專利名稱：用于偵測調(diào)節(jié)細(xì)胞里細(xì)胞成分活性的調(diào)節(jié)子的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明關(guān)于一種用于偵測一調(diào)節(jié)子的方法，該調(diào)節(jié)子能調(diào)節(jié)細(xì)胞里的一細(xì)胞成分的生物及/或生理的活性。特別是關(guān)于一種通過成像能顯示沿著一磁力線的一方向的圖樣的標(biāo)記，用于偵測參照品與調(diào)節(jié)子間，對于一細(xì)胞內(nèi)的該細(xì)胞成分，是否存在競爭反應(yīng)的方法。
背景技術(shù)：
一個細(xì)胞生物及/或生理的功能，通過各種細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞成分而調(diào)節(jié)與維護(hù)，該細(xì)胞成分比如大分子，包括蛋白質(zhì)、核酸、多糖與酯類，及小分子，包括氨基酸，核苷酸、磷酸、維生素、胺類化合物與其他有機化合物。當(dāng)正常細(xì)胞成分生物及/或生理的功能被干擾 或抑制時，某些疾病會發(fā)生。通過使用生物技術(shù)和制藥領(lǐng)域里的一種調(diào)節(jié)子，許多努力被用于恢復(fù)細(xì)胞的活動及治療導(dǎo)因于細(xì)胞成分不正常功能的疾病。為了研發(fā)新的調(diào)節(jié)子，某些傳統(tǒng)方法，比如體外結(jié)合試驗、噬菌體顯示技術(shù)(請見美國專利公開號第US2005/0009099A1號與第US2008/0058219A1號)或親和層析技術(shù)(請見PCT公開號第WO 2006/134056A1號)已被廣泛地使用。然而，在上述的傳統(tǒng)方法中，人源性蛋白質(zhì)必須被改良以允許其被表達(dá)于大腸桿菌中及自大腸桿菌中獲得，而該改良的蛋白質(zhì)通常小于原尺寸。因為人源性蛋白質(zhì)是通過使用大腸桿菌系統(tǒng)而獲得，該蛋白質(zhì)的屬性及功能可能異于真實的蛋白質(zhì)的屬性及功能。此外，傳統(tǒng)的標(biāo)靶導(dǎo)向藥物篩選典型地執(zhí)行在一個人工緩沖系統(tǒng)中，該人工緩沖系統(tǒng)使得一蛋白質(zhì)標(biāo)靶及一藥物的反應(yīng)異于真實細(xì)胞的活動。尤其，當(dāng)傳統(tǒng)方法中標(biāo)靶蛋白質(zhì)-藥物交互作用是通過額外實驗過程而間接確定，且該額外實驗過程會導(dǎo)致假陽性的情況過高下，會是一個問題。此外，在傳統(tǒng)方法里，結(jié)果高度依賴實驗條件，比如細(xì)胞裂解液，用于藥-蛋白質(zhì)結(jié)合的結(jié)合緩沖液等等。因此，隨著外部環(huán)境或肇因于實驗步驟復(fù)雜性的技術(shù)錯誤而定，根據(jù)傳統(tǒng)方法實驗的再現(xiàn)性可能會下降?？傊稍隗w外執(zhí)行的傳統(tǒng)方法在藥物開發(fā)時，具有預(yù)測一種藥物在細(xì)胞內(nèi)及/或體內(nèi)的療效的困難。因此，在既有技術(shù)里有對一種用以有效地篩選一調(diào)節(jié)子的方法的需要，該調(diào)節(jié)子通過其與該細(xì)胞成分結(jié)合，能調(diào)節(jié)在細(xì)胞里的一細(xì)胞成分生物及/或生理的活性。為了解決前述的傳統(tǒng)方法的問題，本發(fā)明已開發(fā)了用以辨認(rèn)調(diào)節(jié)子的一種方法。該調(diào)節(jié)子能通過比較有競爭力的反應(yīng)以調(diào)節(jié)在細(xì)胞里的一細(xì)胞成分的生物及/或生理的活性，而該比較是介于一參照品(已知物質(zhì)用于調(diào)節(jié)某細(xì)胞成分生物及/或生理的活性)與用于一細(xì)胞內(nèi)的該細(xì)胞成分的發(fā)明的調(diào)節(jié)子間，通過成像能顯示沿著一磁力線的一方向的圖樣的一標(biāo)記而達(dá)成。