專利名稱：一種卵泡刺激素膠體金診斷試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
種卵泡刺激素膠體金診斷試紙技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明涉及一種通過檢測(cè)人體尿液中的卵泡刺激素，檢測(cè)女性卵巢功能的試紙，屬于膠 體金免疫診斷技術(shù)領(lǐng)域。
技術(shù)背景卵泡剌激素(FSH)是正常存在于血液和尿液中的腦垂體分泌的肽激素，濃度隨月經(jīng)周 期變化。當(dāng)雌激素水平下降時(shí)，F(xiàn)SH就從垂體中釋放出來(lái)，表示女性處于月經(jīng)中或開始更年 期。在停經(jīng)早期，調(diào)控月經(jīng)周期的激素失衡。隨著女性年齡的增長(zhǎng)，超過了育齡期，卵巢產(chǎn) 生的雌激素逐漸減少，F(xiàn)SH水平就會(huì)升高。FSH正常調(diào)節(jié)卵的生長(zhǎng)發(fā)育，月經(jīng)結(jié)束，F(xiàn)SH分 泌就會(huì)停止，然后恢復(fù)正常。雌激素隨著年齡的增長(zhǎng)而分泌減少，F(xiàn)SH分泌就會(huì)增加。這些 激素隨時(shí)間逐漸變化，月經(jīng)周期最后完全停止，就叫停經(jīng)。末次月經(jīng)后2-10年，卵巢功能逐 漸退化。停經(jīng)前的早期階段就叫更年期。在這期間，F(xiàn)SH水平可能上升然后緩慢恢復(fù)正常， 引起月經(jīng)紊亂或月經(jīng)不來(lái)。因此每月應(yīng)該做2次檢測(cè)，來(lái)幫助確定月經(jīng)周期中FSH的水平。目前，卵泡刺激素的測(cè)定多采用放射免疫法、熒光免疫法或酶標(biāo)免疫法，這些方法需要 特殊防護(hù)設(shè)備、價(jià)格昂貴的儀器和訓(xùn)練有素的人員，而且操作費(fèi)時(shí)，不易于推廣應(yīng)用。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)中存在的一些缺點(diǎn)，提供了一種通過膠體金免疫法檢測(cè)人體尿液 中的卵泡刺激素，從而體外定性檢測(cè)女性卵巢功能是否衰退。適用于各類大中型醫(yī)療單位以 及臨床檢測(cè)中心做定性分析用。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的-在卵泡刺激素膠體金診斷試紙底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條試驗(yàn)線 和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線，在底板一端端頭為吸水層，另一端端頭為樣品吸液層，硝 酸纖維素膜兩端分別與吸水層和單克隆抗體金標(biāo)墊相互交疊連接(交疊連接部分在l一2毫米 范圍)，在單克隆抗體金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層。通過免疫篩選出兩種不同單抗， 一種稱為FSH單克隆抗體I用于包被試驗(yàn)線，另一種稱 為FSH單克隆抗體II用于膠體金標(biāo)記，共同與免疫原有親合作用，利用雙抗夾心法原理制成 的試紙。把卵泡刺激素膠體金診斷試紙的樣品吸液層端放入待測(cè)的尿液中(液面不得超過MAX 線)，由于毛細(xì)管作用尿液將沿著試紙條吸水層端移動(dòng)，當(dāng)移動(dòng)至FSH單克隆抗體II金標(biāo)墊 時(shí)，尿液中的FSH與抗FSH單克隆抗體金標(biāo)探針發(fā)生特異結(jié)合，當(dāng)移動(dòng)至固定有FSH單克 隆抗體I的試驗(yàn)線時(shí)，尿液中的FSH另一位點(diǎn)又與試驗(yàn)線中的FSH單克隆抗體相結(jié)合，因 此其膠體金滯留于試驗(yàn)線上,試驗(yàn)線處顯示紅色，為陽(yáng)性；相反如果尿液中沒有FSH，抗FSH 單克隆抗體金標(biāo)探針就不會(huì)與試驗(yàn)線上的FSH單克隆抗體I發(fā)生特異結(jié)合，沒有膠體金滯留。 即僅有一條紅色控制線為陰性，這就是雙抗夾心法原理。根據(jù)此原理，兩條線為陽(yáng)性， 一條 線為陰性得出診斷。當(dāng)移動(dòng)至羊抗鼠多克隆抗體控制線時(shí)，無(wú)論尿液中有無(wú)FSH，標(biāo)記的金標(biāo)探針都會(huì)與己 設(shè)定好的羊抗鼠多克隆抗體結(jié)合滯留，使控制線顯示紅色。因此控制線無(wú)色帶產(chǎn)生則代表操 作有誤，檢測(cè)時(shí)尿液液面超過MAX線或試紙已經(jīng)過期。由于采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明所提供的奶牛早期妊娠診斷試紙及其檢測(cè)方法具有這樣 的有益效果，即特異性強(qiáng)，靈敏度高，易儲(chǔ)存，無(wú)須專門技術(shù)人員操作，而且結(jié)果易讀。

