專利名稱：化妝品中林可霉素類抗生素的快速檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及林可霉素類抗生素的檢測方法，特別涉及一種林可霉素類抗生素的快速檢測方法，具體為化妝品中非法添加林可霉素類抗生素的快速檢測方法。
背景技術(shù)：
近年來，一些不法企業(yè)商家為牟取暴利，在祛痘化妝品中擅自添加抗生素等藥物， 從而達(dá)到快速起效的目的，并謊稱“天然中草藥提取”，吹噓和夸大療效。消費(fèi)者在毫不知情的情況下長期使用，會(huì)給身體健康造成了嚴(yán)重危害。本發(fā)明人通過調(diào)查、實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，市場上祛痘化妝品中非法添加林可霉素類抗生素的現(xiàn)象比較嚴(yán)重。林可霉素類抗生素(Lincosamides)是具有抗革蘭陽性需氧菌和革蘭陽性或陰性厭氧菌活性的抗生素，通常用于需氧菌及厭氧菌混合感染的治療。林可霉素類藥物常見的有林可霉素、克林霉素。林可霉素(Lincomycin)又名潔霉素，是鏈霉菌4-10 產(chǎn)生的抗生素。克林霉素(Cindamycin)又名氯潔霉素，是對(duì)林可霉素結(jié)構(gòu)修飾而得到的半合成衍生物， 克林霉素比林可霉素具有更高的活性。臨床上林可霉素類藥物局部應(yīng)用于炎癥性痤瘡，對(duì)輕至中度面部炎癥性痤瘡極為有效。不法分子利用此類抗生素的特性，在祛痘化妝品中擅自添加，從而達(dá)到快速起效的目的。然而，此類抗生素雖然具有抗菌和消炎作用，對(duì)消除“痘痘”、“粉刺”、“痤瘡”等有一定的效果，但長期使用會(huì)刺激皮膚，表現(xiàn)為皮膚有燒灼感，瘙癢、 紅斑、脫屑等反應(yīng)，還會(huì)引起腎功能障礙和革蘭氏陽性菌的耐藥性增加，給人們?nèi)罕姷纳眢w健康造成嚴(yán)重危害。目前，國家尚未頒布祛痘化妝品中非法添加林可霉素類抗生素的檢驗(yàn)方法。中國發(fā)明專利CN200710026852. 8公開了一種化妝品中克林霉素的檢測方法，是一種采用高效液相色譜儀檢測化妝品中克林霉素的分析方法，該方法采用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的C18柱或C8柱；使用紫外檢測器或二極管陣列檢測器在190 - 380nm處進(jìn)行檢測； 流動(dòng)相采用磷酸二氫銨溶液一乙腈緩沖液或磷酸二氫銨溶液一甲醇緩沖液；樣品用無水甲醇或乙腈溶解萃取，經(jīng)超聲提取20min后，再12000rpm/min離心約5min，取上清液作為供試樣液，如有必要可再用0. 45 μ m濾膜過濾備用；根據(jù)樣品的保留時(shí)間和光譜圖進(jìn)行定性分析，根據(jù)其峰面積進(jìn)行定量分析。上述方法需應(yīng)用多種分析檢測設(shè)備，例如價(jià)格昂貴的高效液相色譜儀，并且應(yīng)用多種化學(xué)試劑，檢測人員需有較強(qiáng)的檢測設(shè)備操作水平，檢測時(shí)間過長，因此該方法不適宜簡易條件下的快速檢測。針對(duì)高科技、高智能制售假劣化妝品案件給化妝品監(jiān)管工作帶來的新挑戰(zhàn)，有必要尋找出更簡便易行的林可霉素類抗生素的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種祛痘化妝品中違法添加林可霉素類抗生素進(jìn)行快速檢測的方法，達(dá)到靶向抽樣、目標(biāo)檢驗(yàn)的目的，方法簡便容易操作，檢測迅速，結(jié)果準(zhǔn)確，檢驗(yàn)成本極低，可實(shí)現(xiàn)對(duì)大批量樣品的快速篩查，。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn) 一種化妝品中林可霉素類抗生素的檢測方法為
