專利名稱：一種檢測人生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及免疫分析領域，具體地，本發(fā)明公開了一種檢測人生長激素化學 發(fā)光免疫分析測定試劑盒及其制備方法。
背景技術：
人生長激素(Human Growth Hormone, hGH)分泌于腦垂體前葉，是一種包含 兩個分子鏈內二硫鍵的多肽，單獨存在或與一些生長激素結合蛋白結合。生長激 素主要形式包含191個氨基酸，分子量約為22000。生長激素的主要生物學活性在 于直接促進生長，它通過直接促進骨骼和肌肉生長以及間接在肝臟中促進釋放生 長調節(jié)素( 一組類胰島素生長因子，insulin-like growth factor, IGF)來發(fā)揮 其生物學效應，尤其是生長調節(jié)素C (IGF-1)對兒童的骨骼生長是很必要的。
對兒童生長激素的臨床測定研究目前已經建立了生長激素與骺板骨骼生長很 好的線性關系。hGH含量很低會導致生長速度減緩至正常人的三分之一至二分之 一。因成人的骺板骨骼已經融合，生長激素過量會逐漸形成肢端肥大，以頭骨、 手骨和足骨增生明顯。
一般利用測定hGH反應的激發(fā)實驗來評價腦垂體前葉的功能水平。刺激措施 可以衡量腦垂體前葉的hGH分泌功能，懷疑患有生長延遲的兒童通常是這類測試 的對象。目前有幾種動態(tài)測試引誘釋放hGH,如運動、注射左旋多巴、胰島素耐藥 量試驗和精氨酸靜脈滴注。抑制實驗可以鑒定腦垂體前葉hGH分泌功能的遏制， 它可以確定生長激素過量以及其導致的肢端肥大癥。
目前用于檢測生長激素的免疫分析方法主要有放射免疫分析UIA)、酶聯(lián)免 疫分析(ELISA)。根據大量的試驗結果及臨床應用資料，從實用性、穩(wěn)定性、準
確性及發(fā)展前景來看，化學發(fā)光免疫分析(CLIA)要大大優(yōu)于酶免疫分析、放射 免疫分析。
放射免疫分析技術因其使用放射性元素作為標記物，因此對環(huán)境有放射性污
染，并存在靈敏度不髙，操作復雜，試劑保存時間短等缺點；酶免疫分析法存在 靈敏度低，信噪比不髙，灰區(qū)附近難以判定等方法學制約因素；化學發(fā)光免疫分 析法是一種較先進而有效的方法，可使檢測靈敏度達到10—"摩爾水平，其酶標記 物穩(wěn)定，可長期使用。較RIA和ELISA優(yōu)勢明顯。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種檢測人生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試劑盒
根據本發(fā)明一種檢測人生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試劑盒，其中，所述 試劑盒包括l)生長激素校準品；2)生長激素抗體包被的微孔板；3)堿性磷酸 酶或辣根過氧化物酶標記抗體；4)洗滌液；5)上述酶標記抗體作用的化學發(fā)光 底物液。
根據本發(fā)明的試劑盒，其中，所述微孔板為48孔、96孔微孔板。
根據本發(fā)明的試劑盒，其中，所述堿性磷酸酶的化學發(fā)光底物液配方為15% 的4-甲氧基-4-(3-磷酰氧基苯)-螺旋-(l,2-二氧雜環(huán)丁烷-3,2'-金剛烷)、 0.05mol/L PH 7.8 Tris-HCL、 0. 15g/L氯化鎂、9g/L氯化鈉。
根據本發(fā)明的試劑盒，其中，所述辣根過氧化物酶的化學發(fā)光底物液包含A 液和B液，其中
化學發(fā)光底物A液，包括1. 7716g/L魯米諾、0. 051g/L 4-羥基聯(lián)苯、0. 012g/L 4-碟苯硼酸、11.4g/L硼酸、4. 9g/L硼砂，其pH值為8. 0~8. 5;
化學發(fā)光底物B液，包括0. 329g/L過氧化脲、0. 0監(jiān)ween20、 51. 58g/L Na風
12H20、 8. 74g/L NaH2P04'2H20，其pH值為7. 0 ~ 7. 5。
