專利名稱：一種特異性結(jié)合稀土納米顆粒的多肽及其篩選方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于納米生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種特異性結(jié)合稀土納米顆粒的多肽及其篩選方法。
背景技術(shù)：
基于稀土的上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米顆粒(upconversion nanophosphors, UCN)作為新一代生物發(fā)光標(biāo)記，相比有機熒光染料和量子點等下轉(zhuǎn)換發(fā)光標(biāo)記而言，上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米顆粒具有光穩(wěn)定性好、化學(xué)穩(wěn)定性高、吸收和發(fā)射帶很窄、發(fā)光壽命長、潛在生物毒性小等優(yōu)點。上轉(zhuǎn)換發(fā)光標(biāo)記因采用近紅外連續(xù)激光作為激發(fā)源，具有較深的光穿透深度、無生物背景熒光干擾、對生物組織幾乎無損傷等顯著優(yōu)勢，使其成為生物成像的理想標(biāo)記物。此外，由于稀土上轉(zhuǎn)換納米材料為稀土摻雜氟化物納米顆粒，其具有較低的聲子能，可以降低非輻射躍遷提高發(fā)光強度，在氧化物、硫化物、磷化物等眾多基質(zhì)中脫穎而出，近年來也被廣泛應(yīng)用在分析檢測、疾病治療等領(lǐng)域。然而，稀土上轉(zhuǎn)換納米顆粒作為無機納米顆粒，用于體內(nèi)應(yīng)用及臨床試驗之前還存在著許多問題。例如，其易團聚且不溶于水，很難應(yīng)用于體內(nèi)環(huán)境；在體內(nèi)進行生物成像及體內(nèi)光動力治療應(yīng)用時，其會與很多組織、細胞及生物分子進行非特異性的粘附，影響作用效果；進入細胞或動物體內(nèi)，其會引發(fā)嚴(yán)重的細胞自噬，甚至導(dǎo)致細胞死亡等。目前，針對于無機納米顆粒的表面改性方法主要是通過各種共價和非共價手段，采用硅膠(CN101434748)、脂肪酸(CN1400167)、聚乙二醇(CN101038290)、殼聚糖(CN101411893)、蛋白、多肽等改善納米顆粒的表面特性。在這些方法中，值得注意的是利用特異性結(jié)合肽涂層包裹的方法進行表面改性，它具有無與倫比的多功能性、生物相容性、簡單和可擴展性。目前，國內(nèi)外主要報道的特異性結(jié)合多肽主要是針對與體內(nèi)外組織器官、細胞及蛋白結(jié)合。例如，與正?；虬┳兘M織器官特異性結(jié)合的多肽(CN101531706、CN101827583A、CN15630 78、CN102060909A、CN101891803A);與正常或癌變細胞特異性結(jié)合的多肽(0附01918433六、0附709905、0附763082、0附01033251、0附900108);以及與體內(nèi)蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的多肽(CN102060913A、CN1823087、CN1262688、CN102105487A、CN101146822、CN1721432、CN1687128、CN101225108、CN101113164、CN101481418)。然而，針對無機納米顆粒的特異性結(jié)合多肽報道甚少，僅有的為對鈦、銀、硅材料的結(jié)合多肽(CN1829734)及金屬鎳的高親和力結(jié)合肽(CN1911956)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種方法，利用噬菌體展示技術(shù)通過噬菌體展示文庫篩選出具有特異性結(jié)合稀土納米顆粒能力的多肽。本發(fā)明的方法包括如下步驟:(a)將噬菌體展示多肽庫與稀土納米顆?