專利名稱：檢測登革病毒抗體的膠體金試紙條及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種檢測登革病毒抗體的膠體金試紙條及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
登革熱是由登革病毒(Dengu e virus，DV)所致的一組蟲媒性傳染病，傳播媒介主要是埃及伊蚊。感染DV后可發(fā)生登革熱(Dengue fever, DF)、登革出血熱(Dengu e hemorrhagic fever，DHF)、登革休克綜合征(Dengue shock syndrome, DSS)。DV 有 4 種血清型，即DV1、2、3、4型。DV引起的感染廣泛流行于全球熱帶和亞熱帶地區(qū)，特別是東南亞、 西太平洋、中南美洲、非洲，發(fā)病率和病死率均較高，是最為嚴重的一種蟲媒病毒性疾病。全球有100多個國家有該病發(fā)生，每年約5 000萬人感染，50萬人需入院治療，病死率高達 5%。DV感染的實驗室診斷，主要有病毒分離、抗體和抗原檢測、基因診斷等。WHO曾經(jīng)把血凝抑制試驗(H I)作為登革熱的標準診斷方法。然而，病毒分離所需時間較長，達不到快速診斷的目的，而常規(guī)的血清學(xué)診斷又因存在廣泛的交叉反應(yīng)而受到干擾。膠體金標記的免疫層析方法具有快速、簡便、不需要依賴重要裝備、能夠?qū)崿F(xiàn)現(xiàn)場檢測等特點，成為目前傳染病快速診斷中研究的熱點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種使用方便、檢測快捷的檢測登革病毒抗體的膠體金試紙條，本發(fā)明的另一目的是提供一種上述試紙條的制備方法和應(yīng)用。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明一種檢測登革病毒抗體的膠體金試紙條，包括反應(yīng)支撐物、緊密連接于反應(yīng)支撐物上表面中部的硝酸纖維膜，硝酸纖維膜起始端的上表面與吸水墊部分重疊連接、硝酸纖維膜末端的上表面與金標抗體保護膜部分重疊連接，金標抗體保護膜的上表面部分重疊連接有樣品墊，其中，金標抗體保護膜包括膜本體、及均勻涂布在其上的膠體金標記的金黃色葡萄球菌A蛋白(Staphylococal Protein A，SPA)或重組登革病毒E蛋白涂層，硝酸纖維膜上靠近其起始端處設(shè)置有羊抗兔IgG或羊抗重組登革病毒E蛋白IgG包被的質(zhì)控條帶、靠近其末端處設(shè)置有重組登革病毒E蛋白包被的檢測條帶。進一步，所述反應(yīng)支持物為PVC板，吸水墊為濾油紙。進一步，所述金標抗體保護膜為玻璃纖維膜、聚脂膜或濾紙纖維。進一步，所述樣品墊為玻璃纖維膜、聚脂膜或濾紙纖維。進一步，所述試紙條整體的外部包裹設(shè)置有外殼，該外殼上對應(yīng)于所述樣品墊處設(shè)置有樣品孔，外殼上對應(yīng)于所述質(zhì)控條帶、檢測條帶處設(shè)置有觀察窗。一種上述膠體金試紙條的制備方法，具體為
1)制備膠體金；
2)利用制得的膠體金標記SPA蛋白或重組登革病毒E蛋白；
3)用隔流噴金劃線機以設(shè)定噴膜速度將羊抗兔IgG或羊抗重組登革病毒E蛋白IgG噴涂到硝酸纖維膜的起始端以形成質(zhì)控條帶，將重組登革病毒E蛋白噴涂到硝酸纖維膜的末端以形成檢測條帶；
4)將膠體金標記的SPA蛋白或重組登革病毒E蛋白均勻涂布在玻璃纖維膜上，并烘干或冷凍干燥，制成金標抗體保護膜；
5)在反應(yīng)支撐物上表面中部設(shè)置硝酸纖維膜，硝酸纖維膜起始端的上表面與吸水墊部分重疊連接，硝酸纖維膜末端的上表面與金標抗體保護膜部分重疊連接，金標抗體保護膜的上表面部分重疊連接樣品墊；
6)將步驟5)中形成的試紙切成規(guī)格大小的條，進行干燥、裝殼，以形成試紙條。進一步，所述步驟1)中制備膠體金的具體步驟為