化學發(fā)光底物液包含A液和B液使用方法A、 B液雙組分試劑，在使用前根 據使用量計算完畢后A: B為l: 1混合，應保證在6h內使用。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種檢測人生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試劑 盒的制備方法，其包括以下步驟 A:制備生長激素校準品
根據本發(fā)明試劑盒制備方法中，所述制備生長激素校準品，其基質配方為 30°/。馬血清，10%山羊血清,lg/L酪蛋白，0.衡oclin300 。
配制基質液后，將生長激素抗原純品參照國家標準品稀釋成濃度為5nIU/ml、 10pIU/ml、 25uIU/ml、 50pIU/ml、 100nIU/ml，分裝成lml/瓶，-20。C保存。
B:制備生長激素單克隆抗體包被的微孔板
根據本發(fā)明試劑盒制備方法中，所述制備生長激素單克隆抗體包被的微孔板， 其包被緩沖液為0. 05M磷酸鹽緩沖液。包被濃度0. 5 ~ 2. 5 m g/ml生長激素單克隆 抗體，4'C24h后，去離子水洗滌2次，2%BSA室溫封閉3h后，在溫度20-28。C及 濕度小于或等于30y。條件下干燥12h，裝袋封口。
C:制備堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶標記抗體
根據本發(fā)明試劑盒制備方法中，所述制備堿性磷酸酶標記抗體，標記方法為 戊二醛交聯(lián)法，其具體步驟為
(1) 稱取堿性磷酸酶5mg溶于0. lmL含2. 5%戊二醛的pH6. 8 0. 1M PBS溶液 中，于4'C靜置過夜。
(2) 將酶溶液經Sephadex G-25層析柱，用生理鹽水洗脫。流速控制在lml / min，收集流出液。如體積大于2ml，則以聚乙二醇6000濃縮至2ml。放置10ml
小燒杯中，緩慢攪拌。
(3) 將待標記的抗體3mg用PH6. 8 0. 1MPBS稀釋至2ml，攪拌下逐滴加入酶溶 液中。
(4) 用1M PH9. 6碳酸緩沖液0. 5ml，繼續(xù)攪拌l小時。
(5) 加0. 2M賴氨酸0. lml，混勻后，置室溫2小時。
(6) 在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，置4'C1小時。
(7) 3000rpm離心30min,棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗3次，最后沉淀 物溶于少量0. 15M PH7. 4的PBS中。
(8) 將上述溶液裝入透析袋中，0. 15M PH7. 4的PB緩沖鹽水透析，去除銨離 子后(用萘氏試劑檢測)，10,000rpm離心30分鐘去除沉淀，上清液即為酶結合物， 加入等體積丙三醇分裝成適合體積后，-2(TC冰凍保存。
根據本發(fā)明試劑盒制備方法中，所述制備辣根過氧化物酶標記抗體，標記方 法為過碘酸鈉法，其具體方法為稱5mg辣根過氧化物酶(HRP)溶于lml雙蒸水 中，加入0. 2ml新配的0.1M Nal(h溶液，室溫避光20mitu lmM pH4. 4醋酸鈉緩沖 液透析，4。C過夜。加入20m10. 2M pH9. 6碳酸鹽緩沖液，加入lml 0. 01M碳酸鹽 緩沖液含5mg抗體，室溫2h。再加0. lml新配4g/LNaBH4，混句，4。C2h。 0. 15M pH7.4PBS透析4'C過夜。攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，4'Clh。 3000rpm離 心0. 5h,棄上清，沉淀物溶于lm10.15M pH7. 4PBS。 0.15M pH7. 4的PBS透析4°C 4h， 10,000rpm離心30min,上清液即為酶結合物，加入等量丙三醇，-2(TC保存。
用酶標記物稀釋液將標記抗體稀釋成工作濃度。用酶標記物稀釋液進行l(wèi): 1， 000 ~ 1: 100， 000之間的一個適當稀釋比例進行稀釋。
上述稀釋堿性磷酸酶標記抗體所用的稀釋液，其配方為0. 05M pH值為7. 2
