專利名稱：用于感測(cè)化學(xué)品的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于感測(cè)化學(xué)品的方法，尤其涉及利用包含壓電/熱電換能器的化學(xué) 感測(cè)設(shè)備進(jìn)行免疫測(cè)定。
背景技術(shù)：
免疫測(cè)定是測(cè)量生物流體中被分析物存在與否或者更通常地測(cè)量被分析物濃度 的測(cè)試。它通常涉及抗原對(duì)抗體的特異性結(jié)合?？贵w可以是多株或者單株的，單株抗體具 有許多益處，包括生產(chǎn)可再現(xiàn)性以及對(duì)被分析物一個(gè)表位結(jié)合的抑制。為了提供被分析物 濃度的可量化測(cè)度，將應(yīng)答與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品相比較?？贵w或抗原的濃度可由多種方 法確定，雖然最常用的一種方法是標(biāo)記抗原或抗體并且檢測(cè)標(biāo)記的存在。免疫測(cè)定可以是競(jìng)爭(zhēng)性或者非競(jìng)爭(zhēng)性的。在競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定中，未知樣品中的抗 原與被標(biāo)記抗原(所述“報(bào)告物”)競(jìng)爭(zhēng)以與抗體結(jié)合，所述抗體通常被固定在固態(tài)。隨后 通常通過分離并測(cè)量結(jié)合至固態(tài)的被標(biāo)記抗原來測(cè)量結(jié)合至抗體位點(diǎn)的被標(biāo)記抗原的量。 顯然應(yīng)答將與未知樣品中抗體的濃度成反比。在相似測(cè)定原理中，溶液中的被標(biāo)記抗體與 固定為固態(tài)且存在于樣品中的抗原競(jìng)爭(zhēng)，以給出類似的反比性。在非競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定(也 被稱為免疫分析測(cè)定)中，未知樣品中的抗原與過量的被固定抗體(“捕獲”抗體)結(jié)合， 由此測(cè)量結(jié)合抗原的量。與競(jìng)爭(zhēng)性方法不同，非競(jìng)爭(zhēng)性方法的結(jié)果將與抗原濃度直接成比 例。在所謂的“雙位點(diǎn)”免疫分析測(cè)定(也被稱為“三明治測(cè)定”)中，抗原結(jié)合至捕獲抗體 位點(diǎn)，隨后引入被標(biāo)記抗體，被標(biāo)記抗體再與結(jié)合至捕獲抗體的抗原結(jié)合。隨后測(cè)量位點(diǎn)處 被標(biāo)記抗體的量。在典型的三明治免疫測(cè)定中，所關(guān)注抗原特異性的抗體附著在聚合物支持物上， 比如聚苯乙烯的薄片上。待測(cè)試的一滴樣品(例如，細(xì)胞提取物或者血清或尿的樣品)被 置于薄片上，薄片在抗體-抗原復(fù)合物形成之后被清洗。然后加入抗原上的不同位點(diǎn)特異 性的抗體，再次清洗支持物。這第二種抗體攜帶標(biāo)記(被標(biāo)記的報(bào)告物)以便能被高靈敏 度地檢測(cè)。結(jié)合到薄片上的第二種抗體的量與樣品中的抗原數(shù)量成比例。這種測(cè)定以及這 種類型測(cè)定的其他變化眾所周知，參見例如“The Immunoassay Handbook, 2nd Ed. ” David Wild, Ed. , Nature Publishing Group, 2001。這種免疫測(cè)定對(duì)于大分子量被分析物尤其工作良好，這主要是因?yàn)閮蓚€(gè)或更多個(gè) 表位可以被尋址；被分析物和抗體之間的互補(bǔ)性區(qū)域相對(duì)較大并且被分析物之間出現(xiàn)相對(duì) 較大的差異(例如，至少通過肽內(nèi)的氨基酸)。對(duì)于小分子(有時(shí)也被稱為“半抗原”，是一 種當(dāng)附至諸如蛋白質(zhì)的大載體時(shí)能夠引起免疫應(yīng)答的小分子)免疫測(cè)定，兩個(gè)表位的缺乏 導(dǎo)致無法形成“三明治”。這為技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展提供了動(dòng)機(jī)。一種相對(duì)較新的免疫測(cè)定技術(shù)是所謂的“選擇性抗體免疫分析”測(cè)定，它被設(shè) 計(jì)用于改善小分子檢測(cè)的特異性和敏感性(參見N. Kobayashi和J. Goto，in Advances in Clinical Chemistry, Vol. 36, Ed. H. E. Spiegel 等人，Academic Press, 2001, pages 139-170并且尤其參見第155-158頁的section 3. 3)。這一免疫測(cè)定同樣具有優(yōu)勢(shì)，即提供了被分析物濃度和信號(hào)之間的直接關(guān)系，而不是通常在競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定中常見的反比關(guān)系。所述方案基于用多個(gè)半抗原標(biāo)記的大分子掩蔽未被占領(lǐng)的抗體位點(diǎn)以允許隨后 對(duì)半抗原占領(lǐng)抗體的選擇性確定。首先，抗半抗原抗體被固定在(附至)固態(tài)支持物上。固 態(tài)支持物隨后被暴露給含有未知被分析物(半抗原)以及多重接合至所述半抗原的大分子 的樣品。被分析物和大分子隨后為固態(tài)支持物上抗半抗原抗體的結(jié)合位點(diǎn)而競(jìng)爭(zhēng)。被分析 物在大分子之前被引入，或者它們可被同時(shí)引入并被允許為表面而競(jìng)爭(zhēng)，或者在大分子可 逆結(jié)合至所述表面的情況下，大分子可在被分析物之前被引入。隨后添加與主抗體結(jié)合的 被標(biāo)記次抗體。次抗體與沒有結(jié)合大分子的主抗體結(jié)合。