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用于檢測蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲的方法、裝置、試劑盒和組合物的制作方法

文檔序號:5864621閱讀:1575來源:國知局

專利名稱::用于檢測蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲的方法、裝置、試劑盒和組合物的制作方法用于檢測蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲的方法、裝置、試劑盒和組合物交叉引用本申請要求提交于2008年12月12日的美國臨時專利申請系列號61/122260;提交于2008年5月19日的61/128077;提交于2008年5月19日的61/128079;提交于2008年5月19日的61/128076;提交于2008年5月19日的61/U8099;和提交于2008年12月12日的61/122254;以及提交于2007年6月15日的美國專利申請系列號11/763592和提交于2007年6月15日的11/763583,其以全文提述的方式并入本文。
背景技術
:1.發(fā)明領域本發(fā)明設計用于在哺乳動物中檢測和分辨蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲的組合物、裝置、試劑盒和方法。更具體而言,本發(fā)明涉及抗體和抗體組合物、裝置、試劑盒和方法,其用于在來自哺乳動物的試樣中檢測蛔蟲抗原、鞭蟲抗原和鉤蟲抗原是否存在,以及用于分辨蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲抗原。2.現有技術描述寄生性蠕蟲(parasiticworm)(寄生蟲(helminth))感染在動物中是常見的,而且,如果不進行診斷和治療,會導致嚴重的疾病或死亡?,F行用于診斷寄生性蠕蟲感染的方法主要涉及對糞便試樣的顯微鏡檢查,或者直接在糞便涂片中,或是在通過密度介質中的浮選來濃縮卵和寄生蟲后進行。盡管此規(guī)程被廣泛采用,但是該方法具有顯著的缺點。這些顯微術方法是費時的,要求專門的儀器。另外,這些方法的結果的準確性高度依賴于操作人員的技術和專長。舉例而言,鞭蟲的存在是通過尋找卵來確定的,但其排泄(excrete)是間歇性的,且量少。在早期感染或在幼年動物中檢測鉤蟲對于普通從業(yè)醫(yī)師而言是困難的。使用顯微鏡檢查的蛔蟲診斷的特異性約為50%。糞便處理令人生厭并且有害。衛(wèi)生的和不令人生厭的處理糞便步驟是費事的,且常常是復雜的。上述步驟可包括稱重、離心和儲藏,這些是困難的,除非是在配備有合適的設備、保護裝置和熟練技工的臨床實驗室中。因此,任何對進行糞便測試所需步驟數的減少,以及任何測試操作人員與測試材料之間接觸的減少都是令人期待的。臨床實驗室已使用免疫測定方法在糞便中檢測了不同的病毒、細菌和非蠕蟲寄生蟲(non-helminthparasite)以及生物。然而,仍有對簡單的用于在糞便、全血或血清中檢測寄生性蠕蟲感染的免疫測定方法的需求。發(fā)明概述在一個方面,本發(fā)明提供用于從試樣特異性結合并分離寄生蟲抗原(例如,從糞便試樣特異性結合并分離糞抗原)的裝置,所述裝置包含固體支持物,其中至少兩種選自下組的抗體固定在所述固體支持物上(a)第一抗體,其能夠特異性結合蛔蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或鉤蟲糞抗原;(b)第二抗體,其能夠特異性結合鞭蟲糞抗原,但不結合蛔蟲或鉤蟲糞抗原;和(c)第三抗體,其能夠特異性結合鉤蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或鉤蟲糞抗原。所述裝置可以是,但不限于,例如,ELISA裝置,如側流免疫測定裝置或微滴定板裝置??捎伤鲅b置對蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲進行測試的試樣包括但不僅限于,糞便、消化道粘液、尿、全血、血清、乳房乳汁和全組織,舉例而言,如來自乳腺、腸、肝、心、肺、食道、腦、肌肉和眼的組織。所述裝置還可包括(但無需包括)用于檢測選自下組的一種或多種的一種或多種試劑一種或多種非蠕蟲寄生蟲、一種或多種病毒、一種或多種真菌和一種或多種細菌。還在另一個方面,本發(fā)明提供了在試樣中檢測一種或多種寄生性蠕蟲抗原(例如,來自糞便試樣的糞抗原)是否存在的方法,所述方法包括(a)將來自哺乳動物的試樣與至少兩種選自下組的抗體接觸(i)第一抗體,其能夠特異性結合蛔蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或鉤蟲糞抗原;(ii)第二抗體,其能夠特異性結合鞭蟲糞抗原,但不結合蛔蟲或鉤蟲糞抗原;和(iii)第三抗體,其能夠特異性結合鉤蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或鉤蟲糞抗原;(b)在所述糞抗原的存在下(如果有),在試樣中形成抗體-糞抗原復合物;以及(C)檢測所述抗體-糞抗原復合物(如果有)是否存在。所述一種或多種寄生蟲糞抗原包括蛔蟲,如犬弓首線蟲(Toxocaracanis(T.canis))、貓弓首線蟲(Toxocaracati(T.cati))、牛弓首線蟲(Toxocaravitulorum(T.vitulorum))、ff弓蟲回線蟲(ToxascarisIeonina(Τ.Ieonina))、泣熊拜林蟲回線蟲(Baylisascarisprocyonis(B.procyonis))>雞蟲回型線蟲(Ascaridiagalli(A.galli))、馬畐Ij蟲回線蟲(Parascarisequorum(P.equorum))、豬蟲回線蟲(Ascarissuum(A.suum))或^(以蟲引蟲回線蟲(Ascarislumbricoides(A.lumbricoides))>單一無飾線蟲(Anisakissimplex(A.simplex))或Pseudoterranovadecipiens(P.decipiens)白勺抗原,鞭蟲,如狐毛尾線蟲(Trichurisvulpis)>Trichuriscampanula、有齒毛尾線蟲(Trichurisserrata)、豬毛尾線蟲(Trichurissuis)、毛尾毛尾線蟲(Trichuristrichiura)和褪色毛尾線蟲(Trichurisdiscolor)的抗原,以及鉤蟲,如犬鉤口線蟲(Ancylostomacaninum)、巴西鉤口線蟲(Ancylostomabraziliense)、十二指腸鉤口線蟲(Ancylostomaduodenal)、錫蘭鉤口線蟲(Ancylostomaceylanicum)、Ancylostomatubaeforme禾口多齒鉤口線蟲(Ancylostomapluridentatum)、美洲板口線蟲(Necatoramericanus)禾口狹首鉤形線蟲(Uncinariastenocephala)的抗原,例如,其在從哺乳動物(如犬、貓、豬、牛或人)得到的試樣中,并區(qū)分蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲。在一個方面,實施所述方法以就蛔蟲糞抗原、鞭蟲糞抗原和鉤蟲糞抗原對哺乳動物糞便試樣進行測試。然而,實施所述方法并不僅限于用于測試糞便試樣。因此,除了糞便以外,所述試樣可以為,但不限于,例如全血、血清、乳房乳汁和全組織,如來自乳腺、腸、肝、心、肺、食道、腦、肌肉和眼的組織。還在另一個方面,本發(fā)明提供了診斷哺乳動物是否被一種或多種寄生蟲感染的方法,所述方法包括下述步驟(a)將來自哺乳動物的試樣與與至少兩種選自下組的抗體接觸(i)第一抗體,其能夠特異性結合蛔蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或鉤蟲糞抗原;(ii)第二抗體,其能夠特異性結合鞭蟲糞抗原,但不結合蛔蟲或鉤蟲糞抗原;和(iii)第三抗體,其能夠特異性結合鉤蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或鉤蟲糞抗原;(b)在所述糞抗原的存在下(如果有),在試樣中形成抗體-糞抗原復合物;以及(C)檢測所述抗體-糞抗原復合物(如果有)是否存在;和(d)診斷所述哺乳動物罹患(i)蛔蟲感染,如果存在蛔蟲抗體-糞抗原復合物;(ii)鞭蟲感染,如果存在鞭蟲抗體-糞抗原復合物;和(iii)鉤蟲感染,如果存在鉤蟲抗體-糞抗原復合物。所述方法還可用于測試和分辨蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲對環(huán)境的污染??捎伤鲅b置就蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲進行測試的環(huán)境試樣包括但不僅限于土壤、腐敗材料或來自居住環(huán)境(包括院落、花園、砂箱和操場)的糞便物質。測試位置還可包括公園、沙灘、森林、農場或其他暴露于來自犬、貓或其他蛔蟲哺乳動物宿主的糞便物質的位置。也可測試來自室內和室外垃圾箱的糞便。還在另一個方面,本發(fā)明包括供實施本發(fā)明方法一個或多個步驟的試劑盒。所述試劑盒可以可選地包括,例如,本發(fā)明的裝置和一種或多種組合物,以及實施本發(fā)明方法的說明書。所述試劑盒還可以可選地包括,例如,一種或多種指示劑(indicatorreagent),一種或多種抗體標記化合物、一種或多種抗體、一種或多種抗原捕獲劑(antigencapturereagent)、一種或多種抑制劑和一種或多種洗滌劑(washreagent),其作為所述裝置的一部分使用和/或用于實施所述方法。還在另一個方面,本發(fā)明包括供特異性結合來自試樣的寄生蟲抗原(例如,來自糞便試樣的糞抗原)的裝置,所述裝置包含固體支持物,其中在所述固體支持物上固定至少兩種選自下組的抗體(a)第一抗體,其能夠特異性結合蛔蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或鉤蟲糞抗原;(b)第二抗體,其能夠特異性結合鞭蟲糞抗原,但不結合蛔蟲或鉤蟲糞抗原;(C)第三抗體,其能夠特異性結合鉤蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或鉤蟲糞抗原;和(d)—種或多種類型的蛔蟲抗原、鞭蟲抗原和/或鉤蟲抗原,其中所述一種或多種類型的蛔蟲抗原、鞭蟲抗原和鉤蟲抗原與所述抗體特異性結合。附圖簡述圖1顯示了ELISA測定法的結果,其通過使用側流裝置實施,并遵循本發(fā)明第一個實施例中的方法測試來自由蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲感染的犬的糞便試樣。圖2顯示了ELISA測定法的結果,其通過使用微滴定板實施,并遵循本發(fā)明第二個實施例中的方法測試來自由蛔蟲、鉤蟲、鞭蟲或犬惡絲蟲感染的犬的糞便試樣。圖3顯示了來自狐毛尾線蟲全成蟲的1210-核苷酸cDNA序列的核苷酸序列(SEQIDNO:1)。圖4顯示了來自狐毛尾線蟲全成蟲的1059-核苷酸cDNA序列的核苷酸序列(SEQIDNO2)。圖5顯示了SEQIDNO3禾口SEQIDNO:4的比較比對,SEQIDNO3禾口SEQIDNO4的共有序列示于SEQIDNO:9。圖6顯示了來自犬弓首線蟲全成蟲的865-核苷酸cDNA序列的核苷酸序列(SEQIDNO10)。圖7顯示了來自貓弓首線蟲全成蟲的632-核苷酸cDNA序列的核苷酸序列(SEQIDNO11)。圖8顯示了SEQIDNO:13禾口SEQIDNO14的比較比對,SEQIDNO:13禾口SEQIDNO14的共有序列示于SEQIDNO:16。圖9顯示了來自犬弓首線蟲全成蟲的535-核苷酸cDNA序列的核苷酸序列(SEQIDNO17)。圖10顯示了來自貓弓首線蟲全成蟲的536-核苷酸cDNA序列的核苷酸序列(SEQIDNO18)。圖11顯示了SEQIDNO20和SEQIDNO21的比較比對,SEQIDNO20和SEQIDNO21的共有序列示于SEQIDNO:23。圖12顯示了來自犬弓首線蟲全成蟲的469-核苷酸cDNA序列的核苷酸序列(SEQIDNO24)。圖13顯示了來自貓弓首線蟲全成蟲的M8-核苷酸cDNA序列的核苷酸序列(SEQIDNO25)。圖14顯示了SEQIDNO27和SEQIDNO28的比較比對,SEQIDNO27和SEQIDNO28的共有序列示于SEQIDNO:30。圖15顯示了用SP柱的洗脫級分作為試樣的ELISA,且通過遵循本發(fā)明在第三個實施例中的方法洗脫所述SP柱,可將Copro67^部分地純化和富集。圖16顯示了遵循本發(fā)明在第三個實施例中的方法,使用以兔抗全長DIV67^IgG-HRP作為探針的Wfestern印跡,發(fā)現Copro6728的分子量約為7KD。圖17顯示了使用以ImperialProteinStaining染色的SDS-PAGE凝膠,遵循本發(fā)明在第三個實施例中的方法,發(fā)現Copro6728的分子量約為7KD。圖18顯示了遵循本發(fā)明在第三個實施例中的方法,由質譜分析鑒定的全長DIV6728(SEQIDNO:21)的氨基酸序列,以及兩個肽(SEQIDNO35和SEQIDN0:36),其在陰影框中用高光顯示。圖19顯示了遵循本發(fā)明在第四個實施例中的方法,由構建體編碼的67^N(SEQIDNO37)和6728C(SEQIDNO:38)氨基酸序列的比對。圖20顯示了遵循本發(fā)明在第四個實施例中的方法,加載了不同試樣以檢查所述重組6728N純度的SDS-PAGE凝膠。圖21顯示了遵循本發(fā)明在第四個實施例中的方法,加載了不同試樣以檢查所述重組6728C純度的SDS-PAGE凝膠。圖22顯示了遵循本發(fā)明在第四個實施例中的方法,用不同的糞便試樣獲得ELISA數據以測試針對不同重組67蛋白質的不同多克隆抗體。圖23顯示了遵循本發(fā)明在第四個實施例中的方法,用重組蛋白獲得ELISA數據以測試針對不同重組67蛋白質的不同多克隆抗體。圖M顯示了遵循本發(fā)明在第四個實施例中的方法,以兔抗全長DIV6728IgG_HRP作為探針,用不同的糞便試樣進行的Western印跡。圖25顯示了遵循本發(fā)明在第四個實施例中的方法,以兔抗67^CIgG_HRP作為探針,用不同的糞便試樣進行的Western印跡。圖沈顯示了遵循本發(fā)明在第四個實施例中的方法,以兔抗67^NIgG_HRP作為探針,用不同的糞便試樣進行的Western印跡。發(fā)明詳述I.介紹本發(fā)明一般性地涉及用于在從哺乳動物獲得的糞便試樣中檢測和分辨蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲的方法、裝置和試劑盒。例如,本發(fā)明涉及來自弓首屬(Toxocara),如犬弓首線蟲和貓弓首線蟲的蛔蟲糞抗原,來自毛尾屬(Trichuris),如狐毛尾線蟲的鞭蟲糞抗原,以及鉤口屬(Ancylostoma),如犬鉤口線蟲的鉤蟲糞抗原。具體而言,本發(fā)明涉及用于檢測和分辨例如蛔蟲,如弓首屬、弓蛔屬(Toxascaris)、拜林蛔線蟲屬(Baylisascaris)、蛔型屬(Ascaridia)、副蛔屬(Parascaris)、蛔屬(Ascaris)、無飾屬(Anisakis)或偽新地蛔線蟲屬(I^seudoterranova),包括犬弓首線蟲、貓弓首線蟲、牛弓首線蟲、獅弓蛔線蟲、浣熊拜林蛔線蟲、雞蛔形線蟲、馬副蛔線蟲、似蚓蛔線蟲和豬蛔線蟲、單一無飾線蟲和P.decipiens,鞭蟲,如狐毛尾線蟲、有齒毛尾線蟲和Trichuriscampanula、毛尾毛尾線蟲,以及鉤蟲,如犬鉤口線蟲、巴西鉤口線蟲、十二指腸鉤口線蟲、錫蘭鉤口線蟲、Ancylostomatubaeforme和多齒鉤口線蟲、美洲板口線蟲和狹首鉤形線蟲。本發(fā)明提供了與現有的顯微鏡檢查技術相比較佳的替代手段。其確鑿如此,因為本發(fā)明提供了用于在來自哺乳動物的試樣中檢測蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲是否存在的裝置、試劑盒和方法,其(1)既易于使用并給出穩(wěn)定可靠的結果;(2)使得能夠確證鞭蟲在哺乳動物中是否存在,而不論該哺乳動物是否受鉤蟲、蛔蟲和/或犬惡絲蟲(heartworm)感染;(3)可在其卵首次出現在受感染的宿主糞便之前檢測蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲;以及⑷可分辨蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲感染。本發(fā)明部分基于發(fā)現對蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲感染有特異性的組合物具有未預料到的性質。具體而言,確定了針對蠕蟲特異性多肽產生的抗體(或針對全蠕蟲提取物、或蠕蟲生殖器官提取物或蠕蟲腸提取物產生的抗體)可在哺乳動物中用于捕獲、檢測和區(qū)分蛔蟲抗原、鞭蟲抗原和鉤蟲抗原。針對每種類型的蠕蟲的特異性是令人驚訝的,因為蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲均為彼此相關的線蟲,且會預期針對從這些蠕蟲中任一種分離的蛋白質而產生的抗體與一種或多種其他蠕蟲、宿主抗原或其他宿主組分相互作用。進一步確定了在哺乳動物中,早至該哺乳動物首次感染9日后,該抗體可用于捕獲并檢測蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲抗原。其在感染后如此短的時間內,在任何卵在受感染的哺乳動物糞便中出現之前就能檢測蛔蟲、鞭蟲或鉤蟲的能力是令人驚訝的,因為卵通常僅在所述宿主感染約五到八周之后方才出現在感染性宿主的糞便中。因此,本發(fā)明包括使用抗體和/或其片段在哺乳動物中特異性地捕獲、檢測和分辨蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲抗原的方法、裝置和試劑盒。本發(fā)明在甚至也存在一種或多種其他蠕蟲類型時檢測并診斷蛔蟲的能力,使得所述哺乳動物的管理者(caregiver)能夠有機會選擇最佳的治療以從所述哺乳動物中驅除蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲。此外,本發(fā)明在一些情況下能夠在早至所述哺乳動物首次感染9日后便檢測蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲的能力,提供了管理者可以在所述哺乳動物罹患重病之前開始這種治療的可能性。在卵在糞便中出現之前的介入手段也會極大地減少或消除該傳染散布到其他動物或人中的可能性。II.術語的定義和使用術語“本發(fā)明組合物”指所有的核酸、多肽、抗體和包含這些核酸、多肽和抗體中一種或多種以及一種或多種其他化合物的混合物,其可通過實施本發(fā)明明確描述的、隱含的或以其他方式在本文中公開的方法,用于在從哺乳動物獲得的試樣中檢測蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲是否存在??