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主旨在通過成像在一磁力線方向上磁化之磁性物質(zhì)的一磁性圖樣與結(jié)合至一細(xì)胞成分的一標(biāo)記的圖案，提供一種偵測一參照品與一調(diào)節(jié)子間，對于該細(xì)胞內(nèi)的該細(xì)胞成分，是否存在競爭反應(yīng)的方法。進(jìn)一步，本發(fā)明的主旨在于提供一種用于偵測一調(diào)節(jié)子的方法，該調(diào)節(jié)子能調(diào)節(jié)一細(xì)胞成分生物及/或生理的活性。該方法能通過成像在一磁力線方向磁化的一磁性物質(zhì)的磁性圖樣及結(jié)合至該細(xì)胞成分的一標(biāo)記的圖樣，決定是否對于在一細(xì)胞內(nèi)的該細(xì)胞成分，一參照品與一調(diào)節(jié)子間有競爭反應(yīng)后，偵測一調(diào)節(jié)子。首先，使用于此的術(shù)語將解釋如下術(shù)語“細(xì)胞成分”指的是任何生物的物質(zhì)，其調(diào)節(jié)一細(xì)胞內(nèi)生物及/或生理的活動。氨基酸、核苷酸、磷酸、維生素、胺類化合物與其他有機化合物，其可被視為體內(nèi)關(guān)于疾病或生理的代謝之物。術(shù)語“調(diào)節(jié)子”指的是能正?；患?xì)胞成分不正常的功能的一種物質(zhì)，該細(xì)胞成分的正常生物及/或生理的功能在一細(xì)胞中被干擾或抑制了。它通常能正?；淼拇x作 用且具有治療某些疾病的潛能。例如藥物的小分子、比如抗體的蛋白質(zhì)、激素或生長因子、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域、蛋白質(zhì)圖案及肽都能作為一調(diào)節(jié)子。術(shù)語“參照品”指的是調(diào)節(jié)一細(xì)胞成分的某生物及/或生理的活性的任何已知物質(zhì)，且如上所述般，對于該細(xì)胞成分，能與該調(diào)節(jié)子競爭。它也是一個強有力的已知物質(zhì)以正?；撋淼拇x作用，或通過于體內(nèi)正?；摷?xì)胞的代謝，治療某疾病例如藥物的小分子、比如抗體的蛋白質(zhì)、激素或生長因子、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域、蛋白質(zhì)圖案及肽也能作為一參照品。術(shù)語“標(biāo)記物質(zhì)或標(biāo)記”指的是一種物質(zhì)，其是否能成像在該參照品與調(diào)節(jié)子間，對于細(xì)胞成分，有一種競爭反應(yīng)，且能通過一圖案可視化該競爭反應(yīng)。它可包括放射性物質(zhì)、熒光或發(fā)光材料。例如，熒光蛋白質(zhì)，比如增強型綠色熒光蛋白質(zhì)(GFP)、黃色熒光蛋白質(zhì)(YFP)、青色熒光蛋白質(zhì)(CFP)或紅色熒光蛋白質(zhì)(RFP)能被用于辨認(rèn)該細(xì)胞成分的存在、位置與整體圖樣。同時，術(shù)語“表面改良”描述于此乃意味改良或變更一種物質(zhì)表面以促成其與其他物質(zhì)的結(jié)合，但不必受限改良而改變該物質(zhì)的基本物性。舉例而言，這表示，但不限于一抗原用以結(jié)合至一特別抗體或一受體以進(jìn)行配體結(jié)合，該抗原是連接到比如一磁性物質(zhì)的粒子表面。此外，術(shù)語“聯(lián)合或聯(lián)合的”描述于此乃意味直接或間接結(jié)合二物質(zhì)。舉例而言，這表示,但不限于當(dāng)一粒子的表面通過一抗體或一受體而改良時,該抗原或受體在粒子的表面允許該粒子各別結(jié)合至對應(yīng)于該抗原或配體的一抗體或配體。以下，本發(fā)明的構(gòu)造將利用上述術(shù)語而描繪。