專利名稱：用于檢測補體結合性抗體的方法和組合物的制作方法
用于檢測補體結合性抗體的方法和組合物
背景技術：
補體系統(tǒng)是血液中的一組復雜的蛋白，其與抗體和其它因子協(xié)同地作為免疫反應、變態(tài)反應、免疫化學反應和免疫病理學反應的介質起重要作用。補體系統(tǒng)的活化可以導致廣范圍的反應，諸如不同種類的細胞、細菌和原生動物的調理作用和裂解，病毒的失活， 和炎性過程的直接介導。通過它的幾種組分的激素-樣活性，補體系統(tǒng)可以募集和支持其它體液和細胞效應系統(tǒng)的參與。這些又可以誘導白細胞的定向遷移，觸發(fā)來自肥大細胞的組胺釋放，并刺激溶酶體組分從吞噬細胞的釋放。補體系統(tǒng)由至少20種不同的血漿蛋白組成，所述蛋白能彼此、與抗體和與細胞膜相互作用。當活化時，這些蛋白中的許多與其它蛋白相結合形成酶，以切割和活化系統(tǒng)中的其它蛋白。這些蛋白的相繼活化(稱作補體級聯(lián))遵循2個主要途徑；經典途徑和替代途徑。兩個途徑都集中在C3，并使用共同的末端主干(terminal trunk)，其導致細胞裂解、細菌調理作用和裂解、或病毒滅活。經典途徑可以被抗原-抗體復合物、聚集的免疫球蛋白和非免疫學物質(諸如DNA 和胰蛋白酶-樣酶)活化。活化的經典途徑連續(xù)地包含4種命名為Cl、C4、C2和C3的組分。這些組分可以分成2個功能單位Cl或識別單位；和C4、C2和C3或活化單位。5個命名為C5、C6、C7、C8和C9的額外組分定義膜攻擊復合物(MAC)，形成兩個途徑共有的末端主干，后者導致細胞裂解。替代途徑使用因子B，并繞過C1-C4-C2步驟，在C3處活化。經典途徑從Cl-復合物開始，所述Cl-復合物由一個Clq分子和2個都具有Clr 和Cls的分子組成。通過Clq對來自類別M和G的抗體(與抗原復合)的結合，或通過Clq 對病原體表面的結合，觸發(fā)Cl-復合物的活化。Clr和Cls都是絲氨酸蛋白酶。Clq的結合導致Clq分子的構象變化，這又導致2個Clr分子的活化，隨后是Cls分子的活化。為了防止該級聯(lián)的自發(fā)活化，用Cl-抑制劑(一種絲氨酸蛋白酶抑制劑)抑制Clr和Cls。一旦被活化，Cl-復合物結合并切割C2和C4，生成Ch和C4b。C2a和C4b然后結合，以形成C4bh 復合物，稱作C3-轉變酶。C3-轉變酶的生成導致C3被切割成C3a和C3b ；后者連接Ch和 C4b (C3轉變酶)，以生成C5轉變酶，它是MAC的最初組分。補體途徑的活化的研究和測量，可以提供許多可能的生物學障礙的指征。補體途徑已經涉入發(fā)病機制或廣譜的人疾病和病理學病癥的癥候學。這樣的疾病包括幾種類型的免疫復合物疾病、自身免疫病(尤其是系統(tǒng)性紅斑狼瘡)和感染性疾病(諸如發(fā)現涉及革蘭陰性細菌、病毒、寄生物、真菌的感染的那些)和各種皮膚疾病、腎臟疾病和血液病。有些障礙可能是由于患者的補體不足。本領域需要用于以快速、靈敏且特異性的方式檢測患者樣品中的補體結合性抗體的方法，尤其在精確地且決定性地區(qū)分特定抗原的方面。本發(fā)明解決了這些需要。相關文獻美國專禾Ij號 6，514，714 和 6，150，122 ;Wahrmann 等人，J. Immunol. Methods. 275 (1-2) 149-60 (2003 ；禾口 Smith 等 A, Am. J. Transplant. 7(12)2809-15(2007)。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供了用于使用補體因子Clq靈敏且特異性地檢測生物樣品中的補體結合性抗體的方法，所述補體因子Clq包括在生物樣品中存在的自體補體因子Clq和結合自體補體因子Clq的可檢測地標記的抗體、外源性人補體因子Clq和結合外源性人補體因子 Clq的可檢測地標記的抗體、可檢測地標記的外源性人補體因子Clq、或自體補體因子Clq 和外源性人補體因子Clq的組合。本發(fā)明也表征了用于本發(fā)明方法中的試劑盒、系統(tǒng)和裝置。在一個方面，本發(fā)明提供了用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在特異性地結合目標抗原的補體結合性抗體的方法，所述方法通過下述進行使其上面固定有目標抗原(AgI)的固體基質接觸來自受試者的生物樣品和補體因子Clq，其中所述接觸的時間足以允許樣品中的抗-AgI補體結合性抗體結合AgI，并允許補體因子Clq結合抗-AgI補體結合性抗體；使用能特異性地結合補體因子Clq的至少一種可檢測地標記的配體溫育固體基質，所述補體因子Clq結合在與AgI結合的抗-AgI補體結合性抗體上；并檢測是否存在結合到補體因子Clq上的可檢測地標記的配體，以測定生物樣品中是否存在特異性地結合 AgI的補體結合性抗體。在有些實施方案中，所述補體因子Clq是自體補體因子Clq。在其它實施方案中， 所述補體因子Clq是外源性補體因子Clq。在其它實施方案中，所述補體因子Clq是自體補體因子Clq和外源性補體因子Clq的組合。在有些實施方案中，所述固體基質是多孔板。在其它實施方案中，所述固體基質是膜。在其它實施方案中，所述固體基質是微粒，如聚苯乙烯珠、乳膠珠或磁珠。在有些實施方案中，所述固體基質是細胞。在其它實施方案中，所述固體基質是細胞膜。在有些實施方案中，所述生物樣品是血清、血液、唾液、血漿或尿。在有些實施方案中，所述可檢測地標記的配體是可檢測地標記的抗體或其結合片段。在有些實施方案中，所述可檢測標記是熒光染料、生色團、酶、連接分子、生物素分子、電子供體、電子受體、染料、金屬或放射性核素。在另一個方面，本發(fā)明提供了用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在特異性地結合目標抗原的補體結合性抗體的方法，所述方法通過下述進行使其上面固定有目標抗原(AgI)的固體基質接觸來自受試者的生物樣品和直接標記的外源性補體因子Clq，其中所述接觸的時間足以允許樣品中的抗-AgI補體結合性抗體結合AgI，并允許所述直接標記的外源性補體因子Clq結合抗-AgI補體結合性抗體；并檢測是否存在結合到抗-AgI補體結合性抗體上的直接標記的外源性Clq，以測定生物樣品中是否存在特異性地結合AgI 的補體結合性抗體。在有些實施方案中，所述固體基質是多孔板。在其它實施方案中，所述固體基質是膜。在其它實施方案中，所述固體基質是微粒，如聚苯乙烯珠、乳膠珠或磁珠。在有些實施方案中，所述固體基質是細胞。在其它實施方案中，所述固體基質是細胞膜。在有些實施方案中，所述生物樣品是血清、血液、唾液、血漿或尿。在有些實施方案中，所述直接標記的外源性Clq被熒光染料、生色團、酶、連接分子、生物素分子、電子供體、電子受體、染料、金屬或放射性核素標記。
在另一個方面，本發(fā)明提供了用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在特異性地結合人白細胞抗原(HLA)的補體結合性抗體的方法，所述方法通過下述進行用不同亞類的微粒的集合和補體因子Clq溫育來自受試者的生物樣品，其中每個微粒包被有不同的純化的HLA亞型，所述HLA亞型源自呈遞相同HLA的細胞群體，且其中所述溫育的時間足以允許生物樣品中的抗-HLA補體結合性抗體結合HLA，并允許所述補體因子Clq結合生物樣品中的抗-HLA補體結合性抗體；用能特異性地結合補體因子Clq的至少一種可檢測地標記的配體溫育所述微粒，所述補體因子Clq結合在與HLA結合的抗-HLA補體結合性抗體上； 并檢測是否存在結合到補體因子Clq上的可檢測地標記的配體，以測定是否存在補體結合性抗體。在有些實施方案中，所述補體因子Clq是自體補體因子Clq。在其它實施方案中， 所述補體因子Clq是外源性補體因子Clq。在其它實施方案中，所述補體因子Clq是自體補體因子Clq和外源性補體因子Clq的組合。在有些實施方案中，所述微粒是瓊脂糖珠。在其它實施方案中，所述微粒是乳膠珠。在其它實施方案中，所述微粒是磁珠。在有些實施方案中，所述生物樣品是血清、血液、 唾液、血漿或尿。在有些實施方案中，所述可檢測地標記的配體是可檢測地標記的抗體或其結合片段。在有些實施方案中，所述可檢測標記是熒光染料、生色團、酶、連接分子、生物素分子、電子供體、電子受體、染料、金屬或放射性核素。在有些實施方案中，所述檢測是通過流式細胞術。在另一個方面，本發(fā)明提供了用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在特異性地結合人白細胞抗原(HLA)的補體結合性抗體的方法，所述方法通過下述進行用不同亞類的微粒的集合和直接標記的外源性補體因子Clq溫育來自受試者的生物樣品，其中每個微粒包被有不同的純化的HLA亞型，所述HLA亞型源自呈遞相同HLA的細胞群體，且其中所述溫育的時間足以允許生物樣品中的抗-HLA補體結合性抗體結合HLA，并允許所述補體因子Clq結合生物樣品中的抗-HLA補體結合性抗體；并檢測是否存在結合到抗-HLA補體結合性抗體上的直接標記的外源性補體因子Clq，以測定生物樣品中是否存在特異性地結合 HLA的補體結合性抗體。