專利名稱：一種一步衍生法同步分析堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物基樣品的同步分析方法領(lǐng)域，具體涉及采用試管或濾紙片作為標(biāo)本載體的同步分析生物基樣品中堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物的方法。
背景技術(shù)：
人體尿液中含有堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類等許多內(nèi)源性化合物的終末或中間代謝產(chǎn)物，這些有機化合物有相對較高的水溶性和腎廓清率，其濃度通常亦高于血清和其他組織體液，如血液、CSF(腦脊液)及組織液等，其中尿標(biāo)本最易于收集，為非侵入性操作性技術(shù)，為國內(nèi)外研究者所認(rèn)同。二十世紀(jì)我國對遺傳代謝性、營養(yǎng)性等代謝性疾病僅能進行初步檢測，依賴歐日美等發(fā)達(dá)國家的檢測技術(shù)且需將標(biāo)本送至國外合作單位方可確診；近十年來我國引進氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(gas chromatography massspectrometry, GC-MS)尿有機酸檢測方法僅僅是檢測有機酸類遺傳代謝性疾病,而缺乏堿基、核苷、氨基酸及糖類等遺傳代謝性疾病的篩查、監(jiān)測和研究的樣本預(yù)處理及同步分析方法，因而也嚴(yán)重影響我國各類代謝性疾病醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的整體研究水平。無論是色譜柱離子交換法還是有機酸萃取法，都只能分析尿中有機酸類物質(zhì)且數(shù)量少，鮮有超過200種物質(zhì)的文獻(xiàn)報道；采用的是通過化學(xué)方法富集尿中有機酸，從而達(dá)到檢測尿中有機酸的目的；現(xiàn)有的傳統(tǒng)分析方法，無論是分析樣本中酸性、堿性及中性有機酸類物質(zhì)的數(shù)量，還是分析樣本中物質(zhì)的種類，和樣本中客觀存在的實際小分子的數(shù)量和種類相比，都存在嚴(yán)重不足，更缺乏堿基、核苷、氨基酸及糖類等物質(zhì)的提取和同步分析的方法。面對分析復(fù)雜樣本的客觀需求，面對分析小分子物質(zhì)數(shù)量巨大的難題和面對分析小分子物質(zhì)種類眾多且理化性質(zhì)各異的難點等。開發(fā)樣本預(yù)處理技術(shù)和樣本分離及檢測技術(shù)至關(guān)重要，也是制約該領(lǐng)域?qū)W科發(fā)展的瓶頸。而目前，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)等儀器很好地解決了樣本分離及檢測技術(shù)難題，成為該應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域的主流分析工具之一。也就是說，剩下的攻關(guān)技術(shù)主要是開發(fā)樣本預(yù)處理技術(shù)，提供一種同步分析堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物的方法，是目前研究的熱點。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有分析方法的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種一步衍生法同步分析堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物的方法。該方法以生物基樣本(尿液、血液、CSF(腦脊液)及組織液等)為檢測對象，可以一次性同步分析上述多種物質(zhì)的代謝中間和終末產(chǎn)物。當(dāng)然，采用本發(fā)明的方法(一步法)客觀上或主觀上忽略酮類酸、醛類酸等代謝產(chǎn)物的情況下應(yīng)用更好，且操作可程序化、標(biāo)準(zhǔn)化，易推廣。本發(fā)明的技術(shù)方案是