在一實施例中，本發(fā)明提供一方法用以偵測一調(diào)節(jié)子，該調(diào)節(jié)子能調(diào)節(jié)在一細(xì)胞里的一細(xì)胞成分的生物及/或生理的活性，包含步驟準(zhǔn)備復(fù)數(shù)個磁性物質(zhì)，該復(fù)數(shù)個磁性物質(zhì)通過一磁場在一磁力線的一方向上磁化，至少一磁性物質(zhì)被配置進(jìn)一奈米粒子且該至少一磁性物質(zhì)的表面是被改良的；聯(lián)合能調(diào)節(jié)能該細(xì)胞成分的活性的一參照品與磁性物質(zhì)，且接著引入該參照品與磁性物質(zhì)至一細(xì)胞中，復(fù)數(shù)個與該參照品聯(lián)合的磁性物質(zhì)被引入至每一細(xì)胞中；聯(lián)合被結(jié)合至該參照品的細(xì)胞成分與一標(biāo)記，該標(biāo)記能成像磁性物質(zhì)的一圖樣，及提供該細(xì)胞成分與該標(biāo)記至該細(xì)胞中；引入一調(diào)節(jié)子至該細(xì)胞中，該調(diào)節(jié)子被測試決定對于該細(xì)胞成分，是否其競爭得過該參照品；通過應(yīng)用一磁場至該細(xì)胞，允許一束磁力線在一方向上通過該細(xì)胞；通過該應(yīng)用的磁場，將復(fù)數(shù)個在該細(xì)胞內(nèi)的磁性物質(zhì)與該磁力線的方向?qū)R；及辨認(rèn)一圖樣，在該圖樣里復(fù)數(shù)個該磁性物質(zhì)對齊該磁力線的方向，及該標(biāo)記的一圖樣，即被成像的圖樣。在本發(fā)明的一個實施例里，該方法進(jìn)一步包含辨認(rèn)該磁性物質(zhì)的成像圖樣與標(biāo)記的成像圖樣，及是否該成像圖樣彼此共定位。在另一實施例中，本發(fā)明包含一方法，其中當(dāng)對于結(jié)合至該細(xì)胞成分，該調(diào)節(jié)子可與參照品競爭時，該調(diào)節(jié)子結(jié)合至該細(xì)胞成分，且該磁性物質(zhì)的成像圖樣不與標(biāo)記的成像圖樣共定位。如果該成像圖樣不共定位，因此，它可以被視為調(diào)節(jié)子結(jié)合至細(xì)胞成分。在一進(jìn)一步實施例里，本發(fā)明包含一方法，其中當(dāng)對于結(jié)合至該細(xì)胞成分，該調(diào)節(jié)子無法與參照品競爭時，該參照品結(jié)合至該細(xì)胞成分，且該磁性物質(zhì)的成像圖樣與標(biāo)記的成像圖樣共定位。如果該成像圖樣共定位，因此，它可以被視為調(diào)節(jié)子無法結(jié)合至細(xì)胞成分。較佳的情況是該方法進(jìn)一步包含將該參照品與磁性物質(zhì)兩者引入至一活細(xì)胞內(nèi)，且接著將該參照品與磁性物質(zhì)兩者顯露至該活細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。更佳的情況是，在該參照品與磁性物質(zhì)顯露至該活細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)前，該調(diào)節(jié)子可被引入該活細(xì)胞中。在一實施例中，本發(fā)明包含一方法，其中該細(xì)胞成分、參照品及/或調(diào)節(jié)子可包括大分子，比如蛋白質(zhì)、核酸、多糖與酯類及小分子，比如氨基酸、核苷酸、磷酸、維生素、胺類化合物和其他有機化合物。在本發(fā)明的另一實施例里包含了一方法，如果該細(xì)胞成分該細(xì)胞成分具有一能結(jié)合至一細(xì)胞膜的特性，該方法能移除結(jié)合至該細(xì)胞膜的細(xì)胞成分的特性。在這種情況下，由該標(biāo)記在應(yīng)用一磁場后，磁性物質(zhì)成像圖樣的失敗情形能被避免，而失敗可能是導(dǎo)因于固定至細(xì)胞膜的被標(biāo)記的細(xì)胞成分。
在另一實施例中，本發(fā)明的方法包含如果該細(xì)胞成分為BLK、FGR、LYN、RC或YES I蛋白質(zhì)，通過以丙氨酸替代該蛋白質(zhì)的第二氨基酸、甘氨酸，移除該細(xì)胞成分能結(jié)合至該細(xì)胞膜的特性。此外，在本發(fā)明的另一個實施例里，如果該細(xì)胞成分是KIT蛋白質(zhì)，該細(xì)胞成分能結(jié)合至該細(xì)胞膜的特性，能通過僅提供該KIT蛋白質(zhì)之氨基酸的545至976區(qū)域至一活細(xì)胞而移除。在本發(fā)明的另一個實施例中，如果該細(xì)胞成分是ABLl蛋白質(zhì)，該細(xì)胞成分能結(jié)合至該細(xì)胞膜的特性，能通過僅提供ABLl的催化區(qū)至一活細(xì)胞而移除。