；旌戏跤?；(b)回收結(jié)合在稀土納米顆粒上的噬菌體；(C)擴增回收的噬菌體用于稀土納米顆粒下一輪結(jié)合篩選；(d)重復(fù)上述(a)到(c)的步驟至少一次；(e)對回收的噬菌體挑取單克隆，測序后獲得所編碼的展示多肽。在實施例中，應(yīng)用本發(fā)明的方法識別出的多肽具有一個編碼展示多肽CTARSPWIC (RE-0,SEQ ID NO:1)的核苷酸序列。攜帶該展示多肽的噬菌體顯示出特異性的高親和力結(jié)合稀土納米顆粒的能力。本發(fā)明中還提供了高親和力的特異性結(jié)合稀土納米顆粒的多肽及其類似物的化學(xué)合成，這些類似物包括噬菌體展示技術(shù)篩選鑒定出的氨基酸序列。包括含有噬菌體展示肽的氨基酸序列的特定多肽及其類似物，顯示出能夠高特異性結(jié)合稀土納米材料的能力。這些稀土納米材料包括稀土金屬氧化物，稀土金屬硫化物，稀土金屬硫氧化物，基于稀土元素摻雜的上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料以及一切含有稀土元素的化合物。任何本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的這些多肽或蛋白質(zhì)的生產(chǎn)技術(shù)包括但不限于通過諸如重組技術(shù)等標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)技術(shù)來表達肽或蛋白質(zhì)、從自然原料中分離肽或蛋白質(zhì)、或者化學(xué)合成這些肽或蛋白質(zhì)等，都包括在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。在一個較佳的實施例中，合成出一個序列為ACTARSPWICG (RE-1，SEQ ID NO:2)的多肽，RE-1包括了 RE-O的序列，即來源于噬菌體M13外殼蛋白上的RE-O序列加上兩個末端氨基酸A和G。在另一些實施例中，RE-1的多肽類似物也被合成出來。這些多肽類似物包括RE-3 (ACffPATRISCG, SEQ ID NO:4)，它是RE-1兩端的各2個氨基酸不變、中間七個氨基酸順序打亂形成的；RE-2X(ACTARSPWICGGGACTARSPWICG，SEQ ID NO: 13)，它是由兩個 RE-1組成的。已經(jīng)證實這些多肽及其類似物高親和力的特異性結(jié)合稀土納米材料的能力。在另一些實施例中，RE-1的多肽類似物也被合成出來。這些多肽類似物包括RE-2 (TARSPWI，SEQ ID NO:3)，它是RE-1去掉兩端各2個氨基酸后剩余的中間七個氨基酸組成的；RE_4 (AATARSPffICG, SEQ ID NO:5)，它是RE-1的一個單獨氨基酸被替換(C —A);RE-5 (ACAARSPffICG, SEQ ID NO:6)，它是RE-1的一個單獨氨基酸被替換(T —A);RE-6 (ACTAASPffICG, SEQ ID NO:7)，它是RE-1的一個單獨氨基酸被替換(R —A);RE-7 (ACTARAPffICG, SEQ ID N0:8)，它是 RE-1 的一個單獨氨基酸被替換(S — A);RE-8 (ACTARSAffICG, SEQ ID NO:9),它是 RE-1 的一個單獨氨基酸被替換(P — A) ;RE_9(ACTARSPAICG, SEQ ID NO: 10)，它是 RE-1 的 一個單獨氨基酸被替換(W — A) ;RE_10(ACTARSPffACG, SEQ ID NO:11 )，它是 RE-1 的一個單獨氨基酸被替換(I — A) ;RE_11(ACTARSPff I AG, SEQ ID NO:12)，它是RE-1的一個單獨氨基酸被替換(C — A)。已經(jīng)證實這些多肽及其類似物一般親和力結(jié)合稀土納米材料的能力。在另一些實施例中，RE-1的多肽類似物也被合成出來。