一種一步衍生法同步分析堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物的方法(一步衍生法)，具體步驟包括I)取樣收集生物基樣本；2)定量待測樣品對生物基 樣本進行物理洗脫并收集洗脫液；測定洗脫液中肌酐含量，確定肌酐濃度，取相當(dāng)于2. 50 μ moL/ μ L肌酐濃度的洗脫液25 μ L-300 μ L作為待測樣品，備用；3)預(yù)處理對待測樣品進行除磷及除硫、除脲素、除蛋白、超聲和離心處理后取離心液b，然后干燥，得殘留物，即為預(yù)處理后的樣品；所述干燥是指氮氣吹干或真空濃縮干燥或先真空濃縮再氮氣吹干；所述除磷及除硫是指在待測樣品中加入O. 08mol/L-l. 2mol/L的鋇劑水溶液10 μ L-200 μ L，震蕩5-30分鐘后離心，收集離心液a ;所述除脲素是指在上述離心液a中加入含脲素酶3U/ μ L-6U/ μ L的水溶液30 μ L-260 μ L，于25°C _42°C溫度下水浴10-45分鐘；所述除蛋白是指再加入相對于離心液a I. 5-6. 7倍體積的溶劑300 μ L-2000 μ L震蕩5_30分鐘，其中所述溶劑為甲醇、乙醇、丙酮酸、乙晴或吡啶；4) 一步衍生法一次三甲基硅烷化衍生反應(yīng)在預(yù)處理后的樣品中加入25yL-300yL的三甲基硅烷化衍生劑，置干燥加熱器上在:TC _200°C溫度下衍生10min-120min,得娃燒化衍生反應(yīng)后的檢測樣品；5)采用氣質(zhì)聯(lián)用分析方法對檢測樣品中的堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物進行同步檢測。步驟(I)中所述的生物基樣本包括尿液、血液、腦脊液或組織液等。步驟(2)中所述物理洗脫收集洗脫液是指用O. 5mL-2. OmL去離子雙蒸水或1%。鹽酸-甲醇或乙醇溶液分次洗脫，超聲、離心、收集洗脫液。步驟(3)預(yù)處理過程中所述氮氣吹干是利用氮吹儀在流量為O. 001-1. 5mL/秒的99. 99%氮氣下進行；所述真空濃縮干燥是在零下70°C至50°C的溫度，并在IOPa以內(nèi)真空度的條件下進行。步驟(3)所述鋇劑水溶液包括Ba (Cl) 2或Ba (OH) 2或Ba (NO3) 2水溶液。步驟(4)所述三甲基硅烷化衍生劑選自N，O-雙(三甲基硅烷基)-2，2，2-三氟乙酰胺(BSTFA)、N-甲基-N-(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(MSTFA)、三甲基氯硅烷(TMCS)、N，O-雙(三甲基硅烷基)-2，2，2_三氟乙酰胺與三甲基氯硅烷按照體積比99 I組成的混合試劑或者N-甲基-N-(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺與三甲基氯硅烷按照體積比99 I組成的混合試劑等20余種三甲基硅烷化衍生劑之一。步驟(5)所述采用氣質(zhì)聯(lián)用分析方法對檢測樣品進行檢測的條件為以正十七烷酸或二十四烷酸或托品酸作為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，采用分流式進樣，其中氦氣與檢測樣品的體積比為10-50 I ;進樣口溫度設(shè)定為190°C _250°C，以氦氣為載氣，流速為O. 5-3. OmL/min，界面溫度為260°C -300°C ;質(zhì)譜檢測采用電子離解模式總離子掃描方式，質(zhì)荷比范圍m/z 30-750，掃描周期O. 1S-0. 5S，色譜柱采用程序升溫，從40°C _70°C開始，以3°C /min-7°C /min的升溫速率升溫至200°C后停留2min_10min，然后以4°C /mi_12°C /min的升溫速率升溫至280°C后停留2min-10min，再以4°C /min_12°C /min的升溫速率升溫至320°C，樣本分析時間為8min_60min。
