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血栓心脈寧片的檢測方法

文檔序號(hào):6115921閱讀:456來源:國知局
專利名稱:血栓心脈寧片的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于中藥現(xiàn)代化領(lǐng)域,具體涉及一種血栓心脈寧片的檢測方法。
背景技術(shù)
中藥成分復(fù)雜,特別是中藥復(fù)方往往含多類、多種成分,構(gòu)成了一個(gè)非常復(fù)雜的系統(tǒng)。目前,新的有效部位中藥制劑和現(xiàn)代復(fù)方中藥制劑的研發(fā)不斷增多,新的工藝及多種不同提取方式并用于藥品的研究及生產(chǎn)。隨著現(xiàn)代分析測試技術(shù)、設(shè)備儀器的迅猛發(fā)展,中藥的含量測定、色譜鑒別成為檢測的重要手段。但目前一般只建立某一指標(biāo)化學(xué)成分的含量測定或鑒別,針對上述多種新工藝同時(shí)應(yīng)用的情況,僅建立某單一成分的含量測定或鑒別在很大程度上帶有較大的片面性。血栓心脈寧片具有益氣活血,開竅止痛功能,用于氣虛血瘀所致的中風(fēng)、胸痹,癥見頭暈?zāi)垦?、半身不遂、胸悶心痛、心悸氣短;缺血性中風(fēng)恢復(fù)期、冠心病心絞痛見上述癥候
者ο血栓心脈寧片為薄膜衣片,除去薄膜衣后顯棕色;氣微香,味微苦。其處方是川芎500g,丹參500g,槐花250g,水蛭125g,毛冬青250g,人工麝香 1. 25g,人工牛黃12. 5g,人參莖葉皂苷25g,冰片2. 5g,蟾酥1. 25g ;制法以上十味,取人工麝香、冰片、人工牛黃、人參莖葉總皂苷、蟾酥粉碎成細(xì)粉; 丹參、毛冬青用80%乙醇回流提取2次,每次1. 5小時(shí),濾過,合并鋁濾液,回收乙醇,濃縮至相對密度為1. 28 1. 30 (600C )的稠膏,藥渣備用。川芎提取揮發(fā)油,收集揮發(fā)油備用,蒸餾后水溶液另器收集,藥渣備用。水蛭與丹參、毛冬青醇提后的藥渣合并,加水煎煮2小時(shí),濾過,濾液放置,藥渣與上述川芎藥渣合并,加水煎煮2小時(shí),濾過,濾液與上述各煎液合并, 濃縮至相對密度為1. 28 1. 30 (600C )的稠膏,與丹參、毛冬青醇提取膏混合,于60 70°C 干燥,粉碎成細(xì)粉;取槐花加適量水,用飽和氫氧化鈣水溶液調(diào)節(jié)PH值至8 9,加熱至微沸,保溫30分鐘,趁熱濾過,藥渣如上法再提取2次,合并濾液,60 70°C攪拌加入鹽酸,調(diào)節(jié)PH值至4 5,靜置1 2小時(shí),抽濾上清液,沉淀用適量水洗3 4次,60°C減壓干燥, 粉碎成細(xì)粉,與上述各細(xì)粉混勻,制粒,干燥,加入適量滑石粉,硬脂酸鎂,羧甲淀粉鈉,噴加川彎揮發(fā)油,混勻,壓制成1000片,包薄膜衣,即得。每片重0.40g; 口服。一次2片,一日3 次。方中以辛溫、入肝膽經(jīng),行氣開郁,祛風(fēng)燥濕,活血止痛的川芎及苦微溫,入心肝經(jīng),活血祛瘀,安神寧心之痛,養(yǎng)血的丹參共為君藥。臣以毛冬青、水蛭、槐花、人工麝香,活血化瘀,開竅醒神、通絡(luò)止痛。佐以冰片、人工牛黃、人參莖葉皂苷三藥佐君臣活血化瘀,開竅醒神,通絡(luò)止痛,清心肝堅(jiān)腎水,治標(biāo)為主,兼顧本虛及郁化熱之勢。使以蟾酥,引藥直達(dá)病所,強(qiáng)身止痛,通行經(jīng)絡(luò)。血栓心脈寧片原來檢測方法中的鑒別包括丹參的鑒別、川芎的鑒別和冰片的鑒另|J,上述鑒別是分開進(jìn)行的,存在專屬性不強(qiáng)、需分次操作等缺點(diǎn)。在含量測定方面,目前有
4對丹參中丹酚酸B和槐花中蘆丁的含量測定,并沒有方中其它藥物的含量測定,使得僅對丹參、槐花的含量測定在很大程度上帶有較大的片面性,不能全面的反映血栓心脈寧片重要成份的含量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種血栓心脈寧片的檢測方法,以解決目前檢測方法存在的專屬性不強(qiáng)、需分次操作、不全面的問題。本發(fā)明采取的技術(shù)方案是,包括如下鑒別方法和含量測定方法(一)鑒別方法(1)取本品20片,研細(xì),加乙醚40ml冷浸1小時(shí),濾過,濾液揮干,殘?jiān)訜o水乙醇2ml使溶解,作為供試品溶液;另分別取丹參對照藥材lg、川芎對照藥材lg,同法制成對照藥材溶液;再取丹參酮IIA對照品、冰片對照品,加乙酸乙酯制成每Iml含Img的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述五種溶液各1 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚60 90°C-乙酸乙酯11 2為展開劑,展開,取出,晾干;供試品色譜中,在與丹參對照藥材、丹參酮IIA對照品色譜相應(yīng)的位置上,日光下顯相同顏色的斑點(diǎn);置紫外光燈365nm下檢視,供試品色譜中,在與川芎對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);再噴以5%磷鉬酸乙醇溶液,在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與冰片對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn);(2)人工麝香的氣相色譜鑒別取本品20片,研細(xì),加乙醚40ml冷浸1小時(shí),濾過,濾液揮干,殘?jiān)訜o水乙醇2ml使溶解,作為供試品溶液;取麝香酮對照品適量,加無水乙醇制成每Iml含0. Img的溶液,作為對照品溶液;照氣相色譜法試驗(yàn),DB-FFAP毛細(xì)管柱 柱長為30m,內(nèi)徑為0. 