專利名稱：一種測定藥物中蒽醌含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種測定藥物中蒽醌含量的方法，具體涉及一種中 藥制劑膽寧片中蒽醌含量的測定方法。
背景技術(shù)：
中藥制劑膽寧片具有疏肝利膽、清熱通下的功效，臨床用于肝郁氣滯、濕熱未清 所致的右上腹隱隱作痛，食入作脹，胃納不香、噯氣、便秘；慢性膽囊炎見上述癥候 者的治療。膽寧片自問世以來，因臨床療效明確，無毒副作用而深受病家的歡迎，目 前已成為膽道疾病的首選藥物。
目前臨床常用的膽寧片多為上海和黃藥業(yè)有限公司研發(fā)的獨(dú)家生產(chǎn)產(chǎn)品，為國家 二級中藥保護(hù)品種，保護(hù)品種編號ZYB2072002097。所述的膽寧片由大黃、虎杖、山楂、 郁金、陳皮、青皮和白茅根七味藥材經(jīng)現(xiàn)代中藥制藥技術(shù)制備而成，研究表明，膽寧 片中主要含有蒽醌類、黃酮類、聯(lián)芐類、三萜類和苯丙素類。
現(xiàn)有技術(shù)公開了膽寧片中含有游離蒽醌和結(jié)合蒽醌，游離蒽醌與結(jié)合蒽醌合稱 為總蒽醌。其中的游離蒽醌包括大黃酸(rhein)，蘆薈大黃素(aloe-eraodin)，大 黃素(emodin)，大黃素甲醚(physcion)，大黃酚(chrys叩hanol)，游離蒽醌的主要 藥理作用為抑菌消炎；其中的結(jié)合蒽醌包括蕃瀉苷A、 B、 C、 D (SermosideA、 B、 C、 D)，大黃素甲醚-8-葡萄糖苷(Physcion-8-P-D-glucoside)等，結(jié)合蒽醌主要藥理 作用為瀉下。
目前有關(guān)膽寧片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，通過游離蒽醌大黃素和大黃酚的含量測定進(jìn)行評估， 即現(xiàn)有技術(shù)只對疏肝利膽的有關(guān)功效提供了質(zhì)量控制方法；而清熱通下的有關(guān)功效則 沒有很好的質(zhì)量控制方法。有關(guān)膽寧片的質(zhì)量控制，僅有《中華人民共和國藥典(一 部)》(2005年版)收載了膽寧片大黃酚、大黃酸含量測定方法。迄今，尚未見涉及膽 寧片總蒽醌和游離蒽醌含量測定方法。為了使中藥制劑尤其是膽寧片中的有效成分提 取完全、含量穩(wěn)定，為中藥膽寧片的提供質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，給臨床提供一個(gè)安全、高效的制 劑，本領(lǐng)域需要制定膽寧片中蒽醌的含量測定方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種測定藥物中蒽醌含量的方法， 尤其涉及中藥制劑膽寧片中蒽醌含量的測定方法。本發(fā)明方法進(jìn)一步用于膽寧片質(zhì)量控制。
本發(fā)明所涉及的膽寧片用于治療膽道疾病，由大黃、虎杖、山楂、郁金、陳皮、 青皮和白茅根七味藥材經(jīng)現(xiàn)代中藥制藥技術(shù)制備而成，其中各藥材可以直接使用，或 使用藥材的提取物。
本發(fā)明上述治療膽道疾病的藥物，其中包含蒽醌類和黃酮類等主要化學(xué)成分，本 方法采用索氏提取或超聲提取法對所述藥物提取后，進(jìn)行酸性水解，以l， 8-二羥基蒽 醌為對照品，以5%醋酸鎂甲醇液為顯色劑，采用分光光度法，對所述藥物的蒽醌進(jìn)行 含量測定。
上述提取蒽醌的溶劑采用下述試劑中的任意一種或者是他們中的任意配比，如 三氯甲烷、二氯甲垸等弱極性的有機(jī)試劑。
所述水解的酸為以下試劑中的任意一種與水的任意配比或者是它們中的幾種與水 的任意配比，如硫酸、鹽酸等中強(qiáng)酸。
本發(fā)明方法通過建立總蒽醌(Total anthraquinones，簡稱TA)和游離蒽醌 (Dissocitative anthraquinones，簡稱DA)的含量測定方法后，由總蒽醌含量減去游 離蒽醌含量得到結(jié)合蒽醌(Associtative anthraquinones,簡稱AA)的含量，計(jì)算公 式公式為結(jié)合蒽醌=總蒽醌-游離蒽醌(AA=TA-DA)，包括以下步驟
1、測定總蒽醌
精密稱取l， 8-二羥基蒽醌對照品適量，加三氯甲垸或二氯甲烷制成每lml含l， 8-二羥基蒽醌0. lmg，搖勻，作為對照品溶液。