下面對本發(fā)明做進一步解釋和說明本發(fā)明的原理是I)堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類等代謝產(chǎn)物，雖然數(shù)量巨大，物理化學(xué)性質(zhì)各異，但均具有羥基(-0H)、羧基(-C00H)、硫醇基(-SH)、氨基(-NH2 ;_NHR)、酰胺基(-C0NH2)、羥胺基(-0NH)、磺(硫)酸基(-S0H)、硼酸基(-B0H)及磷(膦)酸基(-P0H)等化學(xué)功能團，理論上都可以用一種或多種衍生化試劑，使其在合適的條件下同步變成易揮發(fā)、對熱穩(wěn)定、分子極性小等特點的衍生物(如三甲基硅烷化衍生物等)，得衍生反應(yīng)后的檢測樣品；充分滿足氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對檢測樣品的苛刻需求。
2)生物基樣本(尿液、血液、CSF (腦脊液)及組織液等)中的堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類等小分子代謝產(chǎn)物的含量極低(ng級-pg級不等)。直接分析樣本實踐上難度極大，因而傳統(tǒng)上僅僅采用離子交換法或有機酸萃取法對樣本進行預(yù)處理并濃縮，也僅僅多局限于有機酸類物質(zhì)的分析，但理論上分析如果樣本經(jīng)過一系列的超聲、離心、除脲素、除磷、除硫、除蛋白、氮吹、真空干燥等理化方法技術(shù)處理，生物基樣本(尿液、血液、CSF (腦脊液)及組織液等)也就可以直接分析。本發(fā)明的一步法技術(shù)存在的主要問題是對分析生物基質(zhì)樣本中的醛類酸、酮類酸等小分子物質(zhì)能力不足。但是一步衍生法同步分析技術(shù)具有廣泛的應(yīng)用前景和實際檢測的客觀需求,許多生物基質(zhì)樣本不需分析醛類酸、酮類酸等小分子物質(zhì)；許多生物基質(zhì)樣本復(fù)查或篩查時(如甲基丙二酸尿癥等非醛類酸、酮類酸等小分子代謝病)就只需要有一步法就可以達(dá)到分析目的要求。利用本發(fā)明的檢測結(jié)論可以根據(jù)所檢測的物質(zhì)建立堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物質(zhì)譜圖譜庫(非醛類酸、酮類酸等除外)。根據(jù)代謝產(chǎn)物質(zhì)譜圖譜庫可以給各種代謝疾病的診斷提供間接信息。與現(xiàn)有離子交換法或有機酸萃取法或尿素酶預(yù)處理法技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)勢在于I、該方法能對生物基質(zhì)樣本(如尿液、血液、CSF(腦脊液)及組織液等)進行程序化處理,一次性檢測五大類物質(zhì)200余種關(guān)鍵代謝產(chǎn)物。2、不應(yīng)用乙酸乙酯和乙醚等有機萃取法，而是直接除脲素、除磷、除硫、除蛋白、氮吹、真空濃縮干燥等處理程序進行預(yù)處理，并按肌酐、次黃嘌呤核苷或內(nèi)標(biāo)含量定量分析。各種代謝產(chǎn)物回收率高，重復(fù)性好；不至污染色譜毛細(xì)管柱和質(zhì)譜離子源，不需要空氣潔凈柜，不污染工作環(huán)境。3、所選定色譜-質(zhì)譜的肌酐、次黃嘌呤核苷或內(nèi)標(biāo)定性/定量分析條件穩(wěn)定，樣本色譜峰分離效果良好，質(zhì)譜圖信息完整，易于計算機譜庫檢索和鑒定。樣本分析時間較短，適合大尺度、高通量樣本分析，如根據(jù)羊水、血液、尿液及組織液等樣本的檢測物質(zhì)，可以分析遺傳性、線粒體性、營養(yǎng)性等疾病及相關(guān)代謝組學(xué)等研究分析。


圖I是實施例I用本發(fā)明的一步衍生法同步分析方法檢測的羊水的GC-MS分析質(zhì)譜圖；圖2是實施例2用本發(fā)明的一步衍生法同步分析方法檢測的甲基丙二酸尿癥患兒尿液的GC-MS分析質(zhì)譜圖；其中依據(jù)色譜峰保留時間指數(shù)，于16.950min處峰鑒定為甲基丙二酸；于31. 080min和31. 229min處峰鑒定為甲基檸檬酸。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步的解釋和說明實施例I :I)取樣采用試管收集羊水4mL ;離心除胎糞、皮脂等顆粒物；2)定量待測樣品取離心后的羊水上清液100 μ L ;測定上清液中肌酐含量，確定肌酐濃度；取相當(dāng)于2. 