赏ㄟ^本發(fā)明檢測蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲的“來自哺乳動物的試樣”,包括所有的身體部分及其提取物,如任何流體、固體、細胞或組織,其可包含蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲抗原。因此,示例性的試樣包括但不僅限于,例如,糞便、乳汁、全血及其部分,包括血清,并還包括組織提取物,包括來自乳腺、腸、肝、心、肺、食道、腦、肌肉和眼的組織。所述試樣可直接從所述哺乳動物取得,或所述試樣可從任何與該哺乳動物接觸過的事物取得。舉例而言,所述試樣可為來自所述哺乳動物的新鮮的或腐爛的糞便。作為另一個實例,所述試樣可包括例如土壤(soil)、污泥(dirt)、砂、植物材料或任何其他材料,其可與哺乳動物留下的身體材料如糞便混合。由此,所述試樣可從環(huán)境來源取得,包括土壤、腐敗材料或來自森林、農場或居住環(huán)境(包括垃圾箱、院落、花園、砂箱、操場、公園和沙灘)的糞便物質。不管所述試樣的來源或內容如何,該試樣在本文中有時稱為“試樣”、“哺乳動物試樣”、“測試試樣”或“受測試的試樣”。本文中使用的“核酸”與“基因”、“DNA”、“cDNA”、“EST”、“多核苷酸”、“寡核苷酸”、“多聚核酸”、“RNA”和“mRNA”意義相同,并因此可與它們互換使用。核酸可為雙鏈形式,或其可為單鏈形式。此外,核酸可為例如天然分離的,如來自全蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲或其部分,或其可為例如人工合成的,或者是在重組宿主生物中合成,或者是用任何其他本領域技術人員已知的人工手段合成,如通過使用基于PCR的技術,通過構建合成所述核酸的轉基因生物,通過使用DNA合成儀,或通過任何別的基于分子的技術。“多肽”、“肽”和“蛋白質”為同義詞,并在本文中可互換使用,指氨基酸殘基的聚合物。例如,本發(fā)明的多肽、肽和蛋白質可為天然分離的,如來自全蛔蟲、鞭蟲或鉤蟲或來自蛔蟲、鞭蟲或鉤蟲的一部分,或其可為人工合成的,或者是在重組宿主生物中合成,或者是用任何其他本領域技術人員已知的人工手段合成。術語“抗體”或“本發(fā)明的抗體”指任何能夠特異性結合于特定蠕蟲的一種或多種抗原而不與來自其他蠕蟲的抗原結合的抗體。舉例而言,針對一種或多種蛔蟲抗原的抗體能夠特異性地與一種或多種蛔蟲抗原結合,但并不與任何來自鉤蟲或鞭蟲的抗原結合,且針對一種或多種鞭蟲抗原的抗體能夠特異性地與一種或多種鞭蟲抗原結合,但并不與任何來自蛔蟲和鉤蟲的抗原結合。本發(fā)明的抗體可針對本發(fā)明的一種或多種免疫原性多肽產生。除非另行指明,應理解本發(fā)明的抗體可包含兩種或更多種不同類型抗體的混合物。舉例而言,所述抗體可為兩種類型抗體的混合物,其中兩種類型之一特異性結合于一種特定抗原,而兩種類型中的另一種特異性結合于某些其他抗原。本文中使用的術語“第一抗體”指一種或多種抗體,其能夠特異性結合蛔蟲糞抗原,而非鞭蟲或鉤蟲糞抗原。本文中使用的術語“第二抗體”指一種或多種抗體,其能夠特異性結合鞭蟲糞抗原,而非蛔蟲或鉤蟲糞抗原。本文中使用的術語“第三抗體”指一種或多種抗體,其能夠特異性結合鉤蟲糞抗原,而非鞭蟲或蛔蟲糞抗原?!氨景l(fā)明的免疫原性多肽”以及,更簡潔地“本發(fā)明的多肽”,是可以針對其產生本發(fā)明抗體的免疫原。所有“本發(fā)明的多肽”均是免疫原性的,并因此可用于在宿主動物中引發(fā)免疫應答以產生本發(fā)明的抗體。除非另行指明,應理解為本發(fā)明的多肽可為具有多種組分的混合組合物的一個組分?!懊庖咴睘槿魏卧噭?,如本發(fā)明的免疫原性多肽,例如其能夠在暴露于該試劑的動物中引發(fā)免疫應答。本文中使用的術語“蛔蟲”,指寄生蟲,例如蛔目(Ascaridida)的腸道蛔蟲,其包括弓首屬、弓蛔屬、拜林蛔線蟲屬、蛔型屬、副蛔屬、蛔屬、無飾屬和偽地新蛔線蟲屬等屬。因此,本文中使用的術語“蛔蟲”不指整個線蟲動物門(Nematoda)。因此,“蛔蟲”不包括任何鉤口屬、鉤形屬(Uncinaria)、板口屬(Necator)、毛尾屬、吳策屬(Wuchereria)、Brugia或惡絲蟲屬(Dirofilaria)的成員?!盎紫x糞抗原”或“蛔蟲的糞抗原”是任何存在于具有蛔蟲感染的哺乳動物糞便中且可由一種或多種本發(fā)明抗體特異性結合的蛔蟲產物。舉例而言,蛔蟲糞抗原可為一種或多種本發(fā)明多肽,但不僅限于此。本發(fā)明人確定DIV67^新穎的C端7kD亞型(isoform),其為犬弓首線蟲的排泄/分泌蛋白,早至犬科首次受犬弓首線蟲感染38日后便存在于受犬弓首線蟲感染的犬科動物糞便中。因此“蛔蟲糞抗原”可為由本發(fā)明人在犬科動物糞便中觀察到的DIV67^這種新穎的C端7kD亞型(其在本文中稱作“Copro6728”)。本文中使用的術語“鞭蟲”,指寄生蟲,例如毛尾屬和毛首屬的腸道鞭蟲。因此,示例性的鞭蟲包括狐毛尾線蟲、Trichuriscampanula、有齒毛尾線蟲、豬毛尾線蟲、毛尾毛尾線蟲、褪色毛尾線蟲和毛尾毛首線蟲。而且本文中使用的術語“鞭蟲”不指整個線蟲動物門。例如,“鞭蟲”不包括任何鉤口屬、鉤形屬、板口屬、弓首屬、弓蛔屬、蛔屬、吳策屬、Brugia或惡絲蟲屬的成員?!氨尴x糞抗原”或“鞭蟲的糞抗原”是任何存在于具有鞭蟲感染的哺乳動物糞便中且可由一種或多種本發(fā)明抗體特異性結合的鞭蟲產物。舉例而言,鞭蟲糞抗原可為一種或多種本發(fā)明多肽,但不僅限于此。本文中使用的術語“鉤蟲”,指寄生蟲,例如鉤口屬、鉤形屬和板口屬的腸道鉤蟲。因此,示例性的鉤蟲包括犬鉤口線蟲、巴西鉤口線蟲、十二指腸鉤口線蟲、錫蘭鉤口線蟲、Ancylostomatubaeforme和多齒鉤口線蟲、美洲板口線蟲和狹首鉤形線蟲。而且本文中使用的術語“鉤蟲”不指整個線蟲動物門。例如,“鉤蟲”不包括任何毛尾屬、毛首屬、弓首屬、弓蛔屬、蛔屬、吳策屬、Brugia或惡絲蟲屬的成員?!般^蟲糞抗原”或“鉤蟲的糞抗原”是任何存在于具有鞭蟲感染的哺乳動物糞便中且可由一種或多種本發(fā)明抗體特異性結合的鉤蟲產物。舉例而言,鉤蟲糞抗原可為一種或多種本發(fā)明多肽,但不僅限于此。本發(fā)明人確定ASP5新穎的N端^kD亞型,其為鉤口線蟲的排泄/分泌蛋白,早至犬科動物首次經所述鉤口線蟲感染9日后便存在于經所述鉤口線蟲感染的犬科動物糞便中。因此“蛔蟲糞抗原”可為由本發(fā)明人在犬科動物糞便中觀察到的ASP5的這種新穎的N端^kD亞型(其在本文中稱作“CoproASP5”)?!疤禺愑凇薄ⅰ疤禺愋越Y合”和“穩(wěn)定結合”意為本發(fā)明的特定組合物,如本發(fā)明的抗體、多肽或寡核苷酸,例如以相比至少一種其他試劑以更高的親和性識別并結合于一種或多種其他試劑。作為一例,無論何時本發(fā)明的抗體能夠以高于對于任何其他來自非蛔蟲寄生性蠕蟲的抗原的親和性,識別并結合蛔蟲抗原,則其被稱為“特異于”、“特異性結合”或“穩(wěn)定結合”這些蛔蟲抗原。上述結合特異性可使用本領域公知的方法來測試,例如,ELISA或放射免疫測定(RIA)?;谒^察到的關于本發(fā)明特定組合物結合特異性的信息,本發(fā)明的方法可在使得所述組合物能夠結合于(并因此使得所述結合能夠被檢測)特定試劑,但并不顯著地結合其他試劑的條件下實施,同時維持該條件。作為一例,本發(fā)明的方法可在如下條件實施,其使得本發(fā)明抗體能夠結合于(并因此使得所述結合能夠被檢測)一種或多種存在于特定試樣中的蛔蟲抗原,但并不顯著地結合于任何可能存在于該試樣中的鉤蟲或鞭蟲抗原,由此使得分辨蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲成為可能。“檢測蛔蟲”意為檢測一種或多種蛔蟲特異性產物,包括,例如,一種或多種本發(fā)明的多肽、抗體和核酸,或一種或多種蛔蟲抗原,或Copro6728。一種或多種上述蛔蟲產物在來自哺乳動物的試樣中存在指明所述哺乳動物具有蛔蟲感染,而不論任何全蛔蟲生物或其卵是否也存在于該試樣中。與之相對,一種或多種所述蛔蟲產物不存在于來自哺乳動物的試樣中指明所述哺乳動物沒有蛔蟲感染?!皺z測鞭蟲”意為檢測一種或多種鞭蟲特異性產物,包括,例如,一種或多種本發(fā)明的多肽、抗體和核酸,或一種或多種鞭蟲抗原。一種或多種上述鞭蟲產物在來自哺乳動物的試樣中存在指明所述哺乳動物具有鞭蟲感染,而不論任何全鞭蟲生物或其卵是否也存在于該試樣中。與之相對,一種或多種所述鞭蟲產物不存在于來自哺乳動物的試樣中指明所述哺乳動物沒有鞭蟲感染?!皺z測鉤蟲”意為檢測一種或多種鉤蟲特異性產物,包括,例如,一種或多種本發(fā)明的多肽、抗體和核酸,或一種或多種鉤蟲抗原,或CoproASP5。一種或多種上述鉤蟲產物在來自哺乳動物的試樣中存在指明所述哺乳動物具有鉤蟲感染,而不論任何全鉤蟲生物或其卵是否也存在于該試樣中。與之相對,一種或多種所述鉤蟲產物不存在于來自哺乳動物的試樣中指明所述哺乳動物沒有鉤蟲感染。“氨基酸”指天然存在的和合成的氨基酸。氨基酸殘基縮寫如下丙氨酸為A或Ala;精氨酸為R或Arg;天冬酰胺為N或Asn;天冬氨酸為D或Asp;半胱氨酸為C或Cys;谷氨酸為E或Glu;谷氨酰胺為Q或Gln;甘氨酸為G或Gly;組氨酸為H或His;異亮氨酸為I或Ile;亮氨酸為L或Leu;賴氨酸為K或Lys;甲硫氨酸為M或Met;苯丙氨酸為F或Phe;脯氨酸為P或ftx);絲氨酸為S或kr;蘇氨酸為T或Thr;色氨酸為W或Trp;酪氨酸為Y或Tyr;而纈氨酸為V或Val。本文中除非另行定義,X或Xaa指任何氨基酸。其他相關的氨基酸包括但不僅限于,4-羥脯氨酸和5-羥賴氨酸。在任何情況下,本文中描述或者以其他方式提及的多肽的氨基酸序列以常規(guī)形式表現,即序列最左邊的,或第一個氨基酸殘基是N端殘基,而序列最右邊的,或最后一個氨基酸是C端殘基。任何特定核酸序列的“保守變體”包括具有對該特定核酸序列的一個或多個簡并密碼子取代的任何序列,具有在該特定核酸序列中一個或多個核苷酸取代、插入和缺失的任何序列,以及該特定核酸的互補序列,以及該互補序列的保守變體。特定核酸序列的保守變體與該特定核酸序列優(yōu)選具有至少約85%同一性,更優(yōu)選具有至少約90%同一性,且甚至更優(yōu)選至少約95-99%同一性。特定核酸序列的保守變體可為人工合成的,或其可以其天然形式從生物中分離。任何特定多肽序列的“保守變體”為任何如下多肽,其具有從該特定多肽的氨基酸序列變化,但仍然保留該特定多肽的特異性結合性質的氨基酸序列,從而使得針對該特定多肽產生的本發(fā)明的抗體能夠特異性結合所述變體多肽。因此,例如,特定多肽的保守變體可具有對該特定多肽的一個或多個氨基酸取代、缺失、添加和插入。舉例而言,特定多肽的保守變體可具有對該特定多肽的30或更少、25或更少、20或更少、15或更少、10或更少、5或更少個保守氨基酸取代。特定多肽的保守變體優(yōu)選地,但并不必需地與該特定多肽具有至少約80%同一性,更優(yōu)選具有至少約90%同一性,且甚至更優(yōu)選至少約91-99%同一性。對于任何主題(subject)核酸或氨基酸序列(例如,任何本文中描述的多肽)相對于另一個“目標”核酸或氨基酸序列的同一性百分比可如下確定。首先,本發(fā)明的目標核酸或氨基酸序列可與主題核酸或氨基酸序列使用來自BLASTZ含有BLASTN和BLASTP的獨立版本(例如,版本2.0.14)的BLAST2kquences(Blkeq)程序進行比較或比對。BLASTZ的獨立版本可在www,ncbi.nlm.nih.gov獲得。解釋如何使用BLASTZ,且特別是所述Blkeq程序的說明,可見于BLASTZ所附的“幫助(readme)”文件。所述程序還由Karlin等(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.87:2264;KarIin等(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.90:5873;以及Altschul等(1997)Nucl.AcidsRes.25:3389詳細描述?!癈oproASP5”指見于哺乳動物糞便的ASP5的N端^kD片段?!癈opro6728”指見于哺乳動物糞便的DIV67^的C端7kD部分。在一個特定實施方案中,copro6728不包括全長DIV6728的C端。Blkeq對所述主題序列和目標序列使用或者BLASTN(用于比較核酸序列)或者BLASTP(用于比較氨基酸序列)算法進行比較。通常,在進行氨基酸序列比對時,使用BL0SUM62評分矩陣的缺省參數缺口存在罰分(gapexistencecost)為11,而延伸罰分(extensioncost)為1,字長(wordsize)為3,預期值(expectvalue)為10,每殘基罰分(perresiduecost)為1,而lambda比例(lambdaratio)為0·85。輸出文件包含所述目標序列和所述主題序列之間具有同源性的對齊(aligned)區(qū)域。一旦對齊,通過對與來自主題序列的序列從任何匹配位置開始到任何其他匹配位置結束而對齊的來自目標序列的連續(xù)核苷酸或氨基酸殘基(即,排除缺口)進行計數來確定長度。匹配位置是任何在該處相同的核苷酸或氨基酸同時存在于目標和主題序列二者上的位置。一個或多個殘基的缺口可插入到目標或主題序列以使結構上保守的域(例如,α-螺旋、β-折疊和環(huán))之間對齊的序列最大化。在特定長度上的同一性百分比通過對該特定長度上匹配的位置進行計數,并將該數值除以長度,并將結果值乘以100來確定。舉例而言,如果(i)500個氨基酸的目標序列與主題氨基酸序列相比較,(ii)B12seq程序顯示來自所述目標序列的200個氨基酸與主題序列的區(qū)域對齊,其中該200個氨基酸的區(qū)域的第一個和最后一個氨基酸匹配,并且(iii)在這200個對齊的氨基酸中匹配數為180,則所述500個氨基酸的目標序列包含200的長度,且在此長度上序列同一性為90%(即180/200x100=90)。會理解的是與主題序列對齊的核酸或氨基酸目標序列可產生多種不同的長度,而每個長度具有其自身的同一性百分比。應指出所述同一性百分比值四舍五入到小數點后第一位。例如,78.11,78.12,78.13和78.14舍為78.1,而78.15,78.16,78.17,78.18和78.19入為78.2。還應指出長度值總是整數。特定多肽序列的保守變體可人工合成,或其可以其天然形式從生物分離,包括例如從蛔蟲生物(如犬弓首線蟲、貓弓首線蟲和蛔屬)分離,和從鞭蟲生物(如毛尾屬或毛首屬)分離,或從鉤蟲生物(如鉤口屬、鉤形屬和板口屬)分離。在關于蛔蟲的一個特定的非限定性的實施例中,具有對應于下面所示SEQIDNO:27的氨基酸序列的本發(fā)明多肽是具有對應于SEQIDNO:26的氨基酸序列的本發(fā)明多肽的保守變體,其中SEQIDNO27與SEQIDNOJ6在1個對齊的氨基酸上超過95%相同。更一般而言,SEQIDNO26、SEQIDNO27、SEQIDNO:28、SEQIDNO29和SEQIDNO30彼此均為保守變體。還應理解本文所描述的本發(fā)明涵蓋了SEQIDNO26,SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO29和SEQIDNO30的其他保守變體,但本領域技術人員會知道所有這些涵蓋到的變體過于繁多,無法一一列舉。本領域技術人員還會知道,這些變體包括但不僅限于那些具有一個或多個堿性氨基酸殘基取代、一個或多個酸性氨基酸殘基取代、一個或多個極性氨基酸殘基取代、一個或多個疏水氨基酸殘基取代、一個或多個芳族氨基酸殘基取代以及一個或多個小氨基酸殘基取代的。(“堿性”氨基酸殘基是K、R和H。“酸性”氨基酸殘基是D和E?!皹O性”氨基酸殘基是N和Q?!笆杷卑被崾荌、L和V。“芳族”氨基酸殘基是F、Y和W?!靶 卑被崾荊、S、A、T禾口M。)III.本發(fā)明的核酸和多肽本發(fā)明的核酸和多肽在下述臨時申請“Methods,Devices,KitsAndCompositionsForDetectingWhipworm”(申請系列號61/U8077,提交于2008年5月19日);"Methods,Devices,KitsAndCompositionsForDetectingRoundworm"(Efiit^^J^61/128079,^Τ2008^5M19H);"Methods,Devices,KitsAndCompositionsForDetectingRoundworm"(申請系列號61/1沘076,提交于2008年5月19日);"Methods,Devices,KitsAndCompositionsForDetectingRoundworm”(申請系列號61/1沘099,提交于2008年5月19日);"Compositions,Devices,KitsandMethodsforDetectingHookworm,,(申請系列號61/122254,提交于2008年12月12日);以及Utility申請“RoundwormCoproantigenDetection”(申請系列號11/763592,提交于2007年6月15日)以及"Device,KitandMethodforHookwormAntigenDetection”(申請系列號11/763583,提交于2007年6月15日),"Methods,Devices,Kits,CompositionsforDetectingRoundworm,,(與本文一同提交)中詳細描述,這些文獻均以全文提述的形式并入本文。在嘗試鑒定可用于在糞便試樣中確證蛔蟲是否存在,并分辨蛔蟲與其他寄生性蠕蟲感染的組合物時,設計、合成多種寡核苷酸引物,并將其用于包含從犬弓首線蟲全成蟲或貓弓首線蟲全成蟲分離的總RNA的5’RACE、3’RACE和RT-PCR反應中。作為這些努力的結果,從犬弓首線蟲推導出469-核苷酸cDNA序列(在本文中示為SEQIDN0:25),而從貓弓首線蟲推導出M8-核苷酸cDNA序列(在本文中示為SEQIDNO26)。(使用SEQIDNO25和SEQIDNO26實施的BLAST檢索表明這些序列可能編碼絲氨酸蛋白酶抑制劑家族的成員,其已在蛔屬中首先鑒定出來,但迄今并未在犬弓首線蟲或貓弓首線蟲中鑒定出來。)在嘗試鑒定可用于在糞便試樣中確證鞭蟲是否存在,并分辨鞭蟲與其他寄生性蠕蟲感染的組合物時,設計、合成多種寡核苷酸引物,并將其用于包含從狐毛尾線蟲全成蟲分離的總RNA的5’RACE,3'RACE和RT-PCR反應中。作為這些努力的結果,分別推導出了1210-核苷酸cDNA序列和1059-核苷酸cDNA序列(在本文中示為SEQIDNO1和SEQIDNO:2)。(使用SEQIDNO:1和SEQIDNO:2實施的BLAST檢索表明這些序列可能編碼孔蛋白(porin),其為主要的鞭蟲排泄/分泌蛋白質,并已描述于小鼠寄生蟲鼠毛尾線蟲(Trichurismuris)和人寄生蟲毛尾毛尾線蟲,但迄今并未在狐毛尾線蟲中鑒定出來。)之前,Zhan及其同事描述了ASP-5的分子鑒定和部分表征,其為鉤口屬的排泄/分^白(0MZhanφ,InternationalJournalforParasitology33:897-907(2003))在其研究中,^ian研究組描述了單一形式的ASP-5蛋白,其質量為約56kDa,由體外培養(yǎng)的寄生蟲分泌。