專利名稱:用于患有ii型糖尿病患者的腎功能的生物標記的制作方法
用于患有I I型糖尿病患者的腎功能的生物標記相關申請本申請要求享有于2010年4月12日提交的第61/322,949號美國臨時申請的優(yōu)先權。上述申請的全部教導通過引用的方式并入本文。
背景技術:
腎小球在白蛋白尿和腎功能的調節(jié)中起到關鍵作用。除了其在芬蘭型(Finnishtype)先天性腎病綜合征中的作用之外,在糖尿病中也證實了跨膜蛋白去氧腎上腺素(nephrin) (NPHSl)在調節(jié)腎表型中的重要性。在實驗性糖尿病的模型中,已經(jīng)將去氧腎上腺素基因表達的失調與與白蛋白尿聯(lián)系在一起。糖尿病腎病的自然病史的主流傳統(tǒng)觀點認為白蛋白尿早于腎功能下降,但是近來這一觀點已經(jīng)受到挑戰(zhàn)(Retnakaran等2006)。形形色色的報道指出,即使在沒有白蛋白尿的情況下,腎功能下降(表示為腎小球濾過率,GFR)也可以是明顯的(MacIsaac等2004)。雖然并不清楚去氧腎上腺素是否參與控制腎功能,但是,該文獻主要強調了該蛋白質在反映為白蛋白尿的腎臟參數(shù)的改變中的作用。鑒于腎功能在維持內環(huán)境穩(wěn)定中的重要性和與增加腎功能降低風險的疾病(如II型糖尿病)的盛行,迫切需要用于診斷、預測和治療腎功能降低的方法以及用于進行所述方法的試劑盒。
發(fā)明內容
除了其他內容之外,本發(fā)明提供用于檢測對象腎功能降低的診斷和預測方法,以及治療患有腎功能降低的對象的方法和用于進行這些方法中的任一方法的試劑盒。本發(fā)明至少部分地基于下列重要發(fā)現(xiàn):在患有II型糖尿病的患者的尿中可檢測到去氧腎上腺素蛋白質片段與腎功能降低有關,以及一種或多種去氧腎上腺素蛋白質片段的存在表明腎功能降低。因此,在一個方面中,本發(fā)明提供通過檢測哺乳動物對象尿樣中的一種或多種去氧腎上腺素降解產物來檢測該對象的腎功能降低的方法,其中,在尿樣中檢測出一種或多種去氧腎上腺素降解產物表明該對象的腎功能降低。在特別的實施方式中,所述對象是人。在一些實施方式中,所述對象是正常白蛋白尿的。在特別的實施方式中,所述對象患有II型糖尿病或者發(fā)展為II型糖尿病(T2D)的風險增加。在更加特別的實施方式中,所述對象已經(jīng)被診斷為T2D —年以下。在某些實施方式中,所述對象的eGFR下降了至少1.0ml/min/1.73m2。在某些實施方式中,所述一種或多種去氧腎上腺素降解產物的表觀分子量為約25kDa、50kDa、60kDa或75kDa,并且在更加特別的實施方式中,表觀分子量為約25kDa。可以通過包括ELISA、蛋白質印跡法、HPLC、SPR、SAT、適體、肽測序或MS/MS的多種手段檢測所述一種或多種去氧腎上腺素降解產物。在某些實施方式中,使用抗體檢測去氧腎上腺素降解產物,并且在更加特別的實施方式中,所述抗體是單克隆抗體。在特別的實施方式中,在尿樣的無細胞部分中檢測所述去氧腎上腺素降解產物。
在另一個方面中,本發(fā)明提供治療腎功能降低的方法。例如,本發(fā)明的治療方法可以包括本發(fā)明提供的診斷方法中的任一方法的步驟以及向對象給藥用于腎功能降低的適當預防藥物的其他步驟。在又一個方面中,本發(fā)明提供用于檢測哺乳動物的腎功能降低的試劑盒。所述試劑盒可以包括用于進行本發(fā)明提供方法中的任一方法的任一或所有組分。在一些實施方式中,所述試劑盒包括結合一種或多種去氧腎上腺素降解產物的抗體。在更加特別的實施方式中,所述試劑盒還包括使用說明書。在一些實施方式中,所述試劑盒包括適合用作陽性對照的一種或多種去氧腎上腺素降解產物。在某些實施方式中,在所述試劑盒中的抗體與免疫色譜器件相結合,如浸潰試驗(dip test)。本發(fā)明有利地使技術人員能夠快速容易地鑒別患有腎功能降低的對象,包括按照現(xiàn)有測定法(如尿中的白蛋白水平)該對象表現(xiàn)為腎功能正常的情形。