制備標(biāo)準(zhǔn)曲線用微量移液器(上海安亭微量進(jìn)樣器廠)精密量取l， 8-二羥基蒽 醌對照品溶液0. 5ml、 0. 8ml、 1. lml、 1. 4ml、 1. 7ml和2ml，分別置10ml量瓶中，低 溫蒸干溶劑，冷卻，殘?jiān)謩e精密加入5。/。醋酸鎂甲醇液5ml,搖勻，加甲醇稀釋至刻度， 搖勻，放置20min，以相應(yīng)試劑為空白，在510nra的波長處測定吸光度，以吸光度為縱 坐標(biāo)，1， 8-二羥基蒽醌對照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線y:2.8914x+0.012; r=0.9996。
樣品測定取膽寧片(保護(hù)品種編號ZYB207200209710)片，除去包衣，精密稱定， 研細(xì)，取0.35g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加20-60%的硫酸溶液或加10-30%的鹽酸 溶液10ml，用三氯甲垸或二氯甲烷加熱回流提取3次(30、 20、 20ml)，第一次2小 時(shí)，第二、三次每次30分鐘，合并三氯甲烷或二氯甲垸提取液于分液漏斗中，用適量 水洗滌，三氯甲烷或二氯甲烷液轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶中，加三氯甲烷或二氯甲烷至刻度，搖勻，精密量取2ml置于10ml量瓶中，低溫蒸干溶劑，冷卻，殘?jiān)?%醋酸鎂甲醇 液5ml，搖勻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置20min，以相應(yīng)試劑為空白，在510nm 的波長處測定吸光度，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算出樣品中總蒽醌含量。
2、 測定游離蒽醌
精密稱取l， 8-二羥基蒽醌對照品適量，加三氯甲烷或二氯甲烷制成每lml含l， 8-二羥基蒽醌0. lmg，搖勻，作為對照品溶液。
制備標(biāo)準(zhǔn)曲線用微量移液器(上海安亭微量進(jìn)樣器廠)精密量取l， 8-二羥基蒽 醌對照品溶液O. 5ml、 0. 8ml、 1. lml、 1.4ral、 1.7ml和2ml，分別置10ml量瓶中，低 溫蒸干溶劑，冷卻，殘?jiān)謩e精密加入5y。醋酸鎂甲醇液5ml,搖勻，加甲醇稀釋至刻度， 搖勻，放置20min，以相應(yīng)試劑為空白，在510nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱 坐標(biāo)，1， 8-二羥基蒽醌對照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線y=2.8914x+0.012; r=0. 9996。
樣品測定取膽寧片10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取0.35g，精密稱定， 置圓底燒瓶中，加三氯甲烷或二氯甲烷70tnl，索氏提取至提取液近無色或置超聲提取 lh，濾過，洗滌，提取液或?yàn)V液轉(zhuǎn)移至100ral量瓶中，加三氯甲垸或二氯甲烷至刻度， 搖勻，作為樣品溶液。精密吸取樣品溶液2ml置于10ml容量瓶中，低溫蒸干溶劑，冷 卻，殘?jiān)?。/。醋酸鎂甲醇液5ml，搖勻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置20rain，以相 應(yīng)試劑為空白，在510nm的波長處測定吸光度，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算出樣品中游離蒽 醌含量即得。
3、 由上述所算得的總蒽醌含量減去游離蒽醌含量得到結(jié)合蒽醌(Associtative anthraquinones,簡稱AA)的含量，計(jì)算公式公式為結(jié)合蒽醌=總蒽醌-游離蒽醌
(AA=TA-DA)。
與現(xiàn)有質(zhì)量檢測方法相比，本發(fā)明提供的含量測定方法精密度高、重復(fù)性好、回 收率高、涉及面廣，提高了膽寧片的質(zhì)量控制方法，可有效確保該制劑的全面質(zhì)量控 制和臨床療效。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例l:膽寧片蒽醌的含量測定
