專利名稱：：檢測(cè)膀胱移行細(xì)胞癌的非侵入性體外方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種通過尿分析來檢測(cè)個(gè)體的尿中的膀胱移行細(xì)胞癌的存在的非侵入性體外方法，以及衍生自所挑選的蛋白質(zhì)的肽序列的用途和實(shí)現(xiàn)該方法的一種試劑盒。
背景技術(shù)：
：膀胱癌是最常見的尿道癌癥；它也是在男性中第四常見和在婦女中第八常見的癌癥。它包括很大范圍的多種組織學(xué)類型的腫瘤包括膀胱移行細(xì)胞癌(BTCC，90%),扁平上皮癌(7W，腺癌(2%)和未分化癌(1%)。腫瘤的等級(jí)和階段是BTCC的最佳預(yù)后指標(biāo)。依照世界衛(wèi)生組織(WHO)隨著分化狀態(tài)的減少和侵襲性的增加，膀胱腫瘤在細(xì)胞形態(tài)學(xué)上被分級(jí)為從Gl(低度惡性)到G3(高度惡性)。根據(jù)階段或浸潤(rùn)性，BTCC類被分類為表面乳頭狀的(Ta和Tl)，肌層浸潤(rùn)性的(T2到T4)，或不常見的原位癌或原位腫瘤(TIS)。低度惡性腫瘤通常被限制在黏膜或滲入表面層(Ta和Tl階段)。多數(shù)高度惡性腫瘤至少在Tl階段(侵入固有層)就被查出。大約75%被診斷的膀胱癌病例是在淺表的。剩余的25%在診斷時(shí)是肌層浸潤(rùn)性的。淺表BTCC的患者預(yù)后良好，但是復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)有70%。盡管風(fēng)險(xiǎn)這么高，Ta腫瘤傾向于是低度惡性的，并且僅有10-15%在2年內(nèi)將發(fā)展到肌層浸潤(rùn)性的。然而發(fā)展到T2階段的Tl腫瘤的該百分比更高(30-50%)。目前，對(duì)個(gè)體的膀胱癌的最佳診斷系統(tǒng)是通過膀胱鏡檢察和尿道切片^r查法或是通過切除術(shù)，都以侵入性的過程為代表?？勺冃蔚陌螂诅R使技術(shù)的侵襲性較小，但它依然是侵入性的和高度令人不快的，仍然需要某種形式的麻醉。BTCC診斷的主要非侵入性技術(shù)是通過對(duì)尿中細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)檢查以鑒別新成型細(xì)胞。因此，目前用細(xì)胞學(xué)監(jiān)測(cè)已確診的和經(jīng)過治療的膀胱癌患者。雖然尿細(xì)胞學(xué)能檢測(cè)出膀胱鏡檢察不出的原位腫瘤，以及位于膀胱上端或尿道上部，即輸尿管、骨盆和腎臟的肺瘤，但是幾項(xiàng)研究表明，細(xì)胞學(xué)在膀胱癌診斷上的敏感性非常低，對(duì)50%的腫瘤漏診。細(xì)胞學(xué)的發(fā)現(xiàn)少，并且可能與易反應(yīng)或退化過程相混淆。細(xì)胞學(xué)研究要求專家，單獨(dú)評(píng)估，這延遲了結(jié)果的可用性并且進(jìn)一步導(dǎo)致主觀性和最后結(jié)果的分歧。實(shí)際上，還沒有可用于診斷膀胱癌的高靈敏度和特異性的非侵入性方法(BomanH.etal.,JUrol2002,167:80—83)。為了改進(jìn)非侵入性的癌癥檢測(cè)已經(jīng)做了許多努力。在腫瘤細(xì)胞表達(dá)鐠上的最新進(jìn)展通過蛋白組技術(shù)、高分辨率二維電泳法和質(zhì)鐠分析使識(shí)別作為膀胱癌的腫瘤標(biāo)記的候選蛋白質(zhì)成為可能，如核基質(zhì)蛋白NMP22(SolowayM.S.etal.,JUrol1996,156:363-367),透明質(zhì)酸和透明質(zhì)酸酶(PhamHT.etal.，CancerRes1997,57:778—783),基底膜復(fù)合體(BTA，PodeD.etal.