的磷酸鹽緩沖液，25%新生牛血清。
上述稀釋辣根過氧化物酶標記抗體所用的稀釋液，其配方為0.05MpH值為 7.2的磷酸鹽緩沖液，15%新生牛血清
配制完成后，應混勻，放置30分鐘后用肉眼觀察無晶體或沉淀析出，應釆用 電子pH計或中性pH試紙進行檢驗pH應控制在7. 0-7. 5之間，最佳pH為7. 2。然 后分裝到適當體積的聚乙烯塑料瓶中。
D:配制洗滌液
根據本發(fā)明試劑盒制備方法中洗滌液的配方為0. 01M pH值為7.2的磷酸鹽 緩沖液，0. 01%Tween20， lg/L KC1。
E:配制化學發(fā)光底物液
根據堿性磷酸酶化學發(fā)光底物液配方15%的4-甲氧基-4-(3-磷酰氧基苯)-螺 旋-(1，2-二氧雜環(huán)丁烷-3, 2' -金剛烷)、0. 05mol/L PH 7.8 Tris-HCl、 0. 15g/L 氯化鎂、9g/L氯化鈉，定容1L后，觀察溶液須澄清無混濁，配制完成后用深色聚 乙烯塑料瓶分裝，每瓶10ml。
根據辣根過氧化物酶的化學發(fā)光底物液配方，其中，化學發(fā)光底物A液包括 1.7716g/L魯米諾、0. 051g/L4-羥基聯(lián)苯、0. 012g/L 4-碘苯硼酸、11.4g/L硼酸、 4.9g/L硼砂，其pH值為8. 0-8.5;化學發(fā)光底物B液包括0. 329g/L過氧化脲、 0. 011Tween20、 51. 58g/L Na2HP04 .12H20、 8. 74g/L NaH2P04 . 2H20,其pH值為7. 0 ~ 7.5。配制完成后觀察溶液須澄清無混濁，用深色聚乙烯塑料瓶分裝，每瓶10ml。
以及根據A—E的所得到的半成品，組裝各組分成為試劑盒。
綜上，在本發(fā)明的研究過程中，本發(fā)明的發(fā)明人首先對所用的原材料進行了 篩選實驗和質量檢定，包括抗原的純度、標記抗體的活性、微孔板的吸附性能和
、變異大小、堿性磷酸酶的活性、辣根過氧化物酶的活性、化學發(fā)光底物的發(fā)光強 度及發(fā)光持續(xù)時間等。對于堿性磷酸酶和辣根過氧化物酶的標記可以有不同的方 法，通過反復探索和對比實驗最終找到了性能穩(wěn)定、質量可靠的標記方法。
本發(fā)明公開了基于上述摸索試驗得到的各種試劑配方，包括化學發(fā)光底物
液配方、校準品基質配方、洗滌液的配方、堿性磷酸酶和辣根過氧化物酶標記抗 體的稀釋液配方。
本發(fā)明試劑盒利用酶促化學發(fā)光原理，采用微孔板為固相載體實現批量檢測， 將單克隆抗體標記堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶，本試劑盒性能穩(wěn)定，操作簡單、 結果準確靈敏、反應速度快、無放射性污染。


圖1為實施例9所得到的校準品線性圖(雙對數標準曲線)。 圖2為實施例11中本發(fā)明的試劑盒同國外放免試劑盒臨床血樣測值比對的相 關曲線圖。
具體實施例方式
實施例1生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試劑盒堿性磷酸酶發(fā)光底物液的制
備
堿性磷酸酶化學發(fā)光底物液配方 三羥甲基氨基甲烷(Tris) 6. 06g
0. lmol/L鹽酸(HC1) 3. 45ml
4-甲氧基-4-(3-磷酰氧基苯)-螺旋-(1，2-二氧雜環(huán)丁烷-3,2'-金剛烷)
150ml
氯化鎂(MgCl2)
0. 15g
氯化鈉(NaCl)
雙蒸水定容
9g
1000ml
配制完成后肉眼觀察澄清無混濁物，用棕黑色聚乙烯塑料瓶分裝，每瓶10ml。
實施例2生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試劑盒辣根過氧化物酶發(fā)光底物液 的制備
按照辣根過氧化物酶化學發(fā)光底物液A液配方
硼酸
硼砂
魯米諾
4-羥基聯(lián)苯
4-碟苯硼酸
雙蒸水定容
11. 4g 4.9g 1.7716g 0. 051g g 0. 012g 1000ml
配制完成后用聚乙烯塑料瓶，每瓶分裝10m1. 化學發(fā)光底物液B液配方