1)制備HAuCl4水溶液磁力攪拌下加入HAuCl4,同時加入檸檬酸三鈉水溶液，顏色穩(wěn)定后繼續(xù)加熱，冷卻至室溫后加純水補足至設(shè)定值，4 ！避光保存；
2)用K2COjfpH 值為 6. 0-6. 4 ；
3)將膠體金調(diào)至pH 6. 0-6. 4，用PB稀釋SPA至0. 2 mg/ml ； 4)保持膠體金穩(wěn)定。進一步，所述步驟3)中，噴膜速度為10-100mm/s;所述重組登革病毒E2蛋白的加入量為0. l_5mg/ml，該重組抗原的稀釋液可以為PBS ；羊抗兔IgG或羊抗重組登革病毒E 蛋白IgG的濃度為0. 1-5 mg/ml。進一步，將膠體金標記的SPA蛋白或重組登革病毒E蛋白的pH為6. 0-6. 4 ；所述樣品墊采用含有NP 40的磷酸鹽緩沖液對玻璃纖維素膜進行預(yù)處理。一種上述膠體金試紙條的應(yīng)用，將所述膠體金試紙條與膠體金生物傳感器有機整合成膠體金定量檢測系統(tǒng)，以正確判讀該試紙條檢測結(jié)果。本發(fā)明基于SPA蛋白或重組登革病毒E蛋白標記膠體金，構(gòu)建間接法或雙抗原夾心法檢測抗體，并對該方法的敏感性、特異性、穩(wěn)定性進行評價。通過對人為摻入兔抗重組登革病毒E2抗體的健康人血清模擬環(huán)境樣品檢測，評價該方法檢測血清樣品中登革病毒抗體的可行性。利用本發(fā)明提供的試紙條進行檢測，具有操作簡單，檢測時間短，無需專業(yè)人員，適合快速現(xiàn)場檢測。


圖1為本實用新型檢測試紙條內(nèi)部結(jié)構(gòu)的正面示意圖； 圖2為本實用新型檢測試紙條內(nèi)部結(jié)構(gòu)的側(cè)面結(jié)構(gòu)示意圖； 圖3為本實用新型檢測試紙條的陽性檢測結(jié)果示意圖4為本實用新型檢測試紙條的陰性檢測結(jié)果示意圖； 圖5為本實用新型檢測試紙條的無效檢測結(jié)果示意圖。
具體實施例方式下面，參考附圖，對本發(fā)明進行更全面的說明，附圖中示出了本發(fā)明的示例性實施例。然而，本發(fā)明可以體現(xiàn)為多種不同形式，并不應(yīng)理解為局限于這里敘述的示例性實施例。而是，提供這些實施例，從而使本發(fā)明全面和完整，并將本發(fā)明的范圍完全地傳達給本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員。
為了易于說明，在這里可以使用諸如“上”、“下” “左” “右”等空間相對術(shù)語，用于說明圖中示出的一個元件或特征相對于另一個元件或特征的關(guān)系。應(yīng)該理解的是，除了圖中示出的方位之外，空間術(shù)語意在于包括裝置在使用或操作中的不同方位。例如，如果圖中的裝置被倒置，被敘述為位于其他元件或特征“下”的元件將定位在其他元件或特征“上”。 因此，示例性術(shù)語“下”可以包含上和下方位兩者。裝置可以以其他方式定位(旋轉(zhuǎn)90度或位于其他方位)，這里所用的空間相對說明可相應(yīng)地解釋。一種檢測登革病毒抗體的膠體金試紙條，包括
(1)反應(yīng)支持物5；
(2)吸水墊1；
(3)硝酸纖維膜2，該膜包被有重組登革病毒E抗原和質(zhì)控抗體的檢測條帶和質(zhì)控條
帶；
(4)金標抗體保護膜3，其中含有膠體金標記的SPA蛋白或重組登革病毒E蛋白；
(5)樣品墊4，采用含有NP40的磷酸鹽緩沖液對玻璃纖維素膜進行預(yù)處理；