本發(fā)明能通過成像一磁性物質(zhì)在一磁力線的方向的磁性圖樣及結(jié)合至該細(xì)胞成分的一標(biāo)記的圖樣，偵測對于在細(xì)胞里的一細(xì)胞成分，是否在一參照品與調(diào)節(jié)子間有競爭反應(yīng)，且它也能通過確定在一細(xì)胞內(nèi)是否對于該細(xì)胞成分，該參照品與調(diào)節(jié)子間有競爭反應(yīng)，而偵測一調(diào)節(jié)子，該調(diào)節(jié)子能調(diào)節(jié)細(xì)胞成分生物及/或生理的活性。根據(jù)本發(fā)明的方法，因為無須純化或改良細(xì)胞成分，比如蛋白質(zhì)，該細(xì)胞成分在細(xì)胞內(nèi)具有其原始的形式及功能。此外，不似傳統(tǒng)的篩選方法，其能通過使用純化的細(xì)胞成分偵測藥物療效，本發(fā)明能監(jiān)視一細(xì)胞成分的選擇性以供在一細(xì)胞內(nèi)的一調(diào)節(jié)子。這給予了一種好處能精確預(yù)測該調(diào)節(jié)子，比如一種藥物，在人體內(nèi)的反應(yīng)。
此外，根據(jù)本發(fā)明的方法，因為細(xì)胞成分與該參照品及調(diào)節(jié)子，比如一種藥物的反應(yīng)是發(fā)生于一細(xì)胞里，對于該細(xì)胞成分，該參照品與調(diào)節(jié)子間的競爭反應(yīng)能反映在一細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的真實代謝作用。本發(fā)明也允許在該細(xì)胞成分與調(diào)節(jié)子(比如一種藥物)間，交互作用結(jié)果可為可視化及在一細(xì)胞里直接地被確認(rèn)。此外，因為本方法使用在該參照品與調(diào)節(jié)子間，對于該細(xì)胞成分的競爭反應(yīng)，該細(xì)胞成分與調(diào)節(jié)子間的交互作用結(jié)果能簡易地被確認(rèn)。舉例而言，如果該磁性物質(zhì)的成像圖樣成形，該細(xì)胞成分與調(diào)節(jié)子間的反應(yīng)被確定為陰性，而如果該磁性物質(zhì)的成像圖樣不能成形，該細(xì)胞成分與調(diào)節(jié)子間的反應(yīng)被確定為陽性。這更進(jìn)一步提供了使用一些參照品篩選許多調(diào)節(jié)子，及偵測該調(diào)節(jié)子在一細(xì)胞內(nèi)的功能的好處，比方說，其功效無須通過引入該參照品而修改該調(diào)節(jié)子。


本發(fā)明的這些及其他對象和功能，對于參照下列圖示，閱讀且了解以下本發(fā)明較 佳實施例的詳細(xì)描述，對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，將是顯而易見的。第I圖包含一不意圖，顯不辨認(rèn)一小分子復(fù)合物(一反應(yīng)競爭物)的觀念，該復(fù)合物通過使用競爭反應(yīng)，能結(jié)合至一細(xì)胞成分。第2圖包含了由一個熒光顯微鏡所拍攝的圖像，顯示一熒光圖樣，當(dāng)一個熒光標(biāo)記的細(xì)胞成分結(jié)合至與一表面改良的磁性物質(zhì)有關(guān)的一參照品時，該熒光圖樣與一感應(yīng)磁化圖樣是重迭的(共定位的)，該感應(yīng)磁化乃通過磁性物質(zhì)在一磁場方向而形成。第3與第4圖包含了由一個熒光顯微鏡所拍攝的圖像，顯示是否一反應(yīng)競爭物結(jié)合至一細(xì)胞成分，取決于處理或不處理非生物素達(dá)沙替尼的反應(yīng)競爭物。當(dāng)不處理一反應(yīng)競爭物時，可證實的是一熒光圖樣與一感應(yīng)磁化圖樣重迭的(共定位的)，因為達(dá)沙替尼-生物素與結(jié)合至一熒光標(biāo)記細(xì)胞成分，表面改良的磁性物質(zhì)有關(guān)，而該感應(yīng)磁化乃通過磁性物質(zhì)在一磁場方向形成。反之，當(dāng)處理一反應(yīng)競爭物時，可證實的是一感應(yīng)磁化圖樣通過磁性物質(zhì)在一磁場方向而形成，但因一反應(yīng)競爭物結(jié)合至一細(xì)胞成分，一突光圖樣與該感應(yīng)磁化圖樣重迭無法被察覺。第5圖包含一個表，顯示篩選調(diào)節(jié)子(小分子復(fù)合物)的結(jié)果，該調(diào)節(jié)子能通過該競爭反應(yīng)，結(jié)合至一細(xì)胞成分。在不同天里，最少兩個獨立實驗中，小分子復(fù)合物已被證實為能結(jié)合至該細(xì)胞成分的調(diào)節(jié)子，該小分子復(fù)合物體現(xiàn)為“抑制”。
