專利名稱：一種電化學發(fā)光檢測的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種電化學發(fā)光檢測的方法。
背景技術：
吡啶釕電化學發(fā)光分析是新一代標記分析技術?，F(xiàn)有技術是基于高濃度 的三丙胺與較低濃度的吡啶釕標記物發(fā)生電化學發(fā)光反應來進行生物分析的。 但是吡啶釕/三丙胺電化學發(fā)光體系存在以下主要不足之處。第一、三丙胺反 應較慢，限制了檢測的靈敏度；第二、需要很高濃度的三丙胺才能實現(xiàn)高靈敏 檢測；第三、三丙胺在中性溶液中溶解度不太好， 一般要采用很高濃度的磷酸
鹽才能使?jié)舛雀哌_100 mmol/L的三丙胺在中性磷酸鹽緩沖溶液中溶解；最后， 三丙胺揮發(fā)性較大，具有較大的異味和一定的毒性。參考文獻(Angew. Chem. Int. Ed， 2007, 46, 421-424)比較了三丙胺和一系列胺的電化學發(fā)光強度， 發(fā)現(xiàn)二正丁基乙醇胺與吡啶釕的電化學發(fā)光強度遠大于三丙胺與吡啶釕的電 化學發(fā)光強度，而且二正丁基乙醇胺還具有環(huán)境友好、溶解度好、使用濃度低、 檢測吡啶釕濃度的線性范圍寬等優(yōu)點。但是二正丁基乙醇胺與吡啶釕的電化學 發(fā)光強度不是最強的，仍然需要尋找與吡啶釕電化學發(fā)光強度更強的共反應 物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種電化學發(fā)光檢測的方法。其應用于電化學發(fā)光標 記分析。一種電化學發(fā)光檢測方法,適用于所有的電化學發(fā)光檢測裝置，其特征在 于，所述的電化學發(fā)光檢測裝置包括光學儀器和電化學儀器兩大部分，光學儀 器是化學發(fā)光強度測定儀，電化學儀器是應用CH系列電化學分析儀；電化學 發(fā)光檢測的發(fā)光體系是以吡啶釕為發(fā)光物質(zhì)，同時吡啶釕也是被檢測物，正丁 基二乙醇胺為共反應物的吡啶釕/正丁基二乙醇胺發(fā)光體系，把吡啶釕和正丁
基二乙醇胺在緩沖溶液中混合，用電化學方法激發(fā)發(fā)光進行分析；所述的吡啶 釕的使用濃度范圍為1X10—" lmmol/L，其結(jié)構(gòu)式為
所述的正丁基二乙醇胺的使用濃度范圍為0.05 50 mmol/L;所述的緩沖 溶液為pH 7 9的磷酸鹽緩沖溶液，所述的正丁基二乙醇胺的結(jié)構(gòu)式如下
有益效果本發(fā)明提供的一種電化學發(fā)光檢測的方法，應用于電化學發(fā)光 標記分析。正丁基二乙醇胺與吡啶釕的電化學發(fā)光效率高，所使用的共反應物 正丁基二乙醇胺濃度可以很低。當吡啶釕濃度是1^imol/L且正丁基二乙醇胺的 濃度為25 mmol/L的情況下，相同條件下，在金電極上吡啶釕/正丁基二乙醇 胺發(fā)光體系比文獻中報道的吡啶釕/二正丁基乙醇胺發(fā)光體系的電化學發(fā)光強 度強約1.3倍(如圖3)。


附圖l是利用吡啶釕/正丁基二乙醇胺體系電化學發(fā)光測定吡啶釕含量的
示意圖。橫坐標是Log吡啶釕的濃度(Log(Ru(bpy)327mm0l/L)，吡啶釕的濃度 單位為fflmol/L;縱坐標是Log (吡啶釕/正丁基二乙醇胺體系電化學發(fā)光強度/ a. u. ) (Xog(IECL/a. u.))。
附圖2是正丁基二乙醇胺的濃度對吡啶釕/正丁基二乙醇胺體系電化學發(fā) 光影響的示意圖。橫坐標是正丁基二乙醇胺的濃度，濃度單位為mmol/L，縱坐 標是吡啶釕/正丁基二乙醇胺體系電化學發(fā)光強度(IEa7a. u.)。
附圖3是25mmol/L正丁基二乙醇胺(英文縮寫B(tài)DEA)和25mmol/L二正丁基 乙醇胺(英文縮寫DBAE)分別與lpmol/L吡啶釕在相同條件下發(fā)生電化學反應 的發(fā)光強度比較圖。
具體實施例方式
實施例1:使用電化學工作站和BPCL微弱發(fā)光測量儀檢測。固定正丁基 二乙醇胺濃度為0.05 mmol/L，被檢測物吡啶釕濃度為lpmol/L，緩沖溶液為 pH 7. 5的0. 1 mol/L磷酸鹽，以金電極為工作電極，施加1. 5 V的階躍電位， 同時施加發(fā)光檢測電壓800V，檢測吡啶釕發(fā)光信號，完成電化學發(fā)光檢測，得 到的發(fā)光信號平均強度為22. 33。