因?yàn)闆]有結(jié)合大分子的主抗體的 比例與被分析物的量直接成比例，所以該測(cè)度能夠確定樣品中存在的被分析物的量。該技術(shù)已被證明具有極高的敏感性和特異性，但是在當(dāng)前實(shí)踐中需要多次培育和 清洗步驟，因?yàn)榍逑床襟E對(duì)在確定存在的被標(biāo)記抗體的量之前去除多余的未結(jié)合標(biāo)記非常 重要。多次清洗顯著增加的測(cè)定復(fù)雜性并因此實(shí)質(zhì)上限制了該技術(shù)的應(yīng)用性。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明提供一種用于檢測(cè)樣品中的被分析物的方法，包括以下步驟(i)提供包含熱電或壓電元件和電極的換能器、以及固定在換能器上的第一試劑， 其中所述換能器能夠?qū)⒛芰孔兓D(zhuǎn)換成電信號(hào)，并且所述第一試劑具有能夠在被分析物或 者被分析物的衍生物存在時(shí)結(jié)合第二試劑的結(jié)合位點(diǎn)；(ii)引入第二試劑，所述第二試劑具有能夠在被分析物或者被分析物的衍生物存 在時(shí)結(jié)合所述第一試劑的結(jié)合位點(diǎn)，并且具有附至其上的標(biāo)記，所述標(biāo)記能夠吸收電磁輻 射以生成非輻射衰減的能量，其中第一試劑或者第二試劑能夠結(jié)合被分析物或其衍生物；(iii)將樣品暴露于換能器，由此允許被分析物或其衍生物與第一試劑或者第二 試劑結(jié)合；(iv)引入能夠與被分析物或其衍生物同樣結(jié)合至第一試劑或者第二試劑的掩蔽 試劑，由此阻止第一試劑對(duì)第二試劑的結(jié)合；(ν)用電磁輻射照射樣品；(vi)將所生成的能量轉(zhuǎn)換為電信號(hào)；以及(vii)檢測(cè)所述電信號(hào)，其中步驟(ii)至(iv)能夠以任意次序發(fā)生。于是，被標(biāo)記的第二試劑(所述報(bào)告物)在被分析物或者被分析物的衍生物存在 且掩蔽試劑不存在時(shí)只能與第一(被固定)試劑結(jié)合，從而允許被分析物或者其衍生物與 所述掩蔽試劑競(jìng)爭(zhēng)以與第一試劑或第二試劑結(jié)合。由于使用具有壓電/熱電膜的換能器的 結(jié)果，益處在于能夠在無需進(jìn)行分離和清洗步驟的情況下實(shí)時(shí)檢測(cè)第二(被標(biāo)記)試劑的
纟口口。本發(fā)明還提供一種套件，包括(i)用于檢測(cè)樣品中的被分析物的設(shè)備，所述設(shè)備 包括具有熱電或壓電元件和電極的換能器，其中所述換能器能夠?qū)⒛芰孔兓D(zhuǎn)換成電信 號(hào)；固定在換能器上的第一試劑，所述第一試劑具有能夠在被分析物或者被分析物的衍生 物存在時(shí)結(jié)合第二試劑的結(jié)合位點(diǎn)；(ii)第二試劑，所述第二試劑具有能夠在被分析物或 者其衍生物存在時(shí)結(jié)合所述第一試劑的結(jié)合位點(diǎn)，并且具有附至其上的標(biāo)記，所述標(biāo)記能減的能量；以及，(iii)能夠與被分析物或其衍生物同樣 結(jié)合至第一試劑或者第二試劑的掩蔽試劑，由此阻止第一試劑對(duì)第二試劑的結(jié)合。還提供 一種用于檢測(cè)樣品中的被分析物的設(shè)備，所述設(shè)備包括具有熱電或壓電元件和電極的換 能器，其中所述換能器能夠?qū)⒛芰孔兓D(zhuǎn)換成電信號(hào)；固定在換能器上的第一試劑，所述第 一試劑具有能夠結(jié)合被分析物或者被分析物的衍生物并且能夠在被分析物或者被分析物 的衍生物存在時(shí)結(jié)合第二試劑的結(jié)合位點(diǎn)；可釋放地結(jié)合第一試劑的掩蔽試劑；電磁輻射 源；以及用于檢測(cè)所述電信號(hào)的檢測(cè)器。本發(fā)明還提供具有熱電或壓電元件和電極的換能 器的用途，用于檢測(cè)選擇性抗體免疫分析測(cè)定中的結(jié)合事件。


現(xiàn)在將參考附圖描述本發(fā)明，其中圖1示出了根據(jù)WO 2004/090512的設(shè)備；圖2示出了本發(fā)明的方法的圖形表達(dá)；圖3示出了根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備；以及圖4示出了使用本發(fā)明方法的計(jì)數(shù)相對(duì)時(shí)間的圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的方法提供用于檢測(cè)樣品中的被分析物。作為第一步驟，本發(fā)明包括提供 具有熱電或壓電元件和電極的換能器，所述換能器能夠?qū)⒛芰孔兓D(zhuǎn)換成電信號(hào)并將樣品 暴露于換能器。這類換能器是本領(lǐng)域內(nèi)周知的，參見例如WO 90/13017和WO 2004/090512。 在此方面，圖1示出了適于在本發(fā)明中使用的化學(xué)感測(cè)設(shè)備1的原理。設(shè)備1依靠用電磁 輻射照射物質(zhì)2時(shí)物質(zhì)2中的發(fā)熱。設(shè)備1包括熱電或壓電換能器3，它具有電極涂層4、 5。優(yōu)選情況下，換能器3是膜，例如極化聚偏氟乙烯膜。電極涂層4、5優(yōu)選地由厚度大約 35nm的氧化銦錫形成的，盡管從Inm的下限至IOOnm的上限中的任何厚度都是可接受的， 但是低于下限時(shí)電導(dǎo)率太低，而高于上限時(shí)透光率太低(應(yīng)當(dāng)不低于95% T)。使用任何適 宜的技術(shù)使物質(zhì)2保持在換能器3上或者接近換能器3，此處示出為附至上電極涂層4。所 述試劑可以是任何適宜的形式，并且可以淀積多種試劑。優(yōu)選情況下，物質(zhì)2被吸附在上電 極上，例如經(jīng)由分子間力(比如離子鍵、氫鍵結(jié)合或范德瓦爾斯力)的共價(jià)耦合或結(jié)合。這 種設(shè)備的關(guān)鍵特征在于，在受到電磁輻射源6 (比如光，優(yōu)選情況下是可見光)的照射時(shí)物 質(zhì)2發(fā)熱。