這些多肽類似物包括RE-Ag (ACTARSPffICGGGNPSSLFRYLPSD, SEQ ID NO:14)，它是由 RE-1 和金屬銀特異性結(jié)合肽(NPSSLFRYLPSD)組成的，已經(jīng)證實了它可以同時與稀土納米顆粒和金屬銀高親和力的特異性結(jié)合。RE-Ti (RKLPDAGGGACTARSPffICG, SEQ ID NO: 15)，它是由 RE-1 和金屬鈦特異性結(jié)合肽(RKLPDA)組成的，已經(jīng)證實了它可以同時與稀土納米顆粒和金屬鈦高親和力的特異性結(jié)合。RE-AT (CLSYYPSYCGGACTARSPWICG, SEQ ID NO: 16)，它是由 RE-1 和凋亡細胞靶向肽(CLSYYPSYC)組成的，已經(jīng)證實了它不僅可以與稀土納米顆粒高親和力的特異性結(jié)合，而且可以將稀土納米顆粒靶向到凋亡細胞表面。RE-PH (SMSIARLGGACTARSPffICG,SEQ ID NO:17)，它是由RE-1和前列腺組織靶向肽(SMSIARL)組成的，已經(jīng)證實了它不僅可以與稀土納米顆粒高親和力的特異性結(jié)合，而且可以將稀土納米顆粒靶向到前列腺組織。RE-BH (CLEVSRKNCGGACTARSPffICG, SEQ ID NO: 18)，它是由 RE-1 和腦組織靶向肽(CLEVSRKNC)組成的，已經(jīng)證實了它不僅可以與稀土納米顆粒高親和力的特異性結(jié)合，而且可以將稀土納米顆粒靶向到腦組織。RE-LH (CGFECVRQCPERCGGACTARSPWICG, SEQ ID NO:19)，它是由RE-1和肺臟組織靶向肽(CGFECVRQCPERC)組成的，已經(jīng)證實了它不僅可以與稀土納米顆粒高親和力的特異性結(jié)合，而且可以將稀土納米顆粒靶向到肺臟組織。RE-DH(ACTARSPffICGGPKKKRKVC, SEQ ID NO:20)，它是由 RE-1 和核酸定位肽(PKKKRKV)組成的，已經(jīng)證實了它不僅可以與稀土納米顆粒高親和力的特異性結(jié)合，而且可以將稀土納米顆粒靶向到細胞核。RE-SMAC (ACTARSPffICGGGAVPIAQK, SEQ ID NO:21 )，它是由 RE-1 和促凋亡多肽SMAC(AVPIAQK)組成的，已經(jīng)證實了它不僅可以與稀土納米顆粒高親和力的特異性結(jié)合，而且可以將稀土納米顆粒靶向到凋亡細胞。RE-1-RGD (CRGDCGGACTARSPffICG, SEQ ID NO:22)，它是由RE-1和腫瘤細胞靶向肽R⑶組成的，已經(jīng)證實了它不僅可以與稀土納米顆粒高親和力的特異性結(jié)合，而且可以將稀土納米顆粒靶向到腫瘤細胞。本發(fā)明也提供了編碼諸如多肽RE-O (SEQ ID NO:1)、RE_1 (SEQ ID NO:2)、RE_2X(SEQ ID NO:13), RE-3 (SEQ ID NO:4)或者是它們的部分的分離的核苷酸、同系物和類似物，或者在嚴(yán)格條件下雜交為編碼SEQ ID NO:USEQ ID NO:2、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:4或者是它們的部分所示的氨基酸序列的核苷酸序列，都具有高親和力的特異性結(jié)合稀土納米顆粒的能力。進一步地，本發(fā)明還提供了核苷酸、同系物和類似物，包括編碼SEQ ID NO:USEQ ID N0:2、SEQ ID NO: 13,SEQ ID NO:4所示氨基酸序列、它們的部分、或者是它們的互補序列的核苷酸序列。本發(fā)明還提供了一種評估納米材料懸浮能力的方法，包括如下步驟:(a)將納米材料懸浮液置于紫外檢測池中；(b)用該納米材料的紫外特征吸收波長對樣品池中的納米材料進行實時觀測和掃描，得出時間動力學(xué)曲線；(c)根據(jù)時間動力學(xué)曲線評估納米材料懸浮能力。