛細管的入口端一一對應(yīng)的插入陣列樣品槽中，將50nL樣品以電壓或壓力方式同時進入毛細管陣列中毛細管的前端，所述樣品的調(diào)配體積比為血樣 溶血劑二甲亞砜=1:3:3。
將毛細管兩端接通為分離緩沖液系統(tǒng)并在毛細管上加10_30kV的恒定直流電壓作為分離驅(qū)動力，以驅(qū)動樣品中的各種蛋白以不同速度通過檢測窗口位置。所述陣列樣品槽和分離緩沖液系統(tǒng)由連有控制元件的機械臂自動控制，也可通過手動控制。
毛細管中流過的各蛋白組分通過光陣列檢測器進行檢測，形成檢測圖譜，并記錄于軟件中。
將二甲亞砜作為電滲流的標記物，其他的各個峰的出峰時間與二甲亞砜作為參考，來確認各峰所代表的蛋白質(zhì)組分。將糖化血紅蛋白ffiAlc及非糖化血紅蛋白HbAO的峰值進行積分，得到糖化血紅蛋白ffiAlc的百分比例與實施例I基本相同。
如實施例I與實施例5所示，將本發(fā)明所提供的無涂層毛細管組成的毛細管陣列作為分離通道，在使用聚陰離子涂層和聚陽離子涂層后，其檢測結(jié)果與直接使用內(nèi)壁有涂層的毛細管陣列作為分離通道的檢測結(jié)果基本相同。
權(quán)利要求
1.一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法， 其特征在于，使用陣列毛細管和光陣列檢測裝置同時對多個樣品進行糖化血紅蛋白HbAlc 檢測。
2.如權(quán)利要求I所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，包括以下步驟a)將分離緩沖液充入陣列毛細管中的各毛細管中作為分離環(huán)境；b)將各樣品同時加入到陣列毛細管中的各毛細管的前端；c)當樣品進入毛細管陣列中的各毛細管前端后，將陣列毛細管的兩端更換為分離緩沖液；d)在毛細管兩端施加電壓作為分離驅(qū)動力；e)通過檢測光源和光陣列檢測器對毛細管中的樣品進行糖化血紅蛋白HbAlc檢測；f)根據(jù)步驟5)所得檢測數(shù)據(jù)計算得出各樣品中的糖化血紅蛋白HbAlc的含量。
3.如權(quán)利要求2所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述毛細管陣列中毛細管內(nèi)徑20-100微米，有效分離長度10-50厘米。
4.如權(quán)利要求3所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述毛細管陣列中毛細管的數(shù)量為4-48根，所述毛細管為無涂層石英毛細管或內(nèi)壁有涂層的中性石英毛細管。
5.如權(quán)利要求4所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述各毛細管的前部互相平行，末端集合到一處。
6.如權(quán)利要求2-5所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，在步驟I)前，在構(gòu)成所述陣列毛細管的毛細管內(nèi)壁制備涂層。
7.如權(quán)利要求6所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述涂層為聚陽離子涂層和聚陰離子涂層所構(gòu)成的雙層涂層。
8.如權(quán)利要求7所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，制備所述雙層涂層的方法為使用聚陽離子溶液和聚陰離子溶液沖洗毛細管。
9.如權(quán)利要求8所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述聚陽離子溶液為含有聚陽離子的水溶液，選自聚凝胺水溶液、聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液、白蛋白水溶液，其濃度為0. OOl-Iwt%。
10.如權(quán)利要求8所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述聚陰離子溶液為含有聚陰離子的水溶液，選自聚丙烯酸水溶液、聚苯乙烯磺酸鈉水溶液、硫酸軟骨素水溶液，其濃度為0.001-lwt%。
11.如權(quán)利要求8所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，在制備涂層前，使用強酸和/或強堿溶液對陣列毛細管中的毛細管進行處理。
12.如權(quán)利要求11所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述強酸和/或強堿溶液對陣列毛細管中的毛細管進行處理、聚陽離子和聚陰離子溶液沖洗毛細管、分離緩沖液充入毛細管的過程均通過壓力完成，所述強酸和強堿溶液、聚陽離子和聚陰離子溶液、分離緩沖液均從毛細管陣列的末端進入，從前端排出到廢液池。
13.如權(quán)利要求12所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述強酸溶液選自鹽酸緩沖液或硝酸緩沖液，所述強酸溶液的濃度為0. 01-lmol/L，所述強堿溶液選自氫氧化鈉水溶液或氫氧化鋰水溶液，所述強堿溶液的濃度為0. 01-lmol/L。
14.如權(quán)利要求2-5或7-13任一權(quán)利要求所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述分離緩沖液的pH值為3-5。
15.如權(quán)利要求2-5或7-13任一權(quán)利要求所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述步驟2)中的各樣品中含有電滲流標記物。
16.如權(quán)利要求15所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，以所述電滲流標記物的出峰時間為基準，得出糖化血紅蛋白及非糖化血紅蛋白所對應(yīng)的峰，對糖化血紅蛋白及非糖化血紅蛋白所對應(yīng)的峰的峰值進行積分并計算后得到樣品中糖化血紅蛋白的含量。
17.如權(quán)利要求16所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述計算的公式為糖化血紅蛋白)含量=糖化血紅蛋白峰值/ (糖化血紅蛋白峰值+非糖化血紅蛋白峰值)*100 %。
18.如權(quán)利要求17所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述電滲流標記物為二甲亞砜；所述二甲亞砜與樣品的體積比為I : 1_30。
19.如權(quán)利要求18所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述樣品包括血樣和溶血劑，所述血樣與溶血劑的體積比為I : 1-3。
20.如權(quán)利要求19所述的種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述各樣品同時加入到毛細管陣列中的各毛細管的前端的方法為電壓方式或壓力方式。
21.如權(quán)利要求2-5或7-13任一權(quán)利要求所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述步驟4)中的分離驅(qū)動力為恒定直流電，其電壓為10-30kV。
22.如權(quán)利要求2-5或7-13任一權(quán)利要求所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述步驟5)中的光源是波長為 180-600nm的紫外或可見光源。
23.如權(quán)利要求22所述的一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法，其特征在于，所述紫外或可見光源是鹵素燈或LED光源，所述光陣列檢測器為PMT或CCD檢測器所組成的光陣列檢測器。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于同時檢測多個樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細管電泳檢測方法。所述多通道毛細管電泳檢測方法使用陣列毛細管和光陣列檢測裝置同時對多個樣品進行糖化血紅蛋白HbAlc檢測。本發(fā)明可以同時對多個血液樣品中的糖化血紅蛋白HbA1c進行分析和檢測，并自動對結(jié)果進行分析，生成報告。
文檔編號G01N27/447GK102539512SQ20121003029
公開日2012年7月4日 申請日期2012年2月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月10日
發(fā)明者寧小檬 申請人:上?？涤锟萍加邢薰?br>