專利名稱：一種甲基苯丙胺的膠體金標記免疫檢測墊、試紙及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種體外快速免疫檢測工具及其使用方法，具體涉及一種甲基苯丙胺的多梯度膠體金標記檢測墊、試紙及其免疫檢測方法。
背景技術(shù)：
甲基苯丙胺(又名去氧麻黃堿或安非他命)呈白色結(jié)晶體或粉末狀，俗稱冰毒。甲 基苯丙胺為中樞興奮劑，能抑制丁氨基氧化酶的活性，使腎上腺素和腎上腺素能神經(jīng)的化 學(xué)傳導(dǎo)物質(zhì)-去甲基腎上腺素的破壞減慢，大腦皮質(zhì)以及皮質(zhì)下中樞產(chǎn)生興奮，具有欣快、 警覺及抑制食欲的作用。濫用者會處于強烈興奮狀態(tài)，表現(xiàn)為不吃不睡、活動過度、情感沖 動、偏執(zhí)狂、妄想、幻覺和暴力傾向。為了捕捉和感受一種短暫即逝的強烈快感或興奮，避免 快感過后的失落、抑郁、疲勞感，常常導(dǎo)致強迫性用藥行為。因而極易成癮。甲基苯丙胺是 目前國際、國內(nèi)蔓延最廣，流行最快的毒品之一。甲基苯丙胺可以使用多種方法進行檢測，如氣相色譜(GC)氣相色譜/質(zhì)譜(GC/ MS)，高效液相色譜(HPLC)等。但是費用較高，所需的時間較長。因此目前在進行毒品篩查 過程中更多使用的是免疫膠體金檢測方法。免疫膠體金技術(shù)是以膠體金作為示蹤標志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫 標記技術(shù)。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負電荷，膠體金標記，實質(zhì)上是蛋白質(zhì)等帶正電荷基團 的高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合，所以不影響蛋 盤質(zhì)等被吸附物質(zhì)的生物特性。膠體金除了與_質(zhì)結(jié)合以外，還可以與許多其它生物大 分子結(jié)合，如SPA、PHA, ConA等。根據(jù)膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形 狀及顏色反應(yīng)，加上結(jié)合物的免疫和生物學(xué)特性，因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織 學(xué)、病理學(xué)和細胞生物學(xué)等領(lǐng)域。1971年Faulk和Taytor將膠體金引入免疫化學(xué)，此后免 疫膠體金技術(shù)作為一種新的免疫學(xué)方法，在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域得到了日益廣泛的應(yīng)用。目前毒品檢測中使用的免疫膠體金檢測方法原理為將氯金酸用還原法制成一定 直徑的金溶膠顆粒，標記抗體。以硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜的毛細管作用，滴加 在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移。在移動的過程中，會發(fā)生相應(yīng)的抗原抗體反應(yīng)，并通 過免疫金的顏色而顯示出來。樣本中的被檢測成分在流動的過程中與膠體金標記的特異性 單克隆抗體結(jié)合，抑制了抗體與硝酸纖維素(NC)膜檢測線上被檢測成分-BSA偶聯(lián)物的結(jié) 合，使檢測線不顯顏色，結(jié)果為陽性；反之，檢測線顯色，結(jié)果為陰性。在膠體金免疫檢測法中，可使用的膠體金通常是紅色型或紫紅色型。下面以目前普遍使用的甲基苯丙胺膠體金標記免疫檢測方法為例進行說明。(1)免疫原的制備采用活化脂法，將牛血清白蛋白(BSA)與甲基苯丙胺結(jié)合，制成甲基苯丙胺的免疫原。(2)抗甲基苯丙胺的特異抗體的制備將制備的甲基苯丙胺合成免疫原免疫小鼠，提取小鼠腹水，分離純化以得到抗甲基苯丙胺單克隆抗體。
