專利名稱：大建中湯的生物測(cè)定方法及使用該方法的質(zhì)量管理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及大建中湯的生物測(cè)定方法，更詳細(xì)而言，涉及可使用培養(yǎng)的產(chǎn)生血清素的細(xì)胞來(lái)定量地評(píng)價(jià)作為漢方制劑的大建中湯的藥理活性值(血清素釋放活性)的生物測(cè)定方法及使用該方法的大建中湯的質(zhì)量管理方法。
背景技術(shù)：
漢方藥是將生藥共混而成的藥物，其活性成分并非完全確定。另外，其不是利用單一的活性成分而發(fā)揮效果是利用多個(gè)成分來(lái)復(fù)合作用，因此，為了保證其品質(zhì)，需要能夠以該制劑整體的形式進(jìn)行評(píng)價(jià)的測(cè)定方法。實(shí)際上，美國(guó)FDA的植物藥指南對(duì)漢方藥等產(chǎn)品要求利用生物測(cè)定等的質(zhì)量管理。該質(zhì)量管理方法有:測(cè)定所有認(rèn)為與藥效有關(guān)的成分，對(duì)它們進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)的方法；以及使用生物材料評(píng)價(jià)生理活性的生物測(cè)定。前者的情況下，在測(cè)定的成本、測(cè)定方法的確立方面存在問(wèn)題。另一方面，生物測(cè)定有體內(nèi)(in vivo)試驗(yàn)和體外(in vitro)試驗(yàn)，體內(nèi)試驗(yàn)的體系在試驗(yàn)設(shè)備、試驗(yàn)動(dòng)物、處理能力等方面存在各種限制，用于漢方藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)伴有困難。另一方面，體外試驗(yàn)體系不需要特殊的設(shè)備，可在短時(shí)間內(nèi)得到穩(wěn)定的試驗(yàn)結(jié)果，因此，期望利用該體系確立生物測(cè)定法。但是，對(duì)于將自身包含多個(gè)有効成分的生藥組合而成的漢方藥，往往未發(fā)現(xiàn)適當(dāng)?shù)纳餃y(cè)定體系，尚待其確立。一直以來(lái)，作為用于對(duì)漢方藥大建中湯的藥理效果進(jìn)行質(zhì)量管理的生物測(cè)定方法，已經(jīng)構(gòu)建出直接測(cè)定由給與大建中湯引起的腸道平滑肌收縮的方法(馬格努斯法(Magnus method))(非專利文獻(xiàn)1)。但是，該馬格努斯法由于使用從大鼠摘取的腸道，因此，作為以質(zhì)量評(píng)價(jià)的常規(guī)試驗(yàn)的形式而實(shí)施的生物測(cè)定方法，使用性差，并且靈敏度、重現(xiàn)性等也不充分?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)1:日本醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)會(huì)雜志(日醫(yī)大醫(yī)會(huì)誌)，第6卷(3)，第127-129頁(yè)(2010)，管隼人和內(nèi)田英二

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問(wèn)題因此，本發(fā)明的課題是，提供利用簡(jiǎn)便的體外試驗(yàn)對(duì)大建中湯進(jìn)行生物測(cè)定的方法，進(jìn)而提供利用該方法的大建中湯的準(zhǔn)確性更高的質(zhì)量管理方法。用于解決問(wèn)題的方案本發(fā)明人等著眼于對(duì)大建中湯的腸道運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)作用、腸道血流增加作用、這些作用與血清素的關(guān)系的報(bào)道(非專利文獻(xiàn)I)，對(duì)大建中湯與血清素的關(guān)系進(jìn)行了深入地研究。然后，其結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大建中湯對(duì)產(chǎn)生血清素的細(xì)胞具有促進(jìn)血清素釋放的作用，通過(guò)測(cè)定釋放的血清素的量，能夠測(cè)定大建中湯的藥理活性值，并且，通過(guò)利用該生物測(cè)定體系，能夠適當(dāng)進(jìn)行大建中湯的質(zhì)量管理，進(jìn)而完成了本發(fā)明。