具體實施例方式本發(fā)明實際且較佳的實施例將被更清楚地描繪于以下實施例里。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員基于揭露內(nèi)容的考慮，在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)可做改良與改進(jìn)，是值得贊賞的。在說明書內(nèi)引用的參考文獻(xiàn)亦納入本發(fā)明的范疇。實施例I.辨認(rèn)一參照品與一細(xì)胞成分的結(jié)合在本發(fā)明的實施例中，它確定是否應(yīng)用一磁場形成的復(fù)數(shù)個磁性物質(zhì)的磁化圖樣能依據(jù)一熒光物質(zhì)成像以用為標(biāo)記，及是否在磁力線方向的磁性物質(zhì)的圖樣與標(biāo)記的熒光圖樣重迭(共定位)，當(dāng)該磁性物質(zhì)(表面-改良的與一參照品相關(guān)聯(lián)的)圖樣磁化在一磁力線方向，且結(jié)合至一細(xì)胞成分的標(biāo)記圖樣是成像的。例如，一列的激酶，包含但不限于一細(xì)胞成分。為了確認(rèn)是否一參照品結(jié)合至在細(xì)胞里的一細(xì)胞成分，進(jìn)行了接下來的實驗。開始時，被考慮用以與選取的參照品相互作用的細(xì)胞成分，當(dāng)結(jié)合至在一細(xì)胞內(nèi)的一熒光蛋白質(zhì)時，是明示的。關(guān)于該參照品的一表面-改良的磁性物質(zhì)被引入至該細(xì)胞中后，當(dāng)應(yīng)用一磁場時，通過結(jié)合該參照品與細(xì)胞成分，觀察是否該磁性物質(zhì)的圖樣在一磁力線方向與該熒光蛋白質(zhì)的熒光圖樣重迭。(I)參照品
一個用于慢性髓性白血病的治療劑，達(dá)沙替尼，選為一參照品，其如眾所周知用以調(diào)節(jié)一細(xì)胞成分生物及/或生理的活性[Lombardo, L. J.，Lee, F. Y.，Chen, P.，etal.Discovery of N-(2-chloro-6-methyl-phenyl)~2~(6-(4-(2-hydroxyethyl)-piperazin-l-yl)-2-methylpyrimidin-4-ylamino)thiazole-5-carboxamide(BMS-354825), a dual Src/Abl kinase inhibitor with potent antitumor activity inpreclinical assays. J. Med. Chem. 47, 6658-6661 (2004) ; Shah, N. P. , Tran, C. , Lee, F. Y.Chen, P. , Norris, D. , Sawyers, C. L. Oerriding imatinib resistance with a novel ABLkinase inhibitor.Science305, 399-401(2004)]。達(dá)沙替尼-生物素乃合成以允許達(dá)沙替尼與一磁性粒子結(jié)合，該磁性粒子的表面以鏈霉親和素改良。達(dá)沙替尼-生物素的合成乃根據(jù)描述于韓國專利申請第10-2008-0111326號(由該發(fā)明的發(fā)明人于2008年11月10日完成申請)的方法而進(jìn)行。在此例中，達(dá)沙替尼為一參照品；然而，發(fā)明不僅限于此。本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易理解，各種小分子復(fù)合物，其能附著于一磁性物質(zhì)且被引介日一細(xì)胞、蛋白質(zhì)比如抗體、激素和生長因子、蛋白質(zhì)域、蛋白質(zhì)圖案，及肽者，能被用為一參照品。(2)細(xì)胞成分對于調(diào)節(jié)一細(xì)胞內(nèi)生物及/或生理的活性的細(xì)胞成分，ABL1、ABL2、BLK、BMX、BTK、CSK、FGR、LYN、SRC、YES1、KIT、MAPK14、RIPK2與SNFlLK被用來與達(dá)沙替尼交互作用。