圖l為本發(fā)明的主視結(jié)構(gòu)圖。
圖2為圖1的俯視剖視結(jié)構(gòu)圖。圖3為陰性結(jié)果圖。圖4為陽(yáng)性結(jié)果圖。圖中1、吸水板，2、硝酸纖維素膜，3、羊抗鼠多克隆抗體控制線，4、試驗(yàn)線，5、單 克隆抗體金標(biāo)墊，6、樣品吸液層，7、底板，8、 MAX線。 具體實(shí)施例1. 化學(xué)合成方法合成兩種不同結(jié)合位點(diǎn)的FSH免疫原(FSH-BSA)。2. FSH單克隆抗體的制備。(1) 將制備的兩種不同結(jié)合位點(diǎn)的FSH-BSA分別免疫BALB/c小鼠。用SP20細(xì)胞融合建 立瘤株進(jìn)行篩選，取瘤細(xì)胞注射于BALB/c小鼠腹腔，使其產(chǎn)生腹水。(2) 提取小鼠腹水純化篩選，獲得與FSH分子不同位點(diǎn)結(jié)合的兩種FSH單克隆抗體I、 FSH單克隆抗體n。3. 膠體金的制備及與FSH單克隆抗體的結(jié)合。(1) 取雙蒸水加適量的氯金酸磁力攪拌加溫到90 95X:,加入適量枸櫞酸三納繼續(xù)加熱 攪拌至沸騰5分鐘，冷卻后避光保存?zhèn)溆谩?2) 把FSH單克隆抗體標(biāo)記的膠體金液，吸附纖維材料上，干燥后備用。4. 制膜機(jī)制膜利用電腦控制傳動(dòng)速度，保證每單位膜上包被的抗體量相等。5. 試紙條組合按公知技術(shù)組合。6. 使用方法選擇一天中方便的時(shí)候檢測(cè)(每天最好在同一時(shí)間進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)晨尿效果最 佳)，將試紙吸液層端插入尿液中，待測(cè)樣本界面勿超過診斷試紙上的"MAX"線，5分鐘內(nèi) 觀察結(jié)果。顯色區(qū)為兩條紅色線，且檢測(cè)線比控制線顏色深或相等，則檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性， 說(shuō)明可能處于圍絕經(jīng)期；當(dāng)反應(yīng)線淺于控制線或僅出現(xiàn)一條控制線時(shí)為陰性，檢測(cè)樣本很 可能處于基礎(chǔ)FSH水平；控制線未出現(xiàn)色帶，表明試紙過期或操作不當(dāng)，請(qǐng)另取試紙 重新檢測(cè)。
權(quán)利要求1一種卵泡刺激素膠體金診斷試紙，其特征在于是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纖維素膜 (2)、單克隆抗體金標(biāo)墊(5)、樣品吸液層(6)、 MAX線(8)組成；底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條試驗(yàn)線(4)和一條多克隆抗體控制線(3)，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標(biāo)墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層。 2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種卵泡刺激素膠體金診斷試紙，其特征在于控制線是由羊抗鼠多克隆抗體包被而成。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種卵泡刺激素膠體金診斷試紙，通過檢測(cè)人體尿液中的卵泡刺激素，從而體外定性檢測(cè)女性卵巢功能是否衰退，屬于膠體金免疫檢測(cè)領(lǐng)域。試紙是由底板、吸水板、硝酸纖維素膜、單克隆抗體金標(biāo)墊、樣品吸液層、MAX線組成；底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條試驗(yàn)線和一條多克隆抗體控制線，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標(biāo)墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層，通過膠體金免疫雙抗夾心方法制成試紙。本實(shí)用新型具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，易儲(chǔ)存，結(jié)果易讀，無(wú)須專門技術(shù)人員操作的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N33/558GK201021926SQ20072000514
公開日2008年2月13日 申請(qǐng)日期2007年2月14日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月14日
發(fā)明者萬(wàn)志強(qiáng), 萬(wàn)志靜 申請(qǐng)人:萬(wàn)華普曼生物工程有限公司