50 μ moL/ μ L肌酐濃度的羊水上清液300 μ L存于樣品制備瓶，作為待測樣品，備用；3)預(yù)處理對待測樣品進行除磷酸根離子及除硫酸根離子處理(采用鋇劑在待測樣品中加入O. lmol/L的Ba(Cl)2或Ba (OH)2水溶液等鋇劑300 μ L，震蕩30分鐘后離心，收集離心液a)、除脲素(在離心液a中加入含脲素酶5U/ μ L的水溶液120 μ L，于35°C -40°C溫度下水浴30-35分鐘)、除蛋白(加入相對于離心液a 4倍體積的甲醇溶液1200 μ L，震蕩15分鐘)、再次超聲和離心處理后得離心液b、真空濃縮干燥是在零下40°C的溫度(零下70°C至50°C都是可行的，根據(jù)實際操作改變)，并在IOPa以內(nèi)真空度的條件下進行除水除溶劑并濃縮樣品至180 μ L，轉(zhuǎn)移濃縮樣品至微量樣品制備瓶，用氮氣小心吹干除水，完全脫水后的殘留物，得預(yù)處理后的樣品；4) 一步衍生法一次三甲基硅烷化衍生在預(yù)處理后的樣品中加入300 μ L的三甲基硅烷化衍生劑，如N，O-雙(三甲基硅烷基)-2，2，2_三氟乙酰胺與三甲基氯硅烷按照體積比99 : I組成的混合試劑，置干燥加熱器上在90°C溫度下衍生60min，得硅烷化衍生反應(yīng)后的檢測樣品，用正己烷定容至500 μ L，得檢測樣品。(衍生溫度和時間根據(jù)不同的樣品和三甲基硅烷化衍生劑而變化)5)取O. 5 μ L樣品進樣，采用氣質(zhì)聯(lián)用分析方法對檢測樣品中的堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物進行檢測。氣相色譜儀-質(zhì)譜儀聯(lián)合分析應(yīng)用agilent :7890/5975C型GC-MS進行樣本分析，配備7673型自動進樣器，DB-5毛細(xì)管色譜柱，柱長30或60M ;直徑O. 25mm,膜厚
O.25 μ m。氣相色譜儀-質(zhì)譜儀聯(lián)合分析條件如下采用分流式進樣(30 1，氦氣樣品的體積比)，進樣口溫度設(shè)定為210°C，氦氣(He :含量為99.999% )為載氣，流速為LOmL/min，界面溫度為280°C ;質(zhì)譜檢測采用電子離解模式總離子掃描方式，質(zhì)荷比范圍m/z 35-750，掃描周期O. 2S，色譜柱箱程序升溫從50°C開始，5°C /min升溫至150 °C后停留8min，然后以8°C /min升溫至280°C后停留lOmin，然后以12°C /min升溫至320°C，樣本分析時間為60min。計算機系統(tǒng)記錄色譜和質(zhì)譜圖形，應(yīng)用質(zhì)譜圖譜庫參比鑒定和各色譜峰的峰度進行定性和定量分析。氣質(zhì)聯(lián)用分析方法對檢測樣品進行檢測質(zhì)譜圖見圖I。實施例2 I)取樣采用試管或濾紙片收集病人尿液(如圖2 :為甲基丙二酸尿癥患兒的質(zhì)譜圖)采用普通試管或國產(chǎn)3號濾紙,切成3. 0cmX8. Ocm大小。晨尿或任意次尿浸透濾晾干后置專用濾紙干燥袋內(nèi)備用。2)定量待測樣品干燥濾紙生物基質(zhì)樣本，用3. OmL去離子雙蒸水或1%。鹽酸-甲醇溶液分次洗脫，對尿液樣本經(jīng)過超聲、離心等物理方法技術(shù)處理后，收集洗脫液；取離心后的尿液100 μ L ;測定尿液樣本中肌酐含量，確定肌酐濃度；取相當(dāng)于2. 50ymoL/y L肌酐濃度的尿液120 μ L存于樣品制備瓶，作為待測樣品，備用；3)預(yù)處理對待測樣品進行除磷酸根離子及除硫酸根離子處理(如采用在待測樣品中加入O. 12mol/L的Ba (Cl)2或Ba (OH) 2水溶液等鋇劑300 μ L，震蕩30分鐘后離心，收集離心液a)、除脲素(在離心液a中加入含脲素酶5U/ μ L的水溶液120 μ L，于35°C _40°C溫度下水浴30-35分鐘)、除蛋白(加入相對于離心液a 4倍體積的甲醇溶液1200 μ L，震蕩15分鐘)、再次超聲和離心處理后得離心液b、真空濃縮干燥是在20°C的溫度(零下70°C至50°C都是可行的，根據(jù)實際操作改變)，并在IOPa以內(nèi)真空度的條件下進行除水除溶劑，并濃縮樣品至150-200 μ L，轉(zhuǎn)移濃縮樣品至微量樣品制備瓶，用氮氣小心吹干除水除溶劑，完全脫水后的殘留物，得預(yù)處理后的樣品；與現(xiàn)有方法不同，不在酸性環(huán)境下，分別用3mL乙酸乙酯和3mL乙醚分別進行萃取，不用Ig無水硫酸鈉震蕩除少許殘余水份等。