光源可以是例如LED。光源6用適當(dāng)波長(zhǎng)(如補(bǔ)色)的光照亮物質(zhì)2。盡管不 奢望成為理論上的結(jié)合，但是據(jù)信物質(zhì)2吸收光以產(chǎn)生激發(fā)態(tài)，然后經(jīng)歷非輻射衰減從而 產(chǎn)生能量，由圖1中的曲線所示。這種能量的主要形式為熱(即環(huán)境中的熱運(yùn)動(dòng))，盡管也 可能產(chǎn)生其他形式的能量，如沖擊波。無論如何，此能量由換能器檢測(cè)并轉(zhuǎn)換為電信號(hào)。對(duì) 本發(fā)明的設(shè)備由測(cè)定的具體試劑標(biāo)定，因此并不需要確定由非輻射衰減所產(chǎn)生能量的確切 形式。除非另外指明，否則本文所用的術(shù)語“熱”意味著由非輻射衰減所產(chǎn)生的能量。光源 6被定為以照亮物質(zhì)2。優(yōu)選情況下，光源6定位成與換能器3和電極4、5基本垂直，并透 過換能器3和電極4、5照亮物質(zhì)2。光源可以是換能器內(nèi)的內(nèi)光源，其中光源是導(dǎo)波系統(tǒng)。 波導(dǎo)可以是換能器本身，也可以是附屬于換能器的附加層。照明波長(zhǎng)取決于使用的標(biāo)記；例 如，對(duì)于40nm金標(biāo)記，優(yōu)選波長(zhǎng)為525nm，而對(duì)于碳標(biāo)記，優(yōu)選波長(zhǎng)為650nm。
7
物質(zhì)2所產(chǎn)生的能量由換能器3檢測(cè)并轉(zhuǎn)換為電信號(hào)。電信號(hào)由檢測(cè)器7檢測(cè)。 光源6和檢測(cè)器7都在控制器8的控制下。在一個(gè)實(shí)施例中，光源6產(chǎn)生一系列光脈沖(除非說明特定波長(zhǎng)，否則本文所用的 術(shù)語“光”意味著任何形式的電磁輻射)，術(shù)語為“斷續(xù)光(chopped light)”。在原理上， 單個(gè)閃光，即電磁輻射的一個(gè)脈沖，便足以從換能器3產(chǎn)生信號(hào)。不過，為了獲得可再現(xiàn)的 信號(hào)會(huì)使用多次閃光，因此實(shí)際上需要斷續(xù)光。施加電磁輻射脈沖的頻率可以變化。在下 限處，脈沖之間的時(shí)延必須足以確定每個(gè)脈沖和電信號(hào)生成之間的時(shí)延。在上限處，每個(gè) 脈沖之間的時(shí)延必須不會(huì)大到使得記錄所述數(shù)據(jù)所花時(shí)間變得不合情理地延長(zhǎng)。優(yōu)選情 況下，脈沖頻率從2至50Hz，更優(yōu)選情況下，5至15Hz，最優(yōu)選情況下，10Hz。這分別對(duì)應(yīng)于 20-500ms,66-200ms和IOOms的脈沖間時(shí)延。此外，所謂的“脈沖間隔”比，即通信號(hào)與斷 信號(hào)的比值，優(yōu)選情況下是1，盡管在特定情況下可以優(yōu)選地使用其他比值。以不同調(diào)制頻 率或不同脈沖間隔比產(chǎn)生調(diào)制光的電磁輻射源是本領(lǐng)域內(nèi)公知的。檢測(cè)器7確定光源6的 每一個(gè)光脈沖與檢測(cè)器7檢測(cè)的來自換能器3的對(duì)應(yīng)電信號(hào)之間的時(shí)延(或者說“相關(guān)延 遲”)。申請(qǐng)人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，這種時(shí)延是距離d的函數(shù)。確定每一個(gè)光脈沖與對(duì)應(yīng)電信號(hào)之間的時(shí)延的任何方法只要提供可再現(xiàn)結(jié)果就 都可以使用。優(yōu)選情況下，測(cè)量從每一個(gè)光脈沖的起點(diǎn)到檢測(cè)器7檢測(cè)到與熱吸收對(duì)應(yīng)的 電信號(hào)的最大值點(diǎn)間的時(shí)延。因此，物質(zhì)2可以與換能器表面分離并仍然能夠檢測(cè)到信號(hào)。另外，不但所述信號(hào) 經(jīng)過能夠向換能器3傳送能量的中間介質(zhì)可檢測(cè)，而且可以區(qū)分不同距離d(這已被稱為術(shù) 語“深度剖析”)，所收到信號(hào)的強(qiáng)度與相距換能器3表面具體距離d處物質(zhì)2的濃度成比 例。圖2示出了在根據(jù)本發(fā)明的選擇性抗體免疫分析測(cè)定中并入圖1的設(shè)備1。圖中 示出了豎直排列的換能器3，雖然在某些情況下其他定向是可能甚至是有利的。換能器3涂 有圖2所示的第一試劑，作為第一抗體9 (被固定的捕獲抗體)。樣品還包括被分析物10以 及結(jié)合了標(biāo)記12的第二抗體11 (對(duì)應(yīng)于圖1中的物質(zhì)2)。已產(chǎn)生抗被分析物10的第一抗體9，并且所述第一抗體9在樣品被引入時(shí)選擇性 地結(jié)合至被分析物10。然而，掩蔽試劑13也并入樣品。在此例中，掩蔽試劑13能夠結(jié)合第 一抗體9。掩蔽試劑13典型地是具有能夠結(jié)合第一試劑9的多個(gè)位點(diǎn)13b的大分子13a。 大分子上的結(jié)合位點(diǎn)優(yōu)選地是與被分析物或其衍生物相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)的部分。大分子可以是提供與第二試劑11結(jié)合的必要位阻并且可被多重接合的任何分 子。例子包括多糖、諸如聚苯乙烯或乳膠的合成聚合物、以及諸如聚(L-賴氨酸)的多肽。 大分子的分子量?jī)?yōu)選地是被分析物的10倍，更優(yōu)選地是被分析物的100至1000倍，例如帶 有5，000至500，OOODalton的分子量?？梢允褂玫难诒卧噭┑囊环N具體類型是個(gè)體基因型 抗體，該抗體確切識(shí)別表面上捕獲劑的結(jié)合位點(diǎn)。圖2示出了與換能器3表面上的多個(gè)第一抗體9結(jié)合的掩蔽試劑13。然而，其中 有兩個(gè)第一抗體9被示出為與被分析物10結(jié)合。與被分析物10結(jié)合的抗體9能夠進(jìn)一步 與附至標(biāo)記12的第二抗體11結(jié)合。第二抗體11具有能夠在被分析物或者被分析物的衍 生物存在而掩蔽試劑13不存在時(shí)與第一試劑9結(jié)合的結(jié)合位點(diǎn)，因?yàn)檠诒卧噭?3原理上 通過位阻來阻滯結(jié)合位點(diǎn)。
