專利名稱：一種fsh、lh聯(lián)合檢測試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種FSH、 LH聯(lián)合檢測試紙，屬于膠體金免疫檢測領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
由垂體前葉產(chǎn)生的卵泡刺激素(FSH)及黃體生成激素(LH)兩種糖蛋白激素，在性腺 軸上起著重要作用，在生育年齡的婦女隨月經(jīng)周期出現(xiàn)周期性變化。FSH作用于卵泡顆粒細(xì) 胞上的受體，刺激卵泡生長、發(fā)育、成熟，并促進(jìn)雌激素分泌。FSH在卵泡早期維持較低水 平，隨卵泡發(fā)育至晚期，雌激素水平升高，隨后FSH略下降，至排卵期24小時(shí)出現(xiàn)低值， 隨即迅速升高，24小時(shí)后又下降，LH和FSH共同作用，引起排卵，黃體期維持低水平，并 促進(jìn)雌、孕激素合成。LH在卵泡早期處于低水平，以后逐漸上升，至排卵前24小時(shí)左右與 FSH同時(shí)出現(xiàn)高峰，而且是較FSH更高的陡峰，24小時(shí)后最高值驟降，黃體后期逐漸下降。 檢測血中及尿液中FSH、 LH水平，臨床上用于協(xié)助判斷閉經(jīng)原因、診斷多囊卵巢綜合癥以及 卵巢早衰、卵巢功能不足等。
常用的測定方法有生物化學(xué)方法(如氣相色譜層析法、分光光度法、熒光分光光度法) 和應(yīng)用免疫學(xué)方法測定，主要是放射免疫測定法(RIA)和酶免疫測定法(ELISA)。這些方 法需要特殊防護(hù)設(shè)備、嚴(yán)苛的條件、價(jià)格昂貴的儀器和訓(xùn)練有素的人員，而且操作費(fèi)時(shí)、樣 本存儲困難，不易于推廣應(yīng)用。
免疫分析為FSH、 LH的檢測提供了一個(gè)新的分析檢測途徑，現(xiàn)已有利用免疫膠體金方 法制成試紙的報(bào)道中國專利00222540.9—種優(yōu)生試紙；中國專利00112780. 2—種優(yōu)生試 紙及其檢測方法；中國專利00222539. 5—種不孕癥檢測試紙。萬華普曼生物工程有限公司于 1995年就己獲得排卵產(chǎn)品的國藥字批準(zhǔn)文號(95)衛(wèi)藥準(zhǔn)字(京萬華)S-02號，并將產(chǎn)品投 放市場，因此對上述專利不構(gòu)成侵犯。本發(fā)明與上述技術(shù)的不同之處在于，硝酸纖維素膜上 包被有三條線， 一條LH單抗試驗(yàn)線， 一條FSH單抗試驗(yàn)線， 一條控制線，可以同時(shí)檢測尿 液中FSH及LH水平，用于診斷婦科疾病及卵巢功能。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)中存在的一些問題，提供了一種通過膠體金雙抗體夾抗原方法檢 漏尿液中FSH、 LH的試紙，可以體外定性診斷婦科疾病及女性卵巢功能。 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的-
FSH、 LH聯(lián)合檢測試紙底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條抗FSH單克 隆抗體試驗(yàn)線、 一條抗LH單克隆抗體試驗(yàn)線和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線，在底板一端 端頭為吸水層，另-端端頭為玻璃纖維樣品層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水層和抗FSH、 抗LH單抗金標(biāo)墊相互交疊連接，在金標(biāo)墊上壓有玻璃纖維樣品層。
檢測時(shí)，把FSH、 LH聯(lián)合檢測試紙的取樣端放入檢測樣本中(液面不得超過MAX線)由 于毛細(xì)管作用檢測樣品將沿著試紙條向吸水層端移動，樣品中相應(yīng)FSH、 LH抗原可與抗FSH 單克隆抗體金標(biāo)探針、抗LH單克隆抗體金標(biāo)探針發(fā)生特異結(jié)合后繼續(xù)移動與包被在硝酸纖維 素膜上的抗體結(jié)合，從而被抗FSH、抗LH單克隆抗體識別，即發(fā)生雙抗夾心的特異結(jié)合。檢 測過程中，當(dāng)上行液面即滯留于此區(qū)域的金標(biāo)探針將顯示相應(yīng)的紅色，出現(xiàn)兩條或以上紅線 為陽性，表明FSH及LH水平高于正常，有可能為卵巢疾??；出現(xiàn)一條紅線表示為陰性。
當(dāng)移動至抗鼠多克隆抗體控制線時(shí)，無論樣品中FSH、 LH含量有無，金標(biāo)探針都會與硝 酸纖維素膜上包被的羊抗鼠IgG結(jié)合滯留，使控制線顯示紅色。因此控制線無色帶產(chǎn)生則代 表操作有誤(檢測時(shí)，樣品液面超過MAX線)或試劑已經(jīng)過期。
由于采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明所提供的FSH、 LH聯(lián)合檢測試紙具有這樣的有益效果 即特異性強(qiáng)，靈敏度高，易儲存，無須專門技術(shù)人員操作，不需要儀器設(shè)備，而且結(jié)果易讀。


圖1為FSH、 LH聯(lián)合檢測試紙的主視結(jié)構(gòu)圖。 圖2為FSH、 LH聯(lián)合檢測試紙的俯視結(jié)構(gòu)圖。 圖3為FSH、 LH聯(lián)合檢測試紙的陽性結(jié)果圖。 圖4為FSH、 LH聯(lián)合檢測試紙的陰性結(jié)果圖。