實施例2:使用電化學工作站和BPCL微弱發(fā)光測量儀檢測。固定正丁基二 乙醇胺濃度為15 mmol/L，緩沖溶液為pH 7. 5的0. 1 mol/L磷酸鹽，加入4. 0 X10, mol/L的被檢測物吡啶釕，以金電極為工作電極，施加1.35 V的階躍 電位，同時施加發(fā)光檢測電壓700V，檢測吡啶釕發(fā)光信號，完成電化學發(fā)光 檢測,得到吡啶釕發(fā)光信號的平均強度為68。
實施例3:使用電化學工作站和BPCL微弱發(fā)光測量儀檢測。固定正丁基二乙醇胺的濃度為1 mmol/L ，被檢測物吡啶釕濃度為1 mmol/L ,溶于pH 7. 5 的O. 1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液中，以金電極為工作電極，施加1.5V的階躍電 位，同時施加發(fā)光檢測電壓500V，檢測吡啶釕發(fā)光信號，完成電化學發(fā)光檢測， 得到的發(fā)光信號平均強度為6751。
實施例4:使用電化學工作站和BPCL微弱發(fā)光測量儀檢測。固定正丁基二 乙醇胺濃度為25 mmol/L，被檢測物吡啶釕濃度為lpmol/L，緩沖溶液為pH 7. 5 的0. 1 niol/L磷酸鹽緩沖溶液中，以金電極為工作電極，電位從0掃到+1. 5 V， 速度是O. 1V/s，同時施加發(fā)光檢測電壓700V，檢測吡啶釕發(fā)光信號，完成電 化學發(fā)光檢測，得到的發(fā)光信號平均強度為3123.33。
實施例5:使用電化學工作站和BPCL微弱發(fā)光測量儀檢測。固定正丁基二 乙醇胺濃度為50 mmol/L，被檢測物吡啶釕濃度為lpmol/L,緩沖溶液為pH 7. 5 的0. lmol/L磷酸鹽緩沖溶液中，以金電極為工作電極，施加1. 35 V的階躍電 位，同時施加發(fā)光檢測電壓700V，檢測吡啶釕發(fā)光信號，完成電化學發(fā)光檢 測，得到的發(fā)光信號平均強度為5204。
實施例6:使用MPI-A型毛細管電泳電化學發(fā)光檢測儀檢測。固定正丁基二 乙醇胺濃度為10mM，被檢測物吡啶釕濃度為lpM，緩沖溶液為pH 7.5的0. 1 M 磷酸鹽緩沖溶液中，以金電極為工作電極，施加1.5V的階躍電位，同時施加適 當發(fā)光檢測電壓800V，檢測吡啶釘發(fā)光信號，完成電化學發(fā)光檢測，得到的 發(fā)光信號平均強度為8820. 67。
權(quán)利要求
1. 一種電化學發(fā)光檢測方法，適用于所有的電化學發(fā)光檢測裝置，其特征在于，電化學發(fā)光檢測的發(fā)光體系是以吡啶釕為發(fā)光物質(zhì)，正丁基二乙醇胺為共反應物的吡啶釕/正丁基二乙醇胺發(fā)光體系，吡啶釕同時也是被檢測物；把被檢測物吡啶釕和正丁基二乙醇胺在緩沖溶液中混合，用電化學方法激發(fā)發(fā)光進行分析；所述的吡啶釕的使用濃度范圍為1×10-10～1mmol/L，其結(jié)構(gòu)式為所述的正丁基二乙醇胺的使用濃度范圍為0.05～50mmol/L；所述的緩沖溶液為pH7～9的磷酸鹽緩沖溶液，所述的正丁基二乙醇胺的結(jié)構(gòu)式如下
2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的電化學發(fā)光檢測方法，其特征在于，所述的電 化學發(fā)光檢測裝置是使用電化學工作站和BPCL微弱發(fā)光測量儀檢測；正丁基 二乙醇胺濃度為0.05 mmol/L，被檢測物吡啶釕濃度為l,ol/L，緩沖溶液為 pH 7. 5的0.1 mol/L磷酸鹽，以金電極為工作電極，施加1. 5 V的階躍電位， 同時施加發(fā)光檢測電壓800V，檢測吡啶釕發(fā)光信號，完成電化學發(fā)光檢測。