(3)膠體金的制備采用還原法制備膠體金，常用的還原劑有檸檬酸鈉、鞣酸、抗 壞血酸、白磷、硼氫化鈉等。(4)膠體金標記抗甲基苯丙胺的特異抗體的制備將特異抗體加入到膠體金溶液 中混合，獲得膠體金標記的抗體。(5)抗膠體金標記抗體的二抗的制備采用常規(guī)的制備方法制備二抗。(6)硝酸纖維素膜和玻璃纖維素膜的處理 硝酸纖維膜的包被硝酸纖維膜作為檢測過程中的抗原抗體反應(yīng)的載體，要依次 包被甲基苯丙胺-BSA結(jié)合物(測試線即T線)和抗膠體金標記抗體的二抗(質(zhì)控線即C 線)。玻璃纖維膜處理將檢測閾值為lOOOng/mL的凍干的膠體金標記的抗甲基苯丙胺 的特異抗體固定于玻璃纖維膜，制成膠體金墊。(7)免疫層析試紙條的制備在塑料底板7上分別將吸液用玻璃纖維6、固著凍干膠體金標記的抗甲基苯丙胺 的特異抗體的玻璃纖維膜金標墊5、包被甲基苯丙胺-BSA結(jié)合物和抗膠體金標記抗體的二 抗的硝酸纖維素膜2和吸水墊1依次粘貼，如圖1所示，其中硝酸纖維素膜2兩端分別與吸 水墊和抗甲基苯丙胺單抗金標墊5互相交疊連接，在抗甲基苯丙胺單抗金標墊5上壓有玻 璃纖維6。(8)樣品測試和結(jié)果判斷方法快速檢測過程描述將試紙條插入待測樣品中，停留5秒后取出平放，或用滴管在 樣品墊上滴加4 6滴樣品，3 5分鐘后觀察結(jié)果。如果受測標本中不含有甲基苯丙胺， 膠體金標記的特異性抗體釋放并向膜區(qū)流動，與膜區(qū)抗原和二抗結(jié)合形成兩條紅線(一條 反應(yīng)線T，一條質(zhì)控線C)，表明檢測結(jié)果為陰性，如果受測標本中存在甲基苯丙胺，而且濃 度高于檢測水平時，就會與膠體金標記的抗體競爭結(jié)合，從而阻止膠體金標記的抗體與膜 區(qū)抗原結(jié)合，使其對應(yīng)的反應(yīng)線不顯色，僅出現(xiàn)一條紅色的質(zhì)控線，表明檢測結(jié)果為陽性。 質(zhì)控線(C)是檢驗方法本身有效與否，顯色有效，不顯色無效。免疫膠體金層析技術(shù)具有特異性強，靈敏度高，簡便易行，價格低廉等許多優(yōu)點， 已經(jīng)成為世界通用的對吸毒人員進行初步篩查的首選方法。當篩查為陽性結(jié)果，再進行 GC-MS檢查確認，大大降低了工作強度和經(jīng)濟費用。作為篩查，我國對每一種毒品都規(guī)定了 各自的檢測閾值(cutoff)，高于該閾值即為檢測陽性。各種毒品的檢測閾值在各國略有不 同，即使在一個國家，也會根據(jù)該閾值的實際檢測的信度和效度不斷調(diào)整閾值。美國1988 年首次公布對阿片、大麻、可卡因等數(shù)種毒品檢測閾值后，到2004年已經(jīng)進行了 4次修訂。 對每個國家來講，各種毒品的檢測閾值都是單一的，以國家行政命令的形式公布的，其區(qū)分 度具有一定的法律意義。我國目前使用的檢測閾值是參照美國1988年公布的檢測閾值制 定的，其中，甲基苯丙胺檢測閾值為lOOOng/mL。但是在對藥物濫用人員執(zhí)法過程中，存在各 種復(fù)雜情況，單一的定性檢測，難以適應(yīng)不同的環(huán)境，難以區(qū)分不同的吸毒人群。如在吸毒 時大量飲水，會造成尿液稀釋，使尿中毒品濃度低于檢測閾值，造成假陰性；無法區(qū)分偶爾 吸毒和吸毒成癮者，對于上述兩種情況我國法律所規(guī)定的處理方法是不同的。