包括N端His6標簽的ASP-5蛋白質(SEQIDNO33)可由SEQIDNO31的核酸序列所編碼ATGGGCAGCAGCCATCATCATCATCATCACAGCAGCGGCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCGCGGATCCGAATTCGAGCTCACCACTTGTCCAGGAAATGATCTAACAGATGCTGAACGCACACTGCTAACTAGGGTGCACAATTCCATTCGACGGGAAATAGCGCAAGGAGTTGCAAACAACTACCATGGTGGTAAACTGCCTGCTGGAAAGAACATATACAGGATGAGATACAGCTGTGAGCTGGAACAGGCTGCTATTGATGCTAGTCAAACCTTCTGTTCCGCATCATTGAGGAACCACAGAAATATGGACAAAACATCCAAGCATACGTCACACCATCTATAATCGCTCGCCCGAAAAACGACCTTCTTGAAGATGCAGTGAAACAATGGTATCTGCCTGTTATCTACTACGGCCAACGCGACGCGGCCAACAAGTTCACCGATCCGCGCTTGTACACATTTGCAAACCTCGCCTACGACAAGAACACTGCACTTGGCTGTCACTATGCGAAATGTCAAGGCCCTGACAGAATCGTCATTAGTTGCATGTACAACAACGTCGTTCCTGACAACGCTGTGATCTACGAGCCAGGAACTGCTTGCGTAAAAGATCAGGACTGCACTACTTATCCTCAGTCCACATGCAAGGACAGCCTTTGCATTATTCCTACGCCACATCCACCAAATCCACCAAATCCACCACCTGCAATGTGTCCAAACGCTGAAATGACTGATGCAGCACGAAAGAAGGTCCTCGACATGCACAACTGGCGCAGATCGCAGCTCGCTCTGGGAAACGTTCAAAACGGGAAAAATGCTTACAACTGCCCCACTGCAACAGACATGTACAAGATGGAATATGATTGCGACCTCGAGAACAGCGCTCTAGCGTATGCAAAGCAATGTAGTCTCGTTGGTTCAGCAGAAGGAACTCGTCCAGGAGAAGGCGAGAATGTCCACAAAGGCGCTCTCGTAACCGATCCGGAGGCTGCAGTTCAGACCGCAGTTCAAGCATGGTGGAGTCAAATCTCACAAAATGGACTCAATGCACAGATGAAATTCACTGCTTTCTTGAAGGACAAGCCTGACGCTCCGACAGCGTTTACACAGATGGCGTGGGCCAAATCCGTAAAGCTTGGATGTGCTGTCTCTAATTGTCAGGCAGATACCTTCACCGTCTGTAGATACAAAGCTGCCGGAAACATCGTGGGCGAATTCATCTATACCAAGGGAAATGTATGCGACGCCTGTAAAGCCACATGCATTACCGCGGAAGGTCTTTGCCCAACGCCTTGAGCGGCCGC(SEQIDNO:31)在鑒別供在受鉤蟲感染的哺乳動物中捕獲并檢測鉤蟲和/或鉤蟲抗原的工具的努力中,本發(fā)明人確定約^kDa,而不是56kDa形式的修飾蛋白存在于受鉤口屬感染的犬科動物糞便中。(該^kDa形式的ASP5在本文中稱為“CoproASP5”;在鉤口屬感染的犬科動物糞便中檢測CoproASP5描述于包括在本文中的實施例部分。)因此,在一個方面,本發(fā)明提供了可用于生成抗體的多肽,所述抗體可用于特異性捕獲并檢測CoproASP5。上述可用于生成可用于結合CoproASP5的抗體的一種多肽稱作ASP5-1多肽,其可由下述核酸序列所編碼ATGGGCAGCAGCCATCATCATCATCATCACAGCAGCGGCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCGCGGATCCGAATTCGAGCTCACCACTTGTCCAGGAAATGATCTAACAGATGCTGAACGCACACTGCTAACTAGGGTGCACAATTCCATTCGACGGGAAATAGCGCAAGGAGTTGCAAACAACTACCATGGTGGTAAACTGCCTGCTGGAAAGAACATATACAGGATGAGATACAGCTGTGAGCTGGAACAGGCTGCTATTGATGCTAGTCAAACCTTCTGTTCCGCATCATTGGAGGAACCACAGAAATATGGACAAAACATCCAAGCATACGTCACACCATCTATAATCGCTCGCCCGAAAAACGACCTTCTTGAAGATGCAGTGAAACAATGGTATCTGCCTGTTATCTACTACGGCCAGCGCGACGCGGCCAACAAGTTTACGGATCCGCGCTTGTACACATTTGCAAACCTCGCCTACGACAAGAACACTGCACTTGGCTGTCACTATGCGAAATGTCAAGGCCCTGACAGAATCGTCATTAGTTGCATGTACAACAACGTCGTTCCTGACAACGCAGTGATCTACGAGCCTGGAACTGCTTGCGTAAAAGATGCGGACTGCACTACTTATCCTCAGTCCACATGCAAGGACAGCCTTTGCATTATTCCTACGCCACATCCACCAAATCCACCAAATCCACCACCAGCAATGAGTCCATGAGCGGCCGC(SEQIDNO32)本領域技術人員應理解,由于遺傳密碼的簡并性,如果進行了合適的(沉默的)密碼子取代,除了SEQIDNO32以外的核酸序列也能編碼SEQIDNO34的多肽。分析對應于SEQIDNO24和SEQIDNO25的蛔蟲序列表明,這些蛔蟲序列的每一個均包含大開放閱讀框(ORF)。具體而言,SEQIDNO24的大ORF對應于SEQIDNO24的核苷酸21-446,并預期編碼具有下述氨基酸序列的蛔蟲多肽MLPITFLLAIIVGAAVAHRKCGPNEEWTECTGCEIKCGQGEQPCPMMCRPPSCECMAGKGLRRTADGRCVPEAQCPKRMVKRDEKCGPNEKFLKCRGCEGTCKERLVPCPRMCKPPGCECPASEGFVRNDKGECIKFDDCPK(SEQIDNO26).此外,SEQIDNO25的大ORF對應于SEQIDNO25的核苷酸21-446,并預期編碼具有下述氨基酸序列的蛔蟲多肽MLPLTFLLAFIVGAAVAHRKCGPNEEWTECTGCEMKCGEGETPCPMMCRPPSCECMAGKGLRRTPDGRCVPEAQCPKHMVKRDEKCGKNEKFLKCRGCEGTCKERLVPCPKMCKPPGCECPASEGFVRNDKHECIKFDDCPK(SEQIDNO27).SEQIDNO24,SEQIDNO25、SEQIDNO26、SEQIDNO27、SEQIDNO28、SEQIDNO:和SEQIDNO:30均大致描述于2008年5月19日提交的臨時申請系列號61/U8076,其以全文提述的方式并入本文。分析對應于SEQIDNO1和SEQIDNO2的鞭蟲序列表明,這些鞭蟲序列的每一個均包含大開放閱讀框(ORF)。具體而言,SEQIDNO1的大ORF對應于SEQIDNO1的核苷酸32-1147,并預期編碼具有下述氨基酸序列的鞭蟲多肽MRLVFHAVIYLTLGFLTDAVREKRGKCPPEPPIAGNTIYCRDDFDCGGRQKCCTIAEGRGCVPPYGEQHFEWKPGHCPAIPAVTGMANFCNTD⑶CDGPKKCCLTSRGYDCTHPLHFPIQPQPPVGQCPPSKPRIPGKWVDICAKHANCPDPEKCCDTEYGNRCMDVGLVPGQGERPGNCPNEPRIRGTKYDCRRDDDCDGVQKCCFTVEGRECVEPSRKPLDKPGHCPPIPADVGSARYCDTDRDCDGPRKCCLSSRGYECKHPVHYPDRVEPLVGECPPSRPRIPGKWVDICSKHANCPDPEKCCDTEYGNRCMDVGLVPGQGEKPANCPKEPRIRGTKYDCRRDDDCDGKQKCCYTTEGRECVHGIWP(SEQIDNO3).此外,SEQIDNO2的大ORF對應于SEQIDNO2的核苷酸1-1059,并預期編碼具有下述氨基酸序列的鞭蟲多肽VREKRGKCPPEPPIAGNTIYCRDDFDCGGRQKCCTIAEGRGCVPPYGEQDFEVVKPGHCPAIPAVTGMANFCNTD⑶CDGPKKCCLTSRGYDCTHPLHFPIQPQPPVGQCPPSKPRVPGKWVDICAKHANCPDPEKCCDTEYGNRCMDVGLVAGQGERPGNCPNEPRIRGTKYDCRRDDDCDGVQKCCFTVEGRECVEPSRKPLDKPGHCPPIPADVGSARYCDTDRDCDGPRKCCLSSRGYECKHPVHYPDRVEPLVGECPPSRPRIPGKWVDICSKHANCPDPEKCCDTEYGNRCMDVGLVPGQGEKPANCPKEPRIRGTKYDCRRDDDCDGKQKCCYTTEGRECVHGIWP(SEQIDNO4).SEQIDNO=USEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8和SEQIDNO:9均大致描述于2008年5月19日提交的臨時申請系列號61/1觀077,其以全文提述的方式并入本文。分析對應于SEQIDNO10和SEQIDNO11的蛔蟲序列表明,這些蛔蟲序列的每一個均包含大0RF。具體而言,如其中所示,SEQIDNO10的大ORF對應于SEQIDNO11的核苷酸2-616,并預期編碼具有下述氨基酸序列的蛔蟲多肽KKlYGVAASRRRRHHFTLENSLDTHLKffLSHEQKEELLQMKKDGKSKKELQDKIMHYYEHLEGDAKHEATEQLKGGCREILKHVVGEEKAAEIKALKDSGASKDELKAKVEEALHAVTDEEKKQHIAEFGPACKKIYGVAASRRRRHHFTLENSLDTHLKffLSHEQKEELLQMKKDGKSKKELQDKIMHYYEHLEGMLLALCILY(SEQIDNO12).此外,SEQIDNO11的大ORF對應于SEQIDNO11的核苷酸1-486,并預期編碼具有下述氨基酸序列的蛔蟲多肽IYGVAASRRRRHHFTLEKSLDTHLKffLSHEQKEELLKMKKDGKSKKELQDKVMHFYEHLEGDAKHEATEQLKGGCREILKHVVGEEKAAEIKALKDSGASKDELKAKVEDALHAVTDEEKKQHIAEFGPACKEIFGVPIDVRHKRDPYTWTPDEVAEGLRS(SEQIDNO13).SEQIDNO10,SEQIDNO=IUSEQIDNO12,SEQIDNO13,SEQIDNO14、SEQIDNO15和SEQIDNO16大致描述于2008年5月19日提交的臨時申請系列號61/1觀079,其以全文提述的方式并入本文。分析對應于SEQIDNO17和SEQIDNO18的蛔蟲序列表明,這些蛔蟲序列的每一個均包含大開放閱讀框(ORF)。具體而言,SEQIDNO17的大ORF對應于SEQIDNO17的核苷酸觀-456,并預期編碼具有下述氨基酸序列的蛔蟲多肽MLSVLALFALITFAVAGPESCGPNEVWTECTGCELKCGQDENTPCTLNCRPPSCECSPGRGMRRTNDGRCIPASQCPQHRAKREEQCKPNEQWSPCRGCEGTCAQRFVPCTRNCRPPGCECVAGAGFVRDAEGNCIKFDDCPK(SEQIDNO19).此外,SEQIDNO2的大ORF對應于SEQIDNO18的核苷酸四_457,并預期編碼具有下述氨基酸序列的蛔蟲多肽MLSVLALFALITFAVADPKSCGPNEVWTECTGCELKCGQDEDTPCTLNCRPPSCECSPGRGMRRTDDGRCIPASQCPQHRAKREEQCKPNEQWSPCRGCEGTCAQRFVPCTRNCRPPGCECVAGAGFVRDAAGNCIKFDDCPK(SEQIDNO20).SEQIDNO:17,SEQIDNO18,SEQIDNO19,SEQIDNO20、SEQIDNO:21、SEQIDNO22和SEQIDNO23大致描述于2008年5月19日提交的臨時申請系列號61/U8099,其以全文提述的方式并入本文。分析對應于SEQIDNO:31和SEQIDNO32的鉤蟲序列表明,這些鉤蟲序列的每一個均包含大開放閱讀框(ORF)。具體而言,SEQIDNO:31的大ORF預期編碼具有下述氨基酸序列的鉤蟲多肽MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMASMTGGQQMGRGSEFELTTCPGNDLTDAERTLLTRVHNSIRREIAQGVANNYHGGKLPAGKNIYRMRYSCELEQAAIDASQTFCSASLEEPQKYGQNIQAYVTPSIIARPKNDLLEDAVKQWYLPVIYYGQRDAANKFTDPRLYTFANLAYDKNTALGCHYAKCQGPDRIVISCMYNNVVPDNAVIYEPGTACVKDQDCTTYPQSTCKDSLCIIPTPHPPNPPNPPPAMCPNAEMTDAARKKVLDMHNWRRSQLALGNVQNGKNAYNCPTATDMYKMEYDCDLENSALAYAKQCSLVGSAEGTRPGEGENVHKGALVTDPEAAVQTAVQAWWSQISQNGLNAQMKFTAFLKDKPDAPTAFTQMAWAKSVKLGCAVSNCQADTFTVCRYKAAGNIVGEFIYTKGNVCDACKATCITAEGLCPTP(SEQIDNO33).SEQIDNO:33的前38個氨基酸來源于克隆載體,本領域技術人員會知道該部分可省略或用其他合適的融合配偶體(fusionpartner)取代。此外,SEQIDNO32的大ORF預期編碼具有下述氨基酸序列的鉤蟲多肽MGSSHHHHHHHSSGLVPRGSHMASMTGGQQMGRGSEFELTTCPGNDLTDAERTLLTRVHNSIRREIAQGVANNYHGGKLPAGKNIYRMRYSCELEQAAIDASQTFCSASLEEPQKYGQNIQAYVTPSIIARPKNDLLEDAVKQWYLPVIYYGQRDAANKFTDPRLYTFANLAYDKNTALGCHYAKCQGPDRIVISCMYNNVVPDNAVIYEPGTACVKDADCTTYPQSTCKDSLCIIPTPHPPNPPNPPPAMSP(SEQIDNO:34).本發(fā)明多肽由核酸編碼,所述核酸具有對應于SEQIDNO=USEQIDN0:2、SEQIDNO:10,SEQIDNO=IUSEQIDNO17,SEQIDNO18,SEQIDNO24、SEQIDNO25、SEQIDN0:31和SEQIDNO32以及這些序列所有的保守變體全部或部分的核苷酸序列。因此,應理解為本發(fā)明多肽的氨基酸序列是可變的。舉例而言,本發(fā)明多肽可具有對應于SEQIDN0:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6,SEQIDN0:7、SEQIDN0:8、SEQIDN0:9、SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:14,SEQIDNO:15、SEQIDNO:16,SEQIDNO:19,SEQIDNO:20、SEQIDN0:21、SEQIDNO:22,SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:33禾口SEQIDNO:34全部或部分,或對應于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:19、SEQIDNO20,SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO33和SEQIDNO34的保守變體全部或部分的氨基酸序列。在一個特定實施例中,本發(fā)明的蛔蟲多肽具有下述氨基酸序列MHRKCGPNEEWTECTGCEIKCGQGEQPCPMMCRPPSCECMAGKGLRRTADGRCVPEAQCPKRMVKRDEKCGPNEKFLKCRGCEGTCKERLVPCPRMCKPPGCECPASEGFVRNDKGECIKFDDCPK(SEQIDNO28).在一個特定實施例中,本發(fā)明的鞭蟲多肽具有下述氨基酸序列MVREKRGKCPPEPPIAGNTIYCRDDFDCGGRQKCCTIAEGRGCVPPYGEQHFEVVKPGHCPAIPAVTGMANFCNTD⑶CDGPKKCCLTSRGYDCTHPLHFPIQPQPPVGQCPPSKPRIPGKWVDICAKHANCPDPEKCCDTEYGNRCMDVGLVPGQGERPGNCPNEPRIRGTKYDCRRDDDCDGVQKCCFTVEGRECVEPSRKPLDKPGHCPPIPADVGSARYCDTDRDCDGPRKCCLSSRGYECKHPVHYPDRVEPLVGECPPSRPRIPGKWVDICSKHANCPDPFKCCDTFYGNRCMDVGLVPGQGEKPANCPKFPRIRGTKYDCRRDDDCDGKQKCCYTTEGRECVHGIWP(SEQIDNO5).在另一個特定實施例中,本發(fā)明的蛔蟲多肽具有下述氨基酸序列MHHFTLENSLDTHLKWLSHEQKEELLQMKKDGKSKKELQDKIMHYYEHLE⑶AKHEATEQLKGGCREILKHVVGEEKAAEIKALKDSGASKDELKAKVEEALHAVTDEEKKQHIAEFGPACKKIYGVAAS(SEQIDNO:14).在另一個特定實施例中,本發(fā)明的蛔蟲多肽具有下述氨基酸序列MGPESCGPNEVWTECTGCELKCGQDENTPCTLNCRPPSCECSPGRGMRRTNDGRCIPASQCPQHRAKREEQCKPNEQWSPCRGCEGTCAQRFVPCTRNCRPPGCECVAGAGFVRDAEGNCIKFDDCPK(SEQIDNO:21).在另一個特定實施例中,本發(fā)明的鉤蟲多肽包含與由SEQIDNO:34代表的序列相同或同源的氨基酸序列。接著對應于SEQIDNO28的蛔蟲多肽N端甲硫氨酸殘基之后的125個氨基酸殘基特別地代表SEQIDNO:26的氨基酸殘基18-142。所述N端甲硫氨酸是通過實施標準克隆技術人工添加至該多肽的N端的。針對對應于SEQIDNO的多肽產生的抗體對于檢測蛔蟲抗原是有用的。由于所述N端甲硫氨酸是人工添加的,且并不認為其天然存在于弓首屬中(在SEQIDNOJ6和SEQIDNO:27每一個中,緊挨在18位組氨酸殘基之前的殘基是丙氨酸,而非甲硫氨酸),因此考慮到本發(fā)明多肽可具有對應于SEQIDN0:26的氨基酸殘基18-142的氨基酸序列,或更具體而言HRKCGPNEEffTECTGCEIKCGQGEQPCPMMCRPPSCECMAGKGLRRTADGRCVPEAQCPKRMVKRDEKCGPNEKFLKCRGCEGTCKERLVPCPRMCKPPGCECPASEGFVRNDKGECIKFDDCPK(SEQIDNO29).