在待測樣品或待測樣品溶液中加入高碘酸鹽溶液、酸性調(diào)節(jié)劑和環(huán)己烷，3 30分鐘后， 觀察上層溶劑顏色，如呈粉紅至紫紅色，則說明待測樣品中含有林可霉素類抗生素；如果環(huán)己烷層不顯粉紅至紫紅色，則說明該待測化妝品中不含有林可霉素類抗生素。當(dāng)待測樣品為非溶液類時(shí)，需加入水或甲醇配制成待測樣品溶液。作為上述技術(shù)方案的改進(jìn)，所述水或甲醇的用量為;Tl5ml/g待測樣品。作為上述技術(shù)方案的改進(jìn)，在待測樣品或待測樣品溶液中加入高碘酸鈉溶液、酸性調(diào)節(jié)劑和環(huán)己烷后，需搖勻后靜置觀察，當(dāng)待測樣品本身為溶液類時(shí)，靜置觀察時(shí)間為 4^6分鐘，當(dāng)待測樣品為非溶液類并配制成待測樣品溶液時(shí)，靜置觀察時(shí)間為15 25分鐘。作為上述技術(shù)方案的改進(jìn)，所述高碘酸鹽溶液的濃度為0. 5 3%，加入量為廣5ml/ g待測樣品。所述高碘酸鹽選自高碘酸鈉、高碘酸鉀、高碘酸鋇中的至少一種。所述酸性調(diào)節(jié)劑選自硫酸、鹽酸、乙酸、磷酸中的至少一種。作為上述技術(shù)方案的改進(jìn)，所述酸性調(diào)節(jié)劑為濃度30%的硫酸，用量為 0. 5^2. 5ml/g待測樣品。所述環(huán)己烷的用量為3 15ml/g待測樣品。所述林可霉素類抗生素是指林可霉素或克林霉素。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果
1、本發(fā)明的檢測方法的測定目標(biāo)為林可霉素類抗生素，包括林可霉素、克林霉素等，本檢測方法形成一套這類物質(zhì)的完整的系統(tǒng)篩查程序，符合監(jiān)管應(yīng)用的需要。2、本發(fā)明的檢測方法，操作簡單、檢測速度快，檢測結(jié)果易觀察，可實(shí)現(xiàn)對(duì)大批量樣品的快速篩查，從大批量樣品中將陽性樣品挑選出來，后續(xù)可再對(duì)這些陽性樣品進(jìn)一步地細(xì)致確證，大大降低了成本，減少了工作量，在化妝品監(jiān)管中具有實(shí)際意義。3、本發(fā)明針對(duì)待測樣品基質(zhì)復(fù)雜的問題，對(duì)待測物質(zhì)的提取方法、顯色反應(yīng)進(jìn)行了摸索和優(yōu)化，最后得到的檢測方法不但操作簡單，成本低，而且可有效去除待測樣品中的干擾物，保證了檢測的高靈敏度和準(zhǔn)確度。4、結(jié)果容易判別。本發(fā)明的檢測方法中，顯色層是在上層的環(huán)己烷中，陽性樣品顯粉紅至紫紅色，非常易觀察判斷。5、本發(fā)明的檢測方法只需加入幾種溶液，振搖數(shù)次，操作簡單，容易上手，無需對(duì)檢測人員進(jìn)行特殊培訓(xùn)。6、本發(fā)明的快篩方法通過環(huán)己烷層顯色，25分鐘內(nèi)即可完成對(duì)待測化妝品中是否添加林可霉素類抗生素的篩查，檢查結(jié)果直觀可靠，經(jīng)高效液相色譜法(二極管陣列檢測器)驗(yàn)證與液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行確證，結(jié)果正確率高于92%，假陰性率為洲，達(dá)到了簡便快速價(jià)廉準(zhǔn)確的目的，符合監(jiān)管現(xiàn)場快速檢查的需要，對(duì)提高監(jiān)管部門的運(yùn)作效率、快速打擊不法分子有著重大的社會(huì)效益。7、本發(fā)明的快篩檢測方法主要是針對(duì)化妝品監(jiān)管工作實(shí)際而設(shè)計(jì)，可填補(bǔ)行內(nèi)對(duì)林可霉素類抗生素系統(tǒng)篩查的空白，有效施行化妝品市場監(jiān)管。
具體實(shí)施例方式
林可霉素、克林霉素同屬于林可霉素類抗生素，其分子結(jié)構(gòu)中均含甲硫基團(tuán)。有機(jī)硫化物很易被氧化生成亞砜a2so)并進(jìn)一步形成砜a2so2)。上述物質(zhì)在酸性條件下用高碘酸鹽氧化硫原子釋放出游離的碘，碘被萃取至環(huán)己烷中呈紫紅色。由于受到化妝品中復(fù)雜基質(zhì)的影響，環(huán)己烷層將呈粉紅至紫紅色。反應(yīng)方程式如下所示。祛痘類化妝品一般分為溶液類和非溶液類(包括乳液、啫喱、霜?jiǎng)⒏囿w等)。當(dāng)待測樣品為溶液類時(shí)，不需要加水或甲醇溶解待測物質(zhì)，可以直接加入高碘酸鹽溶液、酸性調(diào)節(jié)劑和環(huán)己烷。