32mm,膜厚度為0. 5 μ m,柱溫為程序升溫起始溫度為200°C,保持10 分鐘,以每分鐘20°C的速率升溫至250°C,保持10分鐘;分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各1 μ 1,注入氣相色譜儀,測定;記錄供試品色譜中與對照品色譜峰保留時(shí)間相同的色譜峰;(3)取本品6片,研細(xì),加甲醇50ml,加熱回流1小時(shí),濾過,濾液蒸干,殘?jiān)铀?30ml溶解,用乙醚提取2次,每次20ml,合并乙醚液,蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為供試品溶液;另取人工牛黃對照藥材0. 5g,加甲醇5ml,冷浸過夜,濾過,濾液作為對照藥材溶液;再取膽酸對照品,加甲醇制成每Iml含Img的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述三種溶液各3 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以正己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲醇20 25 2 3的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%磷鉬酸乙醇溶液,在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;(二)含量測定方法(1)川芎含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-1%醋酸溶液25 75為流動(dòng)相;檢測波長為321nm,理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4000;對照品溶液的制備取阿魏酸對照品適量,精密稱定,置棕色量瓶中,加70%甲醇制成每Iml含20 μ g的溶液,即得;供試品溶液的制備取本品20片,精密稱定,研細(xì),取0. 3g 0. 5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇20ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,功率250W,頻率50kHz, 放冷,再稱定重量,用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得;測定法分別精密吸取對照品溶液5μ 1和供試品溶液10μ 1,注入液相色譜儀, 測定,即得。(2)人參莖葉皂苷含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-水 20 80為流動(dòng)相;檢測波長為203nm,理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算應(yīng)不低于6000 ;對照品溶液的制備取人參皂苷Rgl對照品和人參皂苷Re對照品適量,精密稱定, 加甲醇制成每Iml各含人參皂苷Rgl 0. 15mg、人參皂苷Re 0. 50mg的混合溶液,即得;供試品溶液的制備取本品20片,精密稱定,研細(xì),取0. 4 0. 6g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加三氯甲烷50ml,超聲提取30分鐘,濾過,棄去濾液;藥渣連同濾紙揮干溶劑, 精密加入甲醇50ml,稱定重量,回流提取1小時(shí),放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液25ml,蒸干,殘?jiān)铀柡驼〈既芤?0ml溶解,用50ml氨試液洗滌一次,棄去氨試液層,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状歼m量使溶解,轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中,加甲醇至刻度使溶解,搖勻,濾過,即得。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)是通過簡單步驟的提取,同一個(gè)薄層系統(tǒng)展開,達(dá)到鑒別三種成分的目的,具有專屬性強(qiáng)、快速、經(jīng)濟(jì)、操作簡便等特點(diǎn);同時(shí)增加了人工牛黃、人工麝香的鑒別, 本發(fā)明建立多指標(biāo)含量測定,具體增加通過對川芎、人參莖葉皂苷的含量測定,配合原有的含量測量能更全面的檢測藥物的成分,了解其含量和穩(wěn)定性,也有助于說明藥物的藥用物質(zhì)基石出。