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的電化學發(fā)光檢測方法，其特征在于，所述的電 化學發(fā)光檢測裝置是使用電化學工作站和BPCL微弱發(fā)光測量儀檢測，固定正 丁基二乙醇胺濃度為15腿ol/L，緩沖溶液為pH 7. 5的0. 1 mol/L磷酸鹽，加入4.0X10—w mol/L的被檢測物吡啶釕，以金電極為工作電極，施加1.35 V 的階躍電位，同時施加發(fā)光檢測電壓700V,檢測吡啶釕發(fā)光信號，完成電化學發(fā)光檢測。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的電化學發(fā)光檢測方法，其特征在于，所述的電 化學發(fā)光檢測裝置是使用電化學工作站和BPCL微弱發(fā)光測量儀檢測，固定正 丁基二乙醇胺的濃度為1咖ol/L ，被檢測物吡啶釕濃度為1 ramol/L ，溶于 pH 7.5的0.1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液中，以金電極為工作電極，施加1.5 V 的階躍電位，同時施加發(fā)光檢測電壓500V，檢測吡啶釕發(fā)光信號，完成電化學 發(fā)光檢測。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的電化學發(fā)光檢測方法，其特征在于，所述的電 化學發(fā)光檢測裝置是使用電化學工作站和BPCL微弱發(fā)光測量儀檢測。固定正 丁基二乙醇胺濃度為25mmol/L，被檢測物吡啶釕濃度為lpmol/L，緩沖溶液為 pH 7. 5的0. 1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液中，以金電極為工作電極，電位從0掃到 +1.5V,速度是O. lV/s，同時施加發(fā)光檢測電壓700V，檢測吡啶釕發(fā)光信號， 完成電化學發(fā)光檢測。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的電化學發(fā)光檢測方法，其特征在于，所述的電 化學發(fā)光檢測裝置是使用電化學工作站和BPCL微弱發(fā)光測量儀檢測，固定正 丁基二乙醇胺濃度為50mmol/L，被檢測物吡啶釕濃度為lpmol/L，緩沖溶液為 pH 7. 5的0. lmol/L磷酸鹽緩沖溶液中，以金電極為工作電極，施加1. 35 V的 階躍電位，同時施加發(fā)光檢測電壓700V，檢測吡啶釕發(fā)光信號，完成電化學 發(fā)光檢測°
7.根據(jù)權(quán)利要求l所述的電化學發(fā)光檢測方法，其特征在于，所述的電化學發(fā)光檢測裝置是使用MPI-A型毛細管電泳電化學發(fā)光檢測儀檢測，固定正丁基二乙醇胺濃度為10mM，吡啶釕濃度為l U M，緩沖溶液為pH 7. 5的0. 1 M磷酸鹽 緩沖溶液中，以金電極為工作電極，施加1.5V的階躍電位，同時施加發(fā)光檢測 電壓800V，檢測吡啶釕發(fā)光信號，完成電化學發(fā)光檢測。
全文摘要
本發(fā)明涉及電化學發(fā)光檢測的方法，電化學發(fā)光檢測的發(fā)光體系是吡啶釕/正丁基二乙醇胺發(fā)光體系；把吡啶釕和正丁基二乙醇胺在pH7～9的磷酸鹽緩沖溶液中混合，用電化學方法激發(fā)發(fā)光進行分析；吡啶釕的濃度范圍為1×10^-10～1mmol/L，正丁基二乙醇胺的濃度范圍為0.05～50mmol/L；正丁基二乙醇胺/吡啶釕發(fā)光體系的電化學發(fā)光效率高，共反應物正丁基二乙醇胺濃度可以很低。當吡啶釕濃度是1μmol/L且正丁基二乙醇胺的濃度為25mmol/L，相同條件下，在金電極上吡啶釕/正丁基二乙醇胺發(fā)光體系比吡啶釕/二正丁基乙醇胺發(fā)光體系的電化學發(fā)光強度強約1.3倍，可廣泛應用于標記分析。
文檔編號G01N21/76GK101532961SQ20091006680
公開日2009年9月16日 申請日期2009年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月10日
發(fā)明者徐國寶, 雙 韓 申請人:中國科學院長春應用化學研究所