接著對應于SEQIDNO5的鞭蟲多肽N端甲硫氨酸殘基之后的353個氨基酸殘基特別地代表SEQIDNO:3的氨基酸殘基20-353。所述N端甲硫氨酸是通過實施標準克隆技術人工添加至該多肽的N端的。針對對應于SEQIDNO:5的多肽產生的抗體對于檢測鞭蟲抗原是有用的。由于所述N端甲硫氨酸是人工添加的,且并不認為其天然存在于狐毛尾線蟲中(在SEQIDNO:3中,緊挨在20位纈氨酸殘基之前的殘基是丙氨酸),因此考慮到本發(fā)明多肽可具有對應于SEQIDNO3的氨基酸殘基20-353的氨基酸序列,或更具體而言VREKRGKCPPEPPIAGNTIYCRDDFDCGGRQKCCTIAEGRGCVPPYGEQHFEVVKPGHCPAIPAVTGMANFCNTD⑶CDGPKKCCLTSRGYDCTHPLHFPIQPQPPVGQCPPSKPRIPGKWVDICAKHANCPDPEKCCDTEYGNRCMDVGLVPGQGERPGNCPNEPRIRGTKYDCRRDDDCDGVQKCCFTVEGRECVEPSRKPLDKPGHCPPIPADVGSARYCDTDRDCDGPRKCCLSSRGYECKHPVHYPDRVEPLVGECPPSRPRIPGKWVDICSKHANCPDPEKCCDTEYGNRCMDVGLVPGQGEKPANCPKEPRIRGTKYDCRRDDDCDGKQKCCYTTEGRECVHGIWP(SEQIDNO6).在另一個特定實施例中,本發(fā)明的鞭蟲多肽具有下述氨基酸序列MVREKRGKCPPEPPIAGNTIYCRDDFDCGGRQKCCTIAEGRGCVPPYGEQDFEVVKPGHCPAIPAVTGMANFCNTD⑶CDGPKKCCLTSRGYDCTHPLHHFPIQPQPPVGQCPPSKPRVPGKWVDICAKHANCPDPEKCCDTEYGNRCMDVGLVAGQGERPGNCPNEPRIRGTKYDCRRDDDCDGVQKCCFTVEGRECVEPSRKPLDKPGHCPPIPADVGSARYCDTDRDCDGPRKCCLSSRGYECKHPVHYPDRVEPLVGECPPSRPRIPGKWVDICSKHANCPDPEKCCDTEYGNRCMDVGLVPGQGEKPANCPKEPRIRGTKYDCRRDDDCDGKQKCCYTTEGRECVHGIWP(SEQIDNO7).接著對應于SEQIDNO7的鞭蟲多肽N端甲硫氨酸殘基之后的353個氨基酸殘基特別地代表SEQIDNO:4的氨基酸殘基1-353。所述N端甲硫氨酸是通過實施標準克隆技術人工添加至該多肽的N端的。針對對應于SEQIDNO:7的多肽產生的抗體對于檢測鞭蟲抗原是有用的。由于所述N端甲硫氨酸是人工添加的,因此考慮到本發(fā)明多肽可具有對應于SEQIDNO4的氨基酸殘基1-353的氨基酸序列,或更具體而言VREKRGKCPPEPPIAGNTIYCRDDFDCGGRQKCCTIAEGRGCVPPYGEQDFEVVKPGHCPAIPAVTGMANFCNTD⑶CDGPKKCCLTSRGYDCTHPLHFPIQPQPPVGQCPPSKPRVPGKWVDICAKHANCPDPEKCCDTEYGNRCMDVGLVAGQGERPGNCPNEPRIRGTKYDCRRDDDCDGVQKCCFTVEGRECVEPSRKPLDKPGHCPPIPADVGSARYCDTDRDCDGPRKCCLSSRGYECKHPVHYPDRVEPLVGECPPSRPRIPGKWVDIdHANCPDPEKCCDTEYGNRCMDVGLVPGQGEKPANCPKEPRIRGTKYDCRRDDDCDGKQKCCYFTEGRECVHGIWP(SEQIDNO:8).接著對應于SEQIDNO:14的蛔蟲多肽N端甲硫氨酸殘基之后的1個氨基酸殘基特別地代表SEQIDNO:12的氨基酸殘基14-142。所述N端甲硫氨酸是通過實施標準克隆技術人工添加至該多肽的N端的。針對對應于SEQIDNO:7的多肽產生的抗體對于檢測蛔蟲抗原是有用的。由于所述N端甲硫氨酸是人工添加的,且并不認為其天然存在于弓首屬中(在SEQIDNO:12和SEQIDNO13每一個中,緊挨在14位組氨酸殘基之前的殘基是精氨酸,而非甲硫氨酸),因此考慮到本發(fā)明多肽可具有對應于SEQIDN0:12的氨基酸14-142的氨基酸序列,或更具體而言HHFTLENSLDTHLKffLSHEQKEELLQMKKDGKSKKELQDKIMHYYEHLEGDAKHEATEQLKGGCREILKHVVGEEKAAEIKALKDSGASKDELKAKVEEALHAVTDEEKKQHIAEFGPACKKIYGVAAS(SEQIDNO15).含1氨基酸的蛔蟲蛋白DIV6728(SEQIDNO:21)大小約為14kD,并具有約6.54的理論pi。該蛋白質屬于TIL超家族,其為一組絲氨酸蛋白酶抑制劑。在鑒別供在受蛔蟲感染的哺乳動物中捕獲并檢測蛔蟲和/或蛔蟲抗原的工具的努力中,本發(fā)明人確定僅全長(HkDa)蛋白質的截短(truncated)部分(約7kDa),因此并非14kDa形式,存在于受犬弓首線蟲感染的犬科動物糞便中。(DIV67^的這種7kDa截短部分在本文中稱為“Copro67^”;在犬弓首線蟲感染的犬科動物糞便中檢測C0pr067^描述于包括在本文中的實施例部分。)因此,在一個方面,本發(fā)明提供了可用于生成抗體的多肽,所述抗體可用于特異性捕獲并檢測Copro6728。接著對應于SEQIDNO21的蛔蟲多肽N端甲硫氨酸殘基之后的127個氨基酸殘基特別地代表SEQIDNO:19的氨基酸殘基17-143。所述N端甲硫氨酸是通過實施標準克隆技術人工添加至該多肽的N端的。同樣如整個實施例部分中所描述的,針對對應于SEQIDNO:21的多肽產生的抗體對于檢測蛔蟲抗原是有用的。由于所述N端甲硫氨酸是人工添加的,且并不認為其天然存在于弓首屬中(在SEQIDN0:19和SEQIDN0:20每一個中,緊挨在17位甘氨酸殘基之前的殘基是丙氨酸,而非甲硫氨酸),因此考慮到本發(fā)明多肽可具有對應于SEQIDNO19的氨基酸殘基17-143的氨基酸序列,或更具體而言GPESCGPNEVWTECTGCELKCGQDENTPCTLNCRPPSCECSPGRGMRRTNDGRCIPASQCPQHRAKREEQCKPNEQWSPCRGCEGTCAQRFVPCTRNCRPPGCECVAGAGFVRDAEGNCIKFDDCPK(SEQIDNO22).此外,SEQIDNO:28(大部分是來源于犬弓首線蟲的序列,僅有的例外是N端的甲硫氨酸殘基)與SEQIDNO:27(來源于貓弓首線蟲的序列)的比對示于圖14。由于針對具有對應于SEQIDNO:28的序列的多肽而產生的抗體對于檢測貓弓首線蟲是有用的,還考慮到本發(fā)明多肽可具有對應于SEQIDNO:30的氨基酸序列,其中1位的X是M或缺失(absent),2位的X是L或缺失,3位的X是P或缺失,4位的X是L或缺失(或4位的X是I,其占據SEQIDNO:26的4位),5位的X是T或缺失,6位的X是F或缺失,7位的X是L或缺失,8位的X是L或缺失,9位的X是A或缺失,10位的X是F或缺失(或10位的X是I,其占據SEQIDNO26的10位),11位的X是I或缺失,12位的X是V或缺失,13位的X是G或缺失,14位的X是A或缺失,15位的X是A或缺失,16位的X是V或缺失,16位的X是M或A,35位的X是I或M,39位的X是Q或E,42位的X是Q或T,65位的X是A或P,78位的X是R或H,88位的X是P或K,111位的X是R或K,而132位的X是G或H。此外,SEQIDN0:3相對于SEQIDNO:4的比對示于圖5。還考慮到本發(fā)明多肽可具有對應于SEQIDNO9的氨基酸序列,其中1位的X是M或缺失,2位的X是R或缺失,3位的X是L或缺失,4位的X是V或缺失,5位的X是F或缺失,6位的X是H或缺失,7位的X是A或缺失,8位的X是V或缺失,9位的X是I或缺失,10位的X是Y或缺失,11位的X是L或缺失,12位的X是T或缺失,13位的X是L或缺失,14位的X是G或缺失,15位的X是F或缺失,16位的X是L或缺失,17位的X是T或缺失,18位的X是D或缺失,19位的X是A或是缺失(或19位的X是M,其占據SEQIDNO:5的19位),69位的X是H或D,136位的X是I或V而172位的X是P或A。此外,SEQIDNO:14(大部分是來源于犬弓首線蟲的序列,僅有的例外是N端的甲硫氨酸殘基)與SEQIDNO:13(來源于貓弓首線蟲的序列)的比對示于圖8。由于針對具有對應于SEQIDNO:14的序列的多肽而產生的抗體對于檢測貓弓首線蟲是有用的,還考慮到本發(fā)明多肽可具有對應于SEQIDNO:16的氨基酸序列,其中1位的X是I或缺失,2位的X是Y或缺失,3位的X是G或缺失,4位的X是V或缺失,5位的X是A或缺失,6位的X是A或缺失,7位的X是S或缺失,8位的X是R或缺失,9位的X是R或缺失,10位的X是R或缺失,11位的X是R或M,18位的X是N或K,37位的X是Q或K,52位的X是I或V,55位的X是Y或F,110位的X是E或D,133位的X是K或E,135位的X是Y或F,138位的X是A或P,139位的X是A或I,140位的X是S或D,141位的X是V或缺失,142位的X是R或缺失,143位的X是H或缺失,144位的X是K或缺失,145位的X是R或缺失,146位的X是D或缺失,147位的X是P或缺失,148位的X是Y或缺失,149位的X是T或缺失,150位的X是N或缺失,151位的X是M或缺失,152位的X是T或缺失,153位的X是P或缺失,154位的X是D或缺失,155位的X是E或缺失,156位的X是V或缺失,157位的X是A或缺失,158位的X是E或缺失,159位的X是G或缺失,160位的X是L或缺失,161位的X是R或缺失,而162位的X是S或缺失。此外,SEQIDNO:21(大部分是來源于犬弓首線蟲的序列,僅有的例外是N端的甲硫氨酸殘基)與SEQIDNO:20(來源于貓弓首線蟲的序列)的比對示于圖11。由于針對具有對應于SEQIDNO:21的序列的多肽而產生的抗體對于檢測貓弓首線蟲是有用的,還考慮到本發(fā)明多肽可具有對應于SEQIDNO:23的氨基酸序列,其中1位的X是缺失或M,2位的X是缺失或L,3位的X是缺失或S,4位的X是缺失或V,5位的X是缺失或L,6位的X是缺失或A,7位的X是缺失或L,8位的X是缺失或F,9位的X是缺失或A,10位的X是缺失或L,11位的X是缺失或I,12位的X是缺失或T,13位的X是缺失或F,14位的X是缺失或A,15位的X是缺失或V,16位的X是M或A,17位的X是G或D,19位的X是E或K,42位的X是N或D,66位的X是N或D,而132位的X是E或A。本發(fā)明多肽可具有對應于SEQIDNO:38的氨基酸序列,其中M位的氨基酸是E或A。特異性結合于該多肽的抗體包括在本發(fā)明中。由于具有對應于SEQIDNO:34的氨基酸序列的多肽的前38個氨基酸殘基并非來源于鉤口屬(即,其為載體序列),還考慮到本發(fā)明多肽可包含與由SEQIDN0:34所代表的序列相同或同源的氨基酸序列,其中1位的X是M或缺失,2位的X是G或缺失,3位的X是S或缺失,4位的X是S或缺失,5位的X是H或缺失,6位的X是H或缺失,7位的X是H或缺失,8位的X是H或缺失,9位的X是H或缺失,10位的X是H或缺失,11位的X是S或缺失,12位的X是S或缺失,13位的X是G或缺失,14位的X是L或缺失,15位的X是V或缺失,16位的X是P或缺失,17位的X是R或缺失,18位的X是G或缺失,19位的X是S或缺失,20位的X是H或缺失,21位的X是M或缺失,22位的X是A或缺失,23位的X是S或缺失,M位的X是M或缺失,25位的X是T或缺失,沈位的X是G或缺失,27位的X是G或缺失,觀位的X是Q或缺失,四位的X是Q或缺失,30位的X是M或缺失,31位的X是G或缺失,32位的X是R或缺失,33位的X是G或缺失,34位的X是S或缺失,35位的X是E或缺失,36位的X是F或缺失,37位的X是E或缺失,而38位的X是L或缺失。此外,由于在SEQIDNO33中251位的S是在描述于本文中實施例部分的克隆方法中在該序列中經人工取代的(野生型鉤口屬ASP5蛋白在該位置為C殘基),因此涵蓋了SEQIDNO:34中251位的X可為S或C。還考慮到SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8,SEQIDNO:9、SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:14、SEQIDNO:15,SEQIDNO:16,SEQIDNO:19,SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23,SEQIDNO:26,SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:33和SEQIDNO:;34可僅為較大多肽序列的一部分,并因此可代表,例如,一種或多種通常在蛔蟲中表達的蛋白質的部分序列,或一種或多種人工融合于SEQIDNO3,SEQIDNO:4、SEQIDNO5,SEQIDN0:6、SEQIDN0:7、SEQIDN0:8、SEQIDN0:9、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13,SEQIDNO:14,SEQIDNO:15,SEQIDNO:16,SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:2USEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29,SEQIDNO:30、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34或SEQIDNO:38或者Copro6728的多肽序列。本領域技術人員會知道存在多種供將兩種或更多種多肽片段人工融合在一起的技術。甚至還考慮到本發(fā)明多肽可包括SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO6,SEQIDN0:7、SEQIDN0:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14,SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22,SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30,SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:38和Copro6728中的多于一種。舉例而言,本發(fā)明多肽可包含SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO30,SEQIDNO33,SEQIDNO:;34或SEQIDNO:38或者Copro6728。還考慮到本發(fā)明多月太可包含對應于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO8,SEQIDNO9SEQIDNO12,SEQIDNO13,SEQIDNO14,SEQIDNO:15、SEQIDNO:16,SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:26,SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30,SEQIDNO:33、SEQIDNO:34或SEQIDNO:38或者Copro6728的多種多肽片段。舉例而言,本發(fā)明多肽可由融合在一起的對應于SEQIDNO:5、SEQIDNO:14、SEQIDNO21或SEQIDNO28的多種多肽片段形成。在另一實例中,本發(fā)明多肽可通過對應于SEQIDNO5SEQIDNO14、SEQIDN0:21或SEQIDNOJ8的多種多肽片段和對應于SEQIDNO:7、SEQIDNO:16、SEQIDNO23或SEQIDNO30的多種多肽片段以任意組合融合在一起來形成。雖然本發(fā)明的一種特定多肽通過特定技術表達并分離(其描述于包括在本文中的實施例部分),本領域技術人員會知道任何本發(fā)明多肽可通過使用不同技術中的任何一種或多種來分離。(參見,例如,Sewald禾口Jakubke,P印tides:ChemistryandBiology,WileyPublishing(2002);PeptideSynthesisandApplications(MethodsinMolecularBiology)Howl,1,HumanaPress(2005);Jones,AminoAcidandPeptideSynthesis,OxfordUniversityI^ress(2002),其中每一個以全文提述的方式并入本文。)這些技術包括那些可實施以分離天然存在的下述多肽的技術,所述多肽具有對應于SEQIDNO3,SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:19、SEQIDNO20,SEQIDNO:21、SEQIDNO22、SEQIDNO23、SEQIDNO26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO38和Copro6728,以及這些多肽任何天然存在的變體的氨基酸序列。這些技術還包括那些可實施以人工生成下述多肽的技術,所述多肽具有對應于SEQIDNO3,SEQIDNO:4、SEQIDNO5,SEQIDN0:6、SEQIDN0:7、SEQIDN0:8、SEQIDNO:9SEQIDNO:12,SEQIDNO13,SEQIDNO14、SEQIDNO15,SEQIDNO16,SEQIDNO19,SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO38和Copro6728,以及這些多肽的任何保守變體的氨基酸序列。上述變體可通過,例如,使用任何一種或多種誘變技術或通過直接合成來生成。本發(fā)明的多肽能夠在暴露于這些多肽的宿主動物中引發(fā)免疫應答以產生本發(fā)明的一種或多種抗體。無論其通過何種技術產生,當其要用于產生抗體的目的時,本發(fā)明多肽優(yōu)選制備為基本上純的(substantiallypure)形式。優(yōu)選地,這些多肽為至少約80%純,更優(yōu)選為至少約90-95%純,且甚至更優(yōu)選為至少約99%純。供在宿主生物中引發(fā)免疫應答和供從其分離抗體的示例性技術描述于本文,但應理解為本發(fā)明并不限于這些技術。本領域技術人員會知道有多種技術以供實現該相同的目標,而不乖離本發(fā)明的范圍和精神。IV.本發(fā)明的抗體本發(fā)明還包括抗體及其抗原結合片段,其針對本發(fā)明一種或多種多肽的全部或部分產生并與其特異性結合,而且還包括包括所述抗體及其抗原結合片段的組合物。