專利名稱：內(nèi)分泌激素四合一聯(lián)合檢測(cè)板的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種內(nèi)分泌激素四合-聯(lián)合檢測(cè)板，屬于膠體金免疫檢測(cè)領(lǐng)域。
技術(shù)背景由垂體前葉產(chǎn)生的FSH (卵泡刺激素素)及LH (黃體生成激素)兩種糖蛋白激素，在 性腺軸上共同作用一起調(diào)節(jié)生殖功能，在生育年齡的婦女隨月經(jīng)周期出現(xiàn)周期性變化。FSH 作用于卵泡顆粒細(xì)胞上的受體，刺激卵泡生長(zhǎng)、發(fā)育、成熟，并促進(jìn)雌激素分泌。FSH在卵 泡早期維持較低水平，隨卵泡發(fā)育至晚期，雌激素水平升高，隨后FSH略下降，至排卵期24 小時(shí)出現(xiàn)低值，隨即迅速升高，24小時(shí)后又下降，LH和FSH共同作用，引起排卵，黃體期 維持低水平，并促進(jìn)雌、孕激素合成。LH在卵泡早期處于低水平，以后逐漸上升，至排卵前 24小時(shí)左右與FSH同時(shí)出現(xiàn)高峰，而且是較FSH更高的陡峰，24小時(shí)后最高值驟降，黃體 后期逐漸下降。檢測(cè)血中及尿液中FSH、 LH水平，臨床上用于協(xié)助判斷閉經(jīng)原因、診斷多囊 卵巢綜合癥以及卵巢早衰、卵巢功能不足等。孕酮為孕激素之一，是了解卵巢功能和胎盤功能的重要指標(biāo)，正常婦女在月經(jīng)周期以卵 泡期最低，黃體期最高；正常妊娠婦女第7周開始升髙，35周達(dá)高峰。異常的孕酮分泌與經(jīng) 前期緊張、了宮內(nèi)膜不規(guī)律剝脫、痛經(jīng)和黃體功能不全有關(guān)。雌二醇是一種A環(huán)為苯環(huán)的18碳類固醇激素，分子量272.4,只有1 3%的雌二醇以游 離形式存在于循不的血漿內(nèi)，它主要與性激素結(jié)合球蛋白和血清白蛋白結(jié)合。雌二醇是存在 于男性與女性體內(nèi)的最主要的天然雌激素，在女性，雌澉素刺激性器官生長(zhǎng)和第二性特征的 發(fā)育，也影響促性腺激素的分泌，在男性作用尚不清楚。未孕婦女雌二醇幾乎全由卵巢產(chǎn)生, 因此，在排卵周期連續(xù)(如每日)測(cè)定有助于判斷卵泡生長(zhǎng)等卵巢功能，也可用于監(jiān)測(cè)在正 常周期或在體外受精之前誘發(fā)的排卵周期中E2血清水平的指數(shù)增長(zhǎng)。其它的臨床用途有青春 期延遲，原發(fā)或繼發(fā)性閉經(jīng)，絕經(jīng)等，可與其它激素同時(shí)測(cè)定來更好地分析與鑒別診斷。目前對(duì)內(nèi)分泌生殖激素檢測(cè)方法有氣相層析法、蛋白結(jié)合分析法及放射免疫法及化學(xué)發(fā) 光法。由于血中孕翻含量較低，目前應(yīng)用較多的方法為蛋白結(jié)合分析、放射免疫分析法(RIA) 及磁性微粒分離的免疫酶聯(lián)測(cè)定法(IEMA)及發(fā)光法。這些方法需要特殊防護(hù)設(shè)備、嚴(yán)苛的條 件、價(jià)格昂貴的儀器和訓(xùn)練有素的人員，而且操作費(fèi)時(shí)、樣本存儲(chǔ)困難，不易于推廣應(yīng)用。免疫分析為內(nèi)分泌生殖激素的檢測(cè)提供了 -個(gè)新的分析檢測(cè)途徑，現(xiàn)已有中國(guó)專利 00222540. 9—種優(yōu)生試紙；中國(guó)專利0011:2780. 2 —種優(yōu)生試紙及其檢測(cè)方法；中國(guó)專利 00222539. 5 種不孕癥檢測(cè)試紙，萬華普曼生物工程有限公司于1995年獲得排卵產(chǎn)品國(guó)藥 字批準(zhǔn)文號(hào)(95)衛(wèi)藥準(zhǔn)字(京萬華)S-02號(hào)，并將產(chǎn)品投放市場(chǎng)，因此對(duì)上述專利不構(gòu)成 侵犯。200610014168.3檢測(cè)雌二醇的膠體金免疫試紙及其制備方法，該專利為檢測(cè)食品中雌 二醇?xì)埩?，本發(fā)明用于診斷婦科疾病及卵巢功能。中國(guó)專利200510109165.3用于奶牛早期妊 娠診斷的試紙及其檢測(cè)方法，用途不同也不構(gòu)成侵犯。