本發(fā)明還提供了一種評估納米材料沉降速率和擴散能力以及與細胞相互作用的方法，包括如下步驟:Ca)將細胞培養(yǎng)在蓋玻片上，正面細胞朝上或細胞朝下分別置于細胞培養(yǎng)板中，蓋玻片架在小玻璃體上；(b)將納米材料培養(yǎng)基倒入細胞培養(yǎng)板中，使得細胞充分浸入培養(yǎng)基中，細胞蓋玻片的位置正好位于液體的中間高度；(C)用裝備有紅外激光器的熒光顯微鏡觀察細胞表面上 結(jié) 合的納米材料；(d)根據(jù)熒光觀察結(jié)果評估納米材料沉降速率和擴散能力以及與細胞相互作用。本發(fā)明還提供了一種評估納米材料沉降速率和擴散能力以及與細胞相互作用的裝置，所述裝置包括細胞培養(yǎng)板、蓋玻片、小玻璃體，所述小玻璃體位于細胞培養(yǎng)板中，所述蓋玻片架在小玻璃體上。本發(fā)明提供了能夠特異性高親和力結(jié)合稀土納米顆粒的多肽，該多肽能夠結(jié)合在納米顆粒表面形成包覆層，從而改善稀土納米顆粒在水中的懸浮性能，阻止顆粒間的聚合，降低顆粒間的相互作用，也降低了稀土納米顆粒與細胞表面，細胞培養(yǎng)板表面及其他介質(zhì)表面的非特異性粘附能力。


圖1為特異性與Nd2O3結(jié)合的噬菌體數(shù)量結(jié)果圖。圖2為驗證RE0B-1噬菌體與Nd2O3結(jié)合的能力的PCR結(jié)果圖。圖3為不同濃度的RE-1短肽對RE0B-1噬菌體與Nd2O3結(jié)合能力的抑制效果結(jié)果圖。圖4為RE-1短肽與不同無機納米材料的結(jié)合能力結(jié)果圖。圖5為UCN與RE-1的結(jié)合表征結(jié)果圖。其中，圖5A為UCN與RE-1短肽的結(jié)合透射電鏡圖；圖5B為UCN與RE0B-1噬菌體的結(jié)合透射電鏡圖；圖5C為UCN與RE-1短肽的結(jié)合的掃描電鏡圖。圖6為上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的粒徑分析結(jié)果圖。其中，圖6A為UCN的粒徑分布；圖6B為UCP的粒徑分布；圖6C為UCN-S的粒徑分布。圖7為上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料與RE-1的結(jié)合曲線圖。其中，圖7A (UCN)和圖7B(UCP)為結(jié)合的時間梯度曲線；圖7C (UCN)、圖7D (UCP)和圖7E (UCN-S)為結(jié)合的濃度梯度曲線。圖8為環(huán)境對上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料與RE-1結(jié)合的影響。其中，圖8A (UCN)和圖8B (UCP)為不同pH值的影響；圖8C (UCN)和圖8D (UCP)為不同鹽離子濃度的影響；圖8E(UCN)和圖8F (UCP)為不同溫度的影響。圖9為RE-1與上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料結(jié)合后隨時間的解離情況。其中，圖9A為UCN的解離結(jié)果；圖9B為UCP的解離結(jié)果。圖10為RE-1提高上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料懸浮能力的時間動力學(xué)曲線結(jié)果圖。其中，圖1OA為UCN的時間動力學(xué)曲線；圖1OB為UCP的時間動力學(xué)曲線。圖11為RE-1降低上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的非特異性粘附能力檢測結(jié)果圖。其中，圖1IA和圖1lB為UCN的檢測結(jié)果；圖1lC和圖1lD為UCN-S的檢測結(jié)果。
