專利名稱：一種利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食品安全檢測領(lǐng)域，尤其涉及一種利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法。
背景技術(shù)：
目前，國內(nèi)外已建立的檢測方法主要采用了液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GB/T21311-2007)和酶聯(lián)免疫法。以上兩種均存在前處理時間長，提取操作繁瑣、費時等缺點。在檢測方面，酶聯(lián)免疫法主要用于快速篩選，但檢測方法單一，只能分別檢測一次待測物，檢測設(shè)備雖比較便宜，但檢測試劑昂貴?！吨腥A人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)業(yè)部1077號公告-2-2008》“水產(chǎn)品中硝基呋喃類代 謝物殘留量-高效液相色譜法”采用了新型衍生劑與SPE柱提取凈化技術(shù)，與現(xiàn)有的國標(biāo)相比，衍生化時間由不少于16小時縮短到I個小時,提取凈化由2小時縮短到0. 5小時，整體檢測時間由20小時縮短為2小時。新的方法突出了新的機(jī)理，前處理過程簡化掉原有標(biāo)準(zhǔn)中難控制的衍生化酸度調(diào)節(jié)和繁瑣的提取凈化操作。方法準(zhǔn)確、可靠，靈敏度高，且大幅度降低檢測成本(時間、儀器、試劑)，總體技術(shù)達(dá)到了國際先進(jìn)水平。該標(biāo)準(zhǔn)已在08年8月在水產(chǎn)行業(yè)成功推廣使用，對硝基呋喃代謝物的控制起到了積極的推進(jìn)作用。對于全國范圍的大規(guī)模監(jiān)控檢測來說，使用上述幾種方法是可行的。但其中仍然存在不足。(I)目前各地的檢測條件還不完全統(tǒng)一，具有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀、液相色譜儀的實驗室很少，原因是這些儀器都很昂貴，需要進(jìn)行大量的投資才可行；(2)樣品處理和檢測周期過長，不能對源頭及時監(jiān)控，無法滿足大量的硝基呋喃代謝物普查工作的需求。因此，行業(yè)內(nèi)急需一種無需大型精密儀器、價格低廉，并且能夠快速便捷的現(xiàn)場檢測方法，來彌補(bǔ)此領(lǐng)域的技術(shù)空白。

發(fā)明內(nèi)容
為解決上述中存在的問題與缺陷，本發(fā)明提供了一種利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法。所述技術(shù)方案如下一種利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法，包括A通過提取劑提取樣品，并將提取的樣品通過上清液進(jìn)行液化；B將液化后的樣液進(jìn)行衍生化，得到衍生化樣液；C將衍生化樣液通過萃取柱進(jìn)行萃取及洗脫劑的洗脫，得到洗脫液；D通過萃取劑對洗脫液進(jìn)行萃取，得到萃取后的萃取液；E吸取下層萃取液于點滴板一孔上，在該孔上加入定性試劑并混合均勻，形成待測樣品混合液；F吸取對照液或陰性樣液于點滴板對照孔上；G將點滴板置入硝代速測儀中，通過待測樣品混合液的熒光強(qiáng)度與對照液或陰性樣液的熒光強(qiáng)度判斷所述待測樣品中含有的硝基呋喃類代謝物的含量。
本發(fā)明提供的技術(shù)方案的有益效果是具有操作簡便、成本低廉、可現(xiàn)場判定結(jié)果的特點。可滿足農(nóng)業(yè)、質(zhì)檢、工商、衛(wèi)生、檢驗檢疫等食品安全監(jiān)管部門的現(xiàn)場監(jiān)督檢查需要，對畜禽及水產(chǎn)品養(yǎng)殖、生產(chǎn)與經(jīng)營企業(yè)控制產(chǎn)品質(zhì)量也有重要意義。


圖I是利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法流程圖。
具體實施例方式為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將結(jié)合附圖對本發(fā)明實施方式作進(jìn)一步地詳細(xì)描述本實施例提供了一種用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物方法，所述方法包括