當(dāng)待測樣品為非溶液類時(shí)，由于此類化妝品中含有很多不溶雜質(zhì)，所以需要加水后充分振搖，使樣品分散均勻且待測物質(zhì)溶解出來后再加其他試劑進(jìn)行顯色反應(yīng)?；诹挚擅顾仡惢衔镌谒⒓状家兹?，而化妝品的基質(zhì)比較復(fù)雜，多為脂溶性成分，為有效、環(huán)保、安全起見，首選水為提取溶劑。因化妝品的基質(zhì)多為脂溶性成分，不溶于7jC，溶劑的使用量，以可以使待測樣品均勻分散為宜，發(fā)明人經(jīng)試驗(yàn)比較，加水量為3 15ml/g待測樣品時(shí)，可滿足不同樣品的需要。由于反應(yīng)是在酸性條件下進(jìn)行，因此可以用任何一種可在水中游離出H+的酸性調(diào)節(jié)劑，例如硫酸、鹽酸、乙酸、磷酸等。發(fā)明人比較了不同的酸、不同的用量、不同的濃度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)選用30%的硫酸溶液0. 5^2. 5ml/g待測樣品時(shí)，可保證顯色反應(yīng)的較高靈敏度。上述的檢測方法中，選擇了高碘酸鹽為氧化劑，因?yàn)槠湟兹苡谒?，且具有較強(qiáng)的氧化性，能很易就完全把林可霉素類化合物分子結(jié)構(gòu)中的甲硫基團(tuán)氧化生成亞砜a2so)并進(jìn)一步形成砜a2so2)同時(shí)釋放出游離的碘。高碘酸鈉、高碘酸鉀、高碘酸鋇等含Io3-的物質(zhì)都可以達(dá)到相同的效果，但是由于高碘酸鉀和高碘酸鋇有毒，因此本發(fā)明優(yōu)選高碘酸鈉。由于環(huán)己烷不溶于水，能與上述復(fù)雜的基質(zhì)及反應(yīng)液很好地分層，而碘被萃取至環(huán)己烷中呈粉紅至紫紅色，使得檢測結(jié)果容易觀察。本發(fā)明人對(duì)115批次待測樣品分別采用本發(fā)明的快篩檢測方法進(jìn)行檢測，同時(shí)采用高效液相色譜法(二極管陣列檢測器)與液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)30批陽性樣品進(jìn)行驗(yàn)證和確證， 結(jié)果正確率高于92%，假陰性率為2%，達(dá)到了簡便快速價(jià)廉準(zhǔn)確的目的，可勝任現(xiàn)場的監(jiān)管檢查。為了便于本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述。下述實(shí)施例僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，不是對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1某品牌痘立清清痘去印潔面乳
本實(shí)施例的痘立清清痘去印潔面乳為乳液類化妝品，首先準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)器具具塞比色管(25ml)、刻度管。取痘立清清痘去印潔面乳約lg，置比色管中，加水10ml，振搖數(shù)次，使樣品分散均勻，加入1%高碘酸鈉溶液3ml和30%硫酸溶液anl，再加入環(huán)己烷10ml，密塞，振搖，靜置， 靜置過程中不時(shí)輕輕上下來回振搖數(shù)次。觀察上層環(huán)己烷層的顏色變化。環(huán)己烷層不呈粉紅至紫紅色，判為陰性，則說明待測樣品中未添加林可霉素類抗生素。采用高效液相色譜法(二極管陣列檢測器)與液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)該樣品進(jìn)行驗(yàn)證和確證，試驗(yàn)結(jié)果和本實(shí)施例試驗(yàn)結(jié)果一致。實(shí)施例2某品牌痘點(diǎn)清凈白祛痘霜
本實(shí)施例的痘點(diǎn)清凈白祛痘霜為霜?jiǎng)╊惢瘖y品，首先準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)器具 具塞比色管(25ml)、刻度管。取痘點(diǎn)清凈白祛痘霜約lg，置比色管中，加水10ml，振搖數(shù)次，使樣品分散均勻， 加入1%高碘酸鈉溶液3ml和30%硫酸溶液anl，再加入環(huán)己烷10ml，密塞，振搖，靜置，靜置過程中不時(shí)輕輕上下來回振搖數(shù)次。觀察上層環(huán)己烷層的顏色變化。環(huán)己烷層呈粉紅色， 判為陽性，則說明待測樣品中添加林可霉素類抗生素。采用高效液相色譜法(二極管陣列檢測器)與液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)該樣品進(jìn)行驗(yàn)證和確證，試驗(yàn)結(jié)果和本實(shí)施例試驗(yàn)結(jié)果一致。實(shí)施例3某品牌高效祛痘神仙水