磷酸二氫鈉(NaH2P04'2H20)
磷酸氫二鈉(Na2HP04*12H20)
過氧化脲(CH6N203 )
Tween20
8.74 g 51. 58 g 0. 329g 0. lml
雙蒸水定容 1000ml 配制完成后用棕黑色聚乙烯塑料瓶，每瓶分裝10m1. 實施例3生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試劑盒校準品的制備 根據本發(fā)明校準品的基質配方
馬血清 300ml
山羊血清 100ml
酪蛋白 lg
Proclin300 lml
雙蒸水定容 1000ral
配制基質液后，將生長激素抗原純品參照國家標準品稀釋成濃度為5nIU/ml、 10|LiIU/ml、 25MlU/ml、 50pIU/ml、 100|LiIU/ml,配制完畢后，使用3ml容積的 西林瓶，每瓶分裝l ml,貼簽后，-2(TC冷凍保存。
實施例4生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試劑盒包被微孔板的制備
取生長激素單克隆抗體濃原料5mg，使用0. 05M磷酸鹽緩沖液將原料稀釋到包 被濃度1.5Mg/ml，搖勾，取96孔微孔板，每微孔中加入150yl， 4'C24h后，去 離子水洗滌2次，2y。BSA室溫封閉3h,在溫度20-28'C及濕度小于或等于30%條件 下12h后，用鋁箔袋熱封口封裝。
實施例5生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試劑盒堿性磷酸酶標記抗體的制
備
堿性磷酸酶標記抗體具體標記步驟為
(1) 稱取堿性磷酸酶5mg溶于0. lmL含2. 5%戊二醛的pH6. 8 0. 1M PBS溶液 中，于4'C靜置過夜。
(2) 將酶溶液經Sephadex G-25層析柱，用生理鹽水洗脫。流速控制在lml / min，收集流出液。如體積大于2ml，則以聚乙二醇6000濃縮至2ml。放置10ml 小燒杯中，緩慢攪拌。
(3) 將待標記的抗體3mg用pH6. 8 0. 1MPBS稀釋至2ral，攪拌下逐滴加入酶溶 液中。
(4) 用1M PH9. 6碳酸緩沖液0. 5ml，繼續(xù)攪拌1小時。
(5) 加0. 2M賴氨酸0. lml，混勾后，置室溫2小時。
(6) 在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，置4'C1小時。
(7) 3000rpm離心30min,棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗3次，最后沉淀 物溶于少量0.15M PH7. 4的PBS中。
(8) 將上述溶液裝入透析袋中，0. 15M PH7.4的PB緩沖鹽水透析，去除銨離 子后(用萘氏試劑檢測)，10，000rpm離心30分鐘去除沉淀，上清液即為酶結合物， 加入等體積丙三醇分裝成適合體積后，-2(TC冰凍保存。
根據堿性磷酸酶標記抗體稀釋液配方
磷酸二氫鈉(NaH2P04*2H20) 2. 19 g
磷酸氫二鈉(Na2HP04*12H20) 12. 9 g
新生牛血清 250ml
去離子水定容 1000ml
配制完成后，應混勻，放置30分鐘后用肉眼觀察無晶體或沉淀析出，應釆用 電子pH計或中性pH試紙進行檢驗pH應控制在7. 0-7. 5之間，最佳pH為7. 2。
采用平行試驗法將堿性磷酸酶標記抗體用上述稀釋液進行不同稀釋度對比， 以最高信噪比大于200，最低信噪比大于5為基準，優(yōu)化選擇成本最低的稀釋比例。
將堿性磷酸酶標記抗體以1/1000、 1/2000、 1/4000、 1/8000、 1/16000、 1/32000、 1/64000的不同稀釋度，進行條件對比實驗，發(fā)現滿足最高信噪比大于200，最低 信噪比大于5的比例中，將堿性磷酸酶標記抗體1/16000的比例所用成本最低。 故選擇這個稀釋比例。
將堿性磷酸酶標記抗體用上述稀釋液以1/16000比例進行稀釋后，混勻放置 30分鐘后，用肉眼觀察無晶體或沉淀析出，用白色聚乙烯塑料瓶，每瓶分裝10ral，
4x:保存.