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步驟20將液化后的樣液進(jìn)行衍生化，得到衍生化樣液；步驟30將衍生化樣液通過萃取柱進(jìn)行萃取及洗脫劑的洗脫，得到洗脫液；步驟40通過萃取劑對洗脫液進(jìn)行萃取，得到萃取后的萃取液；步驟50吸取下層萃取液于點滴板一孔上，在該孔上加入定性試劑并混合均勻，形成待測樣品混合液；步驟60吸取對照液或陰性樣液于點滴板對照孔上；步驟70將點滴板置入硝代速測儀中，通過待測樣品混合液的熒光強(qiáng)度與對照液或陰性樣液的熒光強(qiáng)度判斷所述待測樣品中含有的硝基呋喃類代謝物的含量。其上述方法具體檢測步驟如下提取稱取已絞碎或勻質(zhì)的樣品IOg與50mL的離心管中，倒入一瓶固體提取劑和一瓶液體提取劑，振搖I分鐘使樣品完全分散開與提取劑充分接觸后，在37 40°C條件下超聲提取15分鐘取出，振搖約I分鐘后，過濾或離心，取上清液IOmL于另一支50mL的離心管中。上述過濾過程為取一塊脫脂棉，塞住漏斗上頸口，加3mL凈化劑潤洗脫脂棉，用一次性吸管吸取IOmL樣液過濾并收集。上述離心是在5000r/min離心5分鐘后，取上清液10mL。上述固體提取劑為酸性氧化鋁，硅膠C18鍵合材料和吸附型離子交換樹脂按30 40 30比例混和。上述液體提取劑為5%三氯乙酸-甲醇溶液。上述凈化劑為乙酸乙脂。衍生化取2mL激活劑完全溶解衍生化試劑3備用；如魚和豬肉樣品向收集的樣液中依次加入0. 5mL衍生化試劑I和0. 82mL衍生化試劑2，搖勻后再加入0. ImL衍生化試劑3和0. 5mL衍生化試劑4，搖勻后于37 40°C條件下超聲衍生化30min (超聲過程中搖動樣液4 5次)，取出冷卻至室溫待過柱，如果衍生化樣液中有渾濁或白色沉淀物時，加0. SmL的凈化劑溶解，搖勻待樣液清涼后再過柱。蝦和雞肉樣品向收集的樣液中依次加0. 5mL衍生化試劑I和0. 75mL衍生化試劑2，搖勻后再加0. ImL衍生化試劑3和0. 5mL衍生化試劑4，搖勻后于37 40°C條件下超聲衍生化30min (超聲過程中搖動樣液4_5次)，取出冷卻至室溫待過柱，如果衍生化樣液中有渾濁或白色沉淀物時，加0. 8mL的凈化劑溶解，搖勻待樣液清涼后再過柱。上述衍生化試劑I為2%檸檬酸鈉水溶液，衍生化試劑2為5%磷酸二氫氨水溶液、衍生化試劑3為I. 0%鄰氯水楊醛甲醇溶液，衍生化試劑4為I. 0%三氯化鋱。過柱取固相萃取柱一支，依次加入5mL乙酸乙酯、2mL激活劑和2mL蒸餾水激活(激活柱子不擠干)后，加入全部衍生化樣液(如果衍生化樣液中有渾濁或白色沉淀物時，力口A 0. 8mL的凈化劑溶解，搖勻待樣液清涼后再過柱，以2 3mL/min速度過柱，棄去流出液并擠干，加入2mL洗滌劑棄去流出液并擠干；再加入0. 6mL洗脫劑(移液槍取)洗脫，5mL離心管收集洗脫液。上述激活劑為50%甲醇水溶液，上述洗脫劑為5%冰乙酸甲醇溶液。萃取向收集的洗脫液中加入ImL萃取劑I和ImL萃取劑3，劇烈震搖約I分鐘， 靜止3分鐘或2000R/min離心2分鐘，棄去下層液體(下層一定要棄去干凈)。再加ImL萃取劑2和ImL萃取劑3，劇烈振搖I分鐘，靜止4分鐘或2000R/min離心2分鐘，棄去上層液體；再加2mL萃取劑3，劇烈振搖I分鐘，靜止4分鐘或2000R/min離心2分鐘，棄去上層液體；再加2mL萃取劑3，劇烈振搖I分鐘，靜止4分鐘或2000R/min離心2分鐘，棄去上層液體；再加2mL萃取劑3，劇烈振搖I分鐘，靜止5分鐘或2000R/min離心2分鐘，待觀察；上述萃取劑I為飽和食鹽水；萃取劑2為I :1甲醇水溶液；萃取劑3 :為苯。觀察判斷用一次性吸管或移液槍吸取0. 75mL下層(切忌取到上層)液體到點滴板的一個孔上，加IOOuL或3滴定性試劑混勻，同時用一次性吸管吸取0. 75mL對照液或陰性樣液于點滴板的另一個孔上；將點滴板放入硝代速測儀中對照觀察，熒光強(qiáng)度強(qiáng)于陰性樣品或?qū)φ找旱臒晒鈴?qiáng)度則樣品中含有硝基呋喃類代謝物大于或等于I. Oug/kg ;熒光強(qiáng)度相同或弱于陰性樣品或?qū)φ找旱臒晒鈴?qiáng)度則樣品中硝基呋喃類代謝物的含量小于I.0ug/kgo上述定性劑0. 01%氯化鋱水溶液。上述實施例提供的對硝基呋喃代謝物的檢測包括呋喃唑酮代謝物、呋喃它酮代謝物、呋喃西林代謝物及呋喃妥因代謝物。