在有些實施方案中，所述微粒是瓊脂糖珠。在其它實施方案中，所述微粒是乳膠珠。在其它實施方案中，所述微粒是磁珠。在有些實施方案中，所述生物樣品是血清、血液、 唾液、血漿或尿。在有些實施方案中，所述直接標記的外源性Clq被熒光染料、生色團、酶、 連接分子、生物素分子、電子供體、電子受體、染料、金屬或放射性核素標記。在有些實施方案中，所述檢測是通過流式細胞術。在另一個方面，本發(fā)明提供了用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在特異性地結合目標抗原的補體結合性抗體的試劑盒，所述試劑盒包括其上面固定有目標抗原 (AgI)的固體基質；能特異性地結合補體因子Clq的可檢測地標記的配體；和用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在針對目標抗原的補體結合性抗體的說明書。在有些實施方案中，所述固體基質是多孔板。在其它實施方案中，所述固體基質是膜。在其它實施方案中，所述固體基質是微粒，諸如瓊脂糖珠、聚苯乙烯珠、乳膠珠或磁珠。 在有些實施方案中，所述固體基質是細胞。在其它實施方案中，所述固體基質是細胞膜。在有些實施方案中，所述生物樣品是血清、血液、唾液、血漿或尿。在有些實施方案中，所述可檢測地標記的配體是可檢測地標記的抗體或其結合片段。在有些實施方案中，所述可檢測標記是熒光染料、生色團、酶、連接分子、生物素分子、電子供體、電子受體、染料、金屬或放射性核素。在另一個方面，本發(fā)明提供了用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在特異性地結合目標抗原的補體結合性抗體的試劑盒，所述試劑盒包括其上面固定有目標抗原 (AgI)的固體基質；能結合補體結合性抗體的直接標記的外源性Clq ；和用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在針對目標抗原的補體結合性抗體的說明書。在有些實施方案中，所述固體基質是多孔板。在其它實施方案中，所述固體基質是膜或細胞。在其它實施方案中，所述固體基質是微粒，諸如瓊脂糖珠、聚苯乙烯珠、乳膠珠或磁珠。在其它實施方案中，所述固體基質是細胞膜。在有些實施方案中，所述生物樣品是血清、血液、唾液、血漿或尿。在有些實施方案中，所述直接標記的外源性Clq被熒光染料、生色團、酶、連接分子、生物素分子、電子供體、電子受體、染料、金屬或放射性核素標記。在另一個方面，本發(fā)明提供了用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在針對人白細胞抗原(HLA)的補體結合性抗體的試劑盒，所述試劑盒包括微粒亞類的集合，其中每個微粒亞類包被有不同的純化的HLA，以代表單個細胞系或多個細胞系的HLA抗原群體，使得該集合模仿正常人群體中的HLA分布；能特異性地結合補體因子Clq的可檢測地標記的配體；和用于測定來自受試者的樣品中是否存在針對HLA的補體結合性抗體的說明書。在有些實施方案中，所述微粒是瓊脂糖珠、乳膠珠、磁珠或聚苯乙烯珠。在有些實施方案中，所述生物樣品是血清、血液、唾液、血漿或尿。在有些實施方案中，所述可檢測地標記的配體是可檢測地標記的抗體或其結合片段。在有些實施方案中，所述可檢測標記是熒光染料、生色團、酶、連接分子、生物素、電子供體、電子受體、染料、金屬或放射性核素。在另一個方面，本發(fā)明提供了用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在針對人白細胞抗原(HLA)的補體結合性抗體的試劑盒，所述試劑盒包括微粒亞類的集合，其中每個微粒亞類包被有不同的純化的HLA，以代表單個細胞系或多個細胞系的HLA抗原群體，使得該集合模仿正常人群體中的HLA分布；能結合補體結合性抗體的直接標記的外源性Clq ； 和用于測定來自受試者的樣品中是否存在針對HLA的補體結合性抗體的說明書。在有些實施方案中，所述微粒是瓊脂糖珠、乳膠珠、磁珠或聚苯乙烯珠。在有些實施方案中，所述生物樣品是血清、血液、唾液、血漿或尿。在有些實施方案中，所述直接標記的外源性Clq被標記熒光染料、生色團、酶、連接分子、生物素、電子供體、電子受體、染料、 金屬或放射性核素。本領域技術人員在閱讀下面更充分地描述的本發(fā)明的細節(jié)后，會明白本發(fā)明的這些和其它目的、優(yōu)點和特征。


當結合附圖閱讀時，從下面的詳細描述可以最好地理解本發(fā)明。應當強調，根據普通實踐，附圖的不同部件不是按規(guī)定比例。相反，為了清楚，不同部件的尺度被任意放大或縮小。附圖中包括下述圖。圖1提供了本公開內容的一個實施方案的一般示意圖。使其上面固定有抗原或單個可辨別的目標抗原(AgI)的固體基質接觸疑似含有抗-AgI補體結合性抗體(CFAb)的生物樣品。如圖所示，所述樣品還可能包括非-補體結合性抗體(非-CFAb)以及特異性地結合相同樣品中的補體結合性抗體的自體和/或外源性Clq。在溫育后，如果存在的話， 所述抗-AgI補體結合性抗體特異性地結合固定化的Agl，且所述Clq特異性地結合結合的抗-AgI補體結合性抗體。使所述固體基質接觸特異性地結合人Clq的可檢測地標記的抗-人Clq(抗-hClq)抗體。然后使用本領域已知的方法，測定所述可檢測標記的存在。圖2提供了本公開內容的另一個實施方案的一般示意圖。在該實施方案中，在使所述固體基質接觸樣品之前，將可檢測地標記的抗-Clq (抗-hClq)抗體直接加入到生物樣品中?；蛘撸梢詫⒖?hClq抗體和生物樣品同時引入固體基質中。圖3提供了本公開內容的另一個實施方案的一般示意圖。在該實施方案中，在使所述固體基質接觸樣品之前，將可檢測地標記的外源性Clq直接加入到生物樣品中?；蛘?， 可以將可檢測地標記的外源性Clq和生物樣品同時引入固體基質中，或可以在已經將生物樣品引入基質中以后，將可檢測地標記的外源性Clq引入固體基質中。在該實施方案中，象在其它實施方案中一樣，使用本領域已知的方法，測定可檢測地標記的外源性Clq的存在。圖4提供了本公開內容的另一個實施方案的一般示意圖。該實施方案類似于在圖 1中所述的實施方案，且以類似的方式起作用。但是，在該實施方案中，其上面固定有抗原或單個可辨別的目標抗原(AgI)的固體基質是珠子、微珠、微球、微粒、細胞或膜。圖5提供了本公開內容的另一個實施方案的示意圖。該實施方案類似于在圖2中所述的實施方案，且以類似的方式起作用。但是，在該實施方案中，其上面固定有抗原或單個可辨別的目標抗原(AgI)的固體基質是珠子、微珠、微球、微粒、細胞或膜。圖6提供了本公開內容的另一個實施方案的示意圖。該實施方案類似于在圖3中所述的實施方案，且以類似的方式起作用。但是，在該實施方案中，其上面固定有抗原或單個可辨別的目標抗原(AgI)的固體基質是珠子、微珠、微球、微粒、細胞或膜。圖7顯示了一步法和兩步法Clq的確定預期抗體的能力的對比。圖8顯示了使用常見的LMX-IgG試驗不起作用的靜脈內丙種球蛋白(IVIG)摻加 (spiking)的結果。圖表示測試在緩沖液中稀釋的和在IVIG中稀釋的陰性對照血清，如在 IVIG體外抑制試驗中所進行的，并使用抗-IgG標記的第二個步驟(當前的商業(yè)試驗)。圖9與圖8相同，只是摻加患者血清。結果表明，如果將IVIG加入血清中，并用抗-IgG檢測，不可能檢測出患者抗體的抑制(在緩沖液中稀釋的樣品中可見)。圖10顯示了用于測定IVIG的抑制的補體-依賴性的細胞毒性(⑶C)試驗和Clq 試驗的對比。CDC試驗是以前可用于該測定的唯一試驗。圖11顯示了在成年人心臟患者血清上的實際的IVIG體外抑制Clq試驗，表明如果治療患者，僅AM能被IVIG抑制。圖12A-12B顯示了在監(jiān)測成年人心臟患者血清(具有每個后續(xù)治療)的AM抗體的變化中，LMX-Clq(圖12A)和LMX-IgG(圖12B)試驗的對比。(與圖11相同的患者)。圖13A-i;3B顯示了具有IVIG后續(xù)治療的所有患者的抗體的監(jiān)測，LMX-Clq(圖 12A)和LMX-IgG(圖12B)試驗。注意到使用LMX-IgG試驗，難以觀察抗體的抑制/消失。圖14顯示了體外IVIG抑制Clq試驗的結果，其類似于圖11，但是所述結果來自兒科腎患者，表明B57、B58抗體會被IVIG有效地抑制。圖15顯示了體外和體內結果的并行對比。左圖(與圖14相同)顯示了體外IVIG抑制，右圖顯示了相同血清日期的患者在IVIG輸注之前和之后。圖16A-N的表顯示了 ClQ驗證實驗的結果。圖17A-J的表顯示了 ClQ-IVIG驗證實驗的結果。圖18提供了直接標記的Clq試驗的一般示意圖。圖19A-B提供了使用LMX-Clq試驗的直接和間接標記Clq之間的對比。