，JUrol1999，161:443—446)，癌胚抗原(CEA,HalimA.B.etal.,lntJBiolMarkers1992;7:234-239)，尿溶蛋白II(WuX.R.etal.，CancerRes1998;58:1291-1297)，離散因子/肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(SF/HGF，GohjiK.etal.,JClinOncol2000;18:2963-2971)，角蛋白質(zhì)/細(xì)胞角蛋白家族，如細(xì)胞角蛋白20(Buchumenskyv.etal.,JUrol1998,160:1971—1974),細(xì)月包角蛋白18(Sanchez-CarbayoM.etal.，ClinCa腦rRes2000,6:3585-3594)，乳房肺瘤8—Ka蛋白(MAT-8,MorrisonB.W.,JBiolChem1995，270:2176—2182)和端粒酵(LeeD.H.etal.,ClinicalCancerResearch1998,4:535-538)。MemonA.A.等(CancerDetectPrev2005，29:249-255)確定了在膀胱癌的細(xì)胞系和切片中有七種差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。然而沒有使用對(duì)照做比較。Langbein,S.等(TechnolCancerResTreat2006，67-71)公開了用2D-PAGE和SELDI-T0F-MS技術(shù)的膀胱癌患者的切片檢查的蛋白譜。RasmussenH.H,等(JUrol1996，155:2113-2119)/〉布了存在于膀胱癌患者尿中表達(dá)最高的蛋白質(zhì)的一個(gè)數(shù)據(jù)庫。CeNsJ.E.等(電泳法，1999,300-309)描述了存在于膀胱癌患者的切片檢查中蛋白質(zhì)的一個(gè)數(shù)據(jù)庫。然而，因?yàn)樽髡邲]有給出健康樣品對(duì)腫瘤樣品中蛋白質(zhì)的定量差異圖語，在這些參考文獻(xiàn)中沒有一篇確定了標(biāo)記。此外，沒有已在臨床試驗(yàn)上被證明能用于預(yù)測(cè)膀胱癌的預(yù)后和程度的標(biāo)記(MiyakeH.etal.，JUrol2002,167:1282—1287)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種涉及與BTCC相關(guān)蛋白質(zhì)的高靈敏度，有效快速的非侵入性體外方法。它進(jìn)一步涉及一種通過尿樣分析來診斷、預(yù)后和監(jiān)視BTCC的方法。本發(fā)明出人意料地通過尿分析為BTCC的檢測(cè)提供膀胱癌生物標(biāo)記。本發(fā)明的一種優(yōu)選具體實(shí)施方式涉及通過尿分析檢測(cè)BTCC的40種膀胱癌生物標(biāo)記，它們對(duì)BTCC的檢測(cè)、診斷、預(yù)后和監(jiān)視有重要價(jià)值。氨基?；?1(ACY1)是一種催化?；疞-氨基酸水解為L(zhǎng)-氨基酸和?；鶊F(tuán)的細(xì)胞液同型二聚體的鋅結(jié)合酶，被假定在?；被岽x分解和搶救中起作用。ACYl被確定為屬于染色體3p21.1,該區(qū)域減少小細(xì)胞肺癌(SCLC)的純質(zhì)性，并且有報(bào)告它在SCLC細(xì)胞系和腫瘤中的表達(dá)減少或檢測(cè)不到。ACYl是鋅結(jié)合酶一個(gè)新家族的第一個(gè)成員。醛類還原酶(AKR1A1)屬于醛基/酮基還原酶家族，它涉及生物源的和外來的醛的減少并且實(shí)際上存在于每個(gè)組織中。醛縮酶B(ALDOB),也稱果糖1-磷酸酰醛縮酶，在肝臟、腎臟和腦中產(chǎn)生。