對于無法進 行GC-MS檢測確認的現(xiàn)場執(zhí)法人員面對這些復(fù)雜情況，單一定性的檢測閾值提供的信息是 不夠的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種甲基苯丙胺的多梯度膠體金標記免疫檢測方法，克服上述信息量不足的缺點，采用保留原檢測閾值(cutoff) 1000ng/mL不變，用增加檢測閾值 的方法，擴大檢測范圍，以滿足現(xiàn)場執(zhí)法區(qū)分不同吸毒人員的需要。對尿中含甲基苯丙胺的 濃度進行多個濃度范圍的半定量標定。本發(fā)明甲基苯丙胺膠體金標記免疫檢測墊和相配合的試紙，包括免疫原、抗甲基 苯丙胺特異抗體、膠體金、膠體金標記抗甲基苯丙胺特異抗體、抗膠體金標記抗體的二抗、 硝酸纖維素膜和玻璃纖維素膜、免疫層析試紙條，所述檢測墊是多梯度檢測墊，其上至少有兩個硝酸纖維素膜，不同的硝酸纖維素 膜上分別有不同濃度的膠體金標記抗甲基苯丙胺特異抗體固定于其上，形成具有不同檢測 閾值的膠體金標記墊；所述免疫層析試紙條是使用上述膠體金墊，在同一底板上制成的多梯度檢測試紙 條；其中，每個試紙條是將吸液用玻璃纖維、上述膠體金墊之一、包被甲基苯丙胺-BSA結(jié)合 物和抗膠體金標記抗體的二抗的硝酸纖維素膜和吸水墊依次粘貼于其上。所述甲基苯丙胺的多梯度膠體金標記免疫檢測墊及相配合的試紙，其特征在于所 述多梯度檢測試紙條所包含的檢測閾值為下述三組中的任何一組(1)由如下兩個檢測閾值構(gòu)成250 500ng/mL和1000ng/mL ；(2)由如下兩個檢測閾值構(gòu)成1000ng/mL和10000 100000ng/mL ；(3)由如下三個檢測閾值構(gòu)成250 500ng/mL、1000ng/mL 和 10000 IOOOOOng/
mLo使用所述的免疫檢測墊和相配合的試紙的檢測方法，樣品測試和結(jié)果判斷方法按 照如下操作步驟進行將上述多梯度檢測試劑條置于干凈平坦的臺面上，用塑料吸管垂直滴加140 160ul無空氣泡的受試者尿樣于加樣孔內(nèi)；測試結(jié)果在5-8分鐘以內(nèi)讀取，8分鐘后判定無效；結(jié)果判斷相應(yīng)試紙條上的檢測線不顯色，檢測結(jié)果為陽性，檢測線顯色，檢測結(jié) 果為陰性，質(zhì)控線顯色表明檢測結(jié)果有效，不顯色表明結(jié)果無效。所述免疫層析試紙條的制備是使用上述膠體金墊，在同一底板上制成多梯度檢測 試紙條，其中，每個試紙條是將吸液用玻璃纖維、上述膠體金墊之一、包被甲基苯丙胺-BSA 結(jié)合物和抗膠體金標記抗體的二抗的硝酸纖維素膜和吸水墊依次粘貼；所述樣品測試和結(jié)果判斷方法的操作步驟如下(1)將上述多梯度檢測試劑條置于干凈平坦的臺面上，用塑料吸管垂直滴加 140-160ul無空氣泡的尿樣于加樣孔內(nèi)；(2)測試結(jié)果在5-8分鐘以內(nèi)讀取，8分鐘后判定無效；(3)結(jié)果判斷相應(yīng)試紙條上的檢測線不顯色，檢測結(jié)果為陽性，檢測線顯色，檢 測結(jié)果為陰性，質(zhì)控線顯色表明檢測結(jié)果有效，不顯色表明結(jié)果無效。所述檢測閾值為下述三組中的任何一組(1)包括如下兩個檢測閾值250 500ng/mL和1000ng/mL ；
(2)包括如下兩個檢測閾值:1000ng/mL和10000 100000ng/mL ；(3)包括如下三個檢測閾值250 500ng/mL、1000ng/mL 和 10000 IOOOOOng/ mL ；所述檢測閾值250 500ng/mL用于篩選檢測前3h內(nèi)一次或多次飲水800mL以上
的被試者是否服用甲基苯丙胺類毒品。所述檢測閾值lOOOng/mL用于篩選檢測前3h內(nèi)飲水量不超過SOOmL的被試者是
