一種檢測蛋白水解酶活性的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種檢測蛋白水解酶活性的方法，該方法包括將含有蛋白水解酶的待測樣品與香豆素衍生物熒光探針接觸，得到接觸后的物料，檢測接觸后的物料在激發(fā)光下發(fā)出的熒光的強度，其中，所述香豆素衍生物熒光探針為式（1）或式（2）所示結(jié)構(gòu)的非肽香豆素衍生物；其中，在式（1）中R1為甲基或乙基。通過上述技術(shù)方案，本發(fā)明提供了一種靈敏、簡單、經(jīng)濟的蛋白水解酶活性檢測方法、蛋白水解酶活性檢測試劑盒以及香豆素衍生物熒光探針在制備檢測樣品中蛋白水解酶活性的試劑盒中的用途。式（1）------------------------?式（2）。
【專利說明】一種檢測蛋白水解酶活性的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測蛋白水解酶活性的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]現(xiàn)有測定蛋白水解酶活性的方法主要有三種。第一種是傳統(tǒng)的高效液相色譜法(HPLC)，該方法可以直接用于監(jiān)測蛋白水解酶的對底物的水解反應(yīng)。但是，高效液相色譜法的實驗過程繁瑣、周期長，并且很難做到抑制劑的篩選。第二種是紫外吸收光譜法，這種方法因其簡單、快速的優(yōu)點獲得廣泛的使用，但是紫外吸收光譜法仍然有著一定的缺陷。首先，這種方法背景干擾大導(dǎo)致靈敏度低。另外，參與分析的底物都是多肽衍生物，難于合成導(dǎo)致制備成本很高。第三種是熒光發(fā)射光譜法，這是一種比較新穎的方法，靈敏度高，方法簡單，并且可以用于高通量篩選。遺憾的是，目前使用的熒光探針仍是多肽，在常規(guī)條件下大都穩(wěn)定性差，儲存和運輸條件苛刻，原子利用率很低。因此，設(shè)計開發(fā)基于非肽熒光探針的靈敏、簡單、經(jīng)濟的檢測方法是非常迫切和必要的。然而目前為止，國內(nèi)外較少關(guān)于非肽熒光探針用于檢測彈性蛋白酶(EC號:3.4.21.37)、胰蛋白酶(EC號:3.4.21.4)、胰凝乳蛋白酶(EC號:3.4.21.1)和羧肽酶(EC號:3.4.17.1)活性的報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的多肽類熒光探針穩(wěn)定性差，儲運條件苛刻，原子利用率低的缺點，提供一種靈敏、簡單、經(jīng)濟的的蛋白水解酶活性檢測方法。
[0004]本發(fā)明提供了一種檢測蛋白水解酶活性的方法，該方法包括將含有蛋白水解酶的待測樣品與香豆素類衍生物熒光探針接觸，得到接觸后的物料；檢測接觸后的物料在激發(fā)光下發(fā)出的熒光的強度；其中，所述香豆素類衍生物熒光探針為式(I)或式(2)所示結(jié)構(gòu)的非肽香豆素衍生物；
[0005]

【權(quán)利要求】
1.一種檢測蛋白水解酶活性的方法，該方法包括將含有蛋白水解酶的待測樣品與香豆素衍生物熒光探針接觸，得到接觸后的物料，檢測接觸后的物料在激發(fā)光下發(fā)出的熒光的強度，其特征在于，所述香豆素衍生物熒光探針為式(I)或式(2)所示結(jié)構(gòu)的非肽香豆素衍生物；
其中，在式(I)中R1為甲基或乙基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在式(I)中R1為乙基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述香豆素衍生物為式(I)所示結(jié)構(gòu)，所述蛋白水解酶為彈性蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和羧肽酶中的一種或多種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述香豆素衍生物為式(2)所示結(jié)構(gòu)，所述蛋白水解酶為彈性蛋白酶。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項所述的方法，其中，相對于Iμ M的蛋白水解酶，所述香豆素衍生物的用量為1-100 μ Μ。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項所述的方法，其中，接觸的條件包括:溫度為25-37°C，pH值為6-8，時間為5-30min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項所述的方法,其中,所述激發(fā)光的波長為360-405nm,所述熒光的發(fā)射波長為500-520 nm。
8.—種檢測樣品中蛋白水解酶活性的試劑盒，該試劑盒包括:香豆素衍生物熒光探針以及待測蛋白水解酶的標準品；所述香豆素衍生物熒光探針為式(I)或式(2)所示結(jié)構(gòu)的非肽香豆素衍生物；
式(I)式(2) 其中，在式(I)中R1為甲基或乙基。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，其中，在式(I)中R1為乙基。
10.香豆素衍生物熒光探針在制備檢測樣品中蛋白水解酶活性的試劑盒中的用途，所述香豆素衍生物熒光探針為式(I)或式(2)所示結(jié)構(gòu)的非肽香豆素衍生物；
式(I)式(2)其中，在式(I)中R1為甲基或乙基。
【文檔編號】G01N33/52GK104165869SQ201310184727
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2013年5月17日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月17日
【發(fā)明者】楊光富, 楊文超, 孫琦, 李俊, 劉萬年 申請人:華中師范大學