當與從哺乳動物獲得的試樣接觸時,這些抗體及其抗原結合片段能夠與特定寄生蟲抗原特異性結合。舉例而言,蛔蟲抗體及其抗原結合片段能夠與試樣中存在的蛔蟲抗原特異性結合,但不能與試樣中可能存在的任何來自鉤蟲或鞭蟲的抗原特異性結合。作為進一步的實例,鞭蟲抗體及其抗原結合片段能夠與試樣中存在的鞭蟲抗原特異性結合,但不能與試樣中可能存在的任何來自鉤蟲或蛔蟲的抗原特異性結合。本發(fā)明的抗體僅適用于捕獲一種或多種蛔蟲抗原、鞭蟲抗原和/或鉤蟲抗原,僅適用于檢測一種或多種蛔蟲抗原、鞭蟲抗原和/或鉤蟲抗原,或更優(yōu)選地,適用于捕獲并檢測一種或多種蛔蟲抗原、鞭蟲抗原和/或鉤蟲抗原。本發(fā)明抗體可屬于任何抗體類(antibodyclass),包括,例如,IgG、IgM、IgA、IgD、IgE,且可通過本領域技術人員已知的不同方法之任一來制備。(參見,例如,Dean,Meth0dSMol.Biol.80:23-37(1998);Dean,MethodsMol.Biol.32:361-79(1994);Baileg,MethodsMol.Biol.32:381-88(1994);Gullick,MethodsMol.Biol.32:389-99(1994);Drenckhahn等MethodsCell.Biol.37:7-56(1993);Morrison,Ann.Rev.Immunol.10239-65(1992);Wright等Crit.Rev.Immunol.12:125-68(1992);Harlow禾口Lane,Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory(1988);以及MakingandUsingAntibodies:APracticalHandbook,Howard禾口Kaser編,CRCPress(2006),其每一個均以全文提述的方式并入本文)。在一個技術中,將本發(fā)明多肽引入宿主動物,例如,如引入兔、小鼠、大鼠、豚鼠、山羊、豬、牛、綿羊、驢、犬、貓、雞或馬??赏ㄟ^將所述多肽與載體相聯,和/或通過將宿主暴露于佐劑而在宿主動物中引發(fā)增強的免疫應答,但應理解為本發(fā)明并不需要所述多肽與載體相聯或將所述宿主暴露于佐劑??捎糜谠撃康牡氖纠缘妮d體為牛血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白和大豆胰蛋白酶抑制劑。示例性的佐劑包括弗氏完全佐劑或弗氏不完全佐劑,以及MDL-TDM佐劑。無論所述多肽是否與上述載體相聯,或無論所述宿主是否暴露于佐劑,可選地,可對所述宿主動物進行加強免疫(boosterimmunization),所述宿主動物在此之后放血一次或多次。然后,特異性結合所述多肽的多克隆抗體可從得自所述流出血(bleedorbleeds)的抗血清純化。上述純化可通過,例如,使用親和層析技術來進行,所述技術涉及將所述多肽與固體支持物相聯。上述親和層析技術對本領域技術人員是公知的。在幾個實施方案中,本發(fā)明的蛔蟲抗體是在兔中,通過將該宿主動物用具有對應于SEQIDNO28,SEQIDN0:14和SEQIDNO:21的氨基酸序列的多肽免疫而產生的抗體,(在下文中,這些特定抗體分別稱為“抗-DIV6744”、“抗-DIV6716”和“抗_DIV67^”)。本領域技術人員會知道抗-DIV6744、抗-DIV6716和抗_DIV67^,或本發(fā)明任何其他抗體的產生和分離并不限于任何特定技術。在另一個實施方案中,本發(fā)明的蛔蟲抗體是在兔中,通過將該宿主動物用具有對應于67^C(SEQIDNO:38)的氨基酸序列的多肽免疫而產生的抗體(在下文中,該特定抗體稱為“抗Copro6728C”)。一種產生和分離該抗體的特定技術描述于本文中的實施例部分,但本領域技術人員會知道抗-Copro67^C的產生和分離并不限于該特定技術。在其他實施方案中,本發(fā)明的蛔蟲抗體是在兔中,通過將該宿主動物用全蛔蟲提取物、蛔蟲腸提取物或蛔蟲生殖器官提取物免疫而產生的抗體,如描述于標題為"RoundwormCoproantigenDetection”,在2007年6月15日提交的美國專利申請序列號11/763592中的。在另一個實施方案中,本發(fā)明的鞭蟲抗體是在兔中,通過將該宿主動物用具有對應于SEQIDNO5和SEQIDNO7的氨基酸序列的多肽免疫而產生的抗體(在下文中,此特定抗體稱為“抗-DIV6901”和“抗-DIV6902”)。本領域技術人員會知道抗-DIV6901、抗-DIV6901,或本發(fā)明任何其他抗體的產生和分離并不限于任何特定技術。在別的實施方案中,本發(fā)明的鉤蟲抗體是在兔中,通過將該宿主動物用具有對應于SEQIDNO:34的氨基酸序列的多肽免疫而產生的抗體。(在下文中,此特定抗體稱為“抗-Asp5-1”)。本領域技術人員會知道抗-Asp5-1,或本發(fā)明任何其他抗體的產生和分離并不限于任何特定技術。在其他實施方案中,本發(fā)明的鉤蟲抗體是在兔中,通過將該宿主動物用具有對應于SEQIDN0:33的氨基酸序列的多肽免疫而產生的抗體,S卩,用來自鉤蟲的基本上全長ASP5蛋白質,如描述于標題為"Device,KitandMethodforHookwormAntigenDetection”,提交于2007年6月15日的美國專利申請系列號11/763583中的。在其他實施方案中,本發(fā)明的抗體是在宿主中針對一種或多種具有下述氨基酸序列的多肽而產生的,所述氨基酸序列為對應于SEQIDNO5,SEQIDNO14,SEQIDNO:21、SEQIDNO和SEQIDNO:34的序列的保守變體。在一些其他實施方案中,本發(fā)明的抗體是在宿主中針對一種或多種具有下述氨基酸序列的多肽而產生的,所述氨基酸序列對應于SEQIDNO3,SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:15、SEQIDNO:16,SEQIDNO:19,SEQIDNO:20、SEQIDNO:22,SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:33,SEQIDNO:38、Copro67^和CoproAP5的序列,或所述氨基酸序列為這些序列中任一的保守變體。在另一個實施方案中,本發(fā)明的抗體是特異性結合一種或多種具有下述氨基酸序列的多肽的抗體,所述氨基酸序列對應于SEQIDNO3,SEQIDNO:4、SEQIDN0:5、SEQIDNO:6,SEQIDN0:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO30,SEQIDNO33、SEQIDNO34,SEQIDNO:38、Copro6728或CoproAP5的序列,或其抗原性部分。還在其他實施方案中,本發(fā)明的抗體特異性結合一種或多種具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列為對應于SEQIDNO5,SEQIDNO14,SEQIDNO:21、SEQIDNO:或SEQIDNO:34的序列的保守變體。在一些其他實施方案中,本發(fā)明的抗體特異性結合一種或多種具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列對應于SEQIDNO3,SEQIDNO4,SEQIDNO:6,SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:15,SEQIDNO:16、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:22、SEQIDNO23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30,SEQIDNO:33、SEQIDNO:38,Copro6728或CoproAP5的序列,或所述氨基酸序列為這些序列中任一的保守變體。還應理解為,可選地,本發(fā)明的抗體可為多克隆或單克隆抗體、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體及其片段。對目標多肽有特異性的單克隆抗體可通過,例如,制備產生對目標多肽具有所需特異性的抗體的細胞系來獲取并純化。該類型的細胞系可來源于特定種類的細胞(例如,脾細胞),其從之前如前所述用多肽免疫的宿主動物分離。在上述情況下,這些細胞可隨即通過下述方法被永生化,例如,通過實施本領域技術人員已知的不同融合技術之任一將其與骨髓瘤細胞融合。在一個示例性的技術中,將來自所述經免疫的宿主動物的細胞與其融合配偶體(例如,所述骨髓瘤細胞)一同在洗滌劑的存在下溫育較短時間,然后將其鋪板于支持雜交細胞(但不支持所述骨髓瘤融合配偶體)生長的培養(yǎng)基上。上述選擇可通過,例如,使用次黃嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT)來達成。當雜交細胞在選擇中出現時(可能為開始選擇方法后一或兩周內),對單個雜交集落(及其上清)就其與對宿主動物進行免疫所用的多肽的結合能力進行測試。具有最佳結合特異性的雜交集落會代表可從其分離單克隆抗體的最佳候選。這些單克隆抗體,例如,可直接從這些集落所生長的上清(即,培養(yǎng)基)通過使用本領域技術人員已知的不同技術之任一分離。本發(fā)明的抗體還可為單鏈抗體(scFv),或抗體的抗原結合片段。抗體的抗原結合片段是完整抗體的一部分,包括完整抗體的抗原結合位點或可變區(qū),其中該部分不含完整抗體Fc區(qū)的重鏈恒定域??贵w片段的實例包括Fab、Fab\Fab,_SH、F(ab')2和Fv片段。除了從動物或哺乳動物細胞生產和純化之外,抗體、抗體片段或非抗體支架可基于不同的體外技術(包括噬菌體展示、核糖體展示或細菌展示)來選擇??贵w,包括二次抗體,可用任何類型的本領域已知標記物進行標記,其包括,例如,熒光、化學發(fā)光、放射性、酶、膠粒、放射性同位素和生物發(fā)光標記物。在本發(fā)明的不同實施方案中,本發(fā)明的一種或多種抗體用酶、膠粒、放射性核素或熒光體(fluorophor)來標記。所述微粒標記物可為,例如,與抗體偶合(conjugate)的有色乳膠顆粒、染料溶膠(dyesol)或金溶膠(goldsol)。本發(fā)明的方法、裝置和試劑盒本發(fā)明的裝置和試劑盒在一個方面,本發(fā)明包括檢測一種或多種來自試樣的寄生蟲抗原是否存在的裝置,所述裝置包括固體支持物,其中至少兩種選自下組的抗體固定在所述固體支持物上(a)第一抗體,其能夠特異性結合蛔蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或鉤蟲糞抗原;(b)第二抗體,其能夠特異性結合鞭蟲糞抗原,但不結合蛔蟲或鉤蟲糞抗原;和(C)第三抗體,其能夠特異性結合鉤蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或鉤蟲糞抗原;和可選地,(d)—種或多種類型的蛔蟲糞抗原、鞭蟲糞抗原和/或鉤蟲糞抗原,其中所述一種或多種類型的蛔蟲糞抗原、鞭蟲糞抗原和鉤蟲糞抗原與所述抗體特異性結合。所述裝置配置為協助特異性結合寄生蟲糞抗原,并將其從來自哺乳動物試樣中的蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲中分離出來。在一個方面,所述裝置包括固體支持物,其中本發(fā)明的一種或多種抗體固定于固體支持物上。所述固體支持物可為,例如,微滴定板的孔的內側、底部表面,或作為側流裝置一部分而包括在內的基底(substrate),但不僅限于此。示例性的微滴定板為ImmulonIB96孔板(其可從ThermoScientific,Milford,MA市購),但應理解為本領域技術人員會知道非常多種其他并非所述ImmulonIB96孔板的微滴定板能夠使得抗體固定于其上,并因此適用于提供本發(fā)明的固體支持物。示例性的側流裝置是描述于美國專利號57^010中的側流裝置,其以全文提述的方式并入本文。進行側流測定法的裝置可為SNAP裝置,其可從IDEXXLaboratories,Inc.,ffestbrook,ME市購。然而,應理解為本領域技術人員會知道,非常多種其他并非SNAP裝置或描述于美國專利號57^010中的側流裝置能夠使得抗體固定于其上,并因此適于用作本發(fā)明的裝置。這些裝置包括,例如,使用膠體金技術的側流裝置。用于本發(fā)明裝置的抗體可通過本領域任何已知技術固定于固體支持物上,所述技術包括,例如,共價或非共價地,直接或非直接地將所述抗體附著于所述固體支持物。因此,雖然這些抗體可通過物理吸附(即,不使用化學接頭)附著于固體支持物,確實也可以將這些抗體通過任何本領域技術人員可方便地知道的化學結合(即,使用化學接頭)方法固定于所述固體支持物。還應理解所述固體支持物可為任何適用于固定本發(fā)明抗體的材料。舉例而言,所述固體支持物可為珠、顆粒、管、孔、探針、浸漬片(dipstick)、移液管頭(pipettetip)、載玻片、纖維、膜、紙、天然的和改性的纖維素、聚丙烯酰胺、瓊脂糖、玻璃、聚丙烯、聚乙烯、聚苯乙烯、右旋糖苷、尼龍、淀粉酶、塑料、磁石(magnetite)或本領域技術人員可方便地知道的任何其他合適的材料??蛇x地,所述裝置可包括一種或多種標記的抗原捕捉試劑(labeledantigencapturereagent),其可與來自哺乳動物的試樣在施用于本發(fā)明裝置之前混合。當包含所述標記的抗原捕捉試劑時,所述標記的抗原捕捉試劑可或可不沉積于或干燥于所述裝置的固體表面?!翱乖蹲皆噭敝溉魏螌σ环N或多種目標抗原具有特異性的化合物。所述標記的抗原捕捉試劑,無論是添加至所述哺乳動物試樣或預沉積于所述裝置上,可為(例如)對蛔蟲抗原具有特異性的標記抗體,包括但不僅限于,本發(fā)明的抗體。舉例而言,與辣根過氧化物酶偶合的抗-DIV6744可用作標記的抗原捕捉試劑。在另一個實例中,與辣根過氧化物酶偶合的抗-DIV6901或抗-DIV6902可用作標記的抗原捕捉試劑。在進一步的實例中,與辣根過氧化物酶偶合的抗-DIV6716可用作標記的抗原捕捉試劑。在進一步的實例中,與辣根過氧化物酶偶合的抗_DIV67^可用作標記的抗原捕捉試劑。還在另一個實施例中,與辣根過氧化物酶偶合的抗-Copro67^可用作標記的抗原捕捉試劑。可選地,所述裝置還可包括將未結合的材料(例如,所述哺乳動物試樣的未反應部分,例如,糞便提取物的未反應部分,以及未結合的抗原捕捉試劑)從反應區(qū)(固相)運出(如當所述裝置是SNAP裝置時)或以其他方式促進其移除(如當所述裝置包括微滴定板時)的液體試劑。所述液體試劑可為洗滌試劑,并僅用于將未結合的材料從反應區(qū)移除,或其可包括檢測試劑,并用于移除未結合的材料并促進抗原檢測。舉例而言,在抗原捕捉試劑偶合于酶時,所述檢測試劑包括當在反應區(qū)(固相)中與酶-抗體偶合物反應時產生可檢測信號的底物?;蛘?,在標記的抗原捕捉試劑偶合于放射性、熒光或光吸收分子的情況下,所述液體試劑僅作為洗滌液起作用,通過洗去未結合的標記試劑促進在反應區(qū)檢測復合物的形成。所述液體試劑可還包括有限量的“抑制劑”,即,阻斷所述可檢測終產物顯色(development)的物質。有限量定義為直至大多數或所有過量的、未結合的材料從所述第二區(qū)域運輸走(此時產生可檢測的終產物)為止,足以阻斷終產物顯色抑制劑的量。本發(fā)明的裝置還可包含不同的結合試劑,其固定于與所述一種或多種抗原捕捉試劑不同的位置。舉例而言,識別標記的抗體或抗原捕捉試劑的種特異性(例如,蛔蟲特異性)抗體部分的免疫試劑(抗體、抗原或多肽),或酶標記試劑的酶部分,可作為陽性對照包含在內以評估所述試劑在所述裝置內的活力(viability)。舉例而言,陽性對照可為在(例如)山羊或小鼠中產生的抗辣根過氧化物酶抗體。此外,從所述抗原-抗體復合物的抗體部分所來源的物種的非免疫成員分離的試劑(例如,抗體),可作為陰性對照包括在內以評估免疫復合物(即,抗原-抗體復合物)形成的特異性。除了設計為從哺乳動物試樣中的蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲特異性結合并分離寄生蟲糞抗原之外,可選地,本發(fā)明的裝置可設計為使其能夠進行一種或多種其他診斷測試。舉例而言,所述固體支持物還可包含供檢測一種或多種非蠕蟲寄生蟲、一種或多種病毒、一種或多種真菌或一種或多種細菌的試劑。供檢測一種或多種非蠕蟲寄生蟲、一種或多種病毒、一種或多種真菌或一種或多種細菌的試劑可為,例如,一種或多種抗體,或一種或多種由對一種或多種非蠕蟲寄生蟲、一種或多種病毒、一種或多種真菌或一種或多種細菌有特異性的抗體識別的抗原。在一個實施方案中,本發(fā)明的裝置是微滴定板,其包括多個孔,其中每個孔包含具有抗-DIV6744pAB固定于其上的固體支持物。所述板可與本發(fā)明的方法一同結合用于在試樣中檢測一種或多種寄生蟲糞抗原是否存在。舉例而言,可在哺乳動物中通過用抗_DIV6744pAB檢測一種或多種蛔蟲抗原、用抗-DIV6902pAB檢測一種或多種鞭蟲抗原并用抗-Asp5-lpAB檢測一種或多種鉤蟲抗原來診斷蛔蟲感染,所述抗體均固定于固體支持物之上。在一個實施方案中,檢測的抗原是糞抗原?!凹S抗原”為存在于糞便試樣中并且可特異性結合于抗體的蛔蟲、鞭蟲或鉤蟲的任何一種或多種產物。糞抗原因此可為全蟲、蟲卵、蟲片段或自蟲分泌、排泄或脫落(shed)的產物,或其組合。糞抗原還包括本發(fā)明多肽,如具有對應于SEQIDNO3,SEQIDNO:4、SEQIDNO5,SEQIDN0:6、SEQIDN0:7、SEQIDN0:8、SEQIDN0:9、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13,SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16,SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:2USEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29,SEQIDNO:30,SEQIDNO:33、SEQIDNO:34或SEQIDNO:38的氨基酸序列的多肽,具有為這些序列保守變體的氨基酸序列的多肽,和/或任何上述多肽的抗原性片段,以及,例如,CoproASP5和Copro6728。本發(fā)明還包括用于在哺乳動物試樣中檢測和分辨蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲的測定試劑盒(例如,制成的制品)。因此,試劑盒可包括本發(fā)明的一種或多種裝置和/或組合物。舉例而言,所述試劑盒可包括抗蛔蟲抗體以及確定所述抗體結合于蛔蟲抗原的手段,抗鞭蟲抗體以及確定所述抗體結合于鞭蟲抗原的手段,和抗鉤蟲抗體以及確定所述抗體結合于鉤蟲抗原的手段。在一個特定的實例中,上述試劑盒包括具有固定的抗-蛔蟲抗體(如抗-DIV6744)、抗鞭蟲抗體(如抗-DIV6902)和抗鉤蟲抗體(如抗-Asp5_l)的裝置,例如,一種或多種抗原捕捉試劑(例如,未固定的標記的抗原捕捉試劑和固定的抗原捕捉試劑)和洗滌試劑,以及檢測試劑和陽性和陰性對照試劑,若需要或合適。