重要的是，本發(fā)明的方法允許在無需分離和清洗步驟的情況下實(shí)時(shí)檢測(cè)第二抗體 11與第一試劑9的結(jié)合。這是本領(lǐng)域內(nèi)的一大進(jìn)步。于是，在優(yōu)選實(shí)施例中，就能夠在將 樣品暴露于換能器3和照射樣品的步驟之間無需從換能器3移除樣品的情況下進(jìn)行測(cè)定。 此外，在步驟(ii)至(iv)之間不需要進(jìn)一步的介入(例如，分離結(jié)合的和未結(jié)合的第二試 劑)。未結(jié)合至表面的第二試劑自由擴(kuò)散遠(yuǎn)離表面。優(yōu)選地，允許第二試劑僅通過擴(kuò)散 變得與表面分離。圖2示出了其中掩蔽試劑結(jié)合至第一試劑的一個(gè)實(shí)施例，雖然其他示例也包括在 本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明的一個(gè)關(guān)鍵特征是在掩蔽試劑存在時(shí)將換能器暴露于樣品，并且 在于該掩蔽試劑能夠與第一或者第二試劑結(jié)合以阻止第一試劑與第二試劑的結(jié)合。掩蔽試 劑還與被分析物或其衍生物同樣結(jié)合至第一或者第二試劑。于是，如果第一試劑能夠結(jié)合 被分析物或其衍生物，那么第一試劑還將結(jié)合掩蔽試劑，而第二試劑將不結(jié)合被分析物或 其衍生物或者掩蔽試劑。經(jīng)適當(dāng)修正后，這同樣適用于第二試劑。通過破壞這一結(jié)合以及 與被分析物競(jìng)爭(zhēng)，掩蔽試劑能夠使得與第一試劑結(jié)合的第二試劑的量與樣品中存在的被分 析物的量成比例。在此方面，掩蔽試劑能夠在換能器暴露于樣品之前可釋放地結(jié)合第一或第二試劑 (用掩蔽試劑預(yù)培育第一或第二試劑)，或者掩蔽試劑能夠與樣品基本同時(shí)引入。當(dāng)掩蔽試劑在換能器暴露于樣品之前結(jié)合第一或第二試劑時(shí)，該掩蔽試劑必須可 釋放地結(jié)合以允許被分析物或其衍生物結(jié)合第一或第二試劑?？舍尫诺慕Y(jié)合意味著掩蔽試 劑能夠結(jié)合第一或第二試劑，但是該掩蔽試劑由被分析物或其衍生物代替以結(jié)合第一或第 二試劑。當(dāng)掩蔽試劑與樣品基本同時(shí)引入時(shí)，結(jié)合是可釋放的，但這不是必須的，因?yàn)檠诒?試劑仍然能夠與被分析物或其衍生物競(jìng)爭(zhēng)以結(jié)合第一或第二試劑。當(dāng)結(jié)合是可釋放的時(shí)， 優(yōu)選所述掩蔽試劑可逆結(jié)合第一或第二試劑，即在結(jié)合和非結(jié)合狀態(tài)之間存在平衡。雖然在圖2中用第一和第二抗體例示了第一和第二試劑，但是本發(fā)明并非僅限于 此。因此，雖然第一和第二試劑優(yōu)選地是抗體，但是也可以使用其他的試劑，諸如核酸。在一 個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種執(zhí)行選擇性抗體免疫分析測(cè)定以檢測(cè)樣品中的被分析物 (有時(shí)也被稱為“半抗原”，是一種當(dāng)附至諸如蛋白質(zhì)的大載體時(shí)能夠引起免疫應(yīng)答的小分 子)的方法，包括如下步驟(i)提供包含熱電或壓電元件和電極的換能器、以及固定在換 能器上的第一抗體，其中所述換能器能夠?qū)⒛芰孔兓D(zhuǎn)換成電信號(hào)，并且所述第一抗體能 夠在被分析物或者被分析物的衍生物存在時(shí)結(jié)合第二抗體；(ii)引入第二抗體，所述第二 抗體能夠在被分析物或者被分析物的衍生物存在時(shí)結(jié)合所述第一抗體，并且具有附至其上 的標(biāo)記，所述標(biāo)記能夠吸收電磁輻射以生成非輻射衰減的能量，其中第一或者第二抗體能 夠結(jié)合被分析物或其衍生物；(iii)將樣品暴露于換能器，由此允許被分析物或其衍生物 與第一或者第二抗體結(jié)合；(iv)引入能夠與被分析物或其衍生物同樣結(jié)合至第一或者第 二抗體的掩蔽試劑，由此阻止第一抗體對(duì)第二抗體的結(jié)合；(ν)用電磁輻射照射樣品；(Vi) 將所生成的能量轉(zhuǎn)換為電信號(hào)；以及(Vii)檢測(cè)所述電信號(hào)，其中步驟(ii)至(iv)能夠以 任意次序發(fā)生。優(yōu)選所述結(jié)合是可逆的。圖2示出的第一試劑9附至換能器3的表面并且優(yōu)選地被吸收至換能器上。該表 面還可由其他涂層(例如來自 SurModics Inc, Eden Prairie, MN, USA 的 Stabilcoat)覆
9蓋以使得表面穩(wěn)固。如上參考圖2所討論的，第二試劑11具有附至其上的標(biāo)記12。標(biāo)記12能夠吸收 由輻射源生成的電磁輻射以生成非輻射衰減的能量。于是，為了檢測(cè)換能器3附近標(biāo)記12 的存在，樣品由一系列電磁輻射脈沖照射。換能器3將生成的能量轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，并且電信 號(hào)由檢測(cè)器7檢測(cè)。標(biāo)記12可以是能夠與由輻射源生成的電磁輻射相互作用以生成非輻射衰減的能 量的任何材料。優(yōu)選的，標(biāo)記包括但不限于碳微粒、有色聚合物微粒(例如，有色橡膠)、 染料分子、酶、熒光分子、金屬(例如，金)微粒、血紅蛋白分子、磁性微粒、具有非傳導(dǎo)核心 材料以及至少一個(gè)金屬殼層的納米微粒、紅細(xì)胞、以及它們的組合。在磁性微粒的情況下，電磁輻射是射頻輻射。