否服用甲基苯丙胺類毒品。所述檢測閾值10000 lOOOOOng/mL用于篩選被試者是否連續(xù)服用甲基苯丙類毒
品并成癮。所述樣品為尿液。所述檢測方法在被試者服用甲基苯丙胺類毒品后48小時內(nèi)均可使用。本發(fā)明的優(yōu)越性在于將只有一個檢測閾值的定性檢測方法，改進為多個梯度的 半定量檢測，擴大檢測范圍，增加了信息量，為區(qū)分不同性質(zhì)，不同劑量吸毒人員的判定提 供客觀依據(jù)。


圖1為通用甲基苯丙胺檢測試紙條的結(jié)構(gòu)圖；1-吸水墊；2-硝酸纖維素膜；3-質(zhì)控線；4-測試線；5-抗甲基苯丙胺單抗金標墊； 6-玻璃纖維；7-底板圖2為本發(fā)明甲基苯丙胺檢測試紙條的俯視圖；圖3為本發(fā)明甲基苯丙胺檢測試紙測試結(jié)果圖。
具體實施例方式下面結(jié)合現(xiàn)有技術(shù)對本發(fā)明包括三個檢測閾值250ng/mL、1000ng/mL和 10000ng/mL的檢測方法進行詳細說明。實施例11免疫原的制備采用活化脂法，將牛血清白蛋白(BSA)與甲基苯丙胺結(jié)合，制成 甲基苯丙胺的免疫原，甲基苯丙胺-BSA結(jié)合物。2抗甲基苯丙胺的特異抗體的制備將制備的甲基苯丙胺合成免疫原免疫小鼠，提取小鼠腹水，分離純化以得到抗甲基苯丙胺單克隆抗體，其制備方法參照宋朝錦、郭偉 正、劉一兵等寫的甲基苯丙胺和嗎啡單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用(中國原子能科學(xué)研究 院年報，2001年00期397-403頁)。3膠體金的制備采用檸檬酸三鈉還原法制備金溶膠，其中，加入檸檬酸三鈉 水溶液0. 7ml，制得金溶膠的粒徑為71. 5nm，顏色為紫紅色。4膠體金標記抗甲基苯丙胺的特異抗體的制備將步驟2中制備的特異抗體加入 到步驟3制得的膠體金溶液中混合，從而獲得膠體金標記的抗體，具體操作方法參照江靜、 劉一兵、周棱等寫的甲基苯丙胺免疫層析測試條的研制(同位素，2004年17(2) 79-83)和 曾立波、陳連康、胡小龍等寫的氯胺酮、甲基苯丙胺和嗎啡金標單抗試劑盒的研制(中國法 醫(yī)學(xué)雜志 2008 年 23 (4) 241-243)。
5抗膠體金標記抗體的二抗的制備具體操作方法參照江靜、劉一兵、周棱等寫的 甲基苯丙胺免疫層析測試條的研制(同位素，2004年17(2) 79-83)和曾立波、陳連康、胡 小龍等寫的氯胺酮、甲基苯丙胺和嗎啡金標單抗試劑盒的研制(中國法醫(yī)學(xué)雜志2008年 23(4) :241-243)。6硝酸纖維素膜和玻璃纖維素膜的處理 硝酸纖維膜的包被剪取長6cm，寬為0. 4cm硝酸纖維膜，在膜上依次包被濃度為 10mg/ml的甲基苯丙胺-BSA結(jié)合物(測試線即T線)，位置參照圖1中的4，和濃度為IOmg/ ml的抗膠體金標記抗體的二抗(質(zhì)控線即C線)，位置參照圖1中的3。制作三張同樣的硝
酸纖維膜。玻璃纖維膜處理剪取三張長6cm，寬為0. 4cm玻璃纖維膜，分別將檢測閾值為 250ng/mLU000ng/mL和lOOOOng/mL的凍干的膠體金標記的抗甲基苯丙胺的特異抗體固定 于不同的玻璃纖維膜，制成三個膠體金墊。7免疫層析試紙條的制備在塑料底板7上分別將吸液用玻璃纖維6、固著凍干膠體金標記的抗甲基苯丙胺 的特異抗體的玻璃纖維膜金標墊5、包被甲基苯丙胺-BSA結(jié)合物和抗膠體金標記抗體的二 抗的硝酸纖維素膜2和吸水墊1依次粘貼，三個檢測閾值的試紙條粘帖在同一塑料底板上， 結(jié)果如圖2所示，從上到下檢測閾值依次為250ng/mL、1000ng/mL和10000ng/mL。