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圖12為RE-1降低上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料在溶液中的擴散能力檢測結(jié)果圖。其中，圖12A和圖12B為實驗裝置示意圖；圖12C、圖12D和圖12E為UCN的檢測結(jié)果；圖12F、圖12G和圖12H為UCP的檢測結(jié)果。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明做進一步說明。應(yīng)理解，以下實施例僅用于說明本發(fā)明而非用于限制本發(fā)明的范圍。實施例1、噬菌體展示技術(shù)篩選特異性與Nd2O3結(jié)合的短肽用來篩選特異性與Nd2O3結(jié)合的肽的文庫,是由New England Biolabs (Mass,MA)提供的，為含有二硫鍵的七肽文庫(Ph.D.-C7C)。這個文庫中的隨機片段的兩側(cè)是半胱氨酸殘基，它們可以在噬菌體組裝過程中被氧化形成二硫鍵的連接，這樣就形成一個環(huán)肽和靶對象相互作用。這個文庫含有超過二十億個克隆數(shù)。文庫中隨機肽在小外殼蛋白PlII的氨基端，所以每個噬菌體顆粒都表達五個拷貝。Ph.D.-C7C文庫中噬菌體表達隨機序列的位置之前是丙氨酸-半胱氨酸。在隨機肽和PlII蛋白間含有短的連接序列(甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸_絲氨酸)。(Ph.D. _C7C卩遼菌體肽展示試劑盒，http://www.neb.com/nebecomm/products/productE8120.asp)。將 2 μ I 的 101° 個卩遼菌體與 Iml Nd203( lmg/ml,購自廣州惠州瑞爾化學(xué))混合，在37°C搖床中孵育2h，12000rpm高速離心IOmin后，沉淀用TBST (含有2%吐溫-20，pH7.5)洗滌10次，將結(jié)合在Nd2O3上的噬菌體回收，然后與0.5ml快速生長的大腸桿菌ER2378 (購自New England Biolabs, Mass, MA)混合，鮮育0.5h后加入20ml的LB培養(yǎng)基(胰蛋白胨0.2g ;酵母提取物0.1g ;氯化鈉0.2g)中擴增6h。擴增的噬菌體在磷酸緩沖液(150mM NaCl,50mM Tris_HCl，pH7.5)中重懸，并用來做第二輪的篩選。第一輪大約回收了 100個噬菌體，第三輪擴增后的噬菌體與Nd2O3的結(jié)合效率比噬菌體庫提高了兩個數(shù)量級(圖1)。將第三輪回收的卩遼菌體鋪在含有X-gal(5-bromo-4-chloro-3-1ndolyl-β _D_galactoside)和 IPTG (isopropyl-β-D-thiogalactoside)的 LB 平板上，隨機挑取 15 個藍色的噬菌斑，用DNA自動測序儀(ABI3730)進行測序。其中12個(命名為RE0B-1)都是含有同樣的插入序列，編碼的肽序列是CTARSPWIC (RE-0, SEQ ID NO:1)0實施例2、鑒定RE0B-1噬菌體與Nd2O3的結(jié)合力將滴度為IO5的RE0B-1噬菌體與滴度為IO8的AP-1噬菌體(噬菌體庫隨機選取的隨機噬菌體，用作對照，其編碼的肽序列為CNATLPHQC，SEQ ID NO:23)混合，與100 μ I Nd2O3(lmg/ml)在37°C下孵育2h，12000rpm高速離心IOmin后，沉淀用TBST (含有2%吐溫-20，pH值7.5)洗滌10次，將沉淀中結(jié)合的噬菌體用Iml含有l(wèi)mg/ml BSA的0.2M甘氨酸-鹽酸(pH2.2)洗脫，并鋪在LB平板上。隨機挑選50個藍色噬菌斑，每個噬菌斑同時進行雙PCR反應(yīng)。一個用RE0B-1噬菌體的特異性引物(5’ -CGAGGTCGCCTTGGATTTGC-3’ )進行PCR反應(yīng)，一個用AP-1噬菌體的特異性引物(5’ -GACCAGTCGCATCCGCAGCA-3’)進行PCR反應(yīng)。PCR反應(yīng)所需的另外的引物由載體上的序列組成，為這兩個反應(yīng)共享。PCR產(chǎn)物進行0.8%的瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果用凝膠成像系統(tǒng)(Tanonl600, Tanon, China)拍照。