專利名稱：一種抗膽紅素干擾的尿酸酶法測(cè)定試劑及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種抗膽紅素干擾的尿酸酶法測(cè)定試劑及其使用方法。
背景技術(shù)：
尿酸(UA)是核酸中嘌呤代謝的最終產(chǎn)物，在人體內(nèi)，嘌呤核苷酸分解生成嘌呤核苷及嘌呤后，經(jīng)水解脫氨和氧化，最后生成UA0 UA隨尿排出，血中UA全部通過(guò)腎小球?yàn)V出，在腎小管幾乎完全被重吸收，故UA的清除率極低。由腎排出的UA占一日總排出量的 2/3-3/4，其余在胃腸道被微生物的酶分解。GFR減低時(shí)UA不能正常排泄，血中UA濃度升高。一些藥物也影響UA的排泄，如噻嗪類利尿藥盒羥本璜胺可促進(jìn)UA的排出。水楊酸制劑在高劑量時(shí)也增加其排泄。通常UA水平的增加與含氮物質(zhì)、尿素、肌酐和其他非蛋白因素有關(guān)，臨床上常用于痛風(fēng)、腎功能障礙、骨髓疾病以及一些未明原因的高尿酸血癥的輔助診斷。臨床意義(I)UA在血中含量與體內(nèi)核酸的代謝速度、腎的排泄功能和食物中核酸的含量有關(guān)。UA難以溶解，濃度高時(shí)會(huì)沉積于組織內(nèi)，形成結(jié)石。(2)血清UA增多主要見(jiàn)于痛風(fēng)，是臨床診斷痛風(fēng)的主要指標(biāo)。痛風(fēng)石嘌呤代謝失調(diào)所致，血清UA可明顯升高。(3)核酸代謝亢進(jìn)可引起內(nèi)源性UA生成增加，血清UA上升。見(jiàn)于白血病，多發(fā)性骨髓瘤，真性紅細(xì)胞增多癥等。(4)妊娠高血壓，子癇等腎血流量減少的病變，因UA排泄減少而使血清UA升高。 但此時(shí)SUR常無(wú)變化。(5)血清UA升高還見(jiàn)于慢性鉛中毒，氯仿及四氯化碳中毒。(6)低尿酸血癥多由于代謝紊亂，如UA生成不足、腎小管對(duì)UA的轉(zhuǎn)運(yùn)異常及尿中 UA排出異常增加所致，亦見(jiàn)于Wilson氏病、Fancoi綜合癥、嚴(yán)重貧血等。高尿酸血癥作為現(xiàn)代文明病的新種類引起了醫(yī)學(xué)界的高度關(guān)注，準(zhǔn)確地檢測(cè)UA 在臨床應(yīng)用上愈顯得重要。UA測(cè)定方法很多，有磷鎢酸法、尿酸酶法、干化學(xué)方法和HPLC法等。目前最流行的方法是尿酸酶-過(guò)氧化物酶反應(yīng)體系，方法靈敏且不需要去蛋白質(zhì)，主要的干擾物是抗壞血酸(維生素C，VC)和膽紅素。因此，解決抗壞血酸和膽紅素對(duì)UA測(cè)定的干擾問(wèn)題，具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種抗干擾能力好的抗膽紅素干擾的尿酸酶法測(cè)定試劑及其使用方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是一種抗膽紅素干擾的尿酸酶法測(cè)定試劑，所述試劑為液體雙試劑，其中一種試劑1的組分及含量為
磷酸鹽緩沖液(pH6. 0-8. 0)0. 10-100g/L，過(guò)氧化物酶0. 10-10KU/L,N-乙基-N-(3-甲苯)N-琥珀酰乙二胺 EMSE 0. 10-10g/L，抗干擾酶0. 10-10KU/L,穩(wěn)定劑0.10-100g/L;其中第二種試劑2的組分及含量為磷酸鹽緩沖液(pH6. 0-8. 0) 0. 10-100g/L，過(guò)氧化物酶0. 10-10KU/L,尿酸酶0. 10-10KU/L,4 氨基安替比林 4-AAP0. lO-lOg/L，穩(wěn)定劑0. 10-100g/L具體說(shuō)，所述抗干擾酶為抗膽紅素氧化酶；所述穩(wěn)定劑為牛血清白蛋白、亞鐵氰化物、曲拉通-100、多元醇、聚乙二醇中的至少一種；其中磷酸鹽緩沖液可以采用磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀等。一種上述抗膽紅素干擾的尿酸酶法測(cè)定試劑的使用方法，包括下述步驟(1)樣本準(zhǔn)備樣本為空腹不溶血血清或血漿，樣本在低溫條件下運(yùn)輸保存；(2)采用全自動(dòng)生化分析儀對(duì)步驟(1)的樣本進(jìn)行檢測(cè)，具體參數(shù)如下反應(yīng)類型兩點(diǎn)終點(diǎn)法，反應(yīng)方向正反應(yīng)，主波長(zhǎng)600nm，副波長(zhǎng)800nm，反應(yīng)溫度37 °C，樣本/ 試劑(S/ 3/200，樣本量(S):3yl，試劑I(Ri) :150 μ 1，試劑2(R2) :50μ 1，反應(yīng)時(shí)間IOmin。