1.總蒽醌含量測定方法
精密稱取l， 8-二羥基蒽醌對照品適量，加三氯甲烷制成每lral含l, 8-二羥基蒽 醌O. lmg，搖勻，作為對照品溶液。
5取膽寧片(批號為A080508) 10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取0.35g，精密 稱定0.3566 g，置圓底燒瓶中，加30%的硫酸溶液10ml，用三氯甲烷加熱回流提取3 次(30、 20、 20ml)，第一次2小時(shí)，第二、三次每次30分鐘，合并三氯甲垸提取液 于分液漏斗中，用適量水洗滌，三氯甲烷液轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加三氯甲垸至刻度， 搖勻，精密量取2ml置于10ml量瓶中，低溫蒸干溶劑，冷卻，殘?jiān)?%醋酸鎂甲醇 液5ml，搖勻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置20min,以相應(yīng)試劑為空白，在510nm 的波長處測定吸光度，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算出樣品中總蒽醌含量即得。測定批號為 A080508的膽寧片總蒽醌含量為1. 50%。
2.游離蒽醌含量測定方法
精密稱取l， 8-二羥基蒽醌對照品適量，加三氯甲垸制成每lml含l， 8-二羥基蒽 醌O. lmg，搖勻，作為對照品溶液。
樣品測定取膽寧片10片(批號為A080508)，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取 0.35g，精密稱定0.3516 g，置圓底燒瓶中，加三氯甲烷70ml，索氏提取至提取液近 無色。提取液轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，搖勻，作為樣品溶液。精密 吸取樣品溶液2ml置于10ml容量瓶中，低溫蒸干溶劑，冷卻，殘?jiān)?%醋酸鎂甲醇 液5ml，搖勻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置20min，以相應(yīng)試劑為空白，在510nm 的波長處測定吸光度，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算出樣品中游離蒽醌含量即得。測定批號為 A080508的膽寧片總蒽醌含量為1. 24%。
3J旦寧片(批號為A080508)結(jié)合蒽醌含量
結(jié)合蒽醌(AA)為0. 26%。
實(shí)施例2:膽寧片蒽醌的含量測定
1.總蒽醌含量測定方法
精密稱取l， 8-二羥基蒽醌對照品適量，加三氯甲垸制成每lml含l， 8-二羥基蒽 醌O. lmg，搖勻，作為對照品溶液。
取膽寧片(批號為A080508) 10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取0.35g，精密 稱定0.3566 g，置圓底燒瓶中，加30%的硫酸溶液10ml，用三氯甲烷加熱回流提取3 次(30、 20、 20ml)，第一次2小時(shí)，第二、三次每次30分鐘，合并三氯甲烷提取液 于分液漏斗中，用適量水洗滌，三氯甲垸液轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度， 搖勻，精密量取2ml置于10ml量瓶中，低溫蒸干溶劑，冷卻，殘?jiān)?%醋酸鎂甲醇 液5ml，搖勻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置20min，以相應(yīng)試劑為空白，在510nm的波長處測定吸光度，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算出樣品中總蒽醌含量即得。測定批號為 A080508的膽寧片總蒽醌含量為1. 50%。
2. 游離蒽醌含量測定方法
精密稱取l, 8-二羥基蒽醌對照品適量，加三氯甲垸制成每lml含l， 8-二羥基蒽 醌O. lmg，搖勻，作為對照品溶液。