S卩，本發(fā)明為一種大建中湯的藥理活性的生物測(cè)定方法，其特征在于，在培養(yǎng)的產(chǎn)生血清素的細(xì)胞中添加含有大建中湯的受試試樣，接著，測(cè)定培養(yǎng)上清中的血清素含量。另外，本發(fā)明為一種大建中湯制劑的質(zhì)量管理方法，其特征在于，通過(guò)上述大建中湯的藥理活性的生物測(cè)定方法，在相同條件下對(duì)作為大建中湯其臨床上的藥理效果已得到認(rèn)可的參比制劑與受試制劑評(píng)價(jià)藥理活性，評(píng)價(jià)參比制劑與受試制劑的等效性。發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明的生物測(cè)定方法，能夠不受試驗(yàn)設(shè)備、試驗(yàn)動(dòng)物、處理能力等的限制地、利用簡(jiǎn)單的體外試驗(yàn)來(lái)測(cè)定大建中湯的藥理活性值(血清素釋放活性)，并且，通過(guò)在對(duì)于評(píng)價(jià)質(zhì)量而言為適當(dāng)?shù)臐舛确秶鷥?nèi)進(jìn)行本試驗(yàn)，能夠?qū)Υ蠼ㄖ袦M(jìn)行準(zhǔn)確性高的質(zhì)量管理。


圖1是示出大建中湯濃度與血清素(5-HT)釋放量的關(guān)系的附圖。圖2是示出利用HPLC的培養(yǎng)試樣溶液中的血清素的測(cè)定結(jié)果的附圖。圖中的(a)示出未添加大建中湯時(shí)的血清素(5-HT)的釋放，圖中的(b)示出添加900ii g/ml的大建中湯時(shí)的血清素(5-HT)的釋放。
具體實(shí)施例方式大建中湯通常是在將表I的組成的混合生藥的提取物粉末化而成的物質(zhì)(有時(shí)稱為無(wú)麥芽糖大建中湯)中配混提取物的8倍量左右的粉末麥芽糖(麥芽糖英文名:maltose)而成的。[表I]
權(quán)利要求
1.一種大建中湯的藥理活性的生物測(cè)定方法，其特征在于，在培養(yǎng)的產(chǎn)生血清素的細(xì)胞中添加含有大建中湯的受試試樣，接著，測(cè)定培養(yǎng)上清中的血清素含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大建中湯的藥理活性的生物測(cè)定方法，其中，產(chǎn)生血清素的細(xì)胞為腸嗜鉻樣細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的大建中湯的藥理活性的生物測(cè)定方法，其中，產(chǎn)生血清素的細(xì)胞為選自RIN-14B細(xì)胞、QGP-1細(xì)胞和KRJ-1細(xì)胞中的細(xì)胞株。
4.一種大建中湯制劑的質(zhì)量管理方法，其特征在于，通過(guò)權(quán)利要求1 3中的任一項(xiàng)所述的大建中湯的藥理活性的生物測(cè)定方法，在相同條件下對(duì)作為大建中湯其臨床上的藥理效果已得到認(rèn)可的參比制劑與受試制劑評(píng)價(jià)藥理活性，評(píng)價(jià)參比制劑與受試制劑的等效性。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的大建中湯制劑的質(zhì)量管理方法，其中，在大建中湯的濃度為90 900 u g/mL的范圍內(nèi) 進(jìn)行生物測(cè)定方法。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于，提供一種利用簡(jiǎn)便的體外試驗(yàn)對(duì)大建中湯進(jìn)行生物測(cè)定的方法，進(jìn)而提供利用該方法的大建中湯的準(zhǔn)確性更高的質(zhì)量管理方法。一種大建中湯的藥理活性的生物測(cè)定方法，其特征在于，該方法在培養(yǎng)的產(chǎn)生血清素的細(xì)胞中添加含有大建中湯的受試試樣，接著，測(cè)定培養(yǎng)上清中的血清素含量，以及一種大建中湯制劑的質(zhì)量管理方法，其通過(guò)該生物測(cè)定方法在相同條件下對(duì)作為大建中湯其臨床上的藥理效果已得到認(rèn)可的參比制劑與受試制劑評(píng)價(jià)藥理活性，評(píng)價(jià)參比制劑與受試制劑的等效性。
文檔編號(hào)G01N33/50GK103237899SQ20118005764
公開日2013年8月7日 申請(qǐng)日期2011年11月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月3日
發(fā)明者金子篤, 大野渚 申請(qǐng)人:株式會(huì)社津村