實施例6生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試劑盒辣根過氧化物酶標記抗體 的制備
辣根過氧化物酶標記抗體具體標記方法為稱5mg辣根過氧化物酶(HRP)溶于 lml雙蒸水中,加入0. 2ml新配的0. 1M NaI(V溶液，室溫避光20min。 lmM pH4. 4 醋酸鈉緩沖液透析，4'C過夜。加入20nl0. 2MpH9. 6碳酸鹽緩沖液，加入lml 0. 01M 碳酸鹽緩沖液含5mg抗體，室溫2h。再加O.lml新配4g/LNaBH4，混勻，4。C2h。 0. 15M PH7. 4 PBS透析4'C過夜。攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，4'Clh。 3000rpm 離心0. 5h，棄上清。沉淀物溶于lm10. 15M pH7. 4PBS。 0. 15M pH7. 4的PBS透析4 。C4h, 10，000rpm離心30min，上清液即為酶結合物，加入等量丙三醇，-2(TC保 存。
根據辣根過氧化物酶標記抗體稀釋液配方
磷酸二氫鈉(NaH2P04*2H20) 2. 19 g
磷酸氫二鈉(Na2HP04*12H20) 12.9 g
新生牛血清 150ml 去離子水定容 1000ml
配制完成后，應混勻，放置30分鐘后用肉眼觀察無晶體或沉淀析出，應采用 電子pH計或中性PH試紙進行檢驗pH應控制在7. 0-7. 5之間，最佳pH為7. 2。
采用平行試驗法將辣根過氧化物酶標記抗體用上述稀釋液進行不同稀釋度對 比，以最高信噪比大于200，最低信噪比大于5為基準，優(yōu)化選擇成本最低的稀釋 比例。
將辣根過氧化物酶標記抗體以1/1000、 1/2000、 1/4000、 1/8000、 1/16000、 1/32000、 1/64000的不同稀釋度，進行條件對比實驗，發(fā)現滿足最高信噪比大于 200，最低信噪比大于5的比例中，將辣根過氧化物酶標記抗體1/32000的比例所 用成本最低。故選擇這個稀釋比例。
將辣根過氧化物酶標記抗體用上述稀釋液以1/32000比例進行稀釋后，混句 放置30分鐘后，用肉眼觀察無晶體或沉淀析出，用白色聚乙烯塑料瓶，每瓶分裝 10ml, 4'C保存.
實施例7生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試劑盒洗滌液的制備
根據洗滌液的配方進行配制
磷酸二氫鈉(NaH2P04*2H20) 1 g
磷酸氫二鈉(Na2HP04'12H20 ) 1.28 g
氯化鉀(KC1) lg
Tween20 0. lml
去離子水定容 1000ml
配制完成后，應混勾，放置30分鐘后用肉眼觀察無晶體或沉淀析出，應釆用 電子pH計或中性pH試紙進行檢驗pH應控制在7. 0-7. 5之間，最佳pH為7. 2。
實施例8生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試劑盒半成品及成品組成
根據上述實施例l、 3、 4、 5、 7等步驟所得半成品在組裝前抽檢經過特異性、 精密性、靈敏度及穩(wěn)定性檢定合格才能組裝成生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試 劑盒(堿性磷酸酶)，按照標準操作規(guī)程進行組裝成品，并經過質量人員復核后記 錄、入庫。
根據上述實施例2、 3、 4、 6、 7等步驟所得半成品在組裝前抽檢經過特異性、 精密性、靈敏度及穩(wěn)定性檢定合格才能組裝成生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試 劑盒(辣根過氧化物酶)，按照標準操作規(guī)程進行組裝成品，并經過質量人員復核 后記錄、入庫。
實施例9本發(fā)明的試劑盒的使用方法
一、 實驗前準備
1、 蒸餾水或去離子水；