本發(fā)明根據(jù)檢測(cè)需要，在現(xiàn)有的膠體金免疫技術(shù)上加以改進(jìn)，制備出可同時(shí)檢測(cè)FSH、 LH、孕兩、雌二醇的聯(lián)合檢測(cè)裝置，簡(jiǎn)單小巧，操作容易，且特異性強(qiáng)，靈敏度高，易儲(chǔ)存, 無須專門技術(shù)人員操作，而且結(jié)果易讀。發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型針對(duì)上述存在的一些問題，提供了內(nèi)分泌激素四合一聯(lián)合檢渕板，利用膠體 金免疫層析方法來檢溯相關(guān)內(nèi)分泌激素。為解決上述技術(shù)問趣，本實(shí)用新型是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
內(nèi)分泌激素四合一聯(lián)合檢測(cè)板，包含基礎(chǔ)板和檢測(cè)試紙?；A(chǔ)板又包括板身和板蓋兩部分，兩者連接方式為插接；板身內(nèi)部設(shè)有4個(gè)與檢測(cè)試紙 對(duì)應(yīng)的凹槽，板身正面有相關(guān)信息記錄表、結(jié)果判別說明、檢測(cè)對(duì)象說明和結(jié)果顯示欄。檢測(cè)試紙4條固定于板身內(nèi)部，均是由底板、吸水板、硝酸纖維素膜、單克隆抗體金標(biāo) 墊、樣品吸液層、MAX線組成，底板中部為硝酸纖維素膜，底板一端端頭為吸水板，另一端 端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標(biāo)墊相互交疊連接，在 單克隆抗體金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層。樣品吸液層暴露在板身外，當(dāng)板身和板蓋連接上時(shí)， 樣品吸液層進(jìn)駐板蓋內(nèi)，起到封閉作用；檢測(cè)試紙的硝酸纖維素膜與板身的結(jié)果顯示欄對(duì)應(yīng)。通過免疫篩選出針對(duì)一種免疫原的兩種配對(duì)單抗，種稱為單克隆抗體I用于包被試驗(yàn)線，另種稱為單克隆抗體n用于膠體金標(biāo)記，共同與免疫原有親合作用，利用雙抗夾心法原理制成的試紙。此檢測(cè)裝置中的檢測(cè)試紙利用膠體金雙抗夾心法原理制成，把檢測(cè)試紙的樣品吸液層端 放入待測(cè)樣品中(液面不得超過MAX線)，由于毛細(xì)管作用樣品將沿著試紙向吸水板端移動(dòng)， 在上行過程中，尿液中的抗原與單克隆抗體金標(biāo)探針發(fā)生特異結(jié)合，當(dāng)移動(dòng)至固定有單克隆 抗體I的試驗(yàn)線時(shí)，尿液中的抗原另一位點(diǎn)又與試驗(yàn)線中的單克隆抗體I相結(jié)合，因此其膠 體金滯留于試驗(yàn)線上，試驗(yàn)線處顯示紅色，為陽性；相反如果尿液中沒有相應(yīng)抗原，單克隆 抗體金標(biāo)探針就不會(huì)與試驗(yàn)線上的單克隆抗體I發(fā)生特異結(jié)合，沒有膠體金滯留。即僅有一 條紅色控制線為陰性，這就是雙抗夾心法原理。根據(jù)此原理，兩條線為陽性， 一條線為陰性 得出診斷。方案中，當(dāng)移動(dòng)至羊抗鼠多克隆抗體控制線時(shí)，無論樣品中有無相應(yīng)抗原，標(biāo)記的金標(biāo) 探針都會(huì)與已設(shè)定好的羊抗鼠多克隆抗體結(jié)合滯留，使控制線顯示紅色。因此控制線無色帶 產(chǎn)生則代表操作有誤，檢溯時(shí)樣品液面超過MAX線或試紙已經(jīng)過期。上述抗原可為FSH、 LH、孕爾、雌二醇，硝酸纖維素膜上的試驗(yàn)線可由FSH、 LH、孕 翻、雌二醉合成免疫原包被；多克隆抗體控制線由羊抗鼠多克隆抗體包被。通過更替試驗(yàn)線 包被物的成分，可制成可FSH檢測(cè)試紙、LH檢測(cè)試紙、孕醣檢測(cè)試紙、雌二醇檢測(cè)試紙， 實(shí)現(xiàn)對(duì)內(nèi)分泌激素FSH、 LH、孕兩、雌二醇的同時(shí)檢測(cè)。由于采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明所提供的內(nèi)分泌激素四合一聯(lián)合檢測(cè)板具有這樣的有益 效果，即簡(jiǎn)單小巧，操作容易，且特異性強(qiáng)，靈敏度高，易儲(chǔ)存，無須專門技術(shù)人員操作， 而且結(jié)果易讀。