上述提及的所有其他標(biāo)記利用包 括IR或UV輻射的光。優(yōu)選地，標(biāo)記是金微粒或者碳微粒。碳微粒的益處在于它們?cè)谒?有關(guān)注波長(zhǎng)上的吸收完全均勻，并且遠(yuǎn)沒有測(cè)定期間最小化其沉降的大多數(shù)金屬離子那 樣密集。金微粒市面有售，并且可以使用公知方法制備(參見例如G.Frens，Nature, 241, 20-22(1973))。對(duì)于納米微粒標(biāo)記的更詳細(xì)解釋參見US 6，344，272和WO 2007/141581。優(yōu)選地，本發(fā)明使用具有20至1，OOOnm,優(yōu)選地100至500nm微粒尺寸的微粒。微 粒尺寸是指微粒在其最寬點(diǎn)處的直徑。標(biāo)記12在結(jié)合事件已發(fā)生時(shí)接近換能器。也就是說，標(biāo)記與換能器表面足夠接近 使得換能器能夠檢測(cè)在照射樣品時(shí)由標(biāo)記生成的能量。盡管如此，標(biāo)記和換能器表面的實(shí) 際距離將取決于多個(gè)變量，諸如標(biāo)記的尺寸和特性、第一和第二抗體以及被分析物的尺寸 和特性、樣品培養(yǎng)基的特性、以及電磁輻射的特性和相應(yīng)的檢測(cè)器設(shè)置。對(duì)于電磁輻射的特 性，本發(fā)明的設(shè)備可以包括適于生成一系列電磁輻射脈沖的輻射源以及適于確定來自輻射 源的每個(gè)電磁輻射脈沖與電信號(hào)生成之間的時(shí)延的檢測(cè)器，由此允許精確確定標(biāo)記相對(duì)于 圖1討論的換能器的定位。雖然認(rèn)為未知樣品包含被分析物，但是本發(fā)明的測(cè)定當(dāng)然可用于確定被分析物的 存在與否。被分析物優(yōu)選地是小分子，因此所述測(cè)定理想地使用這類分子，雖然本發(fā)明并不 限于此。本文使用的術(shù)語“小分子”是本領(lǐng)域內(nèi)的術(shù)語并且用于與諸如蛋白質(zhì)和核酸之類 的大分子相區(qū)別。小分子在免疫測(cè)定領(lǐng)域內(nèi)通常被稱為“半抗原”，一種當(dāng)附至諸如蛋白質(zhì) 的大載體時(shí)能夠引起免疫應(yīng)答的小分子，并且包括諸如激素及合成藥物的分子。這類小分 子通常具有2，000或以下的分子量，經(jīng)常具有1，000或以下甚至500或以下的分子量。第 一試劑可適于結(jié)合至被分析物本身，雖然被分析物在與第一試劑結(jié)合之前可以經(jīng)歷化學(xué)反 應(yīng)或者初始絡(luò)合事件。例如，被分析物可以在測(cè)定的PH條件下質(zhì)子化/去質(zhì)子化。于是， 與第一試劑結(jié)合的被分析物可以是被分析物本身或者被分析物的衍生物；這兩者都位于本 發(fā)明的范圍內(nèi)。包含或者不包含所關(guān)注被分析物的樣品一般將會(huì)是流體樣品并且通常是生物樣 品(因此是含水的)，諸如像是血液、血漿、唾液、血清或尿的體液。樣品可以包含懸浮顆粒， 甚至可以是全血。本發(fā)明的方法的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于可以對(duì)包含懸浮顆粒的樣品執(zhí)行測(cè)定而不 會(huì)不恰當(dāng)?shù)赜绊憸y(cè)定結(jié)果。樣品典型地具有微升量級(jí)(例如，1-100 μ L，優(yōu)選地1-10 μ L)。 為了保用流體樣品，換能器優(yōu)選地位于樣品室內(nèi)并且更優(yōu)選地地位于凹槽(well)內(nèi)。在一 個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，換能器集成到室內(nèi)，即形成限定室的壁之一。樣品可以簡(jiǎn)單地由表面張力保持，例如在毛細(xì)管道內(nèi)。本發(fā)明還提供用于執(zhí)行本文描述的測(cè)定的設(shè)備和套件。套件包括用于檢測(cè)基本參 考圖1在本文描述的樣品中的被分析物的設(shè)備。所述設(shè)備包括具有熱電或壓電元件和電極 的換能器，其中所述換能器能夠?qū)⒛芰孔兓D(zhuǎn)換成電信號(hào)；固定在換能器上的第一試劑，所 述第一試劑具有能夠結(jié)合被分析物或者被分析物的衍生物的結(jié)合位點(diǎn)；掩蔽試劑，在樣品 添加之前添加到含有被分析物的樣品中或者可釋放地結(jié)合第一試劑；電磁輻射源；以及用 于檢測(cè)所述電信號(hào)的檢測(cè)器。套件還包括第二試劑，該第二抗體具有能夠在被分析物或其 衍生物存在而掩蔽試劑不存在時(shí)與第一試劑結(jié)合的結(jié)合位點(diǎn)。第二試劑可以在使用之前干 燥附至室的內(nèi)表面之一，以便在樣品引入時(shí)被釋放。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，設(shè)備實(shí)質(zhì)上由上 述特征組成?！皩?shí)質(zhì)上”意味著無需其他特征就能執(zhí)行該測(cè)定。該設(shè)備可以采用手持便攜讀取器和包含換能器的一次性設(shè)備的形式。在實(shí)質(zhì)上封 閉的系統(tǒng)內(nèi)收集樣品，與第二試劑混合，并且置于讀取器內(nèi)，后者會(huì)執(zhí)行樣品照射并且檢測(cè) 得到的電信號(hào)。本發(fā)明還提供具有熱電或壓電元件和電極的換能器的用途，用以檢測(cè)選擇性抗體 免疫分析測(cè)定中的結(jié)合事件。選擇性抗體免疫分析測(cè)定是涉及在第一抗體結(jié)合被分析物或 者被分析物的衍生物時(shí)第二抗體結(jié)合第一抗體但不結(jié)合掩蔽試劑的測(cè)定。示例例 1活性壓電/熱膜生物傳感器的制備在如下示例中用作以下示例中感測(cè)設(shè)備的涂覆在氧化銦錫中的極化聚偏二氟乙 烯雙晶壓電膜在低濕度環(huán)境中在聚苯乙烯溶液(1%甲苯)中浸涂以在氧化銦錫頂上給 出聚苯乙烯層。