4) 一步衍生法一次三甲基硅烷化衍生在預(yù)處理后的樣品中加入200 μ L的三甲基硅烷化衍生劑(如N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺與三甲基氯硅烷按照體積比99 I組成的混合試劑)，置干燥加熱器上在70°C溫度下衍生30min，得硅烷化衍生反應(yīng)后的檢測樣品，硅烷化后用正庚烷稀釋定溶至500 μ L，得檢測樣品。(衍生溫度和時間根據(jù)不同的樣品和三甲基硅烷化衍生劑而變化)5)取O. 5 μ L樣品進樣，采用氣質(zhì)聯(lián)用分析方法對檢測樣品中的堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物進行同步檢測分析。檢測條件同實施例1，可以得到實施例I同樣的檢測效果，見圖2.本發(fā)明還可以檢測其它生物基樣品，如腦脊液、病理組織液等，可以得到實施例I同樣的檢測效果，這里就不一一列舉了。圖I或圖2中各色譜峰在不同標(biāo)本中依次可以鑒定的具體化合物數(shù)據(jù)如表I所示，其中n. d產(chǎn)物僅在遺傳缺陷情形下可檢出。
表I圖I或圖2中各色譜峰依次可鑒定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種一步衍生法同步分析堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物的方法，其特征是，具體步驟包括 1)取樣收集生物基樣本； 2)定量待測樣品對生物基樣本進行物理洗脫并收集洗脫液；測定洗脫液中肌酐含量，確定肌酐濃度，取相當(dāng)于2. 50 u moL/ u L肌酐濃度的洗脫液25 u L-300 u L作為待測樣品 備用; 3)預(yù)處理對待測樣品進行除磷及除硫、除脲素、除蛋白、超聲和離心處理后取離心液b，然后干燥，得殘留物，即為預(yù)處理后的樣品；所述干燥是指氮氣吹干或真空濃縮干燥或先真空濃縮再氮氣吹干； 所述除磷及除硫是指在待測樣品中加入0. 08mol/L-l. 2mol/L的鋇劑水溶液10 u L-200 u L，震蕩5-30分鐘后離心，收集離心液a ;所述除脲素是指在上述離心液a中加入含脲素酶3U/ u L-6U/ u L的水溶液30 u L-260 y L，于25°C -42°C溫度下水浴10-45分鐘；所述除蛋白是指再加入相對于離心液a I. 5-6. 7倍體積的溶劑300 u L-2000 y L震蕩5_30分鐘，其中所述溶劑為甲醇、乙醇、丙酮酸、乙晴或吡啶； 4)一步衍生法一次三甲基硅烷化衍生反應(yīng)在預(yù)處理后的樣品中加入25y L-300U L的三甲基硅烷化衍生劑，置干燥加熱器上在3°C -200°C溫度下衍生10min-120min，得硅烷化衍生反應(yīng)后的檢測樣品； 5)采用氣質(zhì)聯(lián)用分析方法對檢測樣品中的堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物進行同步檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述一種一步衍生法同步分析堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物的方法，其特征是，步驟(I)中所述的生物基樣本包括尿液、血液、腦脊液或組織液。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述一種一步衍生法同步分析堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物的方法，其特征是，步驟(2)中所述物理洗脫收集洗脫液是指用0.5mL-2. OmL去離子雙蒸水、1%。