圖20A-B提供了在體外LMX-Clq IVIG抑制試驗中間接標記Clq (圖20A)和在體外LMX-Clq IVIG抑制試驗中直接標記Clq(圖20B)之間的對比。定義術語“補體結合性抗體”是指這樣的抗體，其特異性地結合病原體上的抗原，并啟動免疫系統(tǒng)的補體級聯(lián)，所述補體級聯(lián)將攜帶抗原的靶物(例如，細胞)或病原體從生物體清除。一般而言，補體結合性抗體是被補體因子Clq識別和特異性地結合的IgM或IgG抗體。Clq補體因子是活化血清補體系統(tǒng)的Cl酶復合物的亞基。它由鏈A、B和C的9 個二硫鍵連接的二聚體組成，所述鏈具有由N-端非螺旋區(qū)、三螺旋(膠原的)區(qū)和C-端球狀頭組成的共同結構(Smith等人Biochem. J. 1994. 301 =249-256)。Clq參與宿主防御、 炎癥、細胞凋亡、自身免疫、細胞分化、器官發(fā)生、冬眠和胰島素抗性的肥胖癥。已經在Clq 家族中鑒別出5個嚴格保守的殘基(Kishore等人Trends in Immunology 2004. 25(10) 551-561)。每個Clq結構域表現出具有膠凍卷(jelly-roll)拓撲學的10鏈-夾心折疊， 其由2個5鏈β-折疊(A'、A、H、C、F)和(B'、B、G、D、E)組成，各自由反向平行鏈組成。 一般而言，Clq補體因子存在于動物的血清中，且對補體結合性抗體具有結合特異性和結合親和力，所述補體結合性抗體也存在于動物的血清中。Clq補體因子與補體結合性抗體的結合活化免疫系統(tǒng)的補體級聯(lián)?！白泽w的”是指源自相同患者樣品，作為另一個組分。例如，提及的自體Clq是指， 所述Clq存在于相同受試者樣品中，作為補體結合性抗體。“外源性的”是指不是天然地源自特定生物體的組分。例如，提及的外源性Clq是指，所述Clq源自不同于具有補體結合性抗體的受試者樣品的生物體或系統(tǒng)。本發(fā)明的“親和試劑”具有分析物結合域、部分或組分，其對靶分析物具有高結合親和力。高結合親和力是指至少約10_4M、通常至少約10、或更高、例如101或更高的結合親和力。親和試劑可以是多種不同類型的分子中的任一種，只要它表現出對靶蛋白的必要的結合親和力(當作為標記的親和配體存在時)。這樣，所述親和試劑可以是小分子或大分子配體。小分子配體是指大小范圍為從約50至約10，000道爾頓、通常從約50至約5，000道爾頓、更通常從約100至約1000道爾頓的配體。大分子配體是指分子量大小為約10，000道爾頓或更大的配體。特別感興趣的大分子親和配體是抗體及其結合片段和模仿物。在抗體是親和配體的情況下，它們可以源自多克隆組合物(使得存在特異性差異的抗體的異質群體各自用相同的標記核酸標記)或單克隆組合物(其中對靶蛋白具有相同特異性的相同抗體的同質群體各自用相同標記(例如，熒光團)來標記)。這樣，親和配體可以是單克隆、寡克隆和/或多克隆抗體。在其它實施方案中，親和配體是抗體結合片段或模仿物，其中這些片段和模仿物具有對靶蛋白的必要的結合親和力。例如，通過切割完整的蛋白，例如通過蛋白酶或化學切割，可以制備諸如Fv、(Fab’)2和Fab等抗體片段。也感興趣的是重組產生的抗體片段， 諸如單鏈抗體或scFv，其中這樣的重組產生的抗體片段保留上述抗體的結合特征。這樣的重組產生的抗體片段通常至少包括主題抗體的VH和VL結構域，從而保留主題抗體的結合特征。使用任意方便的方法，諸如在美國專利號5，851，829和5，965，371 (它們的公開內容通過引用并入本文)中公開的方法，可以容易地制備本發(fā)明的這些重組產生的抗體片段或模仿物。上述的抗體、其片段和模仿物可以從商業(yè)來源得到，和/或使用任意方便的技術制備，其中產生多克隆抗體、寡克隆抗體、單克隆抗體、其片段和模仿物(包括其重組衍生物.)的方法是本領域技術人員已知的?！氨砦弧笔侵柑囟˙細胞和T細胞對其做出應答的抗原上的部位。該術語也與 “抗原決定簇”或“抗原決定基”互換使用。一個表位可以在該表位獨有的空間構象中包含1個或多個氨基酸，諸如3個或更多個氨基酸。通常，一個表位包括至少5個這樣的氨基酸，且更常見地，由至少8-10個這樣的氨基酸組成。測定氨基酸的空間構象的方法是本領域已知的，且包括例如X-射線晶體學和2-維核磁共振。此外，使用本領域眾所周知的技術，可以容易地鑒別給定蛋白中的表位。參見，例如，Geysen等人，Proc. Natl. Acad. Sci.USA(1984)81 :3998-4002(general method of rapidly synthesizing peptides to determine the location of immunogenic epitopes in a given antigen)；美國專利
4,708,871 (procedures for identifying and chemically synthesizing epitopes of antigens)；禾口 Geysen 等人,Molecular Immunology (1986) 23 :709-715 (technique for identifying peptides with high affinity for a given antibody)。在證實一禾中抗體阻斷另一種抗體對靶抗原的結合能力的簡單免疫測定中，可以鑒別識別相同表位的抗體?！疤禺愋缘亟Y合”或“特異性的結合”是指抗體對特定抗原的高親合力(avidity)和 /或高親合力(affinity)結合?？贵w對在特定抗原上的它的表位的結合親合力(avidity) 和/或親和力(affinity)大于相同抗體對不同表位(尤其是作為特定目標抗原的可能存在于結合的分子中或相同樣品中的不同表位)的結合。但是，補體結合性抗體可以對不同目標抗原上的不同表位具有相同的或類似的親合力(avidity)和/或親和力(affinity)。 這樣，“特異性地結合”或“特異性的結合”無意從結合超過一種目標抗原中排除給定的補體結合性抗體。特異性地結合目標多肽的抗體可以能夠在弱的、仍然可檢測的水平(例如，對目標多肽表現出的結合的10%或更低)結合其它多肽。通過例如使用適當的對照，可以容易地將這種弱結合或背景結合與特定抗體對目標多肽的結合辨別開?！翱蓹z測地標記的配體”或“可檢測地標記的第二配體”是指具有連接的可檢測標記的配體，其中所述配體能特異性地結合其它化合物。配體的實例包括、但不限于，保留結合特異性的抗體或抗體片段。通過化學綴合，可以連接可檢測標記，但是在所述標記是多肽時，備選地通過基因工程技術來連接。用于產生可檢測地標記的蛋白的方法是本領域眾所周知的。可檢測標記可以選自多種本領域已知的這樣的標記，但是通常是放射性同位素、生色團、熒光團、熒光染料、酶(例如，辣根過氧化物酶)、接頭分子、或發(fā)射出可檢測信號(例如，放射性、熒光、顏色)或在所述標記暴露于它的底物后發(fā)射出可檢測信號的其它部分或化合物。不同的可檢測標記/底物對(例如，辣根過氧化物酶/ 二氨基聯(lián)苯胺、 抗生物素蛋白/抗生蛋白鏈菌素、螢光素酶/螢光素)、用于標記抗體的方法和使用標記的第二抗體來檢測抗原的方法，是本領域眾所周知的。[注參見，例如，Harlow和Lane， 編·(Antibodies :A Laboratory Manual (1988) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.)]。“直接標記的Clq”是指具有連接的可檢測標記的外源性Clq分子。通過化學綴合， 可以連接可檢測標記，但是在所述標記是多肽時，備選地通過基因工程技術來連接。用于產生可檢測地標記的蛋白的方法是本領域眾所周知的?？蓹z測標記可以選自多種本領域已知的這樣的標記，但是通常是放射性同位素、生色團、熒光團、酶(例如，辣根過氧化物酶)、接頭分子、或發(fā)射出可檢測信號(例如，放射性、熒光、顏色)或在所述標記暴露于它的底物后發(fā)射出可檢測信號的其它部分或化合物。不同的可檢測標記/底物對(例如，辣根過氧化物酶/ 二氨基聯(lián)苯胺、抗生物素蛋白/抗生蛋白鏈菌素、螢光素酶/螢光素)、用于標記抗體的方法和使用標記的第二抗體來檢測抗原的方法，是本領域眾所周知的。[注參見，例如，Harlow 禾口 Lane，編.(Antibodies :A Laboratory Manual(1988)Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N· Y·)]0當用于分離的化合物的上下文中時，本文使用的術語“分離的”是指處于這樣的環(huán)境中的目標化合物，所述環(huán)境不同于所述化合物天然存在的環(huán)境。“分離的”意在包括這樣的化合物，其在大量富含目標化合物的樣品中，和/或其中所述目標化合物部分地或基本上被純化。術語“分離的”包括這樣的情況，其中化合物不伴有至少一些在它的天然狀態(tài)通常伴有的物質。