8 檢測(4)將試劑條置于干凈平坦的臺面上，用塑料吸管垂直滴加5滴無空氣泡的尿樣 (約150ul)于加樣孔內(nèi)。(5)測試結(jié)果在5分鐘時讀取，8分鐘后判定無效。(6)結(jié)果判斷如圖3所示，a 陽性，250ng/ml彡尿液中甲基苯丙胺濃度彡lOOOng/ml，此陽性結(jié)果表明檢測 前3h內(nèi)一次或多次飲水SOOmL以上的被試者服用過甲基苯丙胺類毒品；b 陽性，1000ng/ml彡尿液中甲基苯丙胺濃度彡lOOOOng/ml，此陽性結(jié)果表明檢 測前3h內(nèi)飲水量不超過SOOmL的被試者服用過甲基苯丙胺類毒品；c 陽性，尿液中甲基苯丙胺濃度彡lOOOOng/ml，此陽性結(jié)果表明被試者連續(xù)服用 過甲基苯丙類毒品并成癮；d:陰性；e i 檢測結(jié)果無效。實施例2單次口服甲基苯丙胺10mg，其血漿 Cmax 為 17. 4ng/mL ；Tmax5. 2h ；T1/2 9. 3h。尿 Cmax為2969. 7ng/mL ；Tmax 15. 16h ；陽性結(jié)果(檢測值為1000ng/mL)出現(xiàn)的最早時間 5. Oh。單次口服甲基苯丙胺 20mg，其血漿 Cmax 為 32. 4ng/mL;Tmax7. 5h;T1/2 11. lh。尿 Cmax為4038. 4ng/mL ；Tmaxl4. 32h ；陽性結(jié)果出現(xiàn)的最早時間3. 3h。甲基苯丙胺腎臟清除 率175+/-102mL/min，根據(jù)上述甲基苯丙胺藥代動力學(xué)特征設(shè)計如下實驗，以確定檢測閾值 250ng/ml和10000ng/ml的必要性和可信度。1檢測低線閾值的確定1. 1檢測值500ng/mL或250ng/mL對正常人定量服用甲基苯丙胺后尿中甲基苯苯胺濃度的檢測時間窗和檢測陽性率的影響8例健康受試者，均為男性，平均年齡為26歲，經(jīng)一次口服甲基苯丙胺IOmg后，使 用GC-MS連續(xù)檢測尿液中甲基苯丙胺的濃度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)如以500ng/mL為檢測閾值時，檢出 甲基苯丙胺的時間范圍是7-20h，如果以250ng/mL為檢測閾值，其最初檢出甲基苯丙胺的 時間范圍是4-13h。以250ng/mL為檢測閾值比以500ng/mL為檢測閾值，總檢出時間增加達 34h，總檢出陽性率增加48%。
1. 2不同檢測值對甲基苯丙胺毒品可疑使用者檢出率的影響使用已經(jīng)取得體外試劑檢測批號的杭州艾康生產(chǎn)的甲基苯丙胺檢測試紙條對娛 樂場所中300名可疑甲基苯丙胺使用者進行尿液檢測，結(jié)果顯示206名為陽性，對尿檢 (1000ng/mL為檢測值)陰性人員的尿液使用GC-MS復(fù)檢，結(jié)果發(fā)現(xiàn)檢測值在lOOng/mL以上 陽性率為82. 2%, 250ng/mL以上陽性率為76.4%, 500ng/mL以上陽性率為14. 1%, IOOOng/ mL以上陽性率為0%。在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)所有陰性人員均有在2-3h中大量飲水(飲料)歷史， 飲水量在800ml-1000ml之間。1. 3增加250ng/mL檢測值對假陽性的檢測結(jié)果的影響對甲基苯丙胺檢測而言，假陽性主要來自治療目的使用甲基苯丙胺，和其他藥物 中含有的單胺、腐胺類成分的交叉反應(yīng)。我國允許使用中樞興奮劑治療兒童注意缺陷多 動障礙、成年注意缺陷多動障礙和發(fā)作性睡病。治療劑量一般為20-25mg/d，劑量范圍是 5-30mg/d。在這一用藥劑量范圍中尿液甲基苯丙胺濃度已經(jīng)處于彡lOOOng/mL的水平(參 看2. 