該雙晶壓電膜隨后在室溫下整夜培育以在聚抗生蛋白鏈菌素溶液(PBS 中 200 μ g/mL,其中 PBS 是包含 2. 7mmol/L KC1、137mmol/L NaCl 和 0. 05 % 吐溫的 pH 7.5 lOmmol/L磷酸鹽緩沖液)中浸涂。聚抗生蛋白鏈菌素的制備由Tischer等人(US 5，061，640)描述。為了制備“捕獲”表面，用生物素標(biāo)記的抗睪酮(Ml)培育聚抗生蛋白鏈菌素表 面，以提供涂覆抗體的表面(Cl)。在室溫下在PBS中整夜培育lOug/mL的生物素標(biāo)記的 抗睪酮(HyTest Ltd, Turku, Finland, Cat # 2T2_biotin, or Accurate Chemical Co, ffestbury, New York, USA, Cat # BHSl 13)并在隨后用過量PBS沖洗并在40°C下干燥之前 M Stabilcoat (SurModics Inc, Eden Prairie, MN, USA)涂覆。抗體用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法生物素標(biāo)記。例如，通過溶解凍干的抗體或者 通過稀釋來制備PBS中的5mg/ml抗體溶液。如果該溶液包含其他蛋白質(zhì)或三羥甲基氨基 甲烷或其他干擾劑，則通過透析或凝膠過濾進(jìn)行凈化。隨后在無水DMSO中制備20mmol/L NHS-生物素溶液并且添加15 μ L的NHS-生物素溶液至抗體(ImL)。在室溫下培育1小時(shí) 并在隨后針對(duì)包含疊氮化鈉(.01%)的PBS透析抗體。用0. 的疊氮化鈉和20%的甘油 將生物素標(biāo)記的抗體稀釋至lmg/mL以供在-20°C和+4°C下存儲(chǔ)。生物素標(biāo)記水平應(yīng)該在 每IgG 1-3生物素的范圍內(nèi)。這能夠通過生物素定量來評(píng)估，或者對(duì)于高生物素標(biāo)記速率， 通過胺的差異定量來評(píng)估。Ml
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報(bào)告物結(jié)合物的制備碳標(biāo)記的報(bào)告物結(jié)合物實(shí)質(zhì)上按照Van Doom等人(US 5，641，689)的描述制備。 為了制備涂覆抗體的報(bào)告物結(jié)合物(Cl)，室溫下用200 μ g/mL聚抗生蛋白鏈菌素溶液在 5mmol/L磷酸鹽緩沖液pH 6. 2中搖動(dòng)培育ImL of Special Black-4 RCC標(biāo)稱150nm碳微 粒(Degussa，Essen，Germany)整夜，得到涂覆抗生蛋白鏈菌素的表面。得到的碳結(jié)合物(通 過離心、?；驮賾腋?。隨后用Iml的這一涂覆抗生蛋白鏈菌素的碳微粒懸浮液整夜搖 動(dòng)培育PBS中抗抗體物種反應(yīng)的lOug/mL的生物素標(biāo)記的次單株抗體(M2)，其中該抗體種 用作抗睪酮捕獲抗體(Ml)的源。用pH 8. 5的0. 05mol/L硼酸鹽緩沖液清洗得到的碳結(jié)合 物(C2)3次(通過離心、?；驮賾腋?并在4°C下暗處存儲(chǔ)。為了清楚，如果抗睪酮抗體 (Ml)是單株小鼠抗體，那么次單株抗體(M2)是抗全小鼠抗體反應(yīng)而產(chǎn)生的山羊抗體(所謂 的“山羊抗小鼠抗體”)。當(dāng)然，可以使用任何其他的單株和多株的物種對(duì)，并且這些是本領(lǐng) 域技術(shù)人員周知的。例 3掩蔽試劑的制備為了制備涂覆抗體的掩蔽試劑(MR1)，室溫下用30nmol/L的7ci-C6-生物素 標(biāo)記的睪酮在5mmol/L磷酸鹽緩沖液pH 6. 2中整夜搖動(dòng)培育ImL的涂覆抗生蛋白鏈菌 素的聚苯乙烯膠乳微粒(標(biāo)稱直徑23nm)Bangs Laboratories P/N PS02N/8192 (Bangs Laboratories Inc，F(xiàn)ishers IN，USA)，正如 Luppa 等人描述的那樣進(jìn)行制備(Clin. Chem. 1997，43，2345，)。用上述pH 8. 5的0. 05mol/L硼酸鹽緩沖液清洗得到的結(jié)合物3次 并在4°C下暗處存儲(chǔ)。例 4掩蔽的涂覆抗體的膜的制備為了制備掩蔽的壓電膜表面(C3)，在室溫下用涂覆抗原的掩蔽試劑(所述MRl)在 PBS中整夜培育一片涂覆抗體的壓電膜(如上所述，Cl)，隨后用過量PBS清洗該壓電膜并 在 40°C干燥前用 Stabilcoat (SurModics Inc, Eden Prairie, MN, USA)涂覆。M 5測(cè)定——涂覆抗體的壓電/熱膜傳感器和掩蔽試劑如圖3所述，制造傳感器1以執(zhí)行測(cè)定。傳感器1由一片抗體涂覆的壓電膜3(如 上所述，C3)和一片透明聚碳酸酯蓋膜14制成。上述兩膜用間隔物15隔開約500微米的 距離，其中該間隔物15由一片涂覆粘合劑的壓敏聚酯膜制成并被沖切形成兩個(gè)尺寸不等 的室16、17 ；大小約為30 χ 10 χ 0. 5mm的室16用于測(cè)定反應(yīng)而大小為10 χ 10 χ 0. 5mm 的較小的第二室用于控制反應(yīng)。提供結(jié)構(gòu)用以允許至壓電膜頂表面和底表面的電連接，由 此檢測(cè)生成的電荷。通過用0. lmol/L的三羥甲基氨基甲烷緩沖液和PBS中的睪酮標(biāo)準(zhǔn)品以給出 0. l-100nmol/L最終濃度范圍的混合物(通過填充孔18)填充較大的室16來執(zhí)行測(cè)定，其 中三羥甲基氨基甲烷緩沖液包含0. 150mol/LMgCl2和0. 075%吐溫20溶液，包含涂有生物 素標(biāo)記的抗體(C2，如上所述)的150nm膠質(zhì)碳微粒(最終濃度為0. 0025%固體)，并且其 中所述生物素標(biāo)記的抗體抗捕獲抗體(Ml)反應(yīng)?？刂剖?7同時(shí)填充與測(cè)定室相同的反應(yīng) 混合物，不同之處在于用PBS代替睪酮標(biāo)準(zhǔn)品。入口和出口被密封并將室組件連至測(cè)試儀