結(jié)果顯示，由于加入的RE0B-1噬菌體和AP-1噬菌體的滴度相差1000倍，而PCR的結(jié)果RE0B-1:AP-1=12:1，因此RE0B-1噬菌體與Nd2O3的結(jié)合力比AP-1噬菌體高12000倍。實施例3、特異性結(jié)合肽及其類似物的化學(xué)合成本申請中的多肽委托上海吉爾生化公司利用標(biāo)準(zhǔn)的FMOC固相合成法在多肽自動合成儀(CS536-1381，CS Bio C0., Menlo Park，CA)中合成，并用HPLC純化使其純度大于95%,利用質(zhì)譜儀(Therm oFisher Scientific, Thermo, USA)鑒定分子量。序列ACTARSPWICG (RE-1，SEQ ID NO:2)的肽合成步驟如下。末端氨基酸丙氨酸和甘氨酸來源于M13表面蛋白。RE-1使用標(biāo)準(zhǔn)的FMOC固相合成法，一般的手動合成步驟如下:將大約 0.2mM Fmoc-Gly-Wang resin 加到手動反應(yīng)試管(Peptide International),加入DMF使其膨脹2h。然后加入20%哌啶/DMF反應(yīng)2min以除去Fmoc保護基團，重復(fù)一次去保護基的步驟，冰反應(yīng)20min。陽性的Kaiser檢測結(jié)果表明樹脂上有自由氨基。氨基酸殘基按照如下的循環(huán)方法加到樹脂上:按照RE-1的序列將三倍過量的Fmoc保護氨基酸、三倍過量的HOBT和三倍過量的DIPEA/DMF加到反應(yīng)試管中。在N2流中偶聯(lián)反應(yīng)2h，反應(yīng)試管用真空泵抽干。N端保護的肽用DMF (5次X Imin)洗滌以除去過量的反應(yīng)物，然后如前述方法用20%的哌啶/DMF去Fmoc保護基。反應(yīng)試管用DMF洗滌以除去哌啶，進行重復(fù)的步驟偶聯(lián)序列中的下一個氨基酸。合成好有側(cè)鏈保護的Na-Fmoc-Ala-Cys-Thr-Ala-Arg-Ser-Pro-Trp-1le-Cys-Gly-resin結(jié)合物后,肽樹脂結(jié)合物用DMF (4次X Imin)洗漆,并用真空抽干。氨基末端Fmoc保護基用20%哌啶/DMF除去。側(cè)鏈的去保護以及肽樹脂鍵的斷裂用IOml的裂解液(95%三氟乙酸、2.5%水和2.5%三異丙基硅烷)在500rpm振蕩下反應(yīng)3h。將反應(yīng)物轉(zhuǎn)移到預(yù)稱重的錐形瓶中，用冰的無水乙醚沉淀。粗產(chǎn)物真空干燥48h。將70-100mg的粗產(chǎn)物用反相高效液相色譜(RP-HPLC)純化并凍干成粉末。肽的純度用分析型RP-HPLC鑒定，其分子量用質(zhì)譜儀鑒定。
使用上述相同方法合成對照肽ACNATLPHQCG (AP-1，SEQ ID NO:24)和多肽類似物及衍生物。AP-1是一個有相同末端氨基酸而包含不相干內(nèi)部序列的11肽。FITC通過Acp偶聯(lián)到RE-1和AP-1的氨基端。實施例4、鑒定多肽類似物與Nd2O3的結(jié)合力將100 μ g Nd2O3 分別與 RE-1, AP-1, RE-2，RE-3，RE-4，RE-5，RE-6，RE-7，RE-8，RE-9, RE-10等多肽混合，再分別加入滴度為IO8的RE0B-1噬菌體，孵育2h后，檢測Nd2O3上結(jié)合RE0B-1噬菌體的量。IC5tl值反映了各種多肽競爭抑制RE0B-1噬菌體與結(jié)合氧化釹納米的相對活性。結(jié)果如表I所示，多肽RE-1及其類似物與Nd2O3具有不同程度的結(jié)合力。表1、多肽RE-1及其類似物與Nd2O3的結(jié)合力
權(quán)利要求