例如，關于多肽，術語“分離的”通常是指這樣的氨基酸分子，其缺少(全部或一部分)它在自然界中通常伴有的序列；或指序列，如它在自然界中存在的，但是具有與它伴隨的異源序列。本文使用的“純化的”是指，所述物質包含至少約75% (按重量計算)的總蛋白， 至少約80%是優(yōu)選的，且至少約90%是特別優(yōu)選的。本文使用的術語“基本上純的”是指從它的天然環(huán)境取出的化合物，且至少60%、優(yōu)選75%和最優(yōu)選90%缺少天然伴隨它的其它組分。本文使用的“生物樣品”是指從受試者分離的組織或流體樣品，其在本發(fā)明的背景下，通常是指疑似含有抗-AgI補體結合性抗體的樣品，該樣品在任選的加工后，可以在體外試驗中分析。典型的目標樣品包括、但不一定限于，血液、血漿、血清、血細胞、尿、唾液和粘液。樣品也包括體外細胞培養(yǎng)組分的樣品，包括但不限于在培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞和組織得到的條件培養(yǎng)基，例如，重組細胞和細胞組分。本文使用的術語“人白細胞抗原系統(tǒng)”或“HLA”是指主要組織相容性復合物，其跨染色體6的短臂上的大約350萬個堿基對。它可分成3個單獨的區(qū)域，它們包含I類、II 類、和III類基因。在人類中，I類HLA復合物的長度是約20001Λ，且含有約20個基因。在 I類區(qū)域中存在編碼確定地表征的I類MHC分子的基因，命名為HLA-A、HLA-B和HLA-C。另外，存在非經典的I類基因，它們包括HLA-E、HLA-F, HLA-G, HLA-H、HLA-J和HLA-X以及稱作MIC的新家族。II類區(qū)域含有稱作HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR基因座的3個基因。這些基因編碼命名為HLA-DR、DP和DQ的經典II類MHC分子的α和β鏈。在人類中，還在II 類中鑒別出命名為DM、DN和DO的非經典的基因。III類區(qū)域含有超過36個基因的異質集合。本文使用的“純化的HLA亞型”是指在下面的表中所述的HLA亞型的基本上純化的抗原。當關于用“不同的HLA亞型”包被的微珠使用時，是指每個微珠群體包被有不同的 HLA抗原亞型。本文使用的“HLA抗原群體”是指在任意一個集合中發(fā)現的特定HLA抗原群體，其可以是天然存在的或非天然存在的，諸如在一個特定的細胞或組織類型中。本文使用的“正常人群體中的HLA分布”是指在正常人群體中發(fā)現的特定HLA抗原群體，諸如在一個特定的細胞或組織類型或個體中。術語“評估”包括任意形式的測量，且包括測定元件是否存在。術語“測定”、“測量”、“評價”、“評估”和“試驗”互換使用，且包括定量和定性測定。評估可以是相對的或絕對的?！霸u估……的存在”包括，測定存在的某物的量，和/或測定它是否存在。本文使用的術語“測定”、“測量”、“評估”和“試驗”互換使用，且包括定量和定性測定。術語“固體基質”是指在其上面可以固定化抗原和/或抗體的固體支持物。示例性的固體基質包括多孔平板、膜(包括硝酸纖維素膜和聚乙烯膜)、細胞和細胞膜、珠子、微粒、微球和微珠。本發(fā)明的方法可以用任意材料的微粒、微球、微珠或珠子實現，例如硅石， 金，乳膠，諸如聚苯乙烯、聚砜、聚乙烯或水凝膠等的聚合物。另外，微粒、微球、珠子或微珠可能是磁性的。進一步指出，可以撰寫權利要求來排除任意的任選要素。這樣，該陳述意在用作關于權利要求要素的陳述所使用的諸如“唯一”、“僅”等排它性術語或“陰性”限制的使用的前提基礎。
具體實施例方式本發(fā)明提供了用于使用補體因子Clq靈敏且特異性地檢測生物樣品中的補體結合性抗體的方法，所述補體因子Clq包括在生物樣品中存在的自體補體因子Clq和結合自體補體因子Clq的可檢測地標記的抗體、外源性人補體因子Clq和結合外源性人補體因子 Clq的可檢測地標記的抗體、可檢測地標記的外源性人補體因子Clq、或自體補體因子Clq 和外源性人補體因子Clq的組合。本發(fā)明也表征了用于本發(fā)明方法中的試劑盒、系統(tǒng)和裝置。在描述本發(fā)明之前，應當理解，本發(fā)明不限于所述的特定實施方案，因為它們當然可以變化。還應當理解，本文使用的術語僅僅是用于描述特定實施方案的目的，無意進行限制，因為本發(fā)明的范圍僅由所附的權利要求書限定。在提供值的范圍的情況下，應當理解，也具體地公開了在該范圍的上限和下限之間的每個插入值(在下限單位的十分之一內，除非上下文另有明確指示)。在任意所述值或在所述范圍內的插入值與任意其它所述值或在所述范圍內的插入值之間的每個更小的范圍，也被包括在本發(fā)明內。在該范圍中可以獨立地包括或排除這些更小的范圍的上限和下限，且在本發(fā)明內還包括這樣的每個范圍，其中兩個、任一個、或沒有邊界值被包含在更小的范圍內，這適用于所述范圍中的任意特別排除的邊界值。在所述范圍包括邊界值之一或二者時，在本發(fā)明內還包括這樣的每個范圍，其排除那些邊界值之一或二者。除非另有定義，在本文中使用的所有技術和科學術語具有與本發(fā)明所屬領域的普通技術人員通常理解相同的含義。盡管與本文所述那些類似或等效的任意方法和材料可以用于實踐或測試本發(fā)明，現在描述一些可能的和優(yōu)選的方法和材料。本文提及的所有出版物都通過引用并入本文，以公開和描述所述出版物引用的方法和/或材料。應當理解，在存在矛盾的情況下，本公開內容替代并入的出版物的任意公開內容。必須指出，如在本文中和在所附的權利要求書中所使用的，單數形式“一個”、“一種”和”該”包括復數指示物，除非上下文另有明確指示。因而，例如，提及的“細胞”包括多個這樣的細胞，提及的“該化合物”包括一種或多種化合物和本領域技術人員已知的其等效物，以此類推。本文討論的出版物僅因為它們在本申請的提交日之前的公開而提供。本文中的任何內容都不應當解釋為承認，本發(fā)明因為先前發(fā)明而在這些出版物之前沒有獲得資格。此外，提供的出版物的日期可能不同于實際的出版日，后者可能需要獨立地確認。檢測方法如上面所總結的，本發(fā)明提供了測定生物樣品中是否存在補體結合性抗體的方法。本發(fā)明的方法使用補體因子Clq(例如自體的或外源性的)來鑒別在相同生物樣品中存在的特異性地結合目標抗原的補體結合性抗體。所述方法通常包括，使其上面固定有目標抗原(AgI)的固相支持物接觸疑似含有特異性地結合目標抗原的補體結合性抗體的生物樣品。如果存在，所述補體結合性抗體會特異性地結合固定化在固相支持物上的抗原，且Clq會結合所述補體結合性抗體。然后通過使固相支持物接觸特異性地結合結合的Clq的可檢測地標記的抗-Clq抗體，可以測定 Clq結合?；蛘撸梢栽谠囼炛惺褂弥苯訕擞浀腃lq，且可以直接地測量該直接標記的Clq 的結合，無需使用可檢測地標記的抗-Clq抗體。所述生物樣品通常包括非-補體結合性抗體以及補體結合性抗體。本發(fā)明的一個優(yōu)點是，它可以區(qū)分兩種不同的抗體，無論是通過使用在相同樣品中存在的Clq，還是通過使用外源性Clq。通過使用在相同樣品中存在的Clq，所述試驗提供有關的補體結合性抗體的靈敏且特異性的檢測，這在使用異源的Clq(諸如源自兔血清的Clq)時不會發(fā)生。容易明白，本文所述的試驗的設計可以進行大量變化，且許多形式是本領域已知的。下面的描述僅僅作為指導而提供，使用本領域眾所周知的技術，本領域技術人員可以容易地改進所述方案。目標抗原(AgI)能引起抗體的抗原或抗原決定簇適用于本發(fā)明中。這樣的抗原或抗原決定簇可以是，例如，源自正常人[例如，人白細胞抗原(HLA)]、細菌、病毒、寄生物或真菌來源、或者異常組織(諸如腫瘤抗原)的那些。抗原通常是可以針對它產生抗體的任意分子，包括需要佐劑的存在或與另一種分子綴合以誘導抗體形成的分子。抗原可以是肽或蛋白、碳水化合物、核酸或脂質。術語“抗原”也包括天然存在的分子的一部分，例如，蛋白的亞基、或含有功能結構域或生物學相關基序的蛋白片段。合適的抗原包括但不限于，細胞周期相關蛋白、 組織特異性蛋白、腫瘤標志物、細胞因子、主要組織相容性復合蛋白、熱休克蛋白和病原體相關蛋白(其中病原體可能是細菌、病毒、真菌、原生動物、多細胞寄生物或朊病毒)、以及與輸血抗原和組織分型有關的碳水化合物殘基、脂多糖、鞘脂類等。示例性的抗原是引發(fā)保護動物免于疾病的免疫應答的那些。這種抗原的實例包括但不限于原生動物寄生物抗原、 蠕蟲寄生物抗原、外寄生物抗原、真菌抗原、細菌抗原和病毒抗原。病毒抗原的實例包括源自下述的抗原，諸如乙型肝炎病毒(HBV)，人免疫缺陷病毒(HIV)、流感病毒A型、埃巴病毒(EBV)、單純皰疹病毒(HSV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、 人巨細胞病毒(HCMV)、水痘帶狀皰疹病毒(VZV)和麻疹病毒。