具體實(shí)施例方式血栓心脈寧片由吉林華康藥業(yè)股份有限公司按背景技術(shù)中處方和工藝生產(chǎn)提供。實(shí)施例1包括如下鑒別方法和含量測定方法(一 )鑒別方法(1)取本品20片,研細(xì),加乙醚40ml冷浸1小時(shí),濾過,濾液揮干,殘?jiān)訜o水乙醇2ml使溶解,作為供試品溶液;另分別取丹參對照藥材lg、川芎對照藥材lg,同法制成對照藥材溶液;再取丹參酮IIA對照品、冰片對照品,加乙酸乙酯制成每Iml含Img的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述五種溶液各1 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚60 90°C-乙酸乙酯11 2為展開劑,展開,取出,晾干;供試品色譜中,在與丹參對照藥材、丹參酮IIA對照品色譜相應(yīng)的位置上,日光下顯相同顏色的斑點(diǎn);置紫外光燈365nm下檢視,供試品色譜中,在與川芎對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);再噴以5%磷鉬酸乙醇溶液,在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與冰片對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn);(2)人工麝香的氣相色譜鑒別取本品20片,研細(xì),加乙醚40ml冷浸1小時(shí),濾過,濾液揮干,殘?jiān)訜o水乙醇2ml使溶解,作為供試品溶液;取麝香酮對照品適量,加無水乙醇制成每Iml含0. Img的溶液,作為對照品溶液;照氣相色譜法試驗(yàn),DB-FFAP毛細(xì)管柱 柱長為30m,內(nèi)徑為0. 32mm,膜厚度為0. 5 μ m,柱溫為程序升溫起始溫度為200°C,保持10分鐘,以每分鐘20°C的速率升溫至250°C,保持10分鐘;分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各1 μ 1,注入氣相色譜儀,測定;記錄供試品色譜中與對照品色譜峰保留時(shí)間相同的色譜峰;(3)取本品6片,研細(xì),加甲醇50ml,加熱回流1小時(shí),濾過,濾液蒸干,殘?jiān)铀?30ml溶解,用乙醚提取2次,每次20ml,合并乙醚液,蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為供試品溶液;另取人工牛黃對照藥材0. 5g,加甲醇5ml,冷浸過夜,濾過,濾液作為對照藥材溶液;再取膽酸對照品,加甲醇制成每Iml含Img的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述三種溶液各3 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以正己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲醇20 25 2 3的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%磷鉬酸乙醇溶液,在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;( 二)含量測定方法(1)川芎含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-1%醋酸溶液25 75為流動(dòng)相;檢測波長為321nm,理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4000;對照品溶液的制備取阿魏酸對照品適量,精密稱定,置棕色量瓶中,加70%甲醇制成每Iml含20 μ g的溶液,即得;供試品溶液的制備取本品20片,精密稱定,研細(xì),取0. 5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇20ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,功率250W,頻率50kHz,放冷, 再稱定重量,用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得;測定法分別精密吸取對照品溶液5μ 1和供試品溶液10μ 1,注入液相色譜儀,測定,即得。(2)人參莖葉皂苷含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-水 20 80為流動(dòng)相;檢測波長為203nm,理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算應(yīng)不低于6000 ;對照品溶液的制備取人參皂苷Rgl對照品和人參皂苷Re對照品適量,精密稱定, 加甲醇制成每Iml各含人參皂苷Rgl 0. 