步驟(1)中空腹不溶血血清或血漿采用肝素抗凝，0. Img肝素可抗凝1. Oml血液； 或采用EDTA抗凝1. 8mg EDTA可抗凝1. Oml血液。樣本中尿酸在室溫條件下可穩(wěn)定8小時(shí)，在2°C 8°C可穩(wěn)定3天，在_20°C保存可穩(wěn)定6個(gè)月。綜上所述，本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明的試劑為液體雙試劑，具有良好的抗膽紅素干擾性能和優(yōu)良的穩(wěn)定性。采用兩點(diǎn)終點(diǎn)法，可以在半/全自動(dòng)生化分析儀上使用。本品采用了一種特定的酶，使試劑具有靈敏度高、抗干擾性能強(qiáng)的特點(diǎn)；本品加入選定的穩(wěn)定劑，使得試劑具有良好的穩(wěn)定性，在2-8°C下保存(避光密封)12個(gè)月不影響其性能。本試劑可以廣泛的用于急慢性腎炎、腎結(jié)石、痛風(fēng)等腎臟疾病，以及白血病、多發(fā)性骨髓瘤等核酸代謝過(guò)盛疾病的診斷、健康體檢、腎臟疾病的普查等。
具體實(shí)施方式

實(shí)施例1
(1)樣本準(zhǔn)備樣本為空腹不溶血血清或血漿(肝素抗凝，0. Img肝素可抗凝 1. Oml血液；EDTA抗凝1. 8mg EDTA可抗凝1. Oml血液)。樣本應(yīng)在低溫條件下運(yùn)輸保存， 樣本中尿酸在室溫條件下可穩(wěn)定8小時(shí)，在2°C 8°C可穩(wěn)定3天，在_20°C保存可穩(wěn)定6個(gè)月。(2)按以下成分和用量配制尿酸測(cè)定試劑試劑1 磷酸鹽緩沖液(pH6. 0-8. 0) 0. 10-100g/L，過(guò)氧化物酶0. 10-10KU/L,N-乙基-N-(3-甲苯)-N_ 琥珀酰乙二胺 EMSE 0. 10-10g/L，抗干擾酶0. 10-10KU/L,穩(wěn)定劑0. 10-100g/L ；試劑2 磷酸鹽緩沖液(pH6. 0-8. 0)0. 10-100g/L，過(guò)氧化物酶0. 10-10KU/L,尿酸酶0. 10-10KU/L,4-氨基安替比林 4-AAP0. lO-lOg/L，穩(wěn)定劑0. 10-100g/L。上述各組分及其含量具體為，試劑1中磷酸鹽緩沖液為0. 10-100g/L之間的任意值，具體為 0. 1、0· 2,0. 5、l、3、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100g/L 均可，pH 為 6. 0-8. 0之間的任意值，具體為6、6. 2,6. 5,6. 7,7. 0,7. 2,7. 5,7. 7,8. 0均可；過(guò)氧化物酶為 0. 10-10KU/L 之間的任意值，具體為 0. 1、0· 2,0. 5,0. 8、1、3、5、7、10KU/L 均可；N-乙基-N-(3-甲苯)-N-琥珀酰乙二胺EMSE為0. 10_10g/L之間的任意值，具體為0. 1,0.3,
0.5、l、3、5、10g/L均可；抗干擾酶為0. 10-10KU/L之間的任意值，具體為0. 1,0. 2,0. 5,0. 8、
1、3、5、7、10KU/L均可；穩(wěn)定劑為0.10-100g/L之間的任意值，具體為0. 1,0. 2,0. 5、1、3、5、 10、20、30、40、50、60、70、80、90、100g/L 均可。試劑 2 中磷酸鹽緩沖液為 0. 10-100g/L 之間的任意值，具體為 0. 1,0. 2,0. 5、l、3、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100g/L 均可，pH 為6. 0-8. 0之間的任意值，具體為6、6. 2,6. 5,6. 7,7. 0,7. 2,7. 5,7. 7,8. 0均可；過(guò)氧化物酶為0. 10-10KU/L之間的任意值，具體為0. 1,0. 2,0. 5、0. 8、1、3、5、7、10KU/L均可；尿酸酶為 0. 10-10KU/L 之間的任意值，具體為 0. 1,0. 2,0. 5,0. 8、1、3、5、7、10KU/L 均可；4-氨基安替比林為0. 10-10g/L之間的任意值，具體為0. 1,0. 3,0. 5、l、3、5、10g/L均可；穩(wěn)定劑為 0. 10-100g/L 之間的任意值，具體為 0. 1,0. 2,0. 5、1、3、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、 100g/L 均可。上述試劑溶解完成后，分裝入瓶，制成液體雙試劑，直接使用。在東芝TBA-120FR 型全自動(dòng)生化分析儀上按照以下參數(shù)設(shè)定反應(yīng)類型兩點(diǎn)終點(diǎn)法，反應(yīng)方向正反應(yīng)，主波長(zhǎng)600nm，副波長(zhǎng)800nm，反應(yīng)溫度37 °C，