細菌抗原的實例包括、但不限于來自下述的抗原放線菌屬、桿菌屬、擬桿菌屬、博德特菌屬(Bordetella)、巴爾通體屬(Bartonella)、疏螺旋體屬(Borrelia)、布魯桿菌屬(Brucella)、彎曲桿菌屬、 二氧化碳噬纖維菌屬(Capnocytophaga)、梭菌屬、棒桿菌屬、考克斯體屬(Coxiel la)、 嗜皮菌屬、腸球菌屬、埃里希體屬、埃希氏菌屬、弗朗西絲菌屬、梭桿菌屬、血巴爾通體屬 (Haemobartonella)、螺桿菌屬、克雷伯菌屬、L型細菌、鉤端螺旋體屬、利斯特菌屬、分枝桿菌屬、支原體屬、新立克次氏體屬、諾卡爾菌屬、巴斯德菌屬、消化球菌屬、消化鏈球菌屬、 變形桿菌屬、假單胞菌屬、立克次氏體屬、羅克利馬體菌屬(Rochalimaea)、沙門菌屬、志賀菌屬、葡萄球菌屬、鏈球菌屬和耶爾森菌屬。真菌抗原的實例包括、但不限于來自下述的抗原犁頭霉屬、支頂孢屬、鏈格孢屬、曲霉菌屬、蛙糞霉菌屬(Basidiobolus)、雙極霉屬、 芽生菌屬、念珠菌屬、衣原體屬、球孢菌屬、耳霉屬、隱球菌屬、彎孢屬(Curvalaria)、表皮癬菌屬、外小杯菌(Exophiala)、地絲菌屬、組織胞漿菌屬、馬杜拉分枝菌屬、馬拉色霉菌屬 (Malassezia)、小孢子菌屬、小叢梗孢屬、被孢霉菌、毛霉菌屬、擬青霉屬、青霉屬、單胞瓶霉屬、瓶霉屬、原壁菌屬、假霉樣真菌屬(Pseudallescheria)、假小托菌屬、腐霉菌屬、鼻孢子菌屬、根霉菌屬、線狀擔子菌屬、孢子絲菌屬、匍柄霉屬、發(fā)癬菌屬、毛孢子菌屬和木絲霉屬。原生動物和蠕蟲寄生物抗原的實例包括、但不限于來自下述的抗原巴貝蟲屬、小袋蟲屬、貝諾孢子蟲屬(Besnoitia)、隱孢子蟲屬、艾美球蟲屬、腦炎微孢子蟲屬、內阿米巴屬、賈第蟲屬、哈蒙德蟲屬、肝簇蟲屬、等孢子球蟲屬、利什曼原蟲屬、微孢子屬、新孢子蟲屬、微粒子蟲屬、五鞭毛滴蟲屬、瘧原蟲屬、肺孢子蟲屬(Pneumocystis)、肉孢子蟲屬、血吸蟲屬、泰勒蟲屬、弓形蟲屬和錐蟲屬、棘唇線蟲屬、貓圓線蟲屬、鉤蟲屬、管圓線蟲屬、蛔蟲屬、布魯絲蟲屬、仰口線蟲(Bimostomum)、毛細線蟲屬、夏柏特線蟲屬、古柏線蟲屬、環(huán)體線蟲屬、網尾線蟲屬、膨結線蟲屬、棘唇屬、裂頭屬、復孔絳蟲屬、惡絲蟲屬、龍線蟲屬、蟯蟲屬、類絲蟲屬、 血矛線蟲屬、兔唇蛔屬、羅阿絲蟲屬、曼森線蟲屬、繆勒線蟲屬、侏形吸蟲屬、板口線蟲屬、細頸線蟲屬、結節(jié)線蟲屬、盤尾絲蟲屬、后睪吸蟲屬、胃線蟲屬、副絲蟲屬、并殖吸蟲屬、副蛔蟲屬、泡翼屬線蟲、原圓線蟲屬、腹腔絲蟲屬、旋尾線蟲屬、迭宮絳蟲屬、冠絲蟲屬、類圓線蟲屬 (Strongyloides)、圓線蟲屬、吸吮線蟲屬、弓蛔線蟲屬、弓蛔蟲屬、毛線蟲屬、毛圓線蟲屬、 鞭蟲屬、鉤蟲屬和吳策線蟲屬。外寄生物抗原的實例包括、但不限于來自下述的抗原(包括保護性抗原以及變應原)蚤；蜱，包括硬蜱和軟蜱；蠅類，諸如蠓、蚊子、沙蠅、黑蠅、馬蠅、 角蠅、鹿蠅、采采蠅、廄蠅、蠅蛆病致病蠅和咬蚊；螞蟻；蜘蛛、虱；螨；和真蟲，諸如臭蟲和接吻蟲。 示例性的抗原包括、但不限于杯狀病毒抗原、冠狀病毒抗原、皰疹病毒抗原、免疫缺陷病毒抗原、傳染性腹膜炎病毒抗原、白血病病毒抗原、貓泛白細胞減少癥 (panleukopenia)病毒抗原、細小病毒抗原、狂犬病病毒抗原、巴爾通體屬抗原、耶爾森菌屬抗原、惡絲蟲屬抗原、弓形蟲屬抗原、腫瘤抗原、蚤抗原、跳變應原、蠓抗原、蠓變應原、螨抗原和螨變應原。特別優(yōu)選的抗原包括狂犬病毒糖蛋白G抗原；心絲蟲PLA2、P39、P4、P22U、 Gp^、蝦紅素、半胱氨酸蛋白酶、巨噬細胞遷移抑制因子、毒液變應原、ΤΡΧ-1、ΤΡΧ-2、轉谷氨酰胺酶、錨蛋白和天冬酰胺酶抗原；蚤絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、氨肽酶、絲氨酸蛋白酶抑制劑、羧酸酯酶、保幼激素酯酶和環(huán)氧化物水解酶抗原；蚤唾液抗原；耶爾森菌屬Fl和V抗原；和剛地弓形蟲抗原。在本發(fā)明中使用的抗原可以是通過基因重組方法產生的抗原，或是基于通過基因重組測定的基因序列或肽序列而化學合成的抗原。因而，通過下述方式制備重組抗原用酶等處理已知的基因組序列或通過使用基因重組技術從天然病毒或細胞的分子克隆得到的 DNA序列，或進行化學合成，并由微生物、動物、植物、昆蟲等表達得到的DNA序列或修飾的 DNA序列，以得到重組抗原；或通過下述方式制備肽或修飾的肽稱作液相方法的肽化學合成，或使用上述信息的固相方法。肽的固相合成方法通常以有利的方式通過自動化的肽合成儀器來實現。預吸附在有些實施方案中，任選地首先使生物樣品接觸交叉反應性抗原。一般而言，使生物樣品接觸交叉反應性抗原，會導致生物樣品中交叉反應性抗體的清除，同時還未清除抗-AgI (目標抗原)特異性的補體結合性抗體，其如果存在，以可檢測水平(例如，通過使用試驗來檢測本文所述的特定抗-AgI特異性的補體結合性抗體)保留在樣品中。因此，用于接觸生物樣品的交叉反應性抗原通常不包含將要用于檢測預吸附的生物樣品中是否存在抗-AgI特異性的補體結合性抗體的AgI。接觸可以如下完成，例如，使生物樣品接觸一種或多種本文所述的交叉反應性抗原?？梢栽谶B續(xù)的步驟中，使生物樣品接觸交叉反應性抗原，然后接觸具有固定化的AgI的特定固體支持物。在有些實施方案中，在檢測樣品中的特定抗-AgI特異性的補體結合性抗體之前，使生物樣品接觸根據本發(fā)明的交叉反應性抗原，以從樣品中“預吸附”非特異性的抗體。除非另有特別指出，本文使用的“預吸附”不一定表示，首先使生物樣品接觸交叉反應性抗原，然后使樣品接觸AgI，而是表示，直到樣品已經暴露于交叉反應性抗原之后，才檢測特定抗-AgI特異性的補體結合性抗體。樣品制備在主題方法的實踐中，測定來自受試者的樣品中抗-AgI特異性的補體結合性抗體的存在。在有些實施方案中，測定的樣品是這樣的樣品，它是或源自含有特異性地結合 AgI的補體結合性抗體的任意最初來源。在其它實施方案中，所述樣品是含有不足補體的任意最初來源或從其得到。這樣的樣品包括，其中已經通過熱滅活來破壞補體或Clq的那些樣品，和其中外源性地供給Clq的那些樣品。因此，合適的樣品來源源自這樣的流體，已經向其中釋放了特異性地結合AgI的補體結合性抗體。感興趣的樣品來源包括、但不限于許多不同的體液，尤其是血液或血液制品，例如，血清、血漿和全血、血細胞和尿。樣品體積可以是與特定測定形式相容的任意體積。在有些實施方案中，在測定特異性地結合AgI的補體結合性抗體是否存在之前，在合適的溶液中稀釋樣品。一般而言，適用于稀釋生物樣品的溶液包括緩沖液，諸如磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)，且可以包括額外的物質，例如，非特異性的阻滯劑諸如牛血清白蛋白(BSA)、去污劑諸如Triton-X-IOO等。適用于試驗的對照樣品包括、但不限于從不具有抗-AgI特異性的補體結合性抗體的人受試者收集的血液、血清、全血或尿(即，陰性對照)，或含有已知的、預定量的抗-AgI特異性的補體結合性抗體的樣品(即，陽性對照)。在許多實施方案中，人樣品的合適的最初來源是血液樣品。這樣，在主題試驗中采用的樣品通常是血液衍生的樣品。血液衍生的樣品可以源自全血或其級分，例如，血清、血漿等，其中在某些實施方案中，樣品源自允許凝結的血液，并分離和收集血清，以用于試驗。在其中樣品是血漿、血清或血清-衍生的樣品的實施方案中，所述樣品通常是流體樣品?？梢圆捎糜糜诋a生流體血清樣品的任意方便的方法。在許多實施方案中，所述方法通過皮膚穿刺(例如，手指針刺、靜脈穿刺術)將靜脈血抽入凝固管或血清分離器管，允許血液凝結，并從凝結的血液中離心出血清。然后收集和儲存血清直到試驗。類似地，可以如下從患者收集血漿樣品把靜脈血抽入試管中，并離心血液，使血細胞聚集在試管底部。然后可以收集和儲存樣品的液體部分(它是血漿)直到試驗。得到患者-衍生的樣品后，對樣品進行試驗，以測定抗-AgI特異性的補體結合性抗體的存在?？梢砸远喾N方式處理受試者樣品，從而增強抗-AgI特異性的補體結合性抗體的存在的檢測。例如，在樣品是血液的情況下，在試驗之前，可以從樣品去除紅血細胞(例如， 通過離心)。通過使用本領域眾所周知的規(guī)程(例如酸沉淀、醇沉淀、鹽沉淀、疏水沉淀、過濾(使用能保留大于30kD的分子的過濾器，例如Centrim 30 )、親和純化)來濃縮樣品， 也可以增強抗-AgI特異性的補體結合性抗體的存在的檢測。試驗形式固體支持物固定化的AgI在本文中用作診斷劑，以檢測生物樣品中是否存在反應性的抗-AgI特異性的補體結合性抗體。典型地，所述試驗通常包含，將液相中未結合的抗體與抗原-補體結合性抗體復合物結合的固相支持物分離。該試驗一般地描述在圖1、圖 2和圖3中(關于基本上平坦的固體支持物(例如，膜或微量滴定孔形式))和在圖4、圖5 和圖6中(關于微珠固體支持物)?？梢杂糜趯嵺`本發(fā)明的固體支持物包括基質諸如硝酸纖維素(例如，以膜或微量滴定孔形式)；聚氯乙烯(例如，片層或微量滴定孔)；聚苯乙烯； 乳膠(例如，珠子、微珠、微粒、微球或微孔滴定板)；聚偏氟乙烯；重氮化的紙；尼龍膜；聚乙烯膜，活化的珠子，磁性反應珠子，細胞和細胞膜等。在有些實施方案中，在試驗之前，在合適的溶液中稀釋生物樣品。