專利名稱：一種檢測酸漿宿萼中β-隱黃質(zhì)含量的方法
一種檢測酸漿宿萼中β-隱黃質(zhì)含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然植物中有效成分的檢測方法的技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及一種能夠檢測酸漿宿萼中β -隱黃質(zhì)含量的反相HPLC方法。
背景技術(shù)：
% (Physalis alkekengi L. var. franchetii(Masters)Makino) M ^ (Solanaceae)酸漿屬(Physalis)的一種多年生草本植物，又名“紅姑娘”、“洋姑娘”、“紅燈籠”、“錦燈籠”等。酸漿果實為球狀漿果，外部有寬大四棱型宿萼包裹，呈燈籠形囊狀，在我國大部分地區(qū)均有分布，全草均可入藥，果實可加工成果汁和果醬等制品。酸漿的宿萼和果實組織中含有豐富的β -隱黃質(zhì)，且以脂肪酸酯形式存在，其結(jié)構(gòu)式如下，R =脂肪酸基
權(quán)利要求
1.酸漿宿萼中隱黃質(zhì)含量的測定方法，其特征在于該方法的步驟如下Α)樣品預(yù)處理將酸漿的宿萼與漿果剝離，再用組織搗碎機將酸漿宿萼粉碎成絲狀宿萼樣品；B)游離水含量的測定把準(zhǔn)確稱取的絲狀宿萼樣品置于表面皿中，在溫度40 80°C烘箱中烘干至恒重，然后，按下式計算樣品中游離水的含量 M-M'X =-xlOO(1)M式中X=游離水含量，以％ (重量)計；M =烘干前重量，以克計；M，=烘干后重量，以克計；C)總類胡蘿卜素提取準(zhǔn)確稱取步驟A)得到的絲狀宿萼樣品10重量份，再加入5 8重量份石英砂和以所述絲狀宿萼樣品重量計4 8倍的選自丙酮、乙醇、甲醇或四氫呋喃的第一有機溶劑，研磨 5 15min后靜置分離4 8min，取上清液作為“第一萃取溶媒”；剩余物再加入與所述的第一有機溶劑等量的選自正己烷、石油醚或乙酸乙酯的第二有機溶劑，研磨5 15min后靜置分離4 8min，取上清液作為“第二萃取溶媒”，并反復(fù)用第二有機溶劑研磨提取，直至上清液和提余物為無色；將第一萃取溶媒和所有的第二萃取溶媒合并，置于分液漏斗中，加入與合并萃取溶媒等量的蒸餾水，劇烈震蕩混合，靜置分離25 35min，取上清液在溫度40°C、壓力-0. 06MPa 與旋轉(zhuǎn)速度60rpm的條件下旋轉(zhuǎn)濃縮至干，得到0. 5 1. 5重量份含有總類胡蘿卜素酯的提取物；D)水解使用20 40重量份的由正己烷-乙醇-丙酮-甲苯按照體積比10 6 7 7組成的稀釋液將步驟C)得到的含有總類胡蘿卜素酯的提取物完全溶解，得到所述提取物溶液再加入以所述溶液體積計0. 1 0. 5倍重量百分濃度為35 45 %的堿性甲醇溶液，在溫度50 60°C下進行水解反應(yīng)15 25min后，冷卻到室溫；然后，將所述冷卻反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，并用20 40重量份的正己烷反復(fù)洗滌反應(yīng)瓶，洗滌液合并至分液漏斗中，向反應(yīng)液中加入20 60重量份的重量百分濃度為5 15%的Na2SO4溶液，劇烈震蕩后，在避光的條件下靜置分離0. 8 1. 4h，棄去下層相，將收集的上層溶液轉(zhuǎn)移至IOOmL棕色容量瓶中，用正己烷定容至刻度，準(zhǔn)確移取其溶液lmL，離心分離10 15min，得到的上清液進行HPLC分析；E)HPLC分析a) β -隱黃質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制準(zhǔn)確稱取β-隱黃質(zhì)參比樣品lmg，用ImL丙酮溶解后轉(zhuǎn)移至25mL棕色容量瓶中，用正己烷定容至刻度，配制成40 μ g/mL的儲備液；準(zhǔn)確量取配制好的儲備液，用逐級稀釋法，配制成質(zhì)量濃度分別為0. 00,0. 039,0. 078、 0. 156,0. 313,0. 625、1. 250,2. 500,5. 000 μ g/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液；b)HPLC分析條件的設(shè)定色譜柱0丨3!110118丨1"1，54111，4.611111^25011;流動相六以體積計9 1的乙腈-水混合物；流動相B 乙酸乙酯；線性梯度洗脫流動相B的體積百分濃度在25min內(nèi)由0%增加至 100% ；流速1. OmL/min ；檢測波長450nm ；PDA 波長范圍 250nm 550nm ；進樣量20 μ L ；c)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制使用C18-HPLC，測定步驟a)中配制的β -隱黃質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液在λ = 450nm處的峰面積， 再結(jié)合所述標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；d)樣品中β-隱黃質(zhì)含量的HPLC測定使用高效色譜儀，在步驟b)設(shè)定的條件下測定樣品在λ = 450nm處的峰面積，根據(jù)步驟c)所繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到該樣品的隱黃質(zhì)含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的酸漿宿萼用酸漿的漿果代替。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟B使用的第一萃取溶劑選自丙酮、乙醇或四氫呋喃。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟B使用的第二萃取溶劑選自正己烷或乙酸乙酯。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的堿性甲醇溶液選自氫氧化鉀-甲醇溶液或氫氧化鈉-甲醇溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種能夠檢測酸漿宿萼中β-隱黃質(zhì)含量的反相HPLC方法。該方法包括樣品預(yù)處理、游離水含量的測定、總類胡蘿卜素提取、水解和HPLC分析等步驟。本方法可以準(zhǔn)確客觀地檢測出酸漿果實和宿萼中β-隱黃質(zhì)的含量，將有非常顯著的現(xiàn)實應(yīng)用意義。
文檔編號G01N30/88GK102253161SQ20111010636
公開日2011年11月23日 申請日期2011年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月27日
發(fā)明者徐志文, 惠伯棣, 王旭, 胡春鳳 申請人:秦皇島大惠生物技術(shù)有限公司