本實(shí)施例的高效祛痘神仙水為溶液類化妝品，首先準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)器具 具塞比色管(25ml)、刻度管。取高效祛痘神仙水約anl，置比色管中，加入1%高碘酸鈉溶液3ml和30%硫酸溶液anl，再加入環(huán)己烷10ml，密塞，振搖，靜置，靜置過程中不時(shí)輕輕上下來回振搖數(shù)次。觀察上層環(huán)己烷層的顏色變化。環(huán)己烷層呈紫紅色，判為陽性，則說明待測樣品中添加林可霉素類抗生素。采用高效液相色譜法(二極管陣列檢測器)與液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)該樣品進(jìn)行驗(yàn)證和確證，試驗(yàn)結(jié)果和本實(shí)施例試驗(yàn)結(jié)果一致。實(shí)施例4某品牌痘立清清痘去印潔面乳
本實(shí)施例的痘立清清痘去印潔面乳為乳液類化妝品，首先準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)器具 具塞比色管(25ml)、刻度管。取痘立清清痘去印潔面乳約lg，置比色管中，加甲醇15ml，振搖數(shù)次，使樣品分散均勻，加入3%高碘酸鉀溶液5ml和30%鹽酸溶液2. 5ml，再加入環(huán)己烷15ml，密塞，振搖，靜置，靜置過程中不時(shí)輕輕上下來回振搖數(shù)次。靜置25分鐘后，觀察上層環(huán)己烷層的顏色變化。環(huán)己烷層不呈粉紅至紫紅色，判為陰性，則說明待測樣品中未添加林可霉素類抗生素。采用高效液相色譜法(二極管陣列檢測器)與液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)該樣品進(jìn)行驗(yàn)證和確證，試驗(yàn)結(jié)果和本實(shí)施例試驗(yàn)結(jié)果一致。實(shí)施例5某品牌痘點(diǎn)清凈白祛痘霜
本實(shí)施例的痘點(diǎn)清凈白祛痘霜為霜?jiǎng)╊惢瘖y品，首先準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)器具 具塞比色管(25ml)、刻度管。取痘點(diǎn)清凈白祛痘霜約lg，置比色管中，加甲醇:3ml，振搖數(shù)次，使樣品分散均勻， 加入0. 5%高碘酸鋇溶液Iml和30%乙酸溶液0. 5ml，再加入環(huán)己烷3ml，密塞，振搖，靜置，靜置過程中不時(shí)輕輕上下來回振搖數(shù)次。靜置15分鐘后觀察上層環(huán)己烷層的顏色變化。環(huán)己烷層呈粉紅色，判為陽性，則說明待測樣品中添加林可霉素類抗生素。
采用高效液相色譜法(二極管陣列檢測器)與液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)該樣品進(jìn)行驗(yàn)證和確證，試驗(yàn)結(jié)果和本實(shí)施例試驗(yàn)結(jié)果一致。
實(shí)施例6某品牌高效祛痘神仙水本實(shí)施例的高效祛痘神仙水為溶液類化妝品，首先準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)器具 具塞比色管(25ml)、刻度管。
取高效祛痘神仙水約anl，置比色管中，加入1. 5%高碘酸鈉溶液2. 5ml和30%硫酸溶液1.5ml，再加入環(huán)己烷8ml，密塞，振搖，靜置，靜置過程中不時(shí)輕輕上下來回振搖數(shù)次。 4分鐘后觀察上層環(huán)己烷層的顏色變化。環(huán)己烷層呈紫紅色，判為陽性，則說明待測樣品中添加林可霉素類抗生素。