一般而言，適用于稀釋生物樣品的溶液包括緩沖液，諸如磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)，且可以包括額外的物質， 例如，非特異性的阻滯劑諸如牛血清白蛋白(BSA)、去污劑諸如Triton-X-IOO等。一般而言，首先在合適的結合條件下，使固體支持物與液相組分(例如，一種或多種特定的目標抗原(AgI))反應，使得所述組分充分固定化在支持物上。任選地，通過首先將AgI偶聯(lián)到具有更好結合性質的蛋白上，可以增強抗原向支持物上的固定化。合適的偶聯(lián)蛋白包括、但不限于大分子諸如包括牛血清白蛋白(BSA)在內的血清白蛋白、鑰孔戚血藍素、免疫球蛋白分子、甲狀腺球蛋白、卵白蛋白和本領域技術人員眾所周知的其它蛋白。 可以用于將抗原結合到支持物上的其它分子包括多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合的氨基酸、 氨基酸共聚物等。這樣的分子和將這些分子偶聯(lián)到AgI上的方法，是本領域普通技術人員眾所周知的。參見，例如，Brinkley, M. A. Bioconjugate Chem. (1992)3 :2_13 ；Hashida 等人，J. Appl. Biochem. (1984)6 :56-63 ；禾口 Anjaneyulu 禾口 Staros, International J. of Peptide and Protein Res. (1987)30:117—124。在使固體支持物接觸AgI后，通過洗滌，從支持物去除任意未固定化的Agl。然后在合適的結合條件下，使支持物結合的AgI接觸疑似含有抗-AgI補體結合性抗體的生物樣品。如果存在，所述補體結合性抗體會特異性地結合固定化的AgI。在樣品中存在的Clq (例如自體的或外源性的)會結合補體結合性抗體，所述補體結合性抗體結合在固定化在固相支持物上的AgI上。在樣品中存在的Clq可以是來自生物樣品自身的自體Clq，或可以是外源性Clq。在有些實施方案中，然后通過使固相支持物接觸特異性地結合Clq的可檢測地標記的抗-Clq抗體，來測定結合的Clq。然后可以使用本領域眾所周知的技術，檢測可檢測地標記的抗-Clq抗體的存在。在有些實施方案中，以連續(xù)的方式進行測定，首先使固相支持物接觸含有抗-AgI 補體結合性抗體和Clq的生物樣品，然后使固相支持物接觸可檢測地標記的抗-Clq抗體。 該方案如圖1所述。在其它實施方案中，使固相支持物同時接觸生物樣品和可檢測地標記的抗-Clq抗體。該方案如圖2所述。在有些實施方案中，在試驗中使用可檢測地標記的外源性Clq。在這樣的實施方案中，使固相支持物同時接觸目標樣品和可檢測地標記的外源性Clq。然后使用本領域眾所周知的技術，檢測結合的Clq。該方案如圖3所述。更具體地，在有些實施方案中，可以使用ELISA方法，其中微孔滴定板的孔包被有特定AgI (例如，特定AgI被固定化在表面上)。然后將含有或疑似含有抗-AgI補體結合性抗體和Clq (例如自體的或外源性的)的樣品加入包被的孔中。任選地，使用樣品或其等分試樣作為對照，可以平行地測定一系列含有已知濃度的抗-AgI補體結合性抗體的標準品。 通常，約0. 001至Iml樣品(稀釋的，或以其它方式得到)是足夠的，通常約0. Olml會滿足需要。此外，在某些實施方案中，將每個樣品和標準品加入多個孔中，從而可以得到各自的平均值。將實驗和對照樣品各自與固體支持物一起溫育足以發(fā)生抗體與抗原結合的時間。 通常，約0. 1至3小時是足夠的，通常1小時會滿足需要。在足以允許抗體結合固定化的Agl、和在樣品中存在的Clq結合補體結合性抗體 (其結合在固定化的AgI上)的溫育時段后，可以任選地洗滌平板，以去除未結合的抗體。 通常，在適當PH(通常7-8)的稀釋的非離子型去污劑介質可以用作洗滌介質。在洗滌步驟中可以使用等滲緩沖液，諸如磷酸鹽緩沖鹽水。在某些實施方案中，在試驗過程中不進行洗滌。在一個替代實施方案中，首先使含有或疑似含有抗-AgI補體結合性抗體的生物樣品接觸溶液中的交叉反應性抗原，以提供預吸附的混合物。在足以允許抗體結合交叉反應性抗原的溫育時段后，然后將含有“殘余”抗體的預吸附的混合物加入到用特定AgI包被的微孔滴定板的孔中。在足以允許來自預吸附的混合物的“殘余”抗-AgI補體結合性抗體結合固定化的Agl、和在樣品中存在的Clq(例如自體的或外源性的)結合補體結合性抗體 (其結合在固定化的AgI上)的溫育時段后，可以任選地洗滌平板，以去除未結合的抗體。 在某些實施方案中，不進行洗滌。加入可檢測地標記的第二結合分子，其結合結合在補體結合性抗體上的Clq。允許第二結合分子與結合抗-AgI補體結合性抗體(例如，與固定化在表面上的特定AgI抗原結合的補體結合性抗體)的任意Clq(例如自體的或外源性的)反應，任選地洗滌平板，并使用本領域眾所周知的方法檢測第二結合分子的存在。因而，在一個具體實施方案中，使用包含針對自體Clq的抗體的第二結合物，可以容易地檢測來自生物樣品的結合的抗-AgI補體結合性抗體和自體Clq的存在。在另一個實施方案中，使用包含直接標記的外源性Clq的第二結合物，可以容易地檢測來自生物樣品的結合的抗-AgI補體結合性抗體的存在。許多抗-人Clq分子是本領域已知的(例如， 可商業(yè)得到的山羊抗-人Clq、綿羊抗-人Clq等)，它們可以容易地綴合到可檢測標記上，
19以促進自體或外源性Clq的直接或間接檢測。允許直接測量免疫復合物的標記的實例包括放射性標記，諸如％或1251、熒光團、染料、珠子、化學發(fā)光劑、膠體顆粒等。允許間接測量結合的標記的實例包括酶，其中底物可以提供有色的或熒光的產物?？梢灾苯拥?例如放射性同位素)或通過結合一種或多種額外的分子(例如結合到標記的抗體上的表位)檢測標記。根據本發(fā)明可以使用的熒光化合物的非限制性實例包括熒光染料諸如熒光素(FITC) 或Alexa 488,Cy 3或Cy 5和綠熒光蛋白、以及藻紅蛋白(PE)PE_Cy5、PerCP、ECD等。在有些實施方案中，所述抗體被共價結合的酶標記，在加入合適的底物后，所述酶能提供可檢測的產物信號。適用于綴合物中的酶的實例包括辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、蘋果酸脫氫酶等。當不可商業(yè)得到時，通過本領域技術人員已知的技術，可以容易地產生這樣的抗體-酶綴合物。在這樣的試驗中，可檢測地標記的抗-Clq抗體或直接標記的Clq的濃度通常是約 0. 1至500 μ g/ml，諸如約150 μ g/ml。含有可檢測地標記的抗-Clq抗體的溶液通常被緩沖至約pH 6. 5-9. 5的范圍。溫育時間應當足以使可檢測地標記的抗-Clq抗體結合可得到的自體或外源性Clq。通常，約0.1至3小時是足夠的，通常40分鐘會滿足需要。在已經清除非特異性地結合的物質后，通過常規(guī)方式，檢測由結合的可檢測地標記的抗-Clq抗體生成的信號。例如，當所述可檢測標記是熒光化合物時，使用流式細胞術或其它類似的技術，諸如Luminex xMap系統(tǒng)，可以檢測標記的存在。當使用酶綴合物時，提供適當的酶底物，從而形成可檢測的產物。更具體地，當過氧化物酶是選擇的酶綴合物時，優(yōu)選的底物組合是H2A 和0-苯二胺，其在適當的反應條件下產生有色的產物。適用于其它酶綴合物(諸如上面公開的那些)的底物是本領域技術人員已知的。合適的反應條件以及用于檢測不同的有用綴合物或它們的產物的裝置，也是本領域技術人員已知的。例如，對于底物0-苯二胺的產物， 使用分光光度計方便地測量在490-495nm的吸光度。也可以在溶液中進行試驗，使得在生物樣品中存在的AgI和抗體在沉淀條件下形成復合物。在一個具體實施方案中，使用本領域已知的偶聯(lián)技術，諸如通過直接化學偶聯(lián)或間接偶聯(lián)，可以將特定AgI固定化在固相顆粒(例如，瓊脂糖珠、乳膠珠等)上。然后在合適的結合條件下，使AgI-包被的顆粒和游離的交叉反應性抗原(例如，未固定化在固相顆粒上)接觸疑似含有抗-AgI補體結合性抗體的生物樣品。結合的抗-AgI補體結合性抗體和Clq(例如，自體或外源性的)之間的交聯(lián)，造成顆粒-抗原-抗體復合物聚集體的形成， 使用洗滌和/或離心，可以將所述聚集體從樣品中沉淀和分離出來。使用許多標準方法中的任一種，諸如上述的那些免疫診斷方法，包括使用可檢測地標記的抗-Clq抗體，可以分析反應混合物，以測定抗體-抗原復合物是否存在。在另一個實施方案中，可以將特定AgI固定化在第一固相顆粒(例如，瓊脂糖珠等)上，并可以將交叉反應性抗原固定化在第二固相顆粒(例如，磁珠)上，其中第一固相顆粒和第二固相顆粒是不同的。在這樣的實施方案中，然后在合適的結合條件下，使交叉反應性抗原-包被的顆粒和特定AgI-包被的顆粒接觸疑似含有抗-AgI補體結合性抗體的生物樣品。然后可以從樣品分離顆粒-交叉反應性抗原-抗體復合物。例如，在將交叉反應性抗原結合到第一顆粒(諸如磁性珠)上的情況下，使用許多標準方法中的任一種，可以從溶液分離顆粒-交叉反應性抗原-抗體復合物。然后可以使用上述方法，分析反應混合物， 以測定是否存在補體結合性抗體-特定AgI抗原復合物。