圖中1、吸水板，2、硝酸纖維素膜，3、羊抗鼠多克隆抗體控制線，4、試驗(yàn)線，5抗FSH 單抗金標(biāo)墊、抗LH單抗金標(biāo)墊，6、尿液吸液層，7、底板，8、 MAX線。
具體實(shí)施例
1 合成免疫原
(1) 用化學(xué)合成方法合成兩種不同結(jié)合位點(diǎn)的FSH免疫原(FSH-BSA);
(2) 用化學(xué)合成方法合成兩種不同結(jié)合位點(diǎn)的LH免疫原(LH-BSA)。
2. 單克隆抗體的制備
(1) 將制備的兩種不同結(jié)合位點(diǎn)的FSH-BSA分別免疫BALB/c小鼠。用SP20細(xì)胞融合建 立瘤株進(jìn)行篩選，取瘤細(xì)胞注射于BALB/c小鼠腹腔，使其產(chǎn)生腹水。提取小鼠腹水 純化篩選，獲得與FSH分子不同位點(diǎn)結(jié)合的兩種FSH單克隆抗體I 、 FSH單克隆抗 體II。
(2) 將制備的兩種不兩結(jié)合位點(diǎn)的LH-BSA分別免疫BALB/c小鼠。用SP20細(xì)胞融合建 立瘤株進(jìn)行篩選，取痛細(xì)胞注射于BALB/c小鼠腹腔，使其產(chǎn)生腹水。提取小鼠腹水 純化篩選，獲得與LH分子不同位點(diǎn)結(jié)合的兩種LH單克隆抗體I 、 LH單克隆抗體II 。
3. 膠體金的制備及與孕,單克隆抗體的結(jié)合
(1) 取雙蒸水加適量的氯金酸磁力攪拌加溫到90 95'C，加入適量枸櫞酸三納繼續(xù)加熱 攪拌至沸騰5分鐘，冷卻后避光保存?zhèn)溆谩?br> (2) 把FSH、 LH單克隆抗體標(biāo)記的膠體金液，分別吸附纖維材料上，干燥后備用。
4. 制膜機(jī)制膜利用電腦控制傳動速度，保證每單位膜上包被的抗體量相等。
5. 試紙條組合按公知技術(shù)組合。
6. 使用方法收集晨尿，將試紙吸液層端插入尿液中，待測樣本界面勿超過診斷試紙上的
"MAX"線，5分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。顯色區(qū)為兩條紅色線，且檢測線比控制線顏色深或相等，
鵬檢麴結(jié)果為陽性；當(dāng)反應(yīng)線淺于控制線或僅出現(xiàn)一條控制線時(shí)為陰性；控制線未出現(xiàn)色 帶，表明試紙過期或操作不當(dāng)，請另取試紙重新檢測。
權(quán)利要求1.一種FSH、LH聯(lián)合檢測試紙，其特征在于它是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纖維素膜(2)、抗FSH單抗金標(biāo)墊(5)、抗LH單抗金標(biāo)墊(5)、樣品吸液層(6)、MAX線(8)組成，底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條FSH單抗試驗(yàn)線(4)、一條LH單抗試驗(yàn)線(4)和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線(3)，在底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板與抗FSH、抗LH單抗金標(biāo)墊相互交疊連接，在金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種試紙，其特征在于所述的硝酸纖維素膜上包被有三條線，兩條 試驗(yàn)線， 一條控制線。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的-種試紙，其特征在于LH、FSH通過免疫分別篩選出兩株不同單抗, 其中一株用于包被，另一株用于膠體金標(biāo)記，共同與各自免疫原有親合作用，利用雙抗夾 心法原理制成的試紙。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙，其特征在于利用雙抗夾心法制成試紙的試驗(yàn)線顏色為紅色， 即顯色區(qū)為兩條線或以上時(shí)為陽性；只有一控制線為紅色時(shí)為陰性。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種FSH、LH聯(lián)合檢測試紙，通過膠體金雙抗體夾抗原方法檢測尿液中FSH、LH水平，體外定性診斷婦科疾病及女性卵巢功能，屬于膠體金免疫檢測領(lǐng)域。本實(shí)用新型是由底板、吸水板、硝酸纖維素膜、抗FSH單抗金標(biāo)墊、抗LH單抗金標(biāo)墊、樣品吸液層、MAX線組成，底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條FSH單抗試驗(yàn)線、一條LH單抗試驗(yàn)線和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線，在底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板與抗FSH、抗LH單抗金標(biāo)墊相互交疊連接，在金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層。
文檔編號G01N33/577GK201011517SQ200720005148
公開日2008年1月23日 申請日期2007年2月14日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月14日
發(fā)明者萬志強(qiáng), 萬志靜 申請人:萬華普曼生物工程有限公司