2、 吸水紙結實、耐用、使用中不脫落纖維，用于板條沖洗后的拍干；
3、 封口膜在反應過程中覆蓋板條；
4、 用于混合或稀釋溶液的容器；
5、 微量加樣器可以滿足試驗加樣量要求的可調或固定量程的加樣器帶有l(wèi)Oy 1 ~
200Ml吸液Tip頭，精確度優(yōu)于1.5V，
6、 微孔板沖洗機或沖洗瓶；
7、 計時器。
二、 標本釆集
病人標本無需特殊處理，采用常規(guī)醫(yī)用技術收集全血標本，離心分離后吸取 血清用于檢測。待測血清如在24小時之內使用，可于2-8C保存，若需長期存放 應保存在-2(TC以下，并避免反復凍溶。
三、 使用本試劑盒實驗的具體操作步驟如下
1. 準備自4'C冰箱中取出試劑盒，室溫(20~27°C )平衡15分鐘。
2. 實驗設計首先，根據試驗需求設計好分布圖，將包被板從密封袋中取出，設 空白對照一孔，校準品、樣品、質控品等建議各做雙孔，根據設計的數量在板 架上放好微孔板條。
3. 加樣空白對照孔不加校準品或樣品，取校準品0， 5， 10， 25, 50， 100jaIU/mL 分別加50pL于相對應校準孔中，其余每孔加樣品或質控品50pL;然后每孔
(除空白對照孔)加入酶標記物100 yL。
4. 溫育用微量震蕩器充分振蕩混勻，用不干膠片封蓋反應板，室溫(20 - 27t:) 溫育45分鐘；
5. 洗板發(fā)光板用稀釋后的洗滌液洗5次，每孔加滿洗滌液，每次浸泡10秒， 最后在干凈的吸水紙上拍干。
6. 檢測每孔加入化學發(fā)光底物工作液lOOuL，用微量震蕩器充分振蕩混勻， 室溫(20 - 27'C)避光反應20分鐘，在化學發(fā)光分析儀上依序測量各孔的發(fā) 光強度(RLU),測量時間0. 1 -1. 0秒/孔。必須于加化學發(fā)光底物液后的第20~ 60分鐘內測量。
四、 結果分析
根據化學發(fā)光分析儀中的發(fā)光信號進行數據處理，以雙對數數學模型進行擬合 運算，以校準品濃度點的對數值為橫坐標，發(fā)光信號強度的對數值為縱坐標，直 接擬合出校準曲線，將質控品及樣品的發(fā)光強度代入擬合方程LOG(Y)-aLOG(X)+b 即可得到相應的計算濃度值。應用上述試劑盒所得到的校準品曲線方程為LOG(Y) -2.9321LOG(X)+1.0364,相關系數0.9976,生長激素校準品曲線圖見附圖1。
實施例io本發(fā)明的試劑盒的方法學檢定
按照本領域中常規(guī)的制造及檢定規(guī)程對通過實施例1-11中制備成的試劑盒
進行檢定
1) 外觀
組分齊全、完整；溶液無混濁，無沉淀或絮狀物；微孔板包裝袋無破損、 漏氣現象。外部標識符合規(guī)定。
2) 準確性
以國家標準品為對照品，試劑盒校準品的實測值與標示值之比應在 0. 900-1. 10之間。
3) 劑量-反應曲線線性
劑量-反應曲線相關系數(r)應不低于0. 9900。
4) 精密性
CVW)應小于10. 0%(n = 10)
5) 靈敏度
應不大于o.2nIU/mL。
特異性
交叉因子交叉因子含量測定值
LH200mIU/mL《0. 5pIU/mL
FSH100mlU/mL《0. 5jalUM
HCG500mIU/mL《0. 5,組
TSH120nIUM《0. 5pIU/mL。
穩(wěn)定性
將試劑盒37'C放置7天，測定結果應符合上述1) 6)項要求。 實施例11本發(fā)明的試劑盒同國外放免試劑盒臨床血樣測值比對
用本發(fā)明的試劑盒和國外放射免疫法試劑盒對113份隨機血清樣品同時進行 檢測。其檢測結果見附圖2，以本發(fā)明試劑盒測定的生長激素濃度結果為橫坐標， 以國外放射免疫法試劑盒測定的濃度結果為縱坐標作回歸分析，相關方程為Y = 1. 3794X+0.9772,相關系數r =0. 9874。經統(tǒng)計學處理結果表明，本發(fā)明方法同國 外試劑盒臨床血樣測值相關性良好。
權利要求