其他的組分如本領域一般技術人員已知的緩沖液、對照等,可包含在上述測試試劑盒中。不同的試劑的相對量可變動,以提供基本上使所述測定法的敏感度最優(yōu)的試劑在溶液中的濃度。具體而言,所述試劑可作為干粉提供,通常經凍干,其在溶解時會提供具有合適濃度以供與試樣合并的試劑溶液。本試劑盒還可包括實施本發(fā)明一種或多種方法的說明書,包括所述試劑盒中所包括的本發(fā)明的任何裝置和/或組合物的使用說明書。B.本發(fā)明的方法本發(fā)明還包括使用本發(fā)明一種或多種裝置、試劑盒和/或組合物檢測在試樣中是否存在一種或多種寄生蟲抗原的方法。因此,可進行所述方法檢測蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲在試樣中是否存在,所述試樣的例子如從哺乳動物獲得的糞便試樣,所述哺乳動物包括但不僅限于犬、貓、豬、?;蛉?。此外,還可進行所述方法檢測例如弓首屬,如犬弓首線蟲或貓弓首線蟲或牛弓首線蟲,蛔屬,如似蚓蛔線蟲和豬蛔線蟲,無飾屬,如單一無飾線蟲,偽新地蛔線蟲,如P.decipiens,毛尾屬和/或毛首屬,如狐毛尾線蟲、Trichuriscampanula、有齒毛尾線蟲、豬毛尾線蟲、毛尾毛尾線蟲、褪色毛尾線蟲(Trichurisdiscolor)和毛尾毛首線蟲,犬鉤口線蟲、巴西鉤口線蟲、十二指腸鉤口線蟲、錫蘭鉤口線蟲、Ancylostomatubaeforme和多齒鉤口線蟲、美洲板口線蟲和狹首鉤形線蟲。在本發(fā)明的方法中,蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲的檢測可通過檢測一種或多種蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲抗原,如Copro6728和CoproASP5或具有對應于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO5,SEQIDN0:6、SEQIDN0:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO9SEQIDN0:12、SEQIDNO:13,SEQIDNO:14、SEQIDNO15,SEQIDNO16,SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:2USEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34或SEQIDNO:38的氨基酸序列的多肽,以及這些序列的抗原性片段和/或保守變體,以及CoproASP5是否存在來進行。當被測試寄生蟲糞抗原的試樣是糞便時,所述糞便的可溶性部分可通過任何本領域已知實驗方法收集。舉例而言,除了在本文中實施例部分描述的特定實驗方法之外,所述試樣的可溶性部分通??赏ㄟ^使用過濾、提取、離心或單純混合繼以重量沉降(gravimetricsetting)來收集。本領域技術人員會知道,還有多種從哺乳動物提取和制備非糞便試樣的方法。舉例而言,所述試樣可為由所述哺乳動物天然分泌或以其它方式釋放的體液,或從所述哺乳動物人工得到的體液。所述人工提取可通過對所述哺乳動物進行擠乳,或通過將注射器扎入所述哺乳動物體內,并將所述流體抽至注射器中。一旦獲得,可選地,可對所述流體進行分級(例如,血清可從全血中分級,然后用作試樣)。作為另一個實例,所述試樣可通過從哺乳動物(如所述哺乳動物的口腔)拭取得到。還作為另一個實例,可通過活組織檢查獲得組織切片。所述方法包括在使得抗原/抗體復合物(S卩,免疫復合物)能夠形成的條件下,將哺乳動物試樣與一種或多種對寄生蟲糞抗原具有特異性的抗體相接觸。即,抗體特異性結合于存在于試樣中的糞抗原。本領域技術人員熟悉可用于檢測上述抗原/抗體復合物結合的測定法和條件。舉例而言,所述抗原/抗體復合物可使用結合于所述抗原/抗體復合物的二抗檢測。試樣中抗原和抗體之間復合物的形成可使用本領域已知的任何合適方法檢測。此外,在一個特定反應中形成的抗體-抗原復合物的相對量可參考在任何其他反應中,通過本領域已知方法,為取得該目標而形成的量來測定。當確定受測試的試樣具有特定(蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲)抗體-抗原復合物時,可基于形成的特定復合物得出結論:特定寄生蟲存在于宿主哺乳動物中,以及存在的為何種寄生蟲(蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲)。當確實如此時,可得出結論所述測試試樣來自遭受腸道寄生蟲感染的動物。受測試的哺乳動物遭受腸道寄生蟲感染的結論可由例如醫(yī)師在診斷服務提供者(diagnosticserviceprovider)或所述哺乳動物的管理者(如所述哺乳動物的獸醫(yī))來作出。當哺乳動物的管理者確定(或者從他處得知)哺乳動物遭受寄生蟲感染且存在的為何種寄生蟲時,所述管理人可隨即對所述哺乳動物進行經優(yōu)化設計以使所述哺乳動物特定驅除所述寄生蟲的治療過程,而非一般性驅除寄生性線蟲的治療過程。此外,本發(fā)明可用于確證任何接受針對特定寄生蟲感染的治療的動物已消除了該感染。例如,得知試樣包括蛔蟲和鞭蟲,但非鉤蟲的管理者,可使用該信息特別針對蛔蟲治療所述試樣所取自的動物,所述治療通過對該哺乳動物施以針對蛔蟲最具效力的藥物,與針對鞭蟲最具效力的第二藥物進行。缺少上述信息,所述管理者則可能,例如,用僅對蛔蟲或僅對鞭蟲最具效力,或對蛔蟲和鞭蟲均非最具效力(在此情況下,所述哺乳動物有接受非理想治療的危險)的藥物來治療所述哺乳動物。此外,可告誡可能與受感染的動物或其排泄物接觸的人采取預防措施以防染上所述寄生蟲。在此背景下,以高特異性確定所述蠕蟲的物種是重要的,因為一些寄生蟲,如蛔蟲和鉤蟲,可導致嚴重的人類疾病(例如,幼蟲移行癥(larvalmigrans)),而通常認為鞭蟲并不在人類中起重要的動物傳染性(zoonotic)作用。本發(fā)明方法的步驟可包括將哺乳動物試樣施于本發(fā)明裝置,其包括能夠特異性結合蛔蟲糞抗原,但非鞭蟲或鉤蟲糞抗原的第一抗體;能夠特異性結合鞭蟲糞抗原,但非蛔蟲或鉤蟲糞抗原的第二抗體;和能夠特異性結合鉤蟲糞抗原,但非鞭蟲或鉤蟲糞抗原的第三抗體,以在所述糞抗原存在(如有)存在于試樣中時形成抗體-糞抗原復合物。針對蛔蟲抗原的特異性抗體可直接或間接地附著于固體支持物或基底,如微滴定孔、SNAP裝置的抗體固定部分、磁珠、非磁性珠(non-magneticbead)、柱、基質(matrix)、膜、由合成或天然纖維組成的纖維毯片(fibrousmat)(例如,基于玻璃或纖維素的材料,或熱塑性聚合物,如,聚乙烯、聚丙烯或聚酯),由顆粒材料(例如,玻璃或不同的熱塑性聚合物)組成的燒結結構(sinteredstructure),或由硝酸纖維素、尼龍、聚砜等(通常本質上是合成的)組成的澆注的(cast)膜質薄膜(membranefilm)。所有這些基底材料可以以合適的形狀,如薄膜(film)、片材或板使用,或其可涂于(coated)或粘于(bonded)或層壓在(laminated)合適的惰性載體(如紙、玻璃、塑料薄膜或纖維)上。將肽固定在固相上的合適方法包括離子的、疏水的、共價相互作用以及類似方法。然而,本發(fā)明方法并不需要使用固相或基底。本領域技術人員會知道有多種方法可實施本方法以檢測蛔蟲是否存在而無需涉及使用固相或基底。正好在一個實例中,可實施無需使用固相或基底的免疫沉淀方法。在本發(fā)明一些實施方案中,當指示試劑(如與抗體結合的酶偶合物)催化可檢測的反應時,檢測出抗原/抗體復合物。可選地,包括產生信號的化合物的指示試劑在使得可檢測的抗原/抗體/指示物復合物能夠形成的條件下可施用于所述抗原/抗體復合物。可選地,所述抗體可在形成抗原/抗體復合物之前用指示試劑標記??乖?抗體復合物或抗原/抗體/指示物復合物在本發(fā)明的一些方法中可通過輻射度測量(radiometric)、色度測量、熒光測量、光度測量、大小分離或沉淀方法來特異性地檢測。對抗原/抗體復合物的檢測還可以通過添加與包括信號產生化合物的指示試劑偶合的二抗來達成。包括與多肽/抗體復合物結合的信號產生化合物(標記物)的指示試劑,可使用上述方法檢測,并可包括顯色劑、催化劑(如酶偶合物)、熒光化合物(如熒光素和羅丹明),化學發(fā)光化合物(如Dioxetane、吖啶鹽(acridinium)、菲啶鹽(phenanthridinium)、釕和魯米諾(luminal))、放射性元素、直接可見的標記物,以及輔因子、抑制劑、磁性顆粒等。酶偶聯物的實例包括堿性磷酸酶、辣根過氧化物酶、半乳糖苷酶等。特定標記物的選擇并非至關重要,但其應能夠單獨或與一種或多種別的物質一同產生信號。本發(fā)明的方法包括但不僅限于基于競爭、直接反應或夾心(sandwich)類型測定法,其包括但不僅限于ELISA、RIA、免疫熒光測定法(IFA)、血凝(HA)、熒光偏振免疫測定法(FPIA)和微滴定板測定法(即,任何在微滴定板上一個或多個孔中進行的測定法)。本發(fā)明的一種測定法包括可逆流層析結合測定法,其可通過,例如,使用SNAP裝置來進行。參見美國專利號57沈010。在一些實施方案中,本發(fā)明方法促進夾心或競爭類型的特異性結合測定法。在夾心測定法中,將抗原捕捉試劑固定于反應區(qū)。這些抗原捕捉試劑可特異性結合于就蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲進行測試的試樣中的抗原。在結合來自所述試樣的抗原后,所述抗原捕捉試劑/抗原復合物由任何合適的方法檢測。舉例而言,所述復合物可與標記的特異性結合試劑(例如,酶抗體偶合物)反應,而抗原被檢出(例如,在與底物反應后)。在本發(fā)明方法的其他實施方案中,進行競爭測定法。在競爭測定法中,抗原捕捉試劑固定于反應區(qū),并與來自試樣的抗原和標記的抗原(例如,抗原酶偶合物)同時接觸。在反應區(qū)檢出的標記物量與所述試樣中抗原量成反比。在本方法的一些實施方案中,對蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲糞抗原具有特異性的抗體附著于固相或基底。將潛在地包含來自蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲的抗原的試樣添加至所述基底。添加特異性結合蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲的抗體。所述抗體可以是與固相上使用的相同的抗體或其可以來自不同的來源或物種。另外,這些抗體可以與指示試劑(如酶偶合物)連接。可在每次添加之前進行洗滌步驟。可添加生色團或酶底物,并任其顯色。所述顏色反應可停止,且顏色可使用例如分光光度計來量化,和/或所述顏色可由人肉眼進行主觀評估。在所述方法的其他實施方案中,對蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲糞抗原具有特異性的抗體附著于固相或基底。將潛在地包含蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲抗原的試樣添加至所述基底。添加特異性結合所述糞抗原的抗物種二抗。這些二抗來自與固相抗體來自的物種所不同的物種。添加特異性結合所述二抗,但不特異性結合所述固相抗體的抗物種三抗。所述三抗可包含指示試劑,如酶偶合物??稍诿看翁砑又斑M行洗滌步驟??商砑由珗F或酶底物,并任其顯色。所述顏色反應可停止,且顏色可使用例如分光光度計來量化,和/或所述顏色可由人肉眼進行主觀評估。在一個特定實施例中,本發(fā)明方法與裝置(其為側流測定法裝置)結合,通過將準備好的哺乳動物試樣在第一區(qū)(試樣施加區(qū))添加至所述裝置的流動基質來進行。所述準備好的試樣在流體流動路徑中通過毛細作用攜帶至流動基質的第二區(qū),此處存在顆粒狀的標記物,其能夠與所述試樣中的抗原結合并形成第一復合物。所述顆粒標記物可為,例如,與對蛔蟲抗原有特異性的抗體偶合的有色乳膠顆粒、染料溶膠或金溶膠。第一復合物被攜帶至流動基質的第三區(qū),在此特異性結合蛔蟲抗原的抗體固定于獨特的位置。第二復合物在所述固定抗體和第一復合物之間形成。作為第二復合物一部分的顆粒標記物可直接由人的肉眼觀察到。每個特定寄生蟲抗體可為在反應區(qū)(固相)的固定抗原捕捉試劑。第二抗原捕捉試劑,即,與標記物偶合了的第二特異性寄生蟲抗體,可在所述試樣添加至所述裝置之前添加至所述試樣,或所述第二抗原捕捉試劑可并入所述裝置。舉例而言,標記的抗原捕捉試劑可沉積并干燥在流體流動路徑上,其提供試樣施加區(qū)與所述固相之間的流體聯通。標記的抗原捕捉試劑與測試試樣的接觸可導致所述標記的抗原捕捉試劑溶解。在本發(fā)明方法的一個實施方案中,特定寄生蟲糞抗原通過ELISA檢測。本發(fā)明的ELISA方法的特定實例在本文中包含的實施例部分描述。盡管本發(fā)明參考那些特定ELISA方法描述,但是應理解為本領域一般技術人員會知道可使用可選的(alternative)、附加的(additional)或替代的(substitute)ELISA步驟,而不乖離通過本發(fā)明的這種方法達成的基本目標。在本發(fā)明的另一個實施方案中,寄生蟲糞抗原通過使用例如側流裝置(如SNAP裝置)檢測。此外,供檢測寄生蟲感染的本發(fā)明方法可與其他診斷性測定法組合以檢測其他生物或病狀的存在。舉例而言,本發(fā)明的測定法可與檢測一種或多種非蠕蟲糞便寄生蟲、一種或多種病毒、一種或多種真菌、一種或多種細菌、一種或多種血液-傳播的寄生蟲或潛血、或其組合的試劑組合。通過在單一測定裝置中提供兩種或更多種獨特結合位點(如,例如,在SNAP測定裝置中兩個獨特的點),本發(fā)明使得從單一試樣檢測兩種或更多種生物成為可能。在一個實施方案中,有三個獨特的點(每個點為抗原或抗體結合試劑)供從單一試樣檢測過去或現在的感染或來自三種生物的侵襲(infestation)(即,相同的單一試樣在單一裝置上暴露于三種捕捉試劑)。還在另一個實施方案中,有四個獨特的點(每個點為抗原或抗體結合試劑)供從單一試樣檢測過去或現在的感染或來自四種生物的侵襲(即,相同的單一試樣在單一裝置上暴露于四種捕捉試劑)。然而,應理解為相同的裝置可包括多于四個獨特的點和/或使得檢測多于四種生物成為可能。供檢測一種或多種非蠕蟲寄生蟲、一種或多種病毒、一種或多種真菌或一種或多種細菌的試劑可為,例如,一種或多種抗體或由對一種或多種非蠕蟲寄生蟲、一種或多種病毒、一種或多種真菌或一種或多種細菌具有特異性的抗體識別的抗原。可選地,所述方法還可包括使用一種或多種來自蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲的核酸,包括但不僅限于本發(fā)明的核酸,以確定蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲在哺乳動物試樣中是否存在。上述使用這些核酸確定寄生蟲的存在可在進行所述方法的任何其他方面(包括通過抗體檢測蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲)之前、之后或同時進行。因此,在一個方面,當在特定試樣中檢測到或未檢測到蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲,而將獲取所述試樣的哺乳動物診斷為罹患或未罹患蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲感染之后,所述試樣(或從經診斷的哺乳動物之后獲得的試樣)可就任何一種或多種核酸(包括本發(fā)明的任何一種或多種核酸)是否存在進行測試。任何未能在特定哺乳動物中通過使用一種或多種核酸檢測出特定寄生蟲(在通過使用一種或多種抗體檢測出所述寄生蟲)的人會需要考慮到所述抗體在可檢測的寄生蟲核酸出現在試樣之前便檢測到寄生蟲糞抗原的可能性。在上述情況下,所述哺乳動物的管理者可選擇忽略所述核酸未能檢測出所述寄生蟲的觀察結果,而基于所述抗體事實上檢測到寄生蟲的觀察結果,繼續(xù)特異性地針對寄生蟲感染治療所述哺乳動物。在另一個方面,所述核酸用于在特定哺乳動物中確定寄生蟲是否存在,然后寄生蟲是否存在進一步通過使用本發(fā)明的抗體來評估。對一種或多種寄生蟲核酸的檢測可通過使用任何本領域技術人員已知的核酸檢測技術來進行。舉例而言,上述檢測可通過進行基于PCR的技術(例如,基于實時PCR的技術,但不僅限于此)來進行。示例性的基于PCR的技術描述于,例如,PCRProtocols(MethodsinMolecularBiology),2nded.,Bartlett禾口Stirling編,HumanaPress(2003);以及Sambrook禾口Russell,MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress(2001);每個均以全文提述的方式并入本文。參照五個實施例具體地描述本發(fā)明;然而,不應視其為對本發(fā)明的限定。實施例除非另行指明,下述材料和技術用于產生如下所述實施例1-4中一個或多個所描述的數據。多克隆蛔蟲抗體制備。多克隆抗體“抗_DIV67^pAB”(IgG)分別在兔中針對具有對應于SEQIDNO:21的氨基酸序列的多肽來產生,并通過使用標準方法從血清純化。簡言之,對于抗_DIV67^pAB,將SEQIDNO17的核苷酸76-456框內(in-frame)克隆入載體(D8223,其為PUC19的衍生物)以構建質粒D8M5。特別地,SEQIDNO:21在其序列N端甲硫氨酸殘基之后的125個氨基酸對應于SEQIDNO19的一部分,并由SEQIDNO17的克隆部分所編碼。在D8245質粒中,N-端甲硫氨酸殘基由在該質粒中載體與來自SEQIDN017的克隆序列連接的連接處(junction)的載體序列所編碼。然后將編碼SEQIDNO21的DNA序列從所述D8245質粒通過限制性核酸外切酶消化(NdeI和BamHI)剪切,并純化。然后將該純化序列連接于線性化的(linearized)表達載體,pEI^8a,并將所得的環(huán)狀構建體(pTDX198::DIV6728)轉化入BL21(DE!3)大腸桿菌細胞。(插入物的完整序列通過DNA序列分析確證)。His標記的融合蛋白的表達通過將ImMIPTG添加到經轉化的大腸桿菌的培養(yǎng)物來誘導。將重組蛋白溶于6M尿素,并通過鎳親和和離子交換層析來純化。(該重組蛋白在下文中稱為“rDIV67^”。)在rDIV67^引入兔中之后,將抗_DIV67^pAB從經免疫的兔的血漿通過藉由G蛋白親和層析分離IgG抗體來純化。多克隆鞭蟲抗體制備。多克隆抗體“抗_DIV6901pAB”(IgG)在兔中針對具有對應于SEQIDNO:5的氨基酸序列的多肽來產生,并通過使用標準方法從血清純化。簡言之,在抗-DIV6901pAB的情況下,將SEQIDNO:1的核苷酸89-1147框內克隆入表達載體(D8223,其為PUC19的衍生物)以構建質粒D9073。特別地,SEQIDNO:5在其序列N端甲硫氨酸殘基之后的353個氨基酸對應于SEQIDNO3的一部分,并由SEQIDNO1的克隆部分所編碼。然后將編碼SEQIDNO5的DNA序列從所述D9073質粒通過限制性核酸外切酶消化(NdeI和BamHI)剪切,并純化。