用于PCR的DNA模板由開放生物系統(tǒng)公司(Open Biosystems)購入,或使用cDNA庫中的DNAs。為了以一個融合熒光蛋白質(zhì)的形式表達(dá)編碼在一人源性細(xì)胞內(nèi)的每一基因蛋白質(zhì)，根據(jù)描述于韓國專利申請第10-2008-0111326號(2008年11月10日完成申請)的方法，每一基因的無終止密碼子的ORF通過PCR被擴增且接著克隆至一表達(dá)載體。同時，該蛋白質(zhì)比如BLK、FGR、LYN、SRC與YESl的第二氨基酸，，眾所周知“甘氨酸”經(jīng)由宣蘧?；Y(jié)合至該細(xì)胞膜[McCabe, J. B. &Berthiaume, L. G. (1999)Functionalroles for fatty acylated amino-terminal domains in subcellular localization.Mol. Biol. Cell 10，3771]。因此，在本發(fā)明的此實施例中，該第二氨基酸為丙氨酸所取代且接著該代表性蛋白質(zhì)被復(fù)制以防止該蛋白質(zhì)的宣蘧酰化[McCabe, J. B. &Berthiaume, L.G. (1999)Functional roles for fatty acylated amino-terminal domains insubcellular localization. Mol. Biol. Cell 10,3771]。KIT也是一膜受體激酶，具有一單一跨膜結(jié)構(gòu)域[Yarden, et al. (1987)Humanproto—oncogene c-kit:a new cell surface receptor tyrosine kinase for anunidentified ligand. EMBO J. 6，3341]。如此一來,本發(fā)明的此實施例中，為了移除該KIT的跨膜結(jié)構(gòu)域，僅該氨基酸的545至976區(qū)域通過PCR擴增以制造一表達(dá)載體。
倘若是AB LI，該ABLl催化區(qū)被復(fù)制生產(chǎn)ABLlcat表達(dá)載體。此外，完整的表達(dá)載體通過末端測序而被確認(rèn)。下列表I顯示了基因名稱、基因庫
賬號與表達(dá)的蛋白質(zhì)激酶的特性，而該蛋白質(zhì)激酶在本發(fā)明的此實施例中用為細(xì)胞成分。同時，本發(fā)明可用的細(xì)胞成分不限于蛋白質(zhì)激酶，如表I所提及；然而該細(xì)胞成分
可包括較廣域的物質(zhì)，該等物質(zhì)調(diào)節(jié)在一細(xì)胞內(nèi)生物及/或生理的活性，比如，該物質(zhì)被認(rèn)
為是關(guān)于活體內(nèi)生理的代謝作用與疾病。表I
權(quán)利要求
1.一種用于偵測調(diào)節(jié)細(xì)胞里細(xì)胞成分的生物及/或生理活性的調(diào)節(jié)子的方法，包括下列步驟 準(zhǔn)備復(fù)數(shù)個磁性物質(zhì)，該復(fù)數(shù)個磁性物質(zhì)通過一磁場在一磁力線的一方向上磁化，至少ー磁性物質(zhì)被配置進(jìn)一奈米粒子且該至少ー磁性物質(zhì)的表面是被改良的； 聯(lián)合能調(diào)節(jié)該細(xì)胞成分活性的參照品與磁性物質(zhì)，且接著引入該參照品與磁性物質(zhì)至ー細(xì)胞中，復(fù)數(shù)個與該參照品聯(lián)合的磁性物質(zhì)被引入至每ー細(xì)胞中； 聯(lián)合限于被結(jié)合至該參照品的細(xì)胞成分與ー標(biāo)記，該標(biāo)記能成像磁性物質(zhì)的圖樣，及提供該細(xì)胞成分與該標(biāo)記至該細(xì)胞中； 引入一調(diào)節(jié)子至該細(xì)胞中，該調(diào)節(jié)子限于決定對于細(xì)胞成分，是否其競爭得過該參照品; 通過應(yīng)用一磁場至該細(xì)胞，允許一束磁力線在一方向上通過該細(xì)胞； 通過該應(yīng)用的磁場，將復(fù)數(shù)個在該細(xì)胞內(nèi)的磁性物質(zhì)與該磁力線的方向?qū)R；及 辨認(rèn)ー圖樣，在該圖樣里復(fù)數(shù)個該磁性物質(zhì)對齊該磁力線的方向，及該標(biāo)記的一圖樣，即被成像的圖樣。