12器，使得壓電膜3垂直于室的側(cè)面定向。隨后順序用四個(gè)LED(波長(zhǎng)625nm)以斷續(xù)LED光 照射壓電膜，其中三個(gè)LED照射測(cè)定室表面的不同區(qū)域，一個(gè)照射控制室的壓電膜表面。對(duì) 于每個(gè)LED脈沖，使用鎖定放大器和模數(shù)(ADC)轉(zhuǎn)換器測(cè)量跨壓電膜的電壓。ADC信號(hào)隨時(shí) 間的標(biāo)繪以及ADC計(jì)數(shù)/min相對(duì)于睪酮濃度的關(guān)系在圖4中示出。
權(quán)利要求
一種用于檢測(cè)樣品中的被分析物的方法，包括以下步驟，(i)提供包含熱電或壓電元件和電極的換能器、以及固定在換能器上的第一試劑，其中所述換能器能夠?qū)⒛芰孔兓D(zhuǎn)換成電信號(hào)，并且所述第一試劑具有能夠在被分析物或者被分析物的衍生物存在時(shí)結(jié)合第二試劑的結(jié)合位點(diǎn)；(ii)引入第二試劑，所述第二試劑具有能夠在被分析物或者被分析物的衍生物存在時(shí)結(jié)合所述第一試劑的結(jié)合位點(diǎn)，并且具有附至其上的標(biāo)記，所述標(biāo)記能夠吸收電磁輻射以生成非輻射衰減的能量，其中第一試劑或者第二試劑能夠結(jié)合被分析物或其衍生物；(iii)將樣品暴露于換能器，由此允許被分析物或其衍生物與第一試劑或者第二試劑結(jié)合；(iv)引入能夠與被分析物或其衍生物同樣結(jié)合至第一試劑或者第二試劑的掩蔽試劑，由此阻止第一試劑對(duì)第二試劑的結(jié)合；(v)用電磁輻射照射樣品；(vi)將所生成的能量轉(zhuǎn)換為電信號(hào)；以及(vii)檢測(cè)所述電信號(hào)，其中步驟(ii)至(iv)能夠以任意次序發(fā)生。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第一試劑和所述第二試劑是抗體。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述掩蔽試劑是具有能夠結(jié)合第一試劑的多個(gè) 位點(diǎn)的大分子。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述大分子上的位點(diǎn)是具有與被分析物或其衍生物 相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)的部分。
5.如前述任一權(quán)利要求所述的方法，其中在將換能器暴露于樣品之前，所述掩蔽試劑 可釋放地結(jié)合第一或第二試劑。
6.如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述掩蔽試劑與所述樣品被基本同時(shí) 引入。
7.如前述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述掩蔽試劑可逆地結(jié)合第一或第二試劑。
8.如在前任一權(quán)利要求所述的方法，其中標(biāo)記選自碳微粒、有色聚合物微粒、染料分 子、酶、熒光分子、金屬(例如，金)微粒、血紅蛋白分子、磁性微粒、具有非傳導(dǎo)核材料以及 至少一個(gè)金屬殼層的納米微粒、紅細(xì)胞、以及它們的組合。
9.如在前任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述第一試劑吸附在所述換能器上。
10.如權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一試劑共價(jià)結(jié)合所述換能器。
11.如在前任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述換能器位于樣品室內(nèi)。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中所述室是凹槽。
13.如權(quán)利要求11或12所述的方法，其中所述換能器集成至所述室。
14.如在前任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述樣品包括懸浮顆粒。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述樣品是全血。
16.如在前任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述輻射源適于生成一系列電磁輻射脈沖， 以及所述檢測(cè)器適于確定來自輻射源的每個(gè)電磁輻射脈沖與電信號(hào)生成之間的時(shí)延。
17.如在前任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述方法在將樣品暴露于換能器和照射樣 品的步驟之間無需從換能器移除樣品的情況下進(jìn)行。
18.一種套件，包括(i)用于檢測(cè)樣品中的被分析物的設(shè)備，所述設(shè)備包括具有熱電或壓電元件和電極的換能器，其中所述換能器能夠?qū)⒛芰孔兓D(zhuǎn)換成電信號(hào)；固定在換能 器上的第一試劑，所述第一試劑具有能夠在被分析物或者被分析物的衍生物存在時(shí)結(jié)合第 二試劑的結(jié)合位點(diǎn)；(ii)第二試劑，所述第二試劑具有能夠在被分析物或者其衍生物存在 時(shí)結(jié)合所述第一試劑的結(jié)合位點(diǎn)，并且具有附至其上的標(biāo)記，所述標(biāo)記能夠吸收電磁輻射 以生成非輻射衰減的能量；以及，(iii)能夠與被分析物或其衍生物同樣結(jié)合至第一試劑 或者第二試劑由此阻止第一試劑對(duì)第二試劑的結(jié)合的掩蔽試劑。
19.如權(quán)利要求18所述的套件，其中所述第一試劑和所述第二試劑是抗體。
20.如權(quán)利要求18或19所述的套件，其中所述掩蔽試劑是具有能夠結(jié)合第一試劑的多 個(gè)位點(diǎn)的大分子。