15mg、人參皂苷Re 0. 50mg的混合溶液,即得;供試品溶液的制備取本品20片,精密稱定,研細(xì),取0. 5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加三氯甲烷50ml,超聲提取30分鐘,濾過,棄去濾液;藥渣連同濾紙揮干溶劑,精密加入甲醇50ml,稱定重量,回流提取1小時(shí),放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻, 濾過,取續(xù)濾液25ml,蒸干,殘?jiān)铀柡驼〈既芤?0ml溶解,用50ml氨試液洗滌一次, 棄去氨試液層,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状歼m量使溶解,轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中,加甲醇至刻度使溶解,搖勻,濾過,即得。實(shí)施例2鑒別方法同實(shí)施例1。含量測定方法中,川芎含量測定中供試品溶液的制備取本品20片,精密稱定,研細(xì),取0. 3g,精密稱定,其余同實(shí)施例1。人參莖葉皂苷含量測定中供試品溶液的制備取本品20片,精密稱定,研細(xì),取 0. 4g,精密稱定,其余同實(shí)施例1。實(shí)施例3
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鑒別方法同實(shí)施例1。含量測定方法中,川芎含量測定中供試品溶液的制備取本品20片,精密稱定,研細(xì),取0. 4g,精密稱定,其余同實(shí)施例1。人參莖葉皂苷含量測定中供試品溶液的制備取本品20片,精密稱定,研細(xì),取 0. 6g,精密稱定,其余同實(shí)施例1。本品每片含川芎以阿魏酸(CiqHiqO4)計(jì),不少于0. 10mg。本品每片含人參莖葉皂苷以人參皂苷Rgl (C42H72O14)和人參皂苷Re (C48H82O18)的總量計(jì),不少于4. Omg。試驗(yàn)例1,下面通過試驗(yàn)例進(jìn)一步說明本發(fā)明川芎含量測定方法。儀器、試劑與樣品Agilent 1200高效液相色譜儀;阿魏酸對照品(批號(hào)110773-200611),由中國藥品生物制品檢驗(yàn)所提供,供含量測定用;試劑甲醇為色譜純,水為純化水,其它試劑均為分析純。樣品由吉林華康藥業(yè)股份有限公司提供。1精密度試驗(yàn)儀器精密度試驗(yàn)對同一份供試品溶液(吉林華康藥業(yè)股份有限公司批號(hào) 110201),按本發(fā)明實(shí)施例1的色譜條件,連續(xù)測定6次,結(jié)果峰面積平均值為359. 1244, RSD 為0.12% (η = 6),結(jié)果見表1。表1阿魏酸儀器精密度試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1. 一種血栓心脈寧片的檢測方法,其特征在于包括如下鑒別方法和含量測定方法(一)鑒別方法(1)取本品20片,研細(xì),加乙醚40ml冷浸1小時(shí),濾過,濾液揮干,殘?jiān)訜o水乙醇^iil 使溶解,作為供試品溶液;另分別取丹參對照藥材lg、川芎對照藥材lg,同法制成對照藥材溶液;再取丹參酮II A對照品、冰片對照品,加乙酸乙酯制成每Iml含Img的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述五種溶液各 μ ,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚60 90°C-乙酸乙酯11 :2為展開劑,展開,取出,晾干;供試品色譜中,在與丹參對照藥材、丹參酮II A對照品色譜相應(yīng)的位置上,日光下顯相同顏色的斑點(diǎn);置紫外光燈365nm 下檢視,供試品色譜中,在與川芎對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);再噴以5%磷鉬酸乙醇溶液,在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與冰片對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn);(2)人工麝香的氣相色譜鑒別取本品20片,研細(xì),加乙醚40ml冷浸1小時(shí),濾過,濾液揮干,殘?jiān)訜o水乙醇2ml使溶解,作為供試品溶液;取麝香酮對照品適量,加無水乙醇制成每Iml含0. Img的溶液,作為對照品溶液;照氣相色譜法試驗(yàn),DB-FFAP毛細(xì)管柱柱長為30m,內(nèi)徑為0. 32mm,膜厚度為0. 