在另一個實施方案中，使用本發(fā)明診斷感染(例如，細菌或病毒)的方法包括，用于檢測樣品中是否存在抗-AgI補體結合性抗體的試驗裝置的應用，其通過下述進行首先任選地使樣品接觸交叉反應性抗原，以去除會與特定AgI交叉反應的任意抗體，然后使樣品接觸特定Agl，以結合樣品中的任意抗-AgI補體結合性抗體。在這樣的實施方案中，所述試驗裝置至少包含樣品施用區(qū)、預吸附區(qū)和檢測區(qū)，且由能傳導流體流動的膜(諸如硝酸纖維素膜條)組成。任選地，所述膜可以提供在剛性的或半剛性的支持表面上，該支持表面諸如聚乙烯條。在代表性的實施方案中，所述預吸附區(qū)插入在樣品施用區(qū)和檢測區(qū)之間。 所述區(qū)域的位置可以使得，流體沿著膜的側向流造成樣品的所有組分首先接觸預吸附區(qū)， 然后接觸檢測區(qū)。這樣，通過跨膜的毛細管作用，促進沿著膜從樣品施用區(qū)向預吸附區(qū)、然后向檢測區(qū)的流體流動。示例性的側向流試驗裝置和使用側向流試驗裝置的檢測方法提供在例如美國專利號6，146，589中，其公開內容通過引用并入本文。在代表性的實施方案中，將交叉反應性抗原固定化在預吸附區(qū)中，并將特定AgI 固定化在檢測區(qū)中。通過首先將樣品加入樣品施用區(qū)，并通過跨膜條的毛細管作用使樣品遷移，檢測抗-AgI補體結合性抗體是否存在。隨著樣品跨膜條遷移，樣品首先接觸預吸附區(qū)中的固定化的交叉反應性抗原，以提供預吸附的樣品。預吸附的樣品然后遷移至檢測區(qū)， 在這里接觸固定化的特定Agl。如果存在，抗-AgI補體結合性抗體特異性地結合固定化的 Agl，且Clq(例如，自體或外源性的)然后特異性地結合結合的抗-AgI補體結合性抗體。然后可以如上所述，使可檢測地標記的抗-Clq抗體接觸檢測區(qū)，以檢測Clq和抗-AgI補體結合性抗體復合物的存在。使可檢測地標記的抗-Clq抗體分子與任意捕獲的樣品Clq反應， 并使用上述的和本領域眾所周知的方法，檢測第二結合分子的存在。在任意上述實施方案中，可以采用1-6次洗滌，使用足夠的體積，以徹底洗掉存在的任意非特異性地結合的蛋白或其它分子。試劑盒也提供了可用于實踐上述主題方法的試劑盒。用于實踐主題方法的試劑盒至少包括用于測定源自人受試者的樣品中是否存在抗-AgI補體結合性抗體的試劑，其中這樣的試劑盒可以包括特定AgI和/或包含特定AgI的免疫測定裝置、可檢測地標記的抗-Clq 抗體、直接標記的外源性Clq、以及信號產生系統(tǒng)的成員(諸如酶底物)等；用于實現主題檢測試驗的不同緩沖液；用于測定樣品中是否存在抗-AgI補體結合性抗體的參比物；等。在有些實施方案中，所述組合物提供在適用于稀釋生物樣品的溶液中。一般而言， 適用于稀釋生物樣品的溶液包括緩沖液諸如磷酸鹽緩沖鹽水(PBQ，且可以包括額外的物質，例如，非特異性的阻滯劑諸如牛血清白蛋白(BSA)、去污劑諸如Triton-X-IOO等。所述試劑盒可以另外包括一種或多種可以用于制備患者衍生出的樣品的試劑，諸如肝素、聚蔗糖-泛影葡胺、裂解緩沖液、蛋白酶抑制劑等。另外，主題試劑盒可以另外包括一種或多種用于樣品分級的組分，諸如電泳介質或其前體，例如聚丙烯酰胺凝膠的干燥前體，一種或多種緩沖介質或其組分等。在某些實施方案中，所述試劑盒另外至少包括含有參照數據的信息儲存和呈現介質，試驗結果可以與所述參照數據對比，以便診斷感染，例如，與上述的特異性地結合源自細菌或病毒來源的目標抗原的抗-AgI補體結合性抗體的存在正相關或負相關的參照數據。所述信息儲存和呈現介質可以是任意方便的形式，諸如在包裝插頁上的打印信息，存在于電子儲存介質(例如磁盤、CD-ROM)上的電子文件，等。在其它實施方案中，所述試劑盒可以包括用于得到參照數據的替代方式，例如用于“在線”得到參照數據的網站。所述試劑盒可以另外包括用于得到患者樣品的工具，例如注射器。主題試劑盒通常另外包括關于實現主題方法的說明書，其中這些說明書可以存在于包裝插頁上和/或試劑盒的包裝上。最后，所述試劑盒可以另外包括一種或多種來自其它生化試驗的試劑，所述其它生化試驗用于檢測抗-AgI補體結合性抗體的存在。所述試劑盒組分可以存在于單獨的容器中，或一種或多種組分可以存在于相同的容器中，其中容器可以是儲存容器和/或在試劑盒的預期試驗中使用的容器。驢也提供了可用于實踐上述主題方法的裝置。用于實踐主題方法的裝置至少包括用于測定源自人受試者的樣品中是否存在抗-AgI補體結合性抗體的試劑，其中這樣的裝置可以包括固定化在固體支持物表面上的特定AgI和任選的交叉反應性抗原，該固體支持物諸如微孔滴定板或微珠，諸如瓊脂糖或乳膠珠子。在某些實施方案中，給微孔滴定板提供獨特的Agl，其固定化在平板的每個孔的表面上。在其它實施方案中，給微孔滴定板提供相同的Agl，其固定化在平板的一個或多個孔的表面上。在某些實施方案中，給微珠群體提供Agl，其固定化在微珠群體的表面上。在某些實施方案中，給微珠群體提供獨特的Agl，其固定化在微珠的每個亞群體的表面上。例如， 提供微珠群體，其包括10個亞群體，其中每個亞群體包括一種獨特的固定化的Agl。例如， 可以將30種I類HLA抗原(表1和表幻和30種II類HLA抗原(表2和表4)固定化在微珠(諸如乳膠珠)的表面上，它們是單個抗原形式(表1和2)或在亞群體中(表3和4)， 用于鑒別特異性地結合一種HLA亞型的補體結合性抗體。表權利要求
1.一種用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在特異性地結合目標抗原的補體結合性抗體的方法，所述方法包括使其上面固定有目標抗原(AgI)的固體基質接觸來自受試者的生物樣品和補體因子 Clq，其中所述接觸的時間足以允許所述樣品中的抗-AgI補體結合性抗體結合所述AgI，并允許補體因子Clq結合所述抗-AgI補體結合性抗體；使用能特異性地結合所述補體因子Clq的至少一種可檢測地標記的配體溫育所述固體基質，所述補體因子Clq結合在與所述AgI結合的抗-AgI補體結合性抗體上；并且檢測是否存在結合到所述補體因子Clq上的可檢測地標記的配體，以測定所述生物樣品中是否存在特異性地結合所述AgI的補體結合性抗體。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述補體因子Clq是自體補體因子Clq。
3.如權利要求1所述的方法，其中所述補體因子Clq是外源性補體因子Clq。
4.如權利要求1所述的方法，其中所述補體因子Clq是自體補體因子Clq和外源性補體因子Clq的組合。
5.如權利要求1所述的方法，其中所述固體基質是多孔板。
6.如權利要求1所述的方法，其中所述固體基質是膜。
7.如權利要求1所述的方法，其中所述固體基質是微粒。
8.如權利要求7所述的方法，其中所述微粒是聚苯乙烯珠子。
9.如權利要求7所述的方法，其中所述微粒是乳膠珠。
10.如權利要求7所述的方法，其中所述微粒是磁珠。
11.如權利要求1所述的方法，其中所述固體基質是細胞。
12.如權利要求1所述的方法，其中所述固體基質是細胞膜。
13.如權利要求1所述的方法，其中所述生物樣品是血清、血液、唾液、血漿或尿。
14.如權利要求1所述的方法，其中所述可檢測地標記的配體是可檢測地標記的抗體或其結合片段。
15.如權利要求1所述的方法，其中可檢測標記是熒光染料、生色團、酶、連接分子、生物素分子、電子供體、電子受體、染料、金屬或放射性核素。
16.一種用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在特異性地結合目標抗原的補體結合性抗體的方法，所述方法包括使其上面固定有目標抗原(AgI)的固體基質接觸來自受試者的生物樣品和直接標記的外源性補體因子Clq，其中所述接觸的時間足以允許所述樣品中的抗-AgI補體結合性抗體結合所述Agl，并允許所述直接標記的外源性補體因子Clq結合所述抗-AgI補體結合性抗體；并且檢測是否存在結合到所述抗-AgI補體結合性抗體上的直接標記的外源性Clq，以測定所述生物樣品中是否存在特異性地結合所述AgI的補體結合性抗體。
17.如權利要求16所述的方法，其中所述固體基質是多孔板。
18.如權利要求16所述的方法，其中所述固體基質是膜。
19.如權利要求16所述的方法，其中所述固體基質是微粒。
20.如權利要求19所述的方法，其中所述微粒是聚苯乙烯珠子。
21.如權利要求19所述的方法，其中所述微粒是乳膠珠。
22.如權利要求19所述的方法，其中所述微粒是磁珠。
23.如權利要求16所述的方法，其中所述固體基質是細胞。
24.如權利要求16所述的方法，其中所述固體基質是細胞膜。
25.如權利要求16所述的方法，其中所述生物樣品是血清、血液、唾液、血漿或尿。