鹽酸-甲醇或乙醇溶液分次洗脫，超聲、離心、收集洗脫液。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述一種一步衍生法同步分析堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物的方法，其特征是，步驟(3)預(yù)處理過程中所述氮氣吹干是利用氮吹儀在流量為0. 001-1. 5mL/秒的99. 99%氮氣下進行；所述真空濃縮干燥是在零下70°C至50°C的溫度，并在IOPa以內(nèi)真空度的條件下進行。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述一種一步衍生法同步分析堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物的方法，其特征是，步驟(3)所述鋇劑水溶液包括Ba (Cl) 2、Ba(OH)2或Ba (NO3)2水溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述一種一步衍生法同步分析堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物的方法，其特征是，步驟(4)所述三甲基硅烷化衍生劑選自N，0-雙(三甲基娃燒基)-2,2,2- 二氣乙酸胺、N-甲基-N- (二甲基娃燒基)-二氣乙酸胺、二甲基氣娃燒、N，0-雙(三甲基硅烷基)-2，2，2_三氟乙酰胺與三甲基氯硅烷按照體積比99 I組成的混合試劑或N-甲基-N-(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺與三甲基氯硅烷按照體積比99 I組成的混合試劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述一種一步衍生法同步分析堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物的方法，其特征是，步驟(5)所述采用氣質(zhì)聯(lián)用分析方法對檢測樣品進行檢測的條件為以正十七烷酸、二十四烷酸或托品酸作為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，采用分流式進樣，其中氦氣與檢測樣品的體積比為10-50 I ;進樣口溫度設(shè)定為190°C -250°C,以氦氣為載氣，流速為O. 5-3. OmL/min，界面溫度為260°C -300°C ;質(zhì)譜檢測采用電子離解模式總離子掃描方式，質(zhì)荷比范圍m/z :30-750,掃描周期O. 1S-0. 5S，色譜柱采用程序升溫，從40°C -70°C開始，以3°C /min-7 °C /min的升溫速率升溫至200°C后停留2min_10min，然后以4 °C /mi-12°C /min的升溫 速率升溫至280°C后停留2min_10min,再以4°C /min_12°C /min的升溫速率升溫至320°C，樣本分析時間為8min-60min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種一步衍生法同步分析堿基、核苷、有機酸、脂肪酸、氨基酸及糖類代謝產(chǎn)物的方法。該方法是將生物基質(zhì)樣本(如尿液、血液、腦脊液(CSF)及組織液等)經(jīng)過一系列超聲、離心、除脲素、除磷、除硫、除蛋白、氮吹、真空濃縮干燥及三甲基硅烷化衍生等理化方法技術(shù)處理后，再采用氣相色譜儀-質(zhì)譜聯(lián)合技術(shù)對生物基質(zhì)樣本進行檢測。該方法能同時對生物基質(zhì)樣本進行程序化處理，一次性檢測五大類以上物質(zhì)200余種代謝中間和終末產(chǎn)物。
文檔編號G01N30/02GK102621248SQ20121011424
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月18日
發(fā)明者劉守, 曹君, 王敏, 王益超 申請人:長沙高新開發(fā)區(qū)鷁巢生物科技有限公司