5Mm,柱溫為程序升溫起始溫度為200°C,保持10分鐘, 以每分鐘20°C的速率升溫至250°C,保持10分鐘;分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各 μ ,注入氣相色譜儀,測定;記錄供試品色譜中與對照品色譜峰保留時(shí)間相同的色譜峰;(3)取本品6片,研細(xì),加甲醇50ml,加熱回流1小時(shí),濾過,濾液蒸干,殘?jiān)铀?0ml 溶解,用乙醚提取2次,每次20ml,合并乙醚液,蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為供試品溶液;另取人工牛黃對照藥材0. 5g,加甲醇5ml,冷浸過夜,濾過,濾液作為對照藥材溶液; 再取膽酸對照品,加甲醇制成每Iml含Img的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述三種溶液各3μ1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以正己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲醇 20 25 2 3的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%磷鉬酸乙醇溶液,在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;(二)含量測定方法(1)川芎含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-1%醋酸溶液25 75為流動(dòng)相;檢測波長為321nm,理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4000 ;對照品溶液的制備取阿魏酸對照品適量,精密稱定,置棕色量瓶中,加70%甲醇制成每Iml含的溶液,即得;供試品溶液的制備取本品20片,精密稱定,研細(xì),取0. 3g^0. 5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇20ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,功率250W,頻率50kHz,放冷, 再稱定重量,用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得;測定法分別精密吸取對照品溶液5μ1和供試品溶液10μ1,注入液相色譜儀,測定,即得;(2)人參莖葉皂苷含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-水20 80 為流動(dòng)相;檢測波長為203nm,理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算應(yīng)不低于6000 ;對照品溶液的制備取人參皂苷Rgl對照品和人參皂苷Re對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每Iml各含人參皂苷Rgl 0. 15mg、人參皂苷Re 0. 50mg的混合溶液,即得;供試品溶液的制備取本品20片,精密稱定,研細(xì),取0. 4^0. 6g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加三氯甲烷50ml,超聲提取30分鐘,濾過,棄去濾液;藥渣連同濾紙揮干溶劑,精密加入甲醇50ml,稱定重量,回流提取1小時(shí),放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻, 濾過,取續(xù)濾液25ml,蒸干,殘?jiān)铀柡驼〈既芤?0ml溶解,用50ml氨試液洗滌一次, 棄去氨試液層,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状歼m量使溶解,轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中,加甲醇至刻度使溶解,搖勻,濾過,即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種血栓心脈寧片的檢測方法,屬于中藥檢測領(lǐng)域。包括丹參、川芎、冰片同一個(gè)薄層系統(tǒng)展開鑒別,人工麝香的氣相色譜鑒別、人工牛黃的薄層鑒別和川芎、人參莖葉皂苷的含量測定。優(yōu)點(diǎn)是具有專屬性強(qiáng)、快速、經(jīng)濟(jì)、操作簡便等特點(diǎn);同時(shí)增加了人工牛黃、人工麝香的鑒別,本發(fā)明建立多指標(biāo)含量測定,具體增加通過對川芎、人參莖葉皂苷的含量測定,配合原有的含量測量能更全面的檢測藥物的成分,了解其含量和穩(wěn)定性,也有助于說明藥物的藥用物質(zhì)基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)G01N30/88GK102507844SQ20111035741
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月13日
發(fā)明者丁桂蘭, 劉艷秋, 商慧娟, 夏寶森, 洪梅 申請人:吉林華康藥業(yè)股份有限公司
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