2.如權(quán)利要求I所述的方法，進(jìn)ー步包括辨認(rèn)該磁性物質(zhì)的成像圖樣與標(biāo)記的成像圖樣，及是否該成像圖樣彼此共定位。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中當(dāng)該調(diào)節(jié)子可和該參照品在與細(xì)胞成分結(jié)合方面競爭時，該調(diào)節(jié)子結(jié)合至該細(xì)胞成分，且該磁性物質(zhì)的成像圖樣不與該標(biāo)記的成像圖樣共定位。
4.如權(quán)利要求2所述的方法，其中當(dāng)該調(diào)節(jié)子無法和該參照品在與細(xì)胞成分結(jié)合方面競爭時，該參照品結(jié)合至該細(xì)胞成分，且該磁性物質(zhì)的成像圖樣與該標(biāo)記的成像圖樣共定位。
5.如權(quán)利要求I至4項中任一項所述的方法，進(jìn)ー步包括將該參照品與磁性物質(zhì)兩者提供至一活細(xì)胞，且接著將該參照品與磁性物質(zhì)兩者顯露至該活細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中該調(diào)節(jié)子在該參照品與磁性物質(zhì)顯露至該活細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)前，被引入至該活細(xì)胞中。
7.如權(quán)利要求I至4項中任一項所述的方法，其中如果該細(xì)胞成分具有一能結(jié)合至該細(xì)胞膜的特性，該能結(jié)合至該細(xì)胞膜細(xì)胞成分的特性將被移除。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中如果該細(xì)胞成分是BLK、FGR、LYN、SRC或YESl蛋白質(zhì)，該細(xì)胞成分能結(jié)合至該細(xì)胞膜的特性，可通過以丙氨酸取代該蛋白質(zhì)的第二氨基酸與甘氨酸而被移除。
9.如權(quán)利要求7所述的方法，其中如果該細(xì)胞成分是KIT蛋白質(zhì)，該細(xì)胞成分能結(jié)合至該細(xì)胞膜的特性，可通過僅提供該KIT蛋白質(zhì)的氨基酸545至976的區(qū)域至ー活細(xì)胞中而被移除。
10.如權(quán)利要求7所述的方法，其中如果該細(xì)胞成分是ABLl蛋白質(zhì)，該細(xì)胞成分能結(jié)合至該細(xì)胞膜的特性，可通過僅提供該ABLl的催化區(qū)至一活細(xì)胞中而被移除。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于偵測調(diào)節(jié)細(xì)胞里細(xì)胞成分的生理活性的調(diào)節(jié)子的方法。該方法能通過成像在一磁力線方向磁化的一磁性圖樣及結(jié)合至該細(xì)胞成分的一標(biāo)記的圖樣，決定是否對于在細(xì)胞內(nèi)的該細(xì)胞成分，參照品與調(diào)節(jié)子間有競爭反應(yīng)后，偵測調(diào)節(jié)子。本方法的一個好處是，因為細(xì)胞成分與參照品及諸如藥物的調(diào)節(jié)子的反應(yīng)發(fā)生于細(xì)胞里，該參照品與調(diào)節(jié)子間對于細(xì)胞成分的競爭反應(yīng)，能反應(yīng)發(fā)生于活細(xì)胞里的真實代謝作用。它也能允許該細(xì)胞成分與諸如藥物的該調(diào)節(jié)子間互動的結(jié)果可視化和直接于細(xì)胞內(nèi)被確定。另外，該方法具有使用一些參照品篩選許多調(diào)節(jié)子，及偵測該調(diào)節(jié)子在細(xì)胞內(nèi)的功能的好處，比方說，其功效無須通過引入該參照品而修改該調(diào)節(jié)子。
文檔編號G01N27/00GK102782494SQ201180009160
公開日2012年11月14日 申請日期2011年2月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月12日
發(fā)明者金大中 申請人:麥德斯科股份有限公司