21.如權(quán)利要求20所述的套件，其中所述大分子上的位點(diǎn)是具有與被分析物或其衍生 物相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)的部分。
22.如權(quán)利要求18至21中任一項(xiàng)所述的套件，其中在將換能器暴露于樣品之前，所述 掩蔽試劑可釋放地結(jié)合第一試劑或者第二試劑。
23.如權(quán)利要求18至22中任一項(xiàng)所述的套件，其中所述掩蔽試劑可逆地結(jié)合第一或第 二試齊LU
24.如權(quán)利要求18至23中任一項(xiàng)所述的套件，其中標(biāo)記選自碳微粒、有色聚合物微 粒、染料分子、酶、熒光分子、金微粒、血紅蛋白分子、磁性微粒、具有非傳導(dǎo)核材料以及至少 一個(gè)金屬殼層的納米微粒、紅細(xì)胞、以及它們的組合。
25.如權(quán)利要求18至24中任一項(xiàng)所述的套件，其中所述第一試劑吸附在所述換能器上。
26.如權(quán)利要求18至24中任一項(xiàng)所述的套件，其中所述第一試劑共價(jià)結(jié)合所述換能器。
27.如權(quán)利要求18至26中任一項(xiàng)所述的套件，其中所述設(shè)備還包括樣品室并且所述換 能器位于所述樣品室內(nèi)。
28.如權(quán)利要求27所述的套件，其中所述室是凹槽。
29.如權(quán)利要求27或28所述的套件，其中所述換能器集成至所述室。
30.如權(quán)利要求18至29中任一項(xiàng)所述的套件，其中所述輻射源適于生成一系列電磁輻 射脈沖，以及所述檢測(cè)器適于確定來自輻射源的每個(gè)電磁輻射脈沖與電信號(hào)生成之間的時(shí) 延。
31.一種用于檢測(cè)樣品中的被分析物的設(shè)備，所述設(shè)備包括具有熱電或壓電元件和 電極的換能器，其中所述換能器能夠?qū)⒛芰孔兓D(zhuǎn)換成電信號(hào)；固定在換能器上的第一試 劑，所述第一試劑具有能夠結(jié)合被分析物或者被分析物的衍生物并且能夠在被分析物或者 被分析物的衍生物存在時(shí)結(jié)合第二試劑的結(jié)合位點(diǎn)；可釋放地結(jié)合第一試劑的掩蔽試劑； 電磁輻射源；以及用于檢測(cè)所述電信號(hào)的檢測(cè)器。
32.如權(quán)利要求31所述的設(shè)備，其中所述第一試劑是抗體。
33.如權(quán)利要求31或32所述的設(shè)備，其中所述掩蔽試劑是具有能夠結(jié)合第一試劑的多 個(gè)位點(diǎn)的大分子。
34.如權(quán)利要求33所述的設(shè)備，其中所述大分子上的位點(diǎn)是具有與被分析物或其衍生 物相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)的部分。
35.如權(quán)利要求31至34中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其中所述第一試劑吸附在所述換能器上。
36.如權(quán)利要求31至34中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其中所述第一試劑共價(jià)結(jié)合所述換能ο
37.如權(quán)利要求31至36中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其中所述設(shè)備還包括樣品室并且所述換 能器位于所述樣品室內(nèi)。
38.如權(quán)利要求37所述的設(shè)備，其中所述室是凹槽。
39.如權(quán)利要求37或38所述的設(shè)備，其中所述換能器集成至所述室。
40.如權(quán)利要求31至39中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其中所述輻射源適于生成一系列電磁輻 射脈沖，以及所述檢測(cè)器適于確定來自輻射源的每個(gè)電磁輻射脈沖與電信號(hào)生成之間的時(shí) 延。
41.具有熱電或壓電元件和電極的換能器的用途，用于檢測(cè)選擇性抗體免疫分析測(cè)定 中的結(jié)合事件。全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)樣品中的被分析物(10)的方法，包括以下步驟(i)提供包含熱電或壓電元件和電極的換能器(3)、以及固定在換能器上的第一試劑(9)，其中所述換能器能夠?qū)⒛芰孔兓D(zhuǎn)換成電信號(hào)，并且所述第一試劑具有能夠在被分析物或者被分析物的衍生物存在時(shí)結(jié)合第二試劑(11)的結(jié)合位點(diǎn)；(ii)引入第二試劑，所述第二試劑具有能夠在被分析物或者被分析物的衍生物存在時(shí)結(jié)合所述第一試劑的結(jié)合位點(diǎn)，并且具有附至其上的標(biāo)記(12)，所述標(biāo)記能夠吸收電磁輻射以生成非輻射衰減的能量，其中第一試劑或者第二試劑能夠結(jié)合被分析物或其衍生物；(iii)將樣品暴露于換能器，由此允許被分析物或其衍生物與第一試劑或者第二試劑結(jié)合；(iv)引入能夠與被分析物或其衍生物同樣結(jié)合至第一試劑或者第二試劑的掩蔽試劑(13)，由此阻止第一試劑對(duì)第二試劑的結(jié)合；(v)用電磁輻射照射樣品；(vi)將所生成的能量轉(zhuǎn)換為電信號(hào)；以及(vii)檢測(cè)所述電信號(hào)，其中步驟(ii)至(iv)能夠以任意次序發(fā)生。
文檔編號(hào)G01N33/543GK101981451SQ200980111669
公開日2011年2月23日 申請(qǐng)日期2009年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月2日
發(fā)明者S·A·羅斯, T·J·N·卡特 申請(qǐng)人:維瓦克塔有限公司