樣本/ 試劑(S/ 3/200，樣本量(S):3yl，試劑I(Rl) :150 μ 1，試劑2(R2) :50μ 1，反應(yīng)時(shí)間IOmin。測(cè)定時(shí)，樣本加試劑1在37°C下保溫300秒，記錄吸光度A1，加入試劑2后，在37°C 下保溫300秒，記錄吸光度A2，按以下公式計(jì)算樣本尿酸濃度
權(quán)利要求
1. 一種抗膽紅素干擾的尿酸酶法測(cè)定試劑，其特征在于，所述試劑為液體雙試劑，其中第一種試劑1的組分及含量為
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗膽紅素干擾的尿酸酶法測(cè)定試劑，其特征在于，所述抗干擾酶為抗膽紅素氧化酶，含量為0. 1-10KU/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗膽紅素干擾的尿酸酶法測(cè)定試劑，其特征在于，所述穩(wěn)定劑為牛血清白蛋白、亞鐵氰化物、曲拉通-100、多元醇、聚乙二醇中的至少一種。
4.一種權(quán)利要求1所述的抗膽紅素干擾的尿酸酶法測(cè)定試劑的使用方法，其特征在于，包括下述步驟(1)樣本準(zhǔn)備樣本為空腹不溶血血清或血漿，樣本在低溫條件下運(yùn)輸保存；(2)采用全自動(dòng)生化分析儀對(duì)步驟(1)的樣本進(jìn)行檢測(cè)，具體參數(shù)如下 反應(yīng)類型兩點(diǎn)終點(diǎn)法，反應(yīng)方向正反應(yīng)， 主波長(zhǎng)600nm， 副波長(zhǎng)800nm， 反應(yīng)溫度37°C， 樣本/試劑(S/ 3/200， 樣本量⑶3μ 1， 試劑 I(Rl) :150 μ 1， 試劑 2(R2) :50 μ 1， 反應(yīng)時(shí)間IOmin。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述抗膽紅素干擾的尿酸酶法測(cè)定試劑的使用方法，其特征在于， 所述空腹不溶血血清或血漿采用肝素抗凝，0. Img肝素可抗凝1. Oml血液；或采用EDTA抗凝1. 8mg EDTA可抗凝1. Oml血液。磷酸鹽緩沖液(pH 6. 0-8. 0) 過(guò)氧化物酶N-乙基-N- (3-甲苯)-N-琥珀酰乙抗干擾酶穩(wěn)定劑其中第二種試劑2的組分及含量為磷酸鹽緩沖液(pH 6. 0-8. 0) 過(guò)氧化物酶尿酸酶·4-氨基安替比林4-AAP 穩(wěn)定劑胺 EMSE 0.10-10g/L,·0.10-100g/L, 0.10-10KU/L,·0.10-10KU/L, 0.10-100g/L ；·0.10-100g/L, 0.10-10KU/L, 0.10-10KU/L, 0.10-10g/L, 0.10-100g/L。
全文摘要
本發(fā)明涉及提供一種抗膽紅素干擾的尿酸酶法測(cè)定試劑及其使用方法。本發(fā)明的試劑為液體雙試劑，具有良好的抗膽紅素干擾性能和優(yōu)良的穩(wěn)定性。采用兩點(diǎn)終點(diǎn)法，可以在半/全自動(dòng)生化分析儀上使用。本品采用了一種特定的酶，使試劑具有靈敏度高、抗干擾性能強(qiáng)的特點(diǎn)；本品加入選定的穩(wěn)定劑，使得試劑具有良好的穩(wěn)定性，在2-8℃下保存(避光密封)12個(gè)月不影響其性能。本試劑可以廣泛的用于急慢性腎炎、腎結(jié)石、痛風(fēng)等腎臟疾病，以及白血病、多發(fā)性骨髓瘤等核酸代謝過(guò)盛疾病的診斷、健康體檢、腎臟疾病的普查等。
文檔編號(hào)G01N33/49GK102417921SQ20101050116
公開(kāi)日2012年4月18日 申請(qǐng)日期2010年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月25日
發(fā)明者余向東, 汪峰, 王浩, 程明 申請(qǐng)人:浙江世紀(jì)康大醫(yī)療科技有限公司