26.如權利要求16所述的方法，其中所述直接標記的外源性Clq被熒光染料、生色團、 酶、連接分子、生物素分子、電子供體、電子受體、染料、金屬或放射性核素標記。
27.一種用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在特異性地結合人白細胞抗原 (HLA)的補體結合性抗體的方法，所述方法包括用不同亞類的微粒的集合和補體因子Clq溫育來自受試者的生物樣品，其中每個微粒包被有不同的純化的HLA亞型，所述HLA亞型源自呈遞相同HLA的細胞群體，且其中所述溫育的時間足以允許所述生物樣品中的抗-HLA補體結合性抗體結合所述HLA，并允許所述補體因子Clq結合所述生物樣品中的抗-HLA補體結合性抗體；用能特異性地結合補體因子Clq的至少一種可檢測地標記的配體溫育所述微粒，所述補體因子Clq結合在與所述HLA結合的抗-HLA補體結合性抗體上；并且檢測是否存在結合到所述補體因子Clq上的可檢測地標記的配體，以測定是否存在補體結合性抗體。
28.如權利要求27所述的方法，其中所述補體因子Clq是自體補體因子Clq。
29.如權利要求27所述的方法，其中所述補體因子Clq是外源性補體因子Clq。
30.如權利要求27所述的方法，其中所述補體因子Clq是自體補體因子Clq和外源性補體因子Clq的組合。
31.如權利要求27所述的方法，其中所述微粒是瓊脂糖珠。
32.如權利要求27所述的方法，其中所述微粒是乳膠珠。
33.如權利要求27所述的方法，其中所述微粒是磁珠。
34.如權利要求27所述的方法，其中所述生物樣品是血清、血液、唾液、血漿或尿。
35.如權利要求27所述的方法，其中所述可檢測地標記的配體是可檢測地標記的抗體或其結合片段。
36.如權利要求27所述的方法，其中可檢測標記是熒光染料、生色團、酶、連接分子、生物素分子、電子供體、電子受體、染料、金屬或放射性核素。
37.如權利要求27所述的方法，其中所述檢測是通過流式細胞術。
38.一種用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在特異性地結合人白細胞抗原 (HLA)的補體結合性抗體的方法，所述方法包括用不同亞類的微粒的集合和直接標記的外源性補體因子Clq溫育來自受試者的生物樣品，其中每個微粒包被有不同的純化的HLA亞型，所述HLA亞型源自呈遞相同HLA的細胞群體，且其中所述溫育的時間足以允許所述生物樣品中的抗-HLA補體結合性抗體結合 HLA,并允許所述補體因子Clq結合所述生物樣品中的抗-HLA補體結合性抗體；并且檢測是否存在結合到所述抗-HLA補體結合性抗體上的直接標記的外源性補體因子 Clq,以測定所述生物樣品中是否存在特異性地結合HLA的補體結合性抗體。
39.如權利要求38所述的方法，其中所述微粒是瓊脂糖珠。
40.如權利要求38所述的方法，其中所述微粒是乳膠珠。
41.如權利要求38所述的方法，其中所述微粒是磁珠。
42.如權利要求38所述的方法，其中所述生物樣品是血清、血液、唾液、血漿或尿。
43.如權利要求38所述的方法，其中所述直接標記的外源性Clq被熒光染料、生色團、 酶、連接分子、生物素分子、電子供體、電子受體、染料、金屬或放射性核素標記。
44.如權利要求38所述的方法，其中所述檢測是通過流式細胞術。
45.一種用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在特異性地結合目標抗原的補體結合性抗體的試劑盒，所述試劑盒包含其上面固定有目標抗原(AgI)的固體基質；能特異性地結合補體因子Clq的可檢測地標記的配體；和用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在針對目標抗原的補體結合性抗體的說明書。
46.如權利要求45所述的試劑盒，其中所述固體基質是多孔板。
47.如權利要求45所述的試劑盒，其中所述固體基質是膜。
48.如權利要求45所述的試劑盒，其中所述固體基質是微粒。
49.如權利要求48所述的試劑盒，其中所述微粒是瓊脂糖珠。
50.如權利要求48所述的試劑盒，其中所述微粒是乳膠珠。
51.如權利要求48所述的試劑盒，其中所述微粒是磁珠。
52.如權利要求45所述的試劑盒，其中所述生物樣品是血清、血液、唾液、血漿或尿。
53.如權利要求45所述的試劑盒，其中所述可檢測地標記的配體是可檢測地標記的抗體或其結合片段。
54.如權利要求45所述的試劑盒，其中可檢測標記是熒光染料、生色團、酶、連接分子、 生物素分子、電子供體、電子受體、染料、金屬或放射性核素。
55.一種用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在特異性地結合目標抗原的補體結合性抗體的試劑盒，所述試劑盒包含其上面固定有目標抗原(AgI)的固體基質； 能結合補體結合性抗體的直接標記的外源性Clq ；和用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在針對目標抗原的補體結合性抗體的說明書。
56.如權利要求55所述的試劑盒，其中所述固體基質是多孔板。
57.如權利要求55所述的試劑盒，其中所述固體基質是膜。
58.如權利要求55所述的試劑盒，其中所述固體基質是細胞。
59.如權利要求55所述的試劑盒，其中所述固體基質是微粒。
60.如權利要求59所述的試劑盒，其中所述微粒是瓊脂糖珠。
61.如權利要求59所述的試劑盒，其中所述微粒是乳膠珠。
62.如權利要求59所述的試劑盒，其中所述微粒是磁珠。
63.如權利要求58所述的試劑盒，其中所述微粒是聚苯乙烯珠子。
64.如權利要求55所述的試劑盒，其中所述生物樣品是血清、血液、唾液、血漿或尿。
65.如權利要求55所述的試劑盒，其中所述直接標記的外源性Clq被熒光染料、生色團、酶、連接分子、生物素分子、電子供體、電子受體、染料、金屬或放射性核素標記。
66.一種用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在針對人白細胞抗原(HLA)的補體結合性抗體的試劑盒，所述試劑盒包含微粒亞類的集合，其中每個微粒亞類包被有不同的純化的HLA，以代表單個細胞系或多個細胞系的HLA抗原群體，使得所述集合模仿正常人群體中的HLA分布；能特異性地結合補體因子Clq的可檢測地標記的配體；和用于測定來自受試者的樣品中是否存在針對HLA的補體結合性抗體的說明書。
67.如權利要求66所述的試劑盒，其中所述微粒是瓊脂糖珠。
68.如權利要求66所述的試劑盒，其中所述微粒是乳膠珠。
69.如權利要求66所述的試劑盒，其中所述微粒是磁珠。
70.如權利要求66所述的試劑盒，其中所述微粒是聚苯乙烯珠子。
71.如權利要求66所述的試劑盒，其中所述生物樣品是血清、血液、唾液、血漿或尿。
72.如權利要求66所述的試劑盒，其中所述可檢測地標記的配體是可檢測地標記的抗體或其結合片段。
73.如權利要求66所述的試劑盒，其中可檢測標記是熒光染料、生色團、酶、連接分子、 生物素、電子供體、電子受體、染料、金屬或放射性核素。
74.一種用于測定來自受試者的生物樣品中是否存在針對人白細胞抗原(HLA)的補體結合性抗體的試劑盒，所述試劑盒包含 微粒亞類的集合，其中每個微粒亞類包被有不同的純化的HLA，以代表單個細胞系或多個細胞系的HLA抗原群體，使得所述集合模仿正常人群體中的HLA分布；能結合補體結合性抗體的直接標記的外源性Clq ；和用于測定來自受試者的樣品中是否存在針對HLA的補體結合性抗體的說明書。
75.如權利要求74所述的試劑盒，其中所述微粒是瓊脂糖珠。
76.如權利要求74所述的試劑盒，其中所述微粒是乳膠珠。
77.如權利要求74所述的試劑盒，其中所述微粒是磁珠。
78.如權利要求74所述的試劑盒，其中所述微粒是聚苯乙烯珠子。
79.如權利要求74所述的試劑盒，其中所述生物樣品是血清、血液、唾液、血漿或尿。
80.如權利要求74所述的試劑盒，其中所述直接標記的外源性Clq被熒光染料、生色團、酶、連接分子、生物素、電子供體、電子受體、染料、金屬或放射性核素標記。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于使用補體因子C1q靈敏且特異性地檢測生物樣品中的補體結合性抗體的方法，所述補體因子C1q包括在生物樣品中存在的自體補體因子C1q和結合自體補體因子C1q的可檢測地標記的抗體、外源性人補體因子C1q和結合外源性人補體因子C1q的可檢測地標記的抗體、可檢測地標記的外源性人補體因子C1q、或自體補體因子C1q和外源性人補體因子C1q的組合。本發(fā)明也表征了用于本發(fā)明方法中的試劑盒、系統(tǒng)和裝置。
文檔編號G01N33/535GK102203610SQ200980144639
公開日2011年9月28日 申請日期2009年11月25日 優(yōu)先權日2008年12月1日
發(fā)明者D·B·蒂安, G·陳 申請人:利蘭·斯坦福青年大學托管委員會