它對(duì)于果糖的降解是必要的。a-淀粉酶(AMY)類癌，胰a-淀粉酶和a-淀粉酶1A屬于糖基水解酶13家族并且水解在低聚糖和多聚糖中的1，4-a-糖苦鍵，并且因此是催化飲食中淀粉和糖朊的消化的第一步。人的染色體有一個(gè)在唾液腺或胰腺中高水平表達(dá)的幾個(gè)淀粉酶基因的群。膜聯(lián)蛋白IV(AMA4)屬于鈣依賴性磷脂結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白家族。雖然它們的作用仍然不明確，膜聯(lián)蛋白家族的幾個(gè)成員在與膜相關(guān)的內(nèi)吞和內(nèi)吞通路中相關(guān)連。在上皮細(xì)胞中ANXA4幾乎被專有表達(dá)。載脂蛋白A-1(AP0A1)屬于載脂蛋白Al/A4/E家族，并且其參予了膽固醇排泄從組織到肝臟的反向運(yùn)輸，并且這是通過其作為卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(LCAT)的一個(gè)輔助因子而促進(jìn)膽固醇從組織外流。膽綠素還原酶A(BIEA)屬于gfo/idh/moca家族和膽綠素還原酶亞族，并降低開放式四吡咯，膽綠素IXoc的y-亞甲基橋，其隨著NADH或NADPH的伴隨氧化作用被變?yōu)槟懠t素。黃素還原酶(BLVRB)催化從還原的吡咬核苷酸到黃素以及亞甲藍(lán)、吡咯喹啉對(duì)苯二酮、核黃素或高鐵血紅蛋白的電子轉(zhuǎn)移。BLVRB可能是在保護(hù)細(xì)胞避免從氧化損傷或在調(diào)控的鐵代謝中的一個(gè)成員。在肝臟中，它將膽綠素轉(zhuǎn)換成膽紅素。它主要在肝臟和紅血球中表達(dá)，在心臟、肺、腎上腺和大腦中以較低的水平表達(dá)。組織蛋白酶D(CATD)是一種屬于肽酶Al家族的酸蛋白酶并激活細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)降解。它涉及幾種疾病發(fā)病原理例如膀胱癌(0zerE.，etal.，Urology199954:50-5andloachimE.,etal.，AnticancerRes2002，22:3383—8)乳&泉癌，還可能涉及老年癡呆癥。組織蛋白酶D被合成為一個(gè)不活潑的52kDa的前體，由二個(gè)14kDa(CATDH)和一個(gè)34kDa(CATDK)的多肽形成。不活潑的肽通過N-末端的解朊作用激活形成48kDa酶化活if夭蛋白質(zhì)。補(bǔ)體C3前體(C03)在補(bǔ)體系統(tǒng)的活化中起到關(guān)鍵作用。其通過C3轉(zhuǎn)化酶的處理是兩條補(bǔ)體通路中的關(guān)鍵反應(yīng)。C03與尿殖腫瘤有關(guān)(DunzendorferU.，et.al，EurUrol1980，6:232-6)。細(xì)胞液非特異性的二肽酶(CPGL1)屬于肽酶M20A家族并且也稱為組織力幾肽酶和肽酶A。它是非特異性的二肽酶而不是一種有選擇性的肌肽酶。a-烯醇化酶(ENOA)是一種多功能的酶，它也在多種過程例如生長(zhǎng)控制，耐缺氧和過敏反應(yīng)的糖酵解中起到一部分作用。它在血管內(nèi)和細(xì)胞周圍的纖維蛋白溶解酶系統(tǒng)中可能也起作用，由于它能作為幾種細(xì)胞類型如白血球和神經(jīng)元的細(xì)胞表面的受體和纖溶酶原活化劑。哺乳動(dòng)物的烯醇化酶由3個(gè)同工酶亞基，a,P和Y組成，能形成細(xì)胞型且非特異性發(fā)展的同型二聚體或異型二聚體。ENOA與神經(jīng)細(xì)胞質(zhì)膜上的PLG的相互作用并促進(jìn)它的活化。它^皮用作許多腫瘤的一個(gè)診斷標(biāo)記，并且，其異型二聚體形式，a/v，作為心臟驟停后缺氧腦傷的一個(gè)標(biāo)記。