如圖1、圖2、圖3所示，其具體結(jié)構(gòu)為反應(yīng)支持物5位于底層，硝酸纖維膜2位于反應(yīng)支持物5上的中部，硝酸纖維膜2的T處是重組E2蛋白包被的檢測條帶，C處是羊抗兔IgG 或羊抗重組登革病毒E蛋白IgG包被的質(zhì)控條帶；金標抗體保護膜3位于硝酸纖維膜2上部的一側(cè)并與之部分重疊，該膜含有膠體金標記的重組登革病毒抗體；吸水墊1位于硝酸纖維膜2上部的相對于金標抗體保護膜3而言的另一側(cè)、并與硝酸纖維膜2部分重疊；樣品墊4位于硝酸纖維膜2上與吸水墊1相反的一側(cè)并與金標抗體保護膜3部分重疊。其中反應(yīng)支持物5為PCV板，吸水墊1為濾油紙，硝酸纖維膜2依次包被羊抗兔 IgG或羊抗重組登革病毒E蛋白IgG 0.5-5 mg/ml、重組登革病毒E抗原0. l_5mg/ml，金標抗體保護膜3為含有膠體金標記的SPA蛋白或重組登革病毒E蛋白的玻璃纖維膜或聚脂膜或濾紙纖維，樣品墊4選用玻璃纖維膜或聚脂膜或濾紙纖維。試紙條整體的外部包裹設(shè)置有外殼6，外殼6上對應(yīng)于樣品墊處設(shè)置有樣品孔7，外殼上對應(yīng)于質(zhì)控條帶、檢測條帶處設(shè)置有觀察窗8。本發(fā)明的試紙條，以吸水墊一側(cè)為起始端，樣品墊一側(cè)為末端，重組登革病毒E抗原檢測條帶位于接近末端，羊抗兔IgG或羊抗重組登革病毒E蛋白IgG包被的質(zhì)控條帶接近于起始端。一種檢測登革病毒抗體的膠體金試紙條的制備方法，該方法包括以下步驟膠體金探針的制備，金標墊的制備，硝酸纖維膜的噴涂包被，樣品墊的預(yù)處理。1、膠體金探針的制備
(1)將HAuCl4先配制為0. 01%水溶液。磁力攪拌下準確加入1 ml 1%的HAuCl4,同時加入1.5-;3ml 1%的檸檬酸三鈉水溶液。顏色穩(wěn)定后繼續(xù)加熱，冷卻至室溫后加純水補足至 100 ml, 4 °C避光保存。(2)用K2CO3調(diào)pH值為約6. 0-8. 0，優(yōu)選為約6. 0-6. 8，更優(yōu)選約為6. 0-6. 4。(3)將膠體金調(diào)至 pH 6. 0-6. 4，用 PB 稀釋 SPA 至 0. 2 mg/ml。(4)保持膠體金穩(wěn)定。一種獲得維持膠體金穩(wěn)定的抗體/抗原最佳標記劑量的方法，該方法包括 a.取10支潔凈的1. 5 ml離心管，分別加入膠體金溶液1ml。
b.在 1-10 號管內(nèi)分別加入 10 ml,20 ml,30 ml,40 ml,50ml,60 ml,70 ml,80 ml、 90 mlUOO ml的PB，再依次加入稀釋好的0. 2 mg/ml的待標記SPA溶液90 ml,80 ml,70 ml,60 ml,50 ml,40 ml,30 ml,20 ml、10 ml,O ml，混勻，靜置 5 分鐘。c.在10個管內(nèi)分別加入10% NaCl溶液100 ml，混勻后室溫靜置2小時，觀察顏色變化。未加抗體/抗原及加入量不足以穩(wěn)定膠體金的試管中的液體顏色會呈現(xiàn)由藍變紅的變化，而加入抗體/抗原量達到或超過最低穩(wěn)定劑量的試管則保持紅色不變。與對照管(1號管)相比，顏色最接近、含抗體/抗原劑量最低的試管所含的抗體劑量，即為1 ml膠體金所必須的抗體穩(wěn)定劑量，在此基礎(chǔ)上再加20%抗體，即為抗體/抗原最佳標記劑量。本發(fā)明經(jīng)過反復(fù)試驗和分析，得出的結(jié)果表明維持膠體金溶液適宜蛋白量為0.2 — 10 μ g，優(yōu)選蛋白量0. 2 一 8μ g，最優(yōu)選為0. 5-3 μ g。2、金標抗體保護膜的制備
取上述PH的膠體金以Iml/管分裝于1.5 ml的離心管中。每支管中為0. 2 — IOyg, 優(yōu)選抗體量0.2 — 8yg，最優(yōu)選為0.5-3yg，輕搖混勻后放置。每管中加入10%的BSA 100 μ 1，混勻放置。將上面初步制得的膠體金探針在12000 rpm、4°C下離心30分鐘，棄上清液。 每支離心管中加入1 ml重懸液懸浮沉淀后同上離心。棄上清液，管底得到暗紅色的疏松狀沉淀，加入500 μ 1重懸液重懸后置于4 °C,1000 rpm，離心10分鐘；取上清液，均勻滴加在Icm寬的玻璃纖維上，37 °C干燥。3、硝酸纖維膜的噴涂