然后將該純化序列連接于線性化的表達載體,pED8a,并將所得的環(huán)狀構建體(PTDX233::DIV6901)轉化入大腸桿菌細胞。(插入物的完整序列通過DNA序列分析確證)。His標記的融合蛋白的表達通過將ImMIPTG添加到經轉化的大腸桿菌的培養(yǎng)物來誘導。將重組蛋白溶于6M尿素,并通過鎳親和和離子交換層析來純化。(該重組蛋白在下文中稱為“rDIV6901”。)將抗_DIV6901pAB從經免疫的兔的血漿通過藉由G蛋白親和層析分離IgG抗體來純化。多克隆鉤蟲抗體的制備和分離。多克隆抗體抗-ASP5_lpAB(IgG)在兔中針對具有對應于SEQIDNO:34的氨基酸序列的多肽來產生,并通過使用標準方法從血清純化。簡言之,將SEQIDNO:32的核苷酸50-427框內克隆入質粒。特別地,SEQIDN0:34在其序列N端甲硫氨酸殘基之后的1個氨基酸對應于SEQIDNO:33的一部分,并由SEQIDNO32的克隆部分所編碼。在該質粒中,N-端甲硫氨酸殘基由在該質粒中載體與來自SEQIDNO32的克隆序列連接的連接處的載體序列所編碼。然后將編碼SEQIDNO32的DNA序列從所述質粒通過限制性核酸外切酶消化(NotI和McI)剪切,并純化。然后將該純化序列連接于線性化的表達載體,pED8a,并將所得的環(huán)狀構建體轉化入BL21(DE!3)大腸桿菌細胞。(插入物的完整序列通過DNA序列分析確證)。His標記的融合蛋白的表達通過將ImMIPTG添加到經轉化的大腸桿菌的培養(yǎng)物來誘導。將重組蛋白溶于6M尿素,并通過鎳親和和離子交換層析來純化。(該重組蛋白在下文中稱為“rASP5-l”。)在rASP5_l引入兔之后,將抗_ASP5_lpAB從經免疫的兔的血漿通過藉由G蛋白親和層析分離IgG抗體來純化。犬科和貓科動物的感染。寄生性線蟲感染通過對健康犬科或貓科經口施與約150-300個蛔蟲(犬弓首線蟲)的遮掩卵(larvatedegg)、150-300個鉤蟲(犬鉤口線蟲)的感染性幼蟲,或700個鞭蟲(狐毛尾線蟲)的遮掩卵,或所述三種的任意組合來進行。感染通過在從這些宿主動物獲得的糞便試樣中顯微鏡觀察蠕蟲卵來確證。犬科和貓科糞便試樣的制備。已知未經寄生性蠕蟲感染,或經蛔蟲、鞭蟲或鉤蟲中一種、兩種或全部三種感染的犬科和貓科動物提供糞便試樣的來源。將來自冷凍的,未防腐處理(impreserved)的犬科或貓科糞便試樣的試樣(約1克)懸于細1稀釋溶液(“稀釋溶液”為0.05MTris堿;ImMEDTA;0.45%Kathon;16mg/l硫酸慶大霉素;0.05%Tween-20;40%胎牛血清;10%兔血清和5%小鼠血清)中。將懸液在臺式離心機(tabletopcentrifuge)以4000rpm離心20分鐘以產生第一上清。將第一上清以IOOOOg離心5分鐘以產生第二上清,其在本文中稱作“糞便提取物”。ELISA測定法。將純化的抗-DIV67^pAB、抗_DIV6901pAB和抗-Asp5-lpAB(100y1/孔;對于實施例2,3μg/ml)通過物理吸附在ImmulonIB96孔板上4°C過夜固定。然后用BSA/0.IMTrispH7.0在室溫封閉3小時,然后用2.5%蔗糖/0.IMTris緩沖液,pH7.0在室溫處理3小時,吸去(aspirate)液體,在室溫干燥。將大約100μ1糞便提取物添加至每個孔中,并使其在室溫溫育1小時。然后將孔用PBS-Tween-20溶液根據本領域一般技術人員已知的標準方法洗滌五次。在另一個反應容器中,將游離的抗_DIV67^pAB、抗-DIV6901pAB和抗-Asp5-lpAB通過使用交聯劑4-[N-馬來酰亞胺基甲基]環(huán)己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯(SMCC)用辣根過氧化物酶標記以構建偶合物,將該偶合物(對于實施例2,3μg/ml)添加至每個固定了抗_DIV67^pAB、抗-DIV6901pAB和抗-Asp5-lpAB的孔中。在室溫下溫育30分鐘之后,未結合的偶合物通過使用PBS-Tween-20溶液根據本領域一般技術人員已知的標準方法從所述孔中洗去。然后將50μ1TMBLUE過氧化物酶底物(SeraCareLifeSciences,WesteBridgewater,ΜΑ)添加至每個孔中,并將板在室溫溫育10分鐘。在10分鐘溫育之后,用0.十二烷基硫酸鈉終止酶反應,然后在Α650通過標準分光光度技術測定96孔板每個孔的吸光度(opticaldensity,0D)值,所述技術使用ELISA板讀數器(platereader)對每個孔生成“0D650值”(或,更簡單地,“0D值”)。在此安排下,對于所述96孔板任何特定孔獲得的OD值與在所述孔中存在的特異性結合抗原的量成比例(若所述IgG未飽和)。實施例1當通過ELISA以側流模式(format)測試時,抗_DIV67^pAB特異性結合蛔蟲糞抗原,抗-DIV690IpAB特異性結合鞭蟲糞抗原,而抗-Asp5-lpAB特異性結合鉤蟲糞抗原。在寄生蟲抗體與其非特異性寄生蟲之間并無糞抗原的交叉結合??筥DIV67^pAB對蛔蟲糞抗原、抗-DIV6901pAB對鞭蟲糞抗原以及抗-Asp5-lpAB對鉤蟲糞抗原的特異性結合產生可由人眼方便地觀察到的色度(colorimetric)變化。實施例1的目標是在側流ELISA中確定抗_DIV67^pAB、抗_DIV6901pAB和抗-Asp5-lpAB是否可用于捕捉并特異性結合其相應的寄生蟲糞抗原,而無非特異性結合。使用的側流模式為SNAP測定裝置,與描述于美國專利號57^010中的類似。此外,所述分析法大致上以描述于該專利中的方法進行。簡言之,所述SNAP測定裝置除了包含其他組件以外,還包括試樣進入杯(sampleentrycup)、流動基質(flowmatrix),供去除干擾的顆粒物質的試樣預過濾墊(sampleprefilterpad)、特異性結合試劑墊(specificbindingreagentpad)、反應區(qū)(reactivezone)禾口吸收I&器(absorbentreservoir)。通過干燥將抗_DIV67^pAB、抗_DIV6901pAB和抗_Asp5_lpAB以小而圓的點的形式固定于反應區(qū)。然后將所述反應區(qū)用BSA封閉。將來自經蛔蟲感染的犬科的匯集的糞便提取物(150μ1)與200μ1(1.0μg/ml)偶合的抗-DIV6728pAB.il-DIV6901pAB或抗-Asp5-lpAB(所述抗體在如上所述用HRP標記之前經親和純化)混合。將該混合物添加至所述試樣杯,然后任其隨所述流動基質流動。在所述流動基質中時,經HRP標記的抗體特異性結合于其相應的存在于糞便提取物中的寄生蟲糞抗原。任所得的復合物(即,包括所述經HRP標記的抗體與其相應的寄生蟲糞抗原的那些)在所述反應區(qū)特異性結合于經固定的抗_DIV67^pAB、抗-DIV6901pAB或抗-Asp5-lpAB。沿流動基質的流動通過將所述吸收貯器與所述流動基質接觸來顛倒方向(reverse)。此時,將檢測器和洗滌溶液移入所述流動基質以去除任何未結合的組分,并使得對任何下述的分析物復合物(analytecomplex)的檢測成為可能,所述復合物存在于捕捉試劑固定于反應區(qū)之處。(該檢測步驟持續(xù)約八分鐘。)對所述分析物復合物檢測的終止通過將所述分析物復合物暴露于0.1%疊氮化鈉來進行。如圖IC-E所示,在所述蛔蟲、鞭蟲和鉤蟲特異性抗體固定于不同反應區(qū)之處對寄生蟲特異性分析物復合物的檢測,對于蛔蟲感染(ID)、鞭蟲感染(IE)和鉤蟲感染(IC)是明顯可見的。在圖IA所示的陰性對照試樣(僅為稀釋溶液)中,未檢測到分析物復合物。在圖IB所示的陰性對照試樣中,當抗體固定于另一個裝置的反應區(qū)時,未檢測到分析物復合物(所述陰性對照試樣為從不攜帶寄生蟲感染的犬科所獲得的糞便提取物)。因此,這些數據表明抗_DIV67^pAB、抗-DIV6901pAB和抗-Asp5_lpAB可以以側流ELISA模式用于分別且特異性地結合其相應的寄生蟲糞抗原。該特異性結合對人眼是方便可見的。實施例2當通過ELISA在微滴定皿(microtiterdish)模式進行測試時,抗_DIV67^pAB特異性結合蛔蟲糞抗原,但并不特異性結合來自鉤蟲、鞭蟲或犬惡絲蟲的糞抗原;抗-DIV6901pAB特異性結合鞭蟲糞抗原,但并不特異性結合來自鉤蟲、蛔蟲或犬惡絲蟲的糞抗原;而抗-Asp5-lpAB特異性結合鉤蟲糞抗原,但并不特異性結合來自蛔蟲、鞭蟲或犬惡絲蟲的糞抗原。抗_DIV67^pAB對蛔蟲糞抗原、抗_DIV6901pAB對鞭蟲糞抗原以及抗-Asp5-lpAB對鉤蟲糞抗原的特異性結合產生可由人眼方便地觀察到的色度變化。實施例2的目標是確定當抗-DIV67^pAB、抗-DIV6901pAB和抗-Asp5-1固定于固體支持物上時,抗_DIV67^pAB與蛔蟲糞抗原、抗_DIV6901pAB與鞭蟲糞抗原以及抗-Asp5-lpAB與鉤蟲糞抗原之間的特異性結合可否產生能由人眼觀察到的色度變化。參考圖2,抗-0ν67^ρΑΒ(3μβ/πι1)固定于如前所述的微滴定板的孔D1-D12和Ε1-Ε12的底部表面,抗_DIV6901pAB固定于如前所述的微滴定板的孔G1-G12和H1-H12的底部表面,而抗-Asp5-lpAB固定于如前所述的微滴定板的孔A1-A12和B1-B12的底部表面。在進行了上述固定之后,將孔A3、B3、D3、E3、G3和H3暴露于來自經犬惡絲蟲感染的犬科的糞便提取物(在圖2中標為“冊”)。將孔々4、84、04^4、64和朋暴露于來自第一經鉤蟲感染的犬科的糞便提取物,將孔A5、B5、D5、E5、G5和H5暴露于來自第二經鉤蟲感染的犬科的糞便提取物,并將孔A6、B6、D6、E6、G6和H6暴露于來自第三經鉤蟲感染的犬科的糞便提取物。將孔A7、B7、D7、E7、G7和H7暴露于來自第一經蛔蟲感染的犬科的糞便提取物,將孔A8、B8、D8、E8、G8和H8暴露于來自第二經蛔蟲感染的犬科的糞便提取物,并將孔A9、B9、D9、E9、G9和H9暴露于來自第三經蛔蟲感染的犬科的糞便提取物。將孔A10、B10、D10、E10,GlO和HlO暴露于來自第一經鞭蟲感染的犬科的糞便提取物,將孔Al1、Bl1、Dl1、El1、Gll和Hll暴露于來自第二經鞭蟲感染的犬科的糞便提取物,并將孔A12、B12、D12、E12、G12和H12暴露于來自第三經鞭蟲感染的犬科的糞便提取物。將孔Al、Bi、Dl、El、Gl和Hl暴露于rDIV6728,rDIV6901和rAsp5_l(1μg/ml),并因此用這些孔充當陽性對照??譇2、B2、D2、E2、G2和H2并不暴露于任何糞便提取物或rDIV67^、rDIV6901和rAsp5_l,并因此用這些孔充當陰性對照。在洗滌后,將孔D1-D12和H1-H12暴露于經HRP標記的rDIV6901pAB;將孔A1-A12和B1-B12如上所述暴露于經HRP標記的rASP5_lpAB(3μg/ml)。在用TMBLUE過氧化物酶底物溫育了所有這些孔,并接著添加了SDS之后,在暴露于來自經蛔蟲感染的犬科的糞便提取物的抗DIV6728pAB孔(D7-D9和E7-E9)中,肉眼觀察到色度變化,但是,在任何暴露于來自經鉤蟲、鞭蟲或犬惡絲蟲感染的犬科的糞便提取物的抗_DIV67^pAB孔中,未觀察到色度變化。在暴露于來自經鞭蟲感染的犬科的糞便提取物的抗DIV6901pAB孔(G10-G12和H10-H12)中,肉眼觀察到色度變化,但是,在任何暴露于來自經鉤蟲、蛔蟲或犬惡絲蟲感染的犬科的糞便提取物的抗-DIV6901pAB孔中,未觀察到色度變化。在暴露于來自經鉤蟲感染的犬科的糞便提取物的抗Asp5-lpAB孔(A4-A6和B4-B6)中,肉眼觀察到色度變化,但是,在任何暴露于來自經蛔蟲、鞭蟲或犬惡絲蟲感染的犬科的糞便提取物的抗-Asp5-lpAB孔中,未觀察到色度變化。這些數據表明以ELISA模式用抗_DIV6728pAB檢測蛔蟲;用抗_DIV6901pAB檢測鞭蟲;和用抗-Asp5-lpAB檢測鉤蟲均足以產生魯棒的(robust)色度變化,其對于肉眼是方便可見的。此外,這些數據表明上述色度變化使得人眼能夠方便地分辨包含蛔蟲、鉤蟲和鞭蟲的寄生蟲特異性糞便試樣。實施例3一種截短版本的DIV6728,Copro6728,存在于經犬弓首線蟲感染的犬科的糞便中。A.犬科動物糞便試樣制備已知罹患蛔蟲(犬弓首線蟲)感染的犬科動物或沒有寄生性蠕蟲感染的犬科動物提供糞便試樣的來源。將凍結的、未經防腐處理的犬科動物糞便(其從五只經蛔蟲感染或未感染的犬科動物匯集)試樣(約1克)懸于4ml提取緩沖液(“提取緩沖液”為IX磷酸鹽緩沖鹽水(PBS),pH7.0-7.5,含0.05%Tween-20)中。將該懸液渦旋振蕩2分鐘,然后以13000rpm離心25分鐘以產生第一上清。然后將該第一上清以IOOOOrpm離心5分鐘以產生第二上清。該第二上清在下文中稱作“糞便提取物”。B.離子交換離子交換層析可從糞便試樣富集C0pr06728。PLRS試樣用于該研究。將糞便試樣首先用PBST(0.05%Tween20),pH7.3提取。試樣首先用用檸檬酸鈉緩沖液(pH3.0)稀釋,然后用HCl將pH調整至3。最后,將試樣離心,并將上清加載至磺丙基(sulfopropyl,SP)柱上。將所述SP柱用含IMNaCl的20mM檸檬酸鈉緩沖液(pH3)洗脫,并通過ELISA評估洗脫級分。用兔抗-6728IgG(3μg/ml)涂覆(coat)ELISA板?;趫D15所示的結果,顯然Copro6728可通過用含IMNaCl的檸檬酸鈉緩沖液洗脫所述SP柱來部分地純化和富集,且Copro6728是位于All和C9之間的級分(圖15)。C.Western印跡和SDS-PAGEWestern印跡和SDS-PAGE凝膠顯示Copro6728的分子量約為7kD?;旌蟻碜許P柱的洗脫級分,并用NaOH將緩沖液pH調整至7,然后加載至親和柱上,所述親和柱通過將兔抗-6728IgG與AminoLink樹脂(Pierce,ThermoScientific)連接來制備。對所述柱根據生產商的說明進行洗滌和洗脫。將洗脫級分加載于10孔4-12%Bis-Tris梯度凝膠,并轉移至硝酸纖維素膜上以供Western印跡。以兔抗-6728IgG_HRP為探針,Western印跡顯示主條帶(Copro6728)約為7kD(圖16的紅箭頭)。在進一步濃縮后,將同一個試樣在SDS-PAGE凝膠上用ImperialProteinStain(Pierece,ThermoScientific)顯色??梢?kD條帶,其對應于由抗-6728IgG-HRP所表明的大小。D.質譜分析對從SDS-PAGE凝膠切出的條帶(在圖11上由紅箭頭標出)進行的質譜分析表明,該條帶含有Copro6728,而DIV6728的C端部分含有Copro6728。將對應于Western印跡上7kD條帶的7kD條帶從SDS-PAGE凝膠上切出,并送至YaleUniversity的KeckCenter進行質譜分析。將所述凝膠中的試樣首先用胰蛋白酶消化,然后使用Ultima質譜儀(Waters)的Q-Tof通過LC-MS/MS進行分析。通過質譜分析在所述試樣中發(fā)現兩個特定肽肽1:R.FVPCTR.N(SEQIDNO35)和肽2:R.DAEGNCIK.F(SEQIDNO36)。對DIV6728序列和由MS分析鑒定的兩個肽的比對分析表明,兩個肽均位于全長DIV6728的C末端,確證了由Western印跡鑒定的7kb條帶來源于DIV6728。所述兩個肽序列的位置表明DIV6728的C端部分(Copro6728)存在于犬弓首線蟲的陽性糞便試樣中。圖18顯示全長的DIV6728(SEQIDNO:21),其中由MS分析鑒定的兩個肽在陰影框中高光顯示。實施例4生成兩個重組蛋白,其對應于DIV6728N端部分的64個氨基酸以及DIV6728C端部分的65個氨基酸?;贛S分析、Western印跡和SDS-PAGE數據,制備了兩個編碼截短的DIV6728的新表達構建體。對全長DIV6728的N端和C端分別命名為6728N(SEQIDNO37)和6728C(SEQIDNO:38)。圖19顯示了由所述構建體編碼的6728N(SEQIDNO:37)和6728C(SEQIDNO38)氨基酸序列的比對。A.供表達重組6728N和6728C的合成基因將供表達6728N和6728C多肽的基因針對在大腸桿菌中的表達進行密碼子優(yōu)化,并加以合成,通過GeneArt(Josef-Engert-Str.11D-93053Regensburg,Germany)克隆入載體pET28(a),每個重組蛋白的N端帶有六個His(6)的標簽。B.重組蛋白6728N和6728C的表達將重組蛋白6728N和6728C在大腸桿菌BL21(DE3)中表達,并用單一的鎳柱進行純化。將質粒pET28(a)6728N轉化入BL21(DE3),生長至OD0.8,并用ImMIPTG(異丙基-1-硫代-β-D-半乳糖吡喃糖苷)在37°C誘導2小時。將細胞用MicrofluidizerProcessor,M-IIEH裂解。將重組6728N溶于含500mMNaCl的2OmMTris緩沖液(pH8.0),并通過用在含500mMNaCl的2OmMTris緩沖液(pH8.0)中不同濃度的咪唑逐步洗脫鎳柱來純化。重組6728N用含500mM咪唑的相同緩沖液從所述鎳柱洗脫。圖20是用不同試樣加載的SDS-PAGE凝膠以檢查重組6728N的純化。重組6728N在凝膠上大小約為12kD(泳道9)。將質粒pET28(a)6728C轉化入BL21(DE3),生長至OD0.8,并用ImMIPTG(異丙基-1-硫代-β-D-半乳糖吡喃糖苷)在37°C誘導2小時。將細胞用MicrofluidizerProcessor,M-IIEH裂解。將重組6728C溶于含500mMNaCl的20mMTris緩沖液(pH8.0),并通過用在含500mMNaCl的20mMTris緩沖液(pH8.0)中不同濃度的咪唑逐步洗脫鎳柱來純化。重組6728C用含500mM咪唑的相同緩沖液從所述鎳柱洗脫。圖20是用不同試樣加載的SDS-PAGE凝膠以確認重組6728C的純化。重組6728C在凝膠上大小約為12kD(泳道9)。C.兔多克隆抗體針對6728C產生的兔多克隆抗體在糞便ELISA中檢測出抗原,而針對6728N的多克隆抗體并未在糞便ELISA中檢測出抗原。用單一的鎳柱純化的重組蛋白6728N和6728C用于免疫兔,以供產生多克隆抗體。來自經免疫的兔血清的多克隆抗體用G蛋白樹脂親和純化,并用于以2μg/ml涂覆ImmulonI板。四個不同的犬科試樣用經不同抗圖涂覆的板測試。來自兩個經重組6728C免疫的兔的抗體可區(qū)分犬弓首線蟲陽性的糞便試樣與鉤蟲、鞭蟲陽性試樣和線蟲陰性試樣。然而,來自經重組6728N免疫的兩只兔的抗體無法區(qū)分犬弓首線蟲陽性的糞便試樣與鉤蟲、鞭蟲陽性試樣和線蟲陰性試樣(圖22)。該ELISA數據進一步說明了Copro6728是全長DIV6728的C端部分。進一步實驗顯示針對6728N和6728C產生的抗體僅識別其同族的(cognate)重組蛋白質,而無交叉反應性。(圖23)。如預期所料,這兩種多克隆抗體均與全長重組DIV6828反應(圖23)。D.Western印跡針對重組6728C的兔多克隆抗體可在Western印跡中識別犬弓首線蟲陽性的糞便試樣,但針對重組6728N的多克隆抗體則不行。除了犬弓首線蟲全蠕蟲提取物(泳道1)之夕卜,將線蟲陰性(泳道2-4)和犬弓首線蟲陽性(泳道5-7)糞便試樣通過SP柱用高鹽洗脫緩沖液(1MNaCl/20mM檸檬酸鈉緩沖液,pH3)分級。