它與膀胱癌有關(guān)(lczkowskiLA.,et.al,病理組織學(xué)，1999，35:150-6)。鐵蛋白輕鏈(FRIL)屬于鐵蛋白家族并且是在原核生物和真核中主要的細(xì)胞內(nèi)貯存鐵的蛋白質(zhì)。它由24個(gè)亞基的重的和輕的鐵蛋白鏈組成。在鐵蛋白亞基構(gòu)成上的變化能影響不同組織的鐵吸收率和釋放率。鐵蛋白的主要功能是在可溶的和無毒的狀態(tài)下貯存鐵。RabGDP解離抑制劑p(GDIB)屬于rabgdi家族并調(diào)控rab家族成員的GDP/GTP交換反應(yīng)，ras超級(jí)家族的小GTP結(jié)合蛋白，涉及細(xì)胞器之間的分子膜泡運(yùn)輸。GDIB被普遍表達(dá)。血漿谷胱甘肽過氧化物酶(GPX3)屬于谷胱甘肽過氧化物酶家族并通過還原的谷胱甘肽催化過氧化氫、有機(jī)氬過氧化物和油脂過氧化物的還原反應(yīng)并起到保護(hù)細(xì)胞對(duì)抗氧化損傷的功能。人的血漿谷胱甘肽過氧化物酶被證實(shí)是一種含竭的酶。GPX3表達(dá)顯示出組織特異性。谷胱甘肽合成酶(GSHB)對(duì)許多生物功能是重要的，包括保護(hù)細(xì)胞免受來自自由基的氧化損傷，對(duì)外來異物的解毒和膜轉(zhuǎn)運(yùn)。凝溶膠蛋白(GSN40和GSN80)是一種鉤調(diào)控的，調(diào)整肌動(dòng)蛋白的蛋白質(zhì)，結(jié)合在肌動(dòng)蛋白單體或細(xì)絲的正末端，防止單體交換(端基封閉或加帽反應(yīng))。它能促進(jìn)單體裝配入細(xì)絲(成核現(xiàn)象)，也能切斷現(xiàn)有的細(xì)絲。另外，該蛋白質(zhì)結(jié)合在肌動(dòng)蛋白和纖維連接蛋白上。雖然它未被描述為生物標(biāo)記，即，它在健康個(gè)體中的表達(dá)水平未被比較并且未被對(duì)癌癥患者定量，但是它已與膀胱癌相l(xiāng)關(guān)系(Rasmussen，H.H.etal.，JUrol1996,155:2113—2119;HagaLHokkaidolgakuZasshi2003年，78:29-37;CelisAetal.,Electrophoresis1999，20:355-61)。谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GSTP1)屬于通過催化許多疏水和親電的化合物與還原型谷胱甘肽結(jié)合而成為解毒中一個(gè)重要角色的一個(gè)酶家族。細(xì)胞質(zhì)異檸檬酸鹽脫氫酶(IDHC)屬于異杵檬酸鹽和異丙基蘋果酸脫氬酶家族并且催化異檸檬酸鹽的氧化去羰基形成a-酮戊二酸鹽。膜泡整蛋白VIP36前體(LMAN2)是細(xì)胞內(nèi)凝集素的早期分泌通路中一個(gè)角色。與N-乙?；?D-半乳糖胺和高甘露糖型聚糖相互作用，并且也可結(jié)合到0-連接的聚糖。它涉及高甘露糖類聚糖的糖蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)和排列。淋巴細(xì)胞抗原6復(fù)合體，位點(diǎn)6G6E(LY6G6E)屬于淋巴細(xì)胞抗原6超級(jí)家族。這個(gè)家族的成員富含半胱氨酸，通常為GPI錨定的細(xì)胞表面蛋白，有確定的或想象的免疫相關(guān)作用。它的特定功能是未知的。甘露聚糖結(jié)合的凝集素絲氨酸蛋白酶2，前體(MASP2)屬于肽酶sl家族并且據(jù)推測(cè)在甘露糖結(jié)合凝集素的胰蛋白蛋白酶(MBL)補(bǔ)體活化功能通路的啟動(dòng)中扮演一個(gè)重要的角色。在活化后它乂人C4裂解為C4A和C4B。尼克酰胺乙酰乙酸水解酶(MDC)屬于nadC/modD家族并且是從色氨酸到NAD的從頭合成通路中的一個(gè)中介，并且是通過神經(jīng)元中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體的超刺激的一種潛在的內(nèi)生興奮毒素。