(1)利用隔流噴金劃線機以50mm/s的噴膜速度包被檢測線重組登革病毒E抗原和質(zhì)控線羊抗兔IgG或羊抗重組登革病毒E蛋白IgG兩個條帶的硝酸纖維膜；
在該噴涂包被膜的步驟中，噴膜速度優(yōu)選是lO-lOOmm/s，更優(yōu)選是45-55mm/s，最優(yōu)選是50mm/s;所述重組登革病毒E抗原，其加入量為其濃度為0. l_5mg/ml，更優(yōu)選是 0. 5-2. 5mg/ml，最優(yōu)選為1 mg/ml ；該抗原的稀釋液可以為PBS ；質(zhì)控羊抗兔IgG可以購自鼎國生物技術(shù)公司，其濃度為0. 1-5 mg/ml，更優(yōu)選是0. 5-2. 5 mg/ml，最優(yōu)選為1 mg/ml ；
(2)制備一種含有膠體金標記的SPA蛋白的玻璃纖維膜，將膠體金標記的SPA蛋白均勻涂布在玻璃纖維膜上。蛋白用PB稀釋，pH為6-8，優(yōu)選6-6. 8，最適PH值為6. 0-6. 4。利用本發(fā)明的試紙條檢測登革病毒抗體中，先將待測標本放入裝有稀釋液的小瓶內(nèi)，再用移液器將樣品混合液加入試紙條的樣品孔7內(nèi)，樣品中的液體依靠虹吸作用上行， 一般需10-15分鐘之后進行判讀結(jié)果
如圖3、圖4、圖5所示，如果標本中含有登革病毒抗體，則它將與試紙上膠體金標記的 SPA蛋白或重組登革病毒E蛋白形成相應(yīng)的復(fù)合物，液體展開上行并與硝酸纖維膜上的重組登革病毒抗原結(jié)合，形成紅色線條，即在“T”處形成紅色條帶，膠體金標記的SPA蛋白或重組登革病毒E蛋白與質(zhì)控線的羊抗兔IgG或羊抗重組登革病毒E蛋白IgG形成相應(yīng)的復(fù)合物，即在“C”處形成紅色條帶；如果不含有登革病毒抗體，則它將不會與試紙上膠體金標記的SPA蛋白或重組登革病毒E蛋白形成相應(yīng)的復(fù)合物，即在“T”處不會形成紅色條帶， 但膠體金標記的SPA蛋白或重組登革病毒E2蛋白與質(zhì)控線的羊抗兔IgG或羊抗重組登革病毒E蛋白IgG仍形成相應(yīng)的復(fù)合物，即在“C”處形成紅色條帶，如果膠體金標記的SPA 蛋白或重組登革病毒E蛋白失效將不會形成紅色條帶。
無論是否含有相對應(yīng)的抗原，膠體金標記蛋白繼續(xù)隨液體繼續(xù)上行并與該膜上的羊抗兔IgG或羊抗重組登革病毒E蛋白IgG形成紅色沉淀線，即在“C”處形成紅色條帶。此線是質(zhì)控線，如膠體金試紙條失效，此線就不會出現(xiàn)，說明試紙失效。陽性結(jié)果會出現(xiàn)2條紅色沉淀線，陰性結(jié)果只出現(xiàn)1條紅色沉淀線，如不出現(xiàn)線條說明試紙失效。如若肉眼無法辨別T處紅色條帶，可利用金標免疫分析儀進行定量檢測。本發(fā)明的技術(shù)方案是采用重組登革病毒抗原和羊抗兔IgG或羊抗重組登革病毒 E蛋白IgG分別固相于硝酸纖維膜上，結(jié)合膠體金標記的SPA蛋白，應(yīng)用膜層析間接法的原理檢測標本中的登革病毒抗體。一種將膠體金試紙條與膠體金生物傳感器有機整合的膠體金定量檢測系統(tǒng)。運用膠體金測試條判讀儀的優(yōu)勢在于，判讀儀能夠在人眼無法正確識別可疑物檢測是否存在陽性的情況下，正確判讀該試紙條檢測結(jié)果。減少了因人為主觀判讀帶來的錯誤率，增加了客觀性、準確性；并且可實現(xiàn)定量檢測。此外，膠體金判讀儀攜帶方便、使用簡單、判定準確、結(jié)果客觀、易保留，為檢驗檢疫工作帶來了方便。膠體金免疫層析試紙條的制備過程如下
1、抗原及抗體
純化的登革病毒E蛋白與兔抗重組登革病毒蛋白的多克隆抗體由中國檢科院衛(wèi)生檢疫研究所提供。羊抗兔IgG (購自鼎國生物技術(shù)公司)
2、層析測試條耗材