1)，所以250ng/mL檢測值對治療用藥人群的假陽性檢出率的影響不大。值得注意的 是一些含有單胺、腐胺類藥物由于交叉反應(yīng)造成的假陽性結(jié)果?？梢栽谑褂谜f明中標示 250ng/mL檢測值僅限于在尿液被稀釋的情況下，即吸毒后2_3h內(nèi)飲水量在800ml以上，才 對判定吸毒與否有意義。2檢測高線閾值的確定2. 1娛樂性(偶爾)使用甲基苯丙胺人員尿中甲基苯丙胺濃度低于lOOOOng/mL對使用杭州艾康生產(chǎn)的甲基苯丙胺檢測試紙條檢測的105例甲基苯丙胺尿檢 陽性人員進行血液中甲基苯丙胺濃度檢測(GC-MS方法)發(fā)現(xiàn)血液中甲基苯丙胺濃度在 0. 1-11. ImicroM,中位數(shù)為 1. 3microM(0. 19mg/l)均數(shù)為 2microM(0. 3mg/l)。根據(jù)藥代動 力學(xué)推算，維持甲基苯丙胺血藥濃度為1.3microM(0. 19mg/l)，人每天的藥物負荷劑量應(yīng)為 52mg。4例健康受試者，均為男性，平均年齡28. 3歲，以每次口服給甲基苯丙胺13mg，每 天4次，每次給藥間隔為4h，連續(xù)4天。結(jié)果顯示受試者的血藥濃度維持在l-4micr0M之 間。尿中甲基苯丙胺濃度大于1000ng/mL，低于10000ng/mL。2. 2甲基苯丙胺成癮人員尿中甲基苯丙胺濃度高于lOOOOng/mL物質(zhì)成癮的診斷必須滿足DSM-IV診斷標準，臨床發(fā)現(xiàn)符合甲基苯丙胺依賴診斷 標準的患者都有長期且大量使用甲基苯丙胺的病史。對診斷甲基苯丙胺成癮972名自愿戒 毒人員的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，他們使用甲基苯丙胺劑量范圍在0. 7-2. lg/d，中位數(shù)為0. 82g/d，均數(shù) 為1. lg/d。根據(jù)藥代動力學(xué)的研究，以成癮人員每日用量的中位數(shù)0.82g為甲基苯丙胺藥 物負荷劑量，成癮人員甲基苯丙胺血藥濃度應(yīng)在16-64microM(2. 4-9. 6mg/L)，尿中甲基苯 丙胺濃度在 26400ng/mL-1930000ng/mL，均數(shù)為 317000ng/mL，因而將上線定于 10000ng/mL以上，便于區(qū)分少量娛樂性使用和成癮性大量使用甲基苯丙胺的人員。以上研究結(jié)果表明，以250ng/mL、10000ng/mL，與原有l(wèi)OOOng/mL的檢測閾值共同 組成一個檢測單位，實現(xiàn)對甲基苯丙胺(鹽酸甲基安非他明)3個濃度范圍的半定量檢測。 在該檢測范圍內(nèi)，能夠較好的達到區(qū)分不同性質(zhì)使用甲基苯丙胺的人員。3檢測時間范圍的確定 8個志愿者分為2組口服甲基苯丙胺，連續(xù)給藥組4人每天給甲基苯丙胺10mg，4 天，非連續(xù)給藥4人組隔天給甲基苯丙胺10mg，4次。用GC-MS連續(xù)檢測末次給藥后尿液中 甲基苯丙胺的濃度，直到尿液中甲基苯丙胺濃度低于250ng/ml為止。發(fā)現(xiàn)連續(xù)使用甲基苯 丙胺的4人中從末次給藥到尿中甲基苯丙胺濃度低于250ng/ml的時間范圍是44h到73h， 平均為58. 2士 14. 2h ；非連續(xù)使用甲基苯丙胺的4人中從末次給藥到尿中甲基苯丙胺濃度 低于250ng/ml的時間范圍是59h到71h，平均為65. 8士5. 9h。從以上結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)連續(xù)使 用或間斷使用甲基苯丙胺對最長可檢測時間影響不大；以250ng/ml為最低檢測值，可以發(fā) 現(xiàn)在48h以內(nèi)使用過IOmg以上甲基苯丙胺的人。