大腦中NADC水平的升高與神經(jīng)退^f于性失調(diào)如癲癇癥、老年癡呆癥和亨廷頓病的發(fā)病才幾理相關(guān)。它還未與癌癥相l(xiāng)關(guān)系。NapsinA(NAPSA)屬于肽酶al家族并且它在腎臟中以最高水平表達(dá)，在肺中以適度水平表達(dá)并且在脾臟和脂肪組織中以低水平表達(dá)。它可能涉及肺細(xì)胞表面活化劑前體的處理。增生擴(kuò)散相關(guān)蛋白質(zhì)2G4(PA2G4)是在核定位時(shí)顯示細(xì)胞周期特異性變化的單鏈DNA結(jié)合蛋白質(zhì)，屬于肽酶m24c家族。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)在回應(yīng)有絲分裂原刺激下表達(dá)時(shí)，它可能屬于維護(hù)增生擴(kuò)散細(xì)胞的細(xì)胞周期活動(dòng)的細(xì)胞周期管理蛋白質(zhì)或復(fù)制蛋白質(zhì)的一個(gè)大家族。致癌基因DJ1(PARK7)在胰腺、腎臟、骨骼肌、肝臟、睪丸和心臟中被高度表達(dá)并且對(duì)雄激素受體依賴的轉(zhuǎn)錄起到正調(diào)節(jié)。它能作為氧化還原功能敏感型伴侶和作為氧化壓力的傳感器。它防止SNCA的聚合并且保護(hù)神經(jīng)元以防氧化壓力和細(xì)胞死亡。多(rc)-結(jié)合蛋白1(PCPB1)是優(yōu)選與低聚dC結(jié)合的單鏈核酸結(jié)合蛋白。它能在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)之間穿梭。它在骨骼肌、胸腺和外周血液白細(xì)胞中大量表達(dá)，在前列腺、脾臟、睪丸、卵巢、小腸、心臟，肝臟，腎上腺和曱狀腺中所觀察到的表達(dá)較低。程序性細(xì)胞死亡6相互作用蛋白(PDC6I)在腦、心臟、胎盤、肺、腎臟、胰腺、肝臟、骨骼肌和耳蝸中被表達(dá)，并且可能在凋亡和細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)中扮演一個(gè)角色。它與PDCD6/ALG-2和SH3KBP1相互作用。溶酶體酸性磷酸酶前體(PPAL)屬于組氨酸酸性磷酸酶家族并且水解正;粦酸的單酯為醇和磷酸鹽。抗氧化蛋白2(PRDX2)屬于ahpc/tsa家族并且涉及細(xì)胞的氧化還原調(diào)節(jié)。它通過還原硫氧還蛋白系統(tǒng)提供的等同物來還原過氧化物。它不能從谷氧還蛋白接受電子。它在消滅新陳代謝時(shí)產(chǎn)生的過氧化物中可能扮演一個(gè)重要角色。它能通過調(diào)控細(xì)胞內(nèi)的H202濃度參與增長(zhǎng)因子和ot-腫瘤壞死因子的信號(hào)發(fā)生的聯(lián)級(jí)反應(yīng)。它能提高天然殺傷(NK)細(xì)胞的活性。谷氨酰胺酰肽環(huán)轉(zhuǎn)移酶(QPCT)對(duì)焦谷氨酰肽生物合成負(fù)責(zé)。它偏向酸性并且在谷氨酸N末端附有色氨酸殘基。血漿維生素A結(jié)合蛋白質(zhì)(RETBP)屬于淚液蛋白家族并且是維生素A的(維生素A醇)在血液中的特異性載體。它將肝臟貯存的維生素A運(yùn)送到外周組織。血漿中RBP維生素A復(fù)合體與甲狀腺素蛋白相互作用，以防止它通過腎臟小球時(shí)過濾的損失。維生素A的缺乏阻礙了翻譯后結(jié)合蛋白的分泌并且導(dǎo)致了其對(duì)表皮細(xì)胞的傳輸和供應(yīng)的缺乏。硒結(jié)合蛋白質(zhì)(SBP1)屬于硒結(jié)合蛋白質(zhì)的家族。硒是一種顯示出潛在抗癌特性的基本營(yíng)