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法，其特征在于，所述方法包括 A通過提取劑提取樣品，并將提取的樣品通過上清液進(jìn)行液化； B將液化后的樣液進(jìn)行衍生化，得到衍生化樣液； C將衍生化樣液通過萃取柱進(jìn)行萃取及洗脫劑的洗脫，得到洗脫液； D通過萃取劑對洗脫液進(jìn)行萃取，得到萃取后的萃取液； E吸取下層萃取液于點滴板一孔上，在該孔上加入定性試劑并混合均勻，形成待測樣品混合液； F吸取對照液或陰性樣液于點滴板對照孔上； G將點滴板置入硝代速測儀中，通過待測樣品混合液的熒光強(qiáng)度與對照液或陰性樣液的熒光強(qiáng)度判斷所述待測樣品中含有的硝基呋喃類代謝物的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法，其特征在于，所述步驟A具體包括將獲取的樣品與提取劑混合超聲提取，并振搖過濾或離心后，取上清液于離心管中。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法，其特征在于2種提取劑提取劑I為固體提取劑其配比為酸性氧化鋁、硅膠C18鍵合材料和吸附型離子交換樹脂按30 40 30比例混和物； 提取劑2為三氯乙酸-甲醇溶液； 洗脫劑為5%冰乙酸-甲醇溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法，其特征在于，步驟B具體包括所述液化后的樣液通過衍生化試劑進(jìn)行超聲衍生化并振搖，取出冷卻至室溫。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或4所述的利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法，其特征在于，所述衍生化試劑包括4種衍生化試劑I為2%檸檬酸鈉水溶液、衍生化試劑2為5%磷酸二氫氨水溶液、衍生化試劑3為I. 0%鄰氯水楊醛甲醇溶液、衍生化試劑4為I. 0%三氯化鋱。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法，其特征在于，所述步驟C中，萃取衍生化樣液的萃取柱中衍生化樣液的萃取柱中設(shè)置有乙酸乙酯、激活劑為50%甲醇水溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法，其特征在于，所述步驟D具體包括向收集的洗脫液中加入萃取劑振搖并離心處理，棄去下層液體和上層液體。
8.根據(jù)權(quán)利要求I或7所述的利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法，其特征在于，所述萃取劑包括3種萃取劑I為飽和食鹽水、萃取劑2為一甲醇水溶液、萃取劑3為苯。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法，其特征在于，所述定性劑為0. 01%氯化鋱水溶液。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法，其特征在于，所述硝基呋喃代謝物包括呋喃唑酮代謝物、呋喃它酮代謝物、呋喃西林代謝物及呋喃妥因代謝物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用熒光強(qiáng)度檢測硝基呋喃代謝物的方法，包括通過提取劑提取樣品，并將提取的樣品通過上清液進(jìn)行液化；將液化后的樣液進(jìn)行衍生化，得到衍生化樣液；將衍生化樣液通過萃取柱進(jìn)行萃取及洗脫劑的洗脫，得到洗脫液；通過萃取劑對洗脫液進(jìn)行萃取，得到萃取后的萃取液；吸取下層萃取液于點滴板一孔上，在該孔上加入定性試劑并混合均勻，形成待測樣品混合液；吸取對照液或陰性樣液于點滴板對照孔上；將點滴板置入硝代速測儀中，通過待測樣品混合液的熒光強(qiáng)度與對照液或陰性樣液的熒光強(qiáng)度判斷所述待測樣品中含有的硝基呋喃類代謝物的含量。
文檔編號G01N21/64GK102759519SQ20121026870
公開日2012年10月31日 申請日期2012年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月30日
發(fā)明者王亞軍, 賈東芬 申請人:六角體科技(天津)有限公司