結(jié)合墊(玻璃纖維)、硝酸纖維素膜(NC膜，SHF 1350225)、樣品墊及吸水墊購自 Millipore 公司。3、膠體金免疫層析試紙條的制備
膠體金結(jié)合墊將SPA或重組登革病毒E蛋白標記于檸檬酸鈉法制備25nm的pH值為 6. 0 6. 4膠體金顆粒，37 °C干燥。硝酸纖維素膜檢測帶重組登革病毒E2蛋白lmg/ml ；質(zhì)控帶羊抗兔或羊抗重組登革病毒E蛋白IgGl mg/ml，37°C干燥。組裝將樣品墊、結(jié)合墊、吸水墊依次貼在底襯卡，切成0. 4cm的條，干燥，裝殼，室溫貯存?zhèn)溆?。靈敏度試驗 1、樣品的處理
取待檢測樣品 ο μ L和樣品處理液90 μ L加入到制備好的層析條樣品墊端，10-15min 后，若檢測帶和質(zhì)控帶均出現(xiàn)紅色即判為陽性；若只有質(zhì)控帶出現(xiàn)紅色即判為陰性；若質(zhì)控帶不顯色，則為試紙條失效，應(yīng)取新的試紙條重新檢測。2、直觀檢測靈敏度評價
按確定的最佳反應(yīng)條件制備膠體金免疫層析試紙條，檢測不同濃度的登革病毒抗體。 將登革病毒抗體用樣品處理液稀釋成濃度依次為1 101、1 102、1 103、1 IO4、IilO50 1:1ο1、 1: IO2U: IO3U: IO4U :105,同時進行檢測。結(jié)果顯示直接目測的靈敏度1:104。特異性試驗
分別檢測以0. 85%的生理鹽水稀釋至IO4倍的DV1+2+3+4型血清、WNV血清、JEV血清， 檢測結(jié)果JEV血清無陽性結(jié)果，DV1+2+3+4型血清、WNV血清均為陽性結(jié)果，表明該檢測方法特異性良好。穩(wěn)定性試驗
將登革病毒膠體金免疫層析試紙條于37°C存放7 d后，用稀釋度為1:10^1:10^ 1 103、1 104、1 IO5Aest的DV1+2+3+4型血清及以正常人血清同時進行檢測，膠體金試紙條仍能檢出稀釋度為l:105/test，敏感性沒有下降。正常人血清檢測
將正常人血清作為陰性樣品檢測20次，用金標免疫分析儀掃描讀取信號T/C比值 (表1)。20個樣品T/C比值的平均值與3倍標準差之和即為判定值(Cot-off值)。將顯色后的金標條放入金標免疫分析儀掃描，讀取T/C比值，若比值大于判定值即為陽性，反之則為陰性。經(jīng)計算，Cot-off值為0. 007，金標免疫分析儀掃描讀取值見表1。表1 20份陰性樣品檢測結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種檢測登革病毒抗體的膠體金試紙條，其特征在于，該膠體金試紙條包括反應(yīng)支撐物、緊密連接于反應(yīng)支撐物上表面中部的硝酸纖維膜，硝酸纖維膜起始端的上表面與吸水墊部分重疊連接、硝酸纖維膜末端的上表面與金標抗體保護膜部分重疊連接，金標抗體保護膜的上表面部分重疊連接有樣品墊，其中，金標抗體保護膜包括膜本體、及均勻涂布在其上的膠體金標記的金黃色葡萄球菌A蛋白或重組登革病毒E蛋白涂層，硝酸纖維膜上靠近其起始端處設(shè)置有羊抗兔IgG或羊抗重組登革病毒E蛋白IgG包被的質(zhì)控條帶、靠近其末端處設(shè)置有重組登革病毒E2蛋白包被的檢測條帶。
2.如權(quán)利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述反應(yīng)支持物為PVC板，吸水墊為濾油紙。
3.如權(quán)利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述金標抗體保護膜為玻璃纖維膜、聚脂膜或濾紙纖維。
4.如權(quán)利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述樣品墊為玻璃纖維膜、聚脂膜或濾紙纖維。