樣品測定取膽寧片10片(批號為A080508)，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取 0.35g，精密稱定0.3548 g，置具塞三角燒瓶中，加三氯甲烷70ml，置超聲提取lh, 濾過，洗滌，濾液至100ml量瓶中，用適量三氯甲垸洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一 量瓶中，搖勻，作為樣品溶液。精密吸取樣品溶液2ml置于10ml容量瓶中，低溫蒸干 溶劑，冷卻，殘?jiān)?%醋酸鎂甲醇液5ml，搖勻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置20min， 以相應(yīng)試劑為空白，在510nm的波長處測定吸光度，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算出樣品中游 離蒽醌含量即得。測定批號為A080508的膽寧片總蒽醌含量為1.21%。
3. 膽寧片(批號為A080508)結(jié)合蒽醌含量 結(jié)合蒽醌(AA)為0. 29%。
實(shí)施例3:膽寧片蒽醌的含量測定
1. 總蒽醌含量測定方法.-
精密稱取l， 8-二羥基蒽醌對照品適量，加三氯甲垸制成每lml含l， 8-二羥基蒽 醌O. lmg，搖勻，作為對照品溶液。
取膽寧片(批號為A080508) 10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取0.35g，精密 稱定0.3566 g，置圓底燒瓶中，加30%的鹽酸溶液lOml，用三氯甲烷加熱回流提取3 次(30、 20、 20ml)，第一次2小時(shí)，第二、三次每次30分鐘，合并三氯甲烷提取液 于分液漏斗中，用適量水洗滌，三氯甲烷液轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度， 搖勻，精密量取2ml置于10ml量瓶中，低溫蒸干溶劑，冷卻，殘?jiān)?%醋酸鎂甲醇 液5ml，搖勻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置20min，以相應(yīng)試劑為空白，在510nm 的波長處測定吸光度，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算出樣品中總蒽醌含量即得。測定批號為 A080508的膽寧片總蒽醌含量為1. 48%。
2. 游離蒽醌含量測定方法
精密稱取l， 8-二羥基蒽醌對照品適量，加三氯甲烷制成每lml含l， 8-二經(jīng)基蒽 醌O. lmg，搖勻，作為對照品溶液。
樣品測定取膽寧片10片(批號為A080508)，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取0.35g，精密稱定0.3516 g，置圓底燒瓶中，加三氯甲烷70ml，索氏提取至提取液近 無色。提取液轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加三氯甲垸至刻度，搖勻，作為樣品溶液。精密 吸取樣品溶液2ml置于10ml容量瓶中，低溫蒸干溶劑，冷卻，殘?jiān)?%醋酸鎂甲醇 液5ml，搖勻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置20min，以相應(yīng)試劑為空白，在510nm 的波長處測定吸光度，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算出樣品中游離蒽醌含量即得。測定批號為 A080508的膽寧片總蒽醌含量為1. 24%。
3J旦寧片(批號為A080508)結(jié)合蒽醌含量
結(jié)合蒽醌(AA)為0. 24%。
實(shí)施例4:膽寧片蒽醌的含量測定
1. 總蒽醌含量測定方法
精密稱取l， 8-二羥基蒽醌對照品適量，加三氯甲烷制成每lml含l， 8-二羥基蒽 醌O. lmg，搖勻，作為對照品溶液。
取膽寧片(批號為A080508) 10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取0.35g，精密 稱定0.3566 g，置圓底燒瓶中，加30%的鹽酸溶液10ml，用三氯甲垸加熱回流提取3 次(30、 20、 20 ml),第一次2小時(shí)，第二、三次每次30分鐘，合并三氯甲烷提取液 于分液漏斗中，用適量水洗滌，三氯甲烷液轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加三氯甲垸至刻度， 搖勻，精密量取2ml置于lOml量瓶中，低溫蒸干溶劑，冷卻，殘?jiān)?%醋酸鎂甲醇 液5ml，搖勻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置20min，以相應(yīng)試劑為空白，在510nm 的波長處測定吸光度，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算出樣品中總蒽醌含量即得。測定批號為 A080508的膽寧片總蒽醌含量為1. 48%。