權(quán)利要求
一種甲基苯丙胺膠體金標記免疫檢測墊和相配合的試紙，包括免疫原、抗甲基苯丙胺特異抗體、膠體金、膠體金標記抗甲基苯丙胺特異抗體、抗膠體金標記抗體的二抗、硝酸纖維素膜和玻璃纖維素膜、免疫層析試紙條，其特征在于所述檢測墊是多梯度檢測墊，其上至少有兩個硝酸纖維素膜，不同的硝酸纖維素膜上分別有不同濃度的膠體金標記抗甲基苯丙胺特異抗體固定于其上，形成具有不同檢測閾值的膠體金墊；所述免疫層析試紙條是使用上述膠體金墊，在同一底板上制成的多梯度檢測試紙條，其中，每個試紙條是將吸液用玻璃纖維、上述膠體金墊之一、包被甲基苯丙胺-BSA結(jié)合物和抗膠體金標記抗體的二抗的硝酸纖維素膜和吸水墊依次粘貼于其上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述甲基苯丙胺的多梯度膠體金標記免疫檢測墊及相配合的試紙， 其特征在于所述多梯度檢測試紙條所包含的檢測閾值為下述三組中的任何一組(1)由如下兩個檢測閾值構(gòu)成250 500ng/mL和1000ng/mL；(2)由如下兩個檢測閾值構(gòu)成1000ng/mL和10000 100000ng/mL；(3)由如下三個檢測閾值構(gòu)成250 500ng/mL、1000ng/mL和10000 100000ng/mL。
3.一種使用如權(quán)利要求1或2所述的免疫檢測墊和相配合的試紙的檢測方法，其特征 在于，樣品測試和結(jié)果判斷方法按照如下操作步驟進行(1)將上述多梯度檢測試劑條置于干凈平坦的臺面上，用塑料吸管垂直滴加140 160ul無空氣泡的受試者尿樣于加樣孔內(nèi)；(2)測試結(jié)果在5-8分鐘以內(nèi)讀取，8分鐘后判定無效；(3)結(jié)果判斷相應(yīng)試紙條上的檢測線不顯色，檢測結(jié)果為陽性，檢測線顯色，檢測結(jié) 果為陰性，質(zhì)控線顯色表明檢測結(jié)果有效，不顯色表明結(jié)果無效。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述檢測方法，其特征在于所述檢測閾值有兩個，分別是250 500ng/mL和1000ng/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述檢測方法，其特征在于所述檢測閾值有兩個分別是1000ng/mL和10000 100000ng/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述檢測方法，其特征在于所述檢測閾值有三個，分別是250 500ng/mL、1000ng/mL和10000 100000ng/mL。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種甲基苯丙胺的多梯度膠體金標記免疫檢測墊及其使用方法，屬于體外檢測試劑領(lǐng)域。本發(fā)明是對目前普遍使用的甲基苯丙胺的膠體金標記免疫檢測方法的進一步改進，在保留原有檢測閾值1000ng/mL的基礎(chǔ)上增加1～2個新的檢測閾值構(gòu)成一個多梯度檢測。本發(fā)明的檢測方法可以區(qū)分不同可疑涉毒人員是否吸毒或成癮，為執(zhí)法人員提供一個客觀指標，具有簡單、準確的特點。
文檔編號G01N33/543GK101839911SQ20091011957
公開日2010年9月22日 申請日期2009年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月17日
發(fā)明者高俊鈺 申請人:高俊鈺