將犬弓首線蟲蠕蟲提取物(泳道1)、加載于柱上的試樣(泳道2和5)、柱流過物(flow-through)(泳道3和6)和柱洗脫物(泳道4和7)加載至10孔,4-12%Bis-Tris梯度凝膠,然后進一步轉移至硝酸纖維素膜,如圖24-26所示用不同偶合物進行探測(probe)???全長6728IgG-HRP和抗6728C_IgG_HRP兩者均可區(qū)分犬弓首線蟲陽性糞便試樣與線蟲陰性糞便試樣(圖24和25)。然而,抗-6728NIgG-HRP無法分辨這兩種不同的糞便試樣(圖26)。這些數據進一步確證了Copro6728僅為全長DIV6728大小的約一半,這與從質譜分析和糞便ELISA獲得的數據相一致。權利要求1.一種在試樣中檢測一種或多種寄生蟲抗原是否存在的方法,所述方法包括(a)將來自哺乳動物的試樣與至少兩種選自下組的抗體接觸(i)第一抗體,其能夠特異性結合蛔蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或鉤蟲糞抗原;()第二抗體,其能夠特異性結合鞭蟲糞抗原,但不結合蛔蟲或鉤蟲糞抗原;和(iii)第三抗體,其能夠特異性結合鉤蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或鉤蟲糞抗原;(b)在試樣中,如果有所述糞抗原,那么在所述糞抗原的存在下形成抗體-糞抗原復合物;和(c)如果有,檢測所述抗體-糞抗原復合物是否存在。2.—種診斷哺乳動物是否被一種或多種寄生蟲感染的方法,所述方法包括下述步驟(a)將來自哺乳動物的試樣與至少兩種選自下組的抗體接觸(i)第一抗體,其能夠特異性結合蛔蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或鉤蟲糞抗原;()第二抗體,其能夠特異性結合鞭蟲糞抗原,但不結合蛔蟲或鉤蟲糞抗原;和(iii)第三抗體,其能夠特異性結合鉤蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或鉤蟲糞抗原;(b)在試樣中,如果有所述糞抗原,那么在所述糞抗原的存在下形成抗體-糞抗原復合物;(c)如果有,檢測所述抗體-糞抗原復合物是否存在;和(d)診斷所述哺乳動物罹患(i)蛔蟲感染,如果存在蛔蟲抗體-糞抗原復合物;()鞭蟲感染,如果存在鞭蟲抗體-糞抗原復合物;和(iii)鉤蟲感染,如果存在鉤蟲抗體-糞抗原復合物。3.權利要求1或2的方法,其中(a)所述第一抗體能夠特異性結合具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列對應于SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO27,SEQIDNO28,SEQIDNO29,SEQIDNO30、SEQIDNO:38或Copro6728;或所述第一抗體是針對全蛔蟲提取物,或蛔蟲生殖器官提取物,或蛔蟲腸提取物而產生的;(b)所述第二抗體能夠特異性結合具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列對應于SEQIDNO3,SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8或SEQIDNO9;和(c)所述第三抗體能夠特異性結合具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列對應于SEQIDN0:33或SEQIDNO:34,或CoproASP5。4.權利要求1-3任一項所述的方法,其中所述第一抗體能夠特異性結合具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列對應于SEQIDNO12,SEQIDNO13、SEQIDNO14,SEQIDNO15,SEQIDN0:16、SEQIDN0:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23,SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:38或Copro6728;或所述第一抗體是針對全蛔蟲提取物,或蛔蟲生殖器官提取物,或蛔蟲腸提取物而產生的。5.權利要求1-4任一項所述的方法,其中所述第二抗體能夠特異性結合具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列對應于SEQIDNO3,SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO-J、SEQIDNO8或SEQIDNO:9。6.權利要求1-5任一項所述的方法,其中所述第三抗體能夠特異性結合具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列對應于SEQIDN0:33或SEQIDNO:34,或CoproASP5。7.權利要求1-6任一項所述的方法,其中所述第一、第二和第三抗體可特異性結合于具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列為具有30個或更少的保守氨基酸取代的SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO9SEQIDNO:12、SEQIDNO13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:19,SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27,SEQIDNO:28、SEQIDNO:29,SEQIDNO:30,SEQIDNO:33,SEQIDNO:34或SEQIDNO:38。8.權利要求1-7任一項所述的方法,其中所述糞抗原是具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列是SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO7、SEQIDNO8,SEQIDNO9SEQIDN0:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23,SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:33或SEQIDNO:34、SEQIDNO:38、Copro6728或CoproASP5的保守變體。9.權利要求1-8任一項所述的方法,其中所述試樣從犬科或貓科的哺乳動物獲得。10.權利要求1-9任一項所述的方法,其中所述蛔蟲是犬弓首線蟲(Toxocaracanis)或貓弓首線蟲(Toxocaracati)、牛弓首線蟲(Toxocaravitulorum)、獅弓蛔線蟲(Toxascarisleonina)、泣熊拜林蟲回線蟲(Baylisascarisprocyonis)、雞蟲回型線蟲(Ascaridiagalli)、馬副蟲回線蟲(Parascarisequorum)、豬蟲回線蟲(Ascarissuum)或^(以蟲引蟲回線蟲(Ascarislumbricoides)、單——無飾線蟲(Anisakissimplex)禾口Pseudoterranovadecipiens。11.權利要求1-10任一項所述的方法,其中所述鞭蟲是狐毛尾線蟲(Trichurisvulpis)、Trichuriscampanula、有齒毛尾線蟲(Trichurisserrata)、豬毛尾線蟲(Trichurissuis)、毛尾毛尾線蟲(Trichuristrichiura)、褪色毛尾線蟲(Trichurisdiscolor)禾口毛尾毛首線蟲(Trichocephalustrichiuris)。12.權利要求1-11任一項所述的方法,其中所述鉤蟲是犬鉤口線蟲(Ancylostomacaninum)、巴西鉤口線蟲(Ancylostomabraziliense)、十二指腸鉤口線蟲(Ancylostomaduodenal)、錫蘭鉤□線蟲(Ancylostomaceylanicum)、Ancylostomatubaeforme禾口多齒鉤口線蟲(Ancylostomapluridentatum)、美洲板口線蟲(Necatoramericanus)禾口狹首鉤形線蟲(Uncinariastenocephala)013.權利要求1-12任一項所述的方法,其中所述蛔蟲糞抗原、鉤蟲糞抗原和/或鞭蟲糞抗原來自糞便試樣。14.權利要求1-13任一項所述的方法,其中所述第一、第二和第三抗體不特異性結合任何來源于犬惡絲蟲的糞抗原。15.權利要求1-14任一項所述的方法,其中檢測所述復合物是否存在的步驟還包括提供至少一種結合于至少一種復合物的二抗的步驟。16.權利要求15的方法,其中所述至少一種二抗是標記的。17.權利要求1-15任一項所述的方法,其中所述第一、第二和第三抗體中的一種或多種是標記的。18.權利要求1-17任一項所述的方法,其中所述第一、第二和第三抗體固定于固體支持物上。19.權利要求18的方法,其中所述固體支持物形成酶聯免疫吸附測定裝置的部分。20.權利要求19的方法,其中所述酶聯免疫吸附測定裝置是側流免疫測定裝置。21.權利要求1-20任一項所述的方法,還包括將所述試樣與一種或多種試劑相接觸的步驟,以檢測下組的一種或多種一種或多種非蠕蟲寄生物、犬惡絲蟲、一種或多種病毒、一種或多種真菌和一種或多種細菌。22.權利要求21的方法,其中供檢測一種或多種非蠕蟲寄生物、一種或多種病毒、一種或多種真菌和一種或多種細菌中任一或所有的試劑是一種或多種抗體,或由下述抗體識別的一種或多種抗原,所述抗體對所述一種或多種非蠕蟲寄生蟲、一種或多種病毒、一種或多種真菌或一種或多種細菌具有特異性。23.權利要求1-21任一項所述的方法,還包括確定來自所述蛔蟲、鞭蟲或鉤蟲的核酸是否存在的步驟。24.權利要求23的方法,其中所述核酸具有下述序列,所述序列對應于SEQIDNO=USEQIDNO:2、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO24,SEQIDNO25,SEQIDN0:31或SEQIDNO32、SEQIDNO:38、Copro6728或CoproASP5的全部或部分,或為SEQIDNO=USEQIDNO:2、SEQIDNO:10、SEQIDNO=IUSEQIDNO:17、SEQIDNO18,SEQIDNO:24,SEQIDNO:25,SEQIDN0:31、或SEQIDNO:32,SEQIDNO:38、Copro6728或CoproASP5的全部或部分的保守變體。25.權利要求23的方法,其中確定所述核酸是否存在的步驟是通過使用基于聚合酶鏈式反應(PCR)的測定法進行的。26.一種檢測來自試樣的一種或多種寄生蟲抗原是否存在的裝置;所述裝置包含固體支持物,其中至少兩種選自下組的抗體固定在所述固體支持物上(a)第一抗體,其能夠特異性結合蛔蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或鉤蟲糞抗原;(b)第二抗體,其能夠特異性結合鞭蟲糞抗原,但不結合蛔蟲或鉤蟲糞抗原;和(c)第三抗體,其能夠特異性結合鉤蟲糞抗原,但不結合鞭蟲或蛔蟲糞抗原。27.權利要求沈的裝置,還包括一種或多種類型的蛔蟲抗原、鞭蟲抗原和/或鉤蟲抗原,其中一種或多種類型的蛔蟲抗原、鞭蟲抗原和鉤蟲抗原特異性結合于所述抗體。28.權利要求沈或27任一項所述的裝置,其中(a)所述第一抗體能夠特異性結合具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列對應于SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO19,SEQIDNO20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:38或Copro6728或其抗原性部分;或所述第一抗體是針對全蛔蟲提取物,或蛔蟲生殖器官提取物,或蛔蟲腸提取物而產生的;(b)所述第二抗體能夠特異性結合具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列對應于SEQIDNO3,SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8和SEQIDNO9或其抗原性部分;或(c)所述第三抗體能夠特異性結合具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列對應于SEQIDNO33或SEQIDNO:34,或CoproASP5,或其抗原性部分。29.權利要求沈-觀任一項所述的方法,其中所述第一抗體能夠特異性結合具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列對應于SEQIDNO12,SEQIDN0:13、SEQIDN0:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20,SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30,SEQIDNO:38或Copro67^或其抗原性部分;或所述第一抗體是針對全蛔蟲提取物,或蛔蟲生殖器官提取物,或蛔蟲腸提取物而產生的。30.權利要求沈-四任一項所述的裝置,其中所述第二抗體能夠特異性結合具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列對應于SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO6,SEQIDN0:7、SEQIDNO:8或SEQIDNO:9或其抗原性部分。31.權利要求沈-30任一項所述的裝置,其中所述第三抗體能夠特異性結合具有下述氨基酸序列的多肽,所述氨基酸序列對應于SEQIDN0:33或SEQIDNO:34,或CoproASP5,或其抗原性部分。32.權利要求觀的裝置,其中所述多肽的氨基酸序列是SEQIDN0:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO5,SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21,SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28,SEQIDNO:29,SEQIDNO:30、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:38、Copro6728或CoproASP5的保守變體。33.權利要求沈的裝置,其中所述第一、第二和第三抗體是通過用具有下述氨基酸序列的多肽進行免疫接種而獲得的,所述氨基酸序列對應于SEQIDNO3,SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO9SEQIDNO:12、SEQIDNO13,SEQIDN0:14、SEQIDN0:15、SEQIDN0:16、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21,SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29,SEQIDNO:30、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:38、Copro6728或CoproASP5,或具有SEQIDN0:3、SEQIDNO:4、SEQIDN0:5、SEQIDN0:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8,SEQIDNO:9SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15,SEQIDNO:16,SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO23、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30,SEQIDNO:33,SEQIDNO:34,SEQIDNO:38、Copro67^或CoproASP5的抗原性部分。34.權利要求32的裝置,其中所述多肽的氨基酸序列為具有30個或更少的保守氨基酸取代的SEQIDNO3,SEQIDN0:4、SEQIDN0:5、SEQIDNO:6、SEQIDN0:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO9SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16,SEQIDNO:19,SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:33、SEQIDNO34或SEQIDNO:38。35.權利要求沈的裝置,其中所述試樣是糞便試樣。36.權利要求35的裝置,其中所述第一、第二和第三抗體并不特異性結合任何來源于犬惡絲蟲的糞抗原。37.權利要求沈-36任一項所述的裝置,其中所述裝置是酶聯免疫吸附測定裝置。38.權利要求沈-37任一項所述的裝置,其中所述酶聯免疫吸附測定裝置是側流免疫測定裝置。39.權利要求沈-38任一項所述的裝置,其中所述試樣來自犬科動物或貓科動物。40.權利要求沈-39任一項所述的裝置,其中所述裝置還包括一種或多種試劑,供檢測下組的一種或多種一種或多種非蠕蟲寄生蟲、犬惡絲蟲、一種或多種病毒、一種或多種真菌和一種或多種細菌。41.一種供檢測哺乳動物試樣中一種或多種蛔蟲糞抗原、一種或多種鞭蟲糞抗原和/或一種或多種鉤蟲糞抗原的試劑盒,所述試劑盒包括權利要求26-40任一項所述的裝置,以及足以檢測所述一種或多種抗原的一種或多種試劑。42.權利要求41的試劑盒,其中一種或多種試劑選自下組一種或多種指示試劑、一種或多種抗體標記化合物、一種或多種抗體、一種或多種抗原捕捉試劑、一種或多種抑制劑和一種或多種洗滌試劑。全文摘要本文公開了用于檢測一種或多種寄生蟲糞抗原(helminthiccoproantigen)的方法、裝置、試劑盒和組合物。本發(fā)明的方法、裝置、試劑盒和組合物可用于在哺乳動物的糞便試樣中確證蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲是否存在,且還能夠分辨一種或多種寄生蟲感染。在哺乳動物中確證蛔蟲、鞭蟲和/或鉤蟲是否存在可用于,例如,選擇治療所述哺乳動物的最佳方案和/或在治療開始后確定所述哺乳動物是否已經驅除了所述感染。文檔編號G01N33/569GK102099680SQ200980128216公開日2011年6月15日申請日期2009年5月18日優(yōu)先權日2008年5月19日發(fā)明者勞里.A.弗林,戴維.A.埃爾西莫爾,耿進明,邁克爾.克勞福德申請人:戴弗根斯公司,艾德克斯實驗室公司
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