1.一種篩選具有特異性結(jié)合稀土納米顆粒能力的多肽的方法，包括噬菌體展示技術(shù)，其特征在于，所述方法包括如下步驟: Ca)將噬菌體展示多肽庫與稀土納米顆粒混合孵育； (b)回收結(jié)合在稀土納米顆粒上的噬菌體； (c)擴增回收的噬菌體用于稀土納米顆粒下一輪結(jié)合篩選； Cd)重復(fù)上述(a)到(c)的步驟至少一次； (e)對回收的噬菌體挑取單克隆，測序后獲得所編碼的展示多肽。
2.一種特異性結(jié)合稀土納米顆粒的多肽，其特征在于，所述多肽含有SEQ ID N0:1所示的多肽序列或其類似物。
3.如權(quán)利要求2所述的多肽，其特征在于，所述類似物是通過將SEQID N0:1所示的多肽序列的氨基酸增加、缺失、變換順序或替換獲得。
4.如權(quán)利要求3所述的多肽，其特征在于，所述氨基酸增加的類似物為SEQID N0:2、SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO: 15,SEQ ID NO:16,SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22 所示的多肽序列。
5.如權(quán)利要求3所述的多肽，其特征在于，所述氨基酸缺失的類似物為SEQID NO:3所示的多肽序列。
6.如權(quán)利要求3所述的多肽，其特征在于，所述氨基酸變換順序的類似物為SEQIDNO:4所不的多妝序列。
7.如權(quán)利要求3所述的多肽，其特征在于，所述氨基酸替換的類似物為SEQID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12所示的多肽序列。
8.一種核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列含有編碼如權(quán)利要求2所示的多肽序列或其類似物的核苷酸序列。
9.一種評估納米材料懸浮能力的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟: (a)將納米材料懸浮液置于紫外檢測池中； (b)用該納米材料的紫外特征吸收波長對樣品池中的納米材料進行實時觀測和掃描，得出時間動力學(xué)曲線； (C)根據(jù)時間動力學(xué)曲線評估納米材料懸浮能力。
10.一種評估納米材料沉降速率和擴散能力以及與細胞相互作用的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟: (a)將細胞培養(yǎng)在蓋玻片上，正面細胞朝上或細胞朝下分別置于細胞培養(yǎng)板中，蓋玻片架在小玻璃體上；· (b)將納米材料培養(yǎng)基倒入細胞培養(yǎng)板中，使得細胞充分浸入培養(yǎng)基中，細胞蓋玻片的位置正好位于液體的中間高度； (C)用裝備有紅外激光器的熒光顯微鏡觀察細胞表面上結(jié)合的納米材料； (d)根據(jù)熒光觀察結(jié)果評估納米材料沉降速率和擴散能力以及與細胞相互作用。
11.一種評估納米材料沉降速率和擴散能力以及與細胞相互作用的裝置，其特征在于，所述裝置包括細胞培養(yǎng)板、蓋玻片、小玻璃體，所述小玻璃體位于細胞培養(yǎng)板中，所述蓋玻片架在小玻璃體上。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種特異性結(jié)合稀土納米顆粒的多肽及其篩選方法。所述多肽能夠結(jié)合在納米顆粒表面形成包覆層，從而改善稀土納米顆粒在水中的懸浮性能，阻止顆粒間的聚合，降低顆粒間的相互作用，也降低了稀土納米顆粒與細胞表面，細胞培養(yǎng)板表面及其他介質(zhì)表面的非特異性粘附能力。
文檔編號G01N21/33GK103145798SQ20121026013
公開日2013年6月12日 申請日期2012年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月7日
發(fā)明者溫龍平, 張云嬌 申請人:中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)