具體實施例方式本發(fā)明提供用于診斷、預測和治療患者(如糖尿病患者)的腎功能降低的試劑盒和方法。所述方法包括檢測對象樣本(如尿樣)中的一種或多種去氧腎上腺素降解產物的步驟。本發(fā)明的示例實施方式的說明如下。去氧腎上腺素降解產物去氧腎上腺素(NPHS1的蛋白質產物)是在腎臟中行使腎小球濾過屏障功能的細胞粘附分子的免疫球蛋白家族成員。該基因主要在腎臟組織中表達,并且所述蛋白質是在腎小球足細胞的裂孔隔膜發(fā)現(xiàn)的I型跨膜蛋白。去氧腎上腺素基因已在多種生物中被識別,一些去氧腎上腺素基因總結于下表A中。表A:去氧腎上腺素基因
權利要求
1.一種檢測哺乳動物對象的腎功能降低的方法,所述方法包括檢測該對象尿樣中的一種或多種去氧腎上腺素降解產物,所述去氧腎上腺素降解產物表明該對象的腎功能降低。
2.權利要求1所述的方法,其中,所述哺乳動物是人類。
3.權利要求1所述的方法,其中,所述哺乳動物是正常白蛋白尿的。
4.權利要求1所述的方法,其中,所述一種或多種去氧腎上腺素降解產物的表觀分子量為約 25kDa、50kDa、60kDa 或 75kDa。
5.權利要求4所述的方法,其中,所述一種或多種去氧腎上腺素降解產物的表觀分子量為約25kDa。
6.權利要求1所述的方法,其中,使用抗體檢測所述一種或多種去氧腎上腺素降解產物。
7.權利要求6所述的方法,其中,所述抗體是單克隆抗體。
8.權利要求1所述的方法,其中,所述哺乳動物的eGFR下降了至少1.0ml/min/1.73m2。
9.權利要求1所述的方法,其中,所述哺乳動物患有II型糖尿病或者出現(xiàn)II型糖尿病的風險增加,其中,任選地,患有II型糖尿病的對象已經(jīng)被診斷為糖尿病一年以下。
10.權利要求1所述的方法,其中,通過ELISA、蛋白質印跡法、RIA、HPLC,SPR、核酸或蛋白質適體、SAT、肽測序或MS/MS檢測所述一種或多種去氧腎上腺素降解產物。
11.權利要求1所述的方法,其中,在所述尿樣的無細胞部分中檢測所述去氧腎上腺素降解產物。
12.權利要求1所述的方法,其進一步包括給藥預防腎功能降低的適當藥物,其中,所述預防藥物是腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的一種或多種拮抗物。
13.—種檢測患有II型糖尿病的人的腎功能降低的方法,所述方法包括使用去氧腎上腺素特異性抗體檢測對象尿樣中表觀分子量為約25kDa、50kDa、60kDa或75kDa的可溶性去氧腎上腺素降解產物,其中,在尿樣中檢測出一種或多種去氧腎上腺素降解產物表明該對象的腎功能降低。
14.權利要求13所述的方法,其中,所述人是正常白蛋白尿的。
15.一種用于檢測哺乳動物的腎功能降低的試劑盒,所述試劑盒包括結合一種或多種去氧腎上腺素降解產物的抗體和使用說明書。
16.權利要求15所述的試劑盒,其中,所述試劑盒進一步包括適合用作陽性對照的一種或多種去氧腎上腺素降解產物。
17.權利要求15所述的試劑盒,其中,所述結合一種或多種去氧腎上腺素降解產物的抗體與免疫色譜器件相結合。
18.一種抗體,其結合一種或多種去氧腎上腺素降解產物,用于通過尿分析檢測患有II型糖尿病的哺乳動物的腎功能降低。
19.權利要求18所述的抗體,其中,所述哺乳動物是人。
20.權利要求18所述的抗體,其中,所述哺乳動物是正常白蛋白尿的。
全文摘要
本發(fā)明提供診斷、預測和治療患者(如糖尿病患者)腎功能降低的試劑盒和方法。所述方法包括檢測對象樣本(如尿樣)中的一種或多種去氧腎上腺素降解產物的步驟。
文檔編號G01N33/68GK103189749SQ201180026755
公開日2013年7月3日 申請日期2011年4月12日 優(yōu)先權日2010年4月12日
發(fā)明者黃炳杰·丹尼爾, 戴美珠, 謝繼成, 哈里·霍爾特赫費爾 申請人:新加坡國立大學