采用高效液相色譜法(二極管陣列檢測器)與液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)該樣品進(jìn)行驗(yàn)證和確證，試驗(yàn)結(jié)果和本實(shí)施例試驗(yàn)結(jié)果一致。
權(quán)利要求
1.一種化妝品中林可霉素類抗生素的檢測方法，其特征在于在待測樣品或待測樣品溶液中加入高碘酸鹽溶液、酸性調(diào)節(jié)劑和環(huán)己烷，3 30分鐘后， 觀察上層溶劑顏色，如呈粉紅至紫紅色，則說明待測樣品中含有林可霉素類抗生素；如果環(huán)己烷層不顯粉紅至紫紅色，則說明該待測化妝品中不含有林可霉素類抗生素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化妝品中林可霉素類抗生素的檢測方法，其特征在于當(dāng)待測樣品為非溶液類時(shí)，需加入水或甲醇配制成待測樣品溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化妝品中林可霉素類抗生素的檢測方法，其特征在于所述水或甲醇的用量為3 15ml/g待測樣品。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化妝品中林可霉素類抗生素的檢測方法，其特征在于在待測樣品或待測樣品溶液中加入高碘酸鈉溶液、酸性調(diào)節(jié)劑和環(huán)己烷后，需搖勻后靜置觀察， 當(dāng)待測樣品本身為溶液類時(shí)，靜置觀察時(shí)間為4飛分鐘，當(dāng)待測樣品為非溶液類并配制成待測樣品溶液時(shí)，靜置觀察時(shí)間為15 25分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的化妝品中林可霉素類抗生素的檢測方法，其特征在于所述高碘酸鹽溶液的濃度為0. 5 3%，加入量為廣5ml/g待測樣品。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化妝品中林可霉素類抗生素的檢測方法，其特征在于所述高碘酸鹽選自高碘酸鈉、高碘酸鉀、高碘酸鋇中的至少一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的化妝品中林可霉素類抗生素的檢測方法，其特征在于所述酸性調(diào)節(jié)劑選自硫酸、鹽酸、乙酸、磷酸中的至少一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的化妝品中林可霉素類抗生素的檢測方法，其特征在于所述酸性調(diào)節(jié)劑為濃度30%的硫酸，用量為0. 5^2. 5ml/g待測樣品。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的化妝品中林可霉素類抗生素的檢測方法，其特征在于所述環(huán)己烷的用量為3 15ml/g待測樣品。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的化妝品中林可霉素類抗生素的檢測方法，其特征在于所述林可霉素類抗生素是指林可霉素或克林霉素。
全文摘要
本發(fā)明涉及林可霉素類抗生素的檢測方法，特別涉及一種林可霉素類抗生素的快速檢測方法，具體為祛痘化妝品中非法添加林可霉素類抗生素的快速檢測方法。一種化妝品中林可霉素類抗生素的檢測方法為在待測樣品或待測樣品溶液中加入高碘酸鹽溶液、酸性調(diào)節(jié)劑和環(huán)己烷，3~30分鐘后，觀察上層溶劑顏色，如呈粉紅至紫紅色，則說明待測樣品中含有林可霉素類抗生素；如果環(huán)己烷層不顯粉紅至紫紅色，則說明該待測化妝品中不含有林可霉素類抗生素。本發(fā)明可達(dá)到靶向抽樣、目標(biāo)檢驗(yàn)的目的，方法簡便容易操作，檢測迅速，結(jié)果準(zhǔn)確，檢驗(yàn)成本極低，可實(shí)現(xiàn)對(duì)大批量樣品的快速篩查。
文檔編號(hào)G01N21/78GK102507563SQ20111035563
公開日2012年6月20日 申請(qǐng)日期2011年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月11日
發(fā)明者林暖丹, 簡淑娟, 翁雪萍 申請(qǐng)人:惠州市食品藥品檢驗(yàn)所