圖1為本實(shí)用新型的主視結(jié)構(gòu)圖。 圖2為本實(shí)用新型的剖視圖。 圖3為檢測(cè)試紙的主視結(jié)構(gòu)圖。 圖4為檢測(cè)試紙的剖視圖。l.基礎(chǔ)板，2.板身，3.板蓋，4.信息記錄表，5.結(jié)果判別說明，6.檢測(cè)對(duì)象說明，7.結(jié)果顯 示欄，8.檢測(cè)試紙，9.底板，IO.吸水板，n.硝酸纖維素膜，12.單克隆抗體金標(biāo)墊，13.樣品 吸液層，14.試驗(yàn)線，15.控制線，16.MAX線，17.凹槽。具體實(shí)施例
以下結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行進(jìn)一步說明。圖1詳細(xì)表示了本實(shí)用新型的主視結(jié)構(gòu)圖，從圖中可以看出本實(shí)用新型由基礎(chǔ)板(1)和
檢測(cè)試紙(8)兩部分組成。 (—)基礎(chǔ)板由圖1可見，基礎(chǔ)板(1)包括板身(2)和板蓋(3)兩部分，板身(2)和板蓋(3)連 接方式為插接；板身(2)內(nèi)部設(shè)有與檢測(cè)試紙(8)對(duì)應(yīng)的凹槽(17),板身正面有相關(guān)信息 記錄表(4)、結(jié)果判別說明(5)、檢測(cè)對(duì)象說明(6)和結(jié)果顯示欄(7)。 (二)檢測(cè)試紙圖4詳細(xì)表示檢測(cè)試紙的剖視圖，檢測(cè)試紙(8)固定于板身(2)內(nèi)部，是由底板(9)、 吸水板(10)、硝酸纖維素膜(11)、單克隆抗體金標(biāo)墊(12)、樣品吸液層(13)、 MAX線(16) 組成，底板(9)中部為硝酸纖維素膜(11),底板一端端頭為吸水板(10),另一端端頭為樣 品吸液層(13)，硝酸纖維素膜(11)兩端分別與吸水板(10)和單克隆抗體金標(biāo)墊(12)相 互交疊連接，在單克隆抗體金標(biāo)墊(12)上壓有樣品吸液層(13)。檢測(cè)試紙具體制法應(yīng)用化學(xué)合成方法，分別合成針對(duì)FSH、 LH、孕酮、雌二醇的兩種 不同結(jié)合位點(diǎn)的合成免疫原。用上述制備的合成免疫原免疫小鼠，提取小鼠腹水，分離純化 得到FSH單克隆抗體I 、 FSH單克隆抗體II; LH單克隆抗體I 、 LH單克隆抗體II;孕酮單 克隆抗體I、孕翻單克隆抗體II;雌二醇單克隆抗體I、雌二醇單克隆抗體II。取雙蒸水加 適量的氯金酸磁力攪拌加溫到80 100'C，加入適量檸檬酸三鈉繼續(xù)加熱攪拌至沸騰，冷卻 后避光保存?zhèn)溆?。把金?biāo)抗體吸附于纖維材料上備用。特種機(jī)制膜，利用電腦控制傳動(dòng)速度, 保證每單位膜上包被的抗體量相等。其中4條試紙的試驗(yàn)線分別由FSH單克隆抗體I 、 LH 單克隆抗體I、孕,單克隆抗體I、雌二醇單克隆抗體I包被，控制線是由羊抗鼠多克隆抗 體包被制成,可制成FSH檢測(cè)試紙、LH檢測(cè)試紙、孕酮檢測(cè)試紙、雌二醇檢測(cè)試紙，配搭基 礎(chǔ)板，可同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)FSH、 LH、孕酮、雌二醇的檢測(cè)。結(jié)合圖1和圖2可看出，4條檢渕試紙(8)通過4個(gè)凹槽(17)固定在板身(2)內(nèi)部， 檢測(cè)試紙的樣品吸液層(13)暴露于板身(2)之外，當(dāng)板身(2)和板蓋(3)連接上時(shí)，樣 品吸液層(13)進(jìn)駐板蓋(3)內(nèi)；檢測(cè)試紙(8)的硝酸纖維素膜(11)與板身(2)的結(jié)果 顯示窗(7)對(duì)應(yīng)。使用時(shí)，拔去板蓋，把露出的樣品吸液層放入待檢樣品中(液面不得超過MAX線)，15 秒后取出，5分鐘時(shí)觀察結(jié)果。觀察結(jié)果顯示窗， 一個(gè)顯示窗內(nèi)，控制線、試驗(yàn)線均出現(xiàn)紅 色色帶的，相應(yīng)的檢測(cè)為陽性；某條試驗(yàn)線沒有出現(xiàn)色帶對(duì)應(yīng)的檢測(cè)結(jié)果為陰性；控制區(qū)未 出現(xiàn)紅色線，表明試紙過期或操作不當(dāng)。
