專利名稱：一種高效毛細管電泳拆分檢測茶氨酸對映體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種高效毛細管電泳拆分檢測茶氨酸對映體的方法，屬于對映體的拆分和檢測技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
對映體的拆分和檢測在分離學(xué)科上曾被認為是最困難的工作之一。傳統(tǒng)的拆分方 法有分步結(jié)晶、微生物和酶消化法等，但這些方法都難以進行微量的分離和測定。近年來高 效毛細管電泳技術(shù)應(yīng)用于對映體拆分檢測發(fā)展極為迅速，這種技術(shù)有如下優(yōu)勢①基本不 存在柱污染問題；②實驗成本低，消耗少；③分析速度快，分離效率高；④操作模式多?；?以上優(yōu)勢，毛細管電泳的手性分離己經(jīng)成為一個極其活躍的熱門領(lǐng)域。高效毛細管電泳用 于手性拆分時需在緩沖溶液中加入手性選擇劑，構(gòu)建手性選擇環(huán)境，利用其與對映體間的 作用差異進行分離。目前國內(nèi)外文獻還沒有采用毛細管電泳技術(shù)分離檢測茶氨酸對映體的 報道，本發(fā)明利用該技術(shù)建立了一種分離效果好、靈敏度高的分析方法應(yīng)用于茶氨酸對映 體的分析檢測。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的提供一種高效毛細管電泳拆分檢測茶氨酸對映體的方法，以 β -環(huán)糊精及其衍生物為手性選擇劑，構(gòu)建手性選擇環(huán)境，分離和分析茶氨酸對映體，為茶 氨酸的研究開發(fā)提供技術(shù)保障。本發(fā)明的技術(shù)方案一種高效毛細管電泳拆分檢測茶氨酸對映體的方法，步驟如 下
(1)選用PH值為1(Γ12硼酸鹽緩沖液體系，在該硼酸鹽緩沖液體系中加入濃度為 2(T30mmOl/L手性選擇試劑，超聲脫氣30-40min，用0. 45Mm微孔濾膜過濾，過濾完畢繼續(xù)超 聲脫氣2(T30min ；
(2)用去離子水配置茶氨酸樣品，濃度為0.Γ2. Omg/mL ；
(3)調(diào)節(jié)毛細管電泳參數(shù)為分離電壓為15 30KV，毛細管溫度2(T30°C，壓力進樣 3kPaXk，紫外檢測波長220180 nm ；正極進茶氨酸樣品，負極檢測；
(4)在所述毛細管電泳參數(shù)下使茶氨酸對映體達到基線分離；
所述手性選擇試劑為β-環(huán)糊精，羥乙基-β-環(huán)糊精，羥丙基-β-環(huán)糊精，磺酰 化-β -環(huán)糊精或葡萄糖基-β -環(huán)糊精。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明與傳統(tǒng)手性分離相比具有分離效果好，無污染，低成 本，分析時間短等優(yōu)點。


圖1實施例1茶氨酸對映體的電泳圖。圖2實施例2茶氨酸對映體的電泳圖。
圖3實施例3茶氨酸對映體的電泳圖。
具體實施例方式以下給出實施例，對本發(fā)明作進一步說明。實施例1
采用PH值為11硼酸鹽溶液為緩沖液，加入20 mmol/L β _環(huán)糊精作為手性選擇試劑， 緩沖液先超聲脫氣40min后過0. 45Mm微孔濾膜，再超聲脫氣20min。用去離子水配置茶氨 酸樣品，濃度為0. lmg/mL，實驗使用的儀器為Beckman公司P/ACE MDQ毛細管電泳系統(tǒng)，毛 細管電泳條件參數(shù)為分離電壓為20KV ；毛細管溫度20°C;壓力進樣3kPaXk ；紫外檢測波 長觀0 nm;正極進茶氨酸樣品，負極檢測。茶氨酸對映體的電泳圖見圖1。實施例2
采用PH值為12硼酸鹽溶液為緩沖液，加入30 mmol/L羥乙基-β-環(huán)糊精作為手性選 擇試劑，緩沖液先超聲脫氣30min后過0. 45Mm微孔濾膜，再超聲脫氣20min。用去離子水配 置茶氨酸樣品，濃度為1. Omg/mL,實驗使用的儀器為Beckman公司P/ACE MDQ毛細管電泳系 統(tǒng)，毛細管電泳條件參數(shù)為分離電壓為30KV ；毛細管溫度25°C ；壓力進樣3kPaXk ；紫外 檢測波長觀0 nm;正極進茶氨酸樣品，負極檢測。茶氨酸對映體的電泳圖見圖2。實施例3
采用PH值為12硼酸鹽溶液為緩沖液，加入25 mmol/L葡萄糖基-β -環(huán)糊精作為手性 選擇試劑，緩沖液先超聲脫氣30min后過0. 45Mm微孔濾膜，再超聲脫氣20min。用去離子水 配置茶氨酸樣品，濃度為2. Omg/mL,實驗使用的儀器為Beckman公司P/ACE MDQ毛細管電泳 系統(tǒng)，毛細管電泳條件參數(shù)同實施例1。茶氨酸對映體的電泳圖見圖3。
權(quán)利要求
1. 一種高效毛細管電泳拆分檢測茶氨酸對映體的方法，其特征在于步驟如下(1)選用PH值為1(Γ12硼酸鹽緩沖液體系，在該硼酸鹽緩沖液體系中加入濃度為 20^30mmol/L手性選擇試劑，超聲脫氣30-40min，用0. 45Mm微孔濾膜過濾，過濾完畢繼續(xù)超 聲脫氣2(T30min ；(2)用去離子水配置茶氨酸樣品，濃度為0.Γ2. Omg/mL ；(3)調(diào)節(jié)毛細管電泳參數(shù)為分離電壓為15 30KV，毛細管溫度2(T30°C，壓力進樣 3kPaXk，紫外檢測波長220180 nm ；正極進茶氨酸樣品，負極檢測；(4)在所述毛細管電泳參數(shù)下使茶氨酸對映體達到基線分離；所述手性選擇試劑為β-環(huán)糊精，羥乙基-β-環(huán)糊精，羥丙基-β-環(huán)糊精，磺酰 化-β -環(huán)糊精或葡萄糖基-β -環(huán)糊精。
全文摘要
一種高效毛細管電泳拆分檢測茶氨酸對映體的方法，屬于對映體的拆分和檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明確定了茶氨酸分離所需的手性拆分環(huán)境選用pH值為10~12硼酸鹽緩沖液體系，在該緩沖液中加入手性選擇試劑。配置茶氨酸樣品，濃度為0.1~2.0mg/mL，在毛細管電泳分離電壓為15~30kV的條件下茶氨酸對映體達到基線分離。該方法分離效果好，無污染，低成本，適合于茶氨酸對映體的分析檢測。
文檔編號G01N27/447GK102095775SQ20101056801
公開日2011年6月15日 申請日期2010年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月1日
發(fā)明者丁紹東, 戴軍, 朱松, 李玥, 王洪新, 陳培培, 陳尚衛(wèi) 申請人:江南大學(xué)