1.一種檢測人生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括1)生長激素校準品；2)生長激素抗體包被的微孔板；3)堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶標記抗體；4)洗滌液；5)上述酶標記抗體作用的化學發(fā)光底物液。
2、 如權利要求l所述的試劑盒，其特征在于，所述堿性磷酸酶的化學發(fā)光底 物液配方為15%的4-甲氧基-4-(3-磷酰氧基苯)-螺旋-(1,2-二氧雜環(huán)丁烷-3，2'-金剛烷)、0.05mol/L PH 7.8 Tris-HCl、 0. 15g/L氯化鎂、9g/L氯化鈉。
3、 如權利要求l所述的試劑盒，其特征在于，所述辣根過氧化物酶的化學發(fā) 光底物液包含A液和B液，其中，化學發(fā)光底物A液，包括1. 7716g/L魯米諾、 0. 051g/L 4-羥基聯(lián)苯、0. 012g/L 4-碘苯硼酸、11.4g/L硼酸、4. 9g/L硼砂，其 pH值為8. 0~8. 5;化學發(fā)光底物B液，包括0. 329g/L過氧化脲、0. 01%Tween20、 51. 58g/L Na2HP04 . 12眼8. 74g/L NaH2P04 2H20，其pH值為7. 0 ~ 7. 5。
4、 一種檢測人生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試劑盒的制備方法，其特征在 于，包括以下步驟制備生長激素校準品；制備生長激素單克隆抗體包被的微孔 板；制備堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶標記抗體；配制洗滌液；配制化學發(fā)光底 物液；及組裝各組分成為試劑盒。
5、 如權利要求4所述的試劑盒的制備方法，其特征在于，所述制備生長激素 校準品，其基質配方為30%馬血清，10%山羊血清，lg/L酪蛋白，0.1。/。Proclin300 。
6、 如權利要求4所述的試劑盒的制備方法，其特征在于，所述制備生長激素 單克隆抗體包被的微孔板，其包被緩沖液為0.05M磷酸鹽緩沖液。
7、 如權利要求4所述試劑盒的制備方法，其特征在于，所述制備堿性磷酸酶 標記抗體，標記方法為戊二醛交聯(lián)法；所述制備辣根過氧化物酶標記抗體，標記 方法為過碘酸鈉法，用堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶標記物稀釋液將標記抗體稀 釋成工作濃度。
8、 如權利要求7所述的試劑盒的制備方法，其特征在于，所述堿性磷酸酶標 記物稀釋液，其配方為0.05M pH值為7.2的磷酸鹽緩沖液，25%新生牛血清。
9、 如權利要求7所述的試劑盒的制備方法，其特征在于，所述辣根過氧化物 酶標記物稀釋液，其配方為0.05MpH值為7.2的磷酸鹽緩沖液，15°/ 新生牛血清。
10、 如權利要求4所述的試劑盒制備方法，其特征在于，所述配制洗滌液， 其配方為0.01M pH值為7. 2的磷酸鹽緩沖液，0. 01%Tween20, lg/L KC1。
全文摘要
本發(fā)明涉及免疫分析領域，具體地公開了一種檢測人生長激素化學發(fā)光免疫分析測定試劑盒及其制備方法。本發(fā)明試劑盒利用酶促化學發(fā)光原理，采用微孔板為固相載體實現批量檢測，將單克隆抗體標記堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶，本試劑盒性能穩(wěn)定，操作簡單、結果準確靈敏、反應速度快、無放射性污染。
文檔編號G01N33/535GK101368973SQ20081010541
公開日2009年2月18日 申請日期2008年4月29日 優(yōu)先權日2008年4月29日
發(fā)明者于尚永, 唐寶軍, 宋勝利, 應希堂, 王宏銳, 胡國茂 申請人:北京科美東雅生物技術有限公司