權(quán)利要求1.一種內(nèi)分泌激素四合一聯(lián)合檢測(cè)板，其特征在于包含基礎(chǔ)板(1)、檢測(cè)試紙(8)；基礎(chǔ)板(1)包括板身(2)和板蓋(3)兩部分，板身(2)和板蓋(3)連接方式為插接；板身(2)內(nèi)部設(shè)有與檢測(cè)試紙(8)對(duì)應(yīng)的凹槽(17)，板身正面有相關(guān)信息記錄表(4)、結(jié)果判別說明(5)、檢測(cè)對(duì)象說明(6)和結(jié)果顯示欄(7)；檢測(cè)試紙(8)固定于板身(2)內(nèi)部，是由底板(9)、吸水板(10)、硝酸纖維素膜(11)、單克隆抗體金標(biāo)墊(12)、樣品吸液層(13)、MAX線(16)組成，底板(9)中部為硝酸纖維素膜(11)，底板一端端頭為吸水板(10)，另一端端頭為樣品吸液層(13)，硝酸纖維素膜(11)兩端分別與吸水板(10)和單克隆抗體金標(biāo)墊(12)相互交疊連接，在單克隆抗體金標(biāo)墊(12)上壓有樣品吸液層(13)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種內(nèi)分泌激素四合一聯(lián)合檢測(cè)板，特征在于所述的樣品吸液層(13)暴露于板身(2)之外，當(dāng)板身(2)和板蓋(3)連接上時(shí)，樣品吸液層(13)進(jìn) 駐板蓋(3)內(nèi)；檢測(cè)試紙(8)的硝酸纖維素膜(11)與板身(2)的結(jié)果顯示窗(7)對(duì)應(yīng)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種內(nèi)分泌激素四合一聯(lián)合檢測(cè)板，其特征在于所述的凹槽(17) 數(shù)量為4，對(duì)應(yīng)的檢測(cè)試紙(8)為4條。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種內(nèi)分泌激素四合一聯(lián)合檢測(cè)板，其特征在于硝酸纖維素膜(ll) 上有一條試驗(yàn)線(14)和一條多克隆抗體控制線(15)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種內(nèi)分泌激素四合一聯(lián)合檢測(cè)板，特征在于控制線是由羊抗鼠多 克隆抗體包被制成。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種內(nèi)分泌激素四合一聯(lián)合檢測(cè)板，其特征在于所述內(nèi)分泌激素包 括FSH、 LH、孕酮、雌二醇。
專利摘要本實(shí)用新型為一種內(nèi)分泌激素四合一聯(lián)合檢測(cè)板，包含基礎(chǔ)板和檢測(cè)試紙；基礎(chǔ)板包括板身和板蓋，板身內(nèi)部設(shè)有4個(gè)與檢測(cè)試紙對(duì)應(yīng)的凹槽，板身正面有相關(guān)信息記錄表、結(jié)果判別說明、檢測(cè)對(duì)象說明和結(jié)果顯示欄，檢測(cè)試紙4條固定于板身內(nèi)部。本實(shí)用新型可實(shí)現(xiàn)對(duì)FSH、LH、孕酮、雌二醇的同時(shí)檢測(cè)，具有快速、靈敏、操作簡(jiǎn)便、成本低、無需專業(yè)人員檢測(cè)的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N33/74GK201035012SQ20072000514
公開日2008年3月12日 申請(qǐng)日期2007年2月14日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月14日
發(fā)明者萬志強(qiáng), 萬志靜 申請(qǐng)人:萬華普曼生物工程有限公司