5.如權(quán)利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述試紙條整體的外部包裹設(shè)置有外殼，該外殼上對應(yīng)于所述樣品墊處設(shè)置有樣品孔，外殼上對應(yīng)于所述質(zhì)控條帶、檢測條帶處設(shè)置有觀察窗。
6.一種如權(quán)利要求1所述的膠體金試紙條的制備方法，其特征在于，該制備方法具體為1)制備膠體金；2)利用制得的膠體金標記SPA蛋白或重組登革病毒E蛋白；3)用隔流噴金劃線機以設(shè)定噴膜速度將羊抗兔IgG或羊抗重組登革病毒E蛋白IgG噴涂到硝酸纖維膜的起始端以形成質(zhì)控條帶，將重組登革病毒E2蛋白噴涂到硝酸纖維膜的末端以形成檢測條帶；4)將膠體金標記的SPA蛋白或重組登革病毒E蛋白均勻涂布在玻璃纖維膜上，并烘干或冷凍干燥，制成金標抗體保護膜；5)在反應(yīng)支撐物上表面中部設(shè)置硝酸纖維膜，硝酸纖維膜起始端的上表面與吸水墊部分重疊連接，硝酸纖維膜末端的上表面與金標抗體保護膜部分重疊連接，金標抗體保護膜的上表面部分重疊連接樣品墊；6)將步驟5)中形成的試紙切成規(guī)格大小的條，進行干燥、裝殼，以形成試紙條。
7.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟1)中制備膠體金的具體步驟為1)制備HAuCl4水溶液磁力攪拌下加入HAuCl4,同時加入檸檬酸三鈉水溶液，顏色穩(wěn)定后繼續(xù)加熱，冷卻至室溫后加純水補足至設(shè)定值，4 ！避光保存；2)用K2COjfpH 值為 6. 0-6. 4 ；3)將膠體金調(diào)至pH6. 0-6. 4，用PB稀釋SPA至0. 2 mg/ml ；4)保持膠體金穩(wěn)定。
8.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟3)中，噴膜速度為IO-IOOmm/ s;所述重組登革病毒E2蛋白的加入量為0. l-5mg/ml，該重組抗原的稀釋液可以為PBS; 羊抗兔IgG或羊抗重組登革病毒E蛋白IgG的濃度為0. 1-5 mg/ml。
9.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，將膠體金標記的SPA蛋白或重組登革病毒E蛋白的pH為6. 0-6. 4 ；所述樣品墊采用含有NP 40的磷酸鹽緩沖液對玻璃纖維素膜進行預(yù)處理。
10.一種如權(quán)利要求1所述的膠體金試紙條的應(yīng)用，其特征在于，將所述膠體金試紙條與膠體金生物傳感器有機整合成膠體金定量檢測系統(tǒng)，以正確判讀該試紙條檢測結(jié)果。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測登革病毒抗體的膠體金試紙條及其制備方法和應(yīng)用，膠體金試紙條包括反應(yīng)支撐物、連接于反應(yīng)支撐物上表面中部的硝酸纖維膜，硝酸纖維膜起始端的上表面與吸水墊部分連接、硝酸纖維膜末端的上表面與金標抗體保護膜部分連接，金標抗體保護膜的上表面部分連接有樣品墊，金標抗體保護膜包括膜本體、及其上的膠體金標記的SPA或重組登革病毒E蛋白涂層，硝酸纖維膜上靠近其起始端處設(shè)置質(zhì)控條帶、靠近其末端處設(shè)置有檢測條帶。本發(fā)明建立登革病毒抗體的快速檢測方法，建立的檢測登革病毒的膠體金試紙條，能快速、靈敏、特異、準確地檢測樣品中的登革病毒抗體，并可實現(xiàn)定量檢測、適用于現(xiàn)場的快速檢測及監(jiān)測。
文檔編號G01N33/569GK102393454SQ201110245759
公開日2012年3月28日 申請日期2011年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月24日
發(fā)明者張志華, 楊宇, 楊永莉, 王靜, 秦成峰 申請人:中國檢驗檢疫科學(xué)研究院