2. 游離蒽醌含量測定方法
精密稱取l， 8-二羥基蒽醌對照品適量，加三氯甲烷制成每lml含l， 8-二羥基蒽 醌O. lmg，搖勻，作為對照品溶液。
樣品測定取膽寧片10片(批號為A080508)，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取 0.35g，精密稱定0.3548 g，置具塞三角燒瓶中，加三氯甲烷70ml，置超聲提取lh， 濾過，洗滌，濾液至100ml量瓶中，用適量三氯甲垸洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一 量瓶中，搖勻，作為樣品溶液。精密吸取樣品溶液2ml置于10ml容量瓶中，低溫蒸干 溶劑，冷卻，殘?jiān)?%醋酸鎂甲醇液5ml，搖勻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置20min， 以相應(yīng)試劑為空白，在510nm的波長處測定吸光度，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算出樣品中游 離蒽醌含量即得。測定批號為A080508的膽寧片游離蒽醌含量為1. 21%。3.膽寧片(批號為A080508)結(jié)合蒽醌含量 結(jié)合蒽醌(AA)為0. 27%。
權(quán)利要求
1、一種測定藥物中蒽醌含量的方法，其特征是對所述藥物進(jìn)行蒽醌提取后，進(jìn)行酸性水解，以1，8-二羥基蒽醌為對照品，以5％醋酸鎂甲醇液為顯色劑，采用分光光度法，測定藥物的蒽醌含量。
2、 按權(quán)利要求l所述的測定藥物中蒽醌含量的方法，其特征是所述的測定藥物的蒽醌含量包括以下歩驟1) 測定總蒽醌含量；2) 測定游離蒽醌含量；3) 按計(jì)算公式結(jié)合蒽醌=總蒽醌-游離蒽醌得結(jié)合蒽醌含量。
3、 按權(quán)利要求1所述的測定藥物中蒽醌含量的方法，其特征是所述的水解的酸為 中強(qiáng)酸。
4、 按權(quán)利要求1或3所述的測定藥物中蒽醌含量的方法，其特征是所述的水解的 酸為以下試劑中的任意一種與水的任意配比或是他們中的幾種與水的任意配比硫酸 或鹽酸。
5、 按權(quán)利要求1所述的測定藥物中蒽醌含量的方法，其特征是所述的藥物中蒽醌 的提取方法采用索氏提取或超聲提取法。
6、 按權(quán)利要求l所述的測定藥物中蒽醌含量的方法，其特征是用于提取蒽醌的溶 劑為弱極性的有機(jī)試劑。
7、 按權(quán)利要求6所述的測定藥物中蒽醌含量的方法，其特征是所述的弱極性的有 機(jī)試劑為以下試劑中的任意一種或者是他們中的任意配比三氯甲烷或二氯甲烷。
8、 按權(quán)利要求1所述的測定藥物中蒽醌含量的方法，其特征是所述的藥物為膽寧 片，保護(hù)品種編號ZYB2072002097。
全文摘要
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種測定藥物中蒽醌含量的方法，具體涉及一種中藥制劑膽寧片中蒽醌含量的測定方法。本方法采用索氏提取或超聲提取法對所述藥物提取后，進(jìn)行酸性水解，以1，8-二羥基蒽醌為對照品，以5％醋酸鎂甲醇液為顯色劑，采用分光光度法，對所述藥物的蒽醌進(jìn)行含量測定。與現(xiàn)有質(zhì)量檢測相比，本發(fā)明提供的含量測定方法精密度高、重復(fù)性好、回收率高、涉及面廣，提高了膽寧片的質(zhì)量控制方法，可有效確保該制劑的全面質(zhì)量控制和臨床療效。
文檔編號G01N21/78GK101451957SQ20081020722
公開日2009年6月10日 申請日期2008年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月17日
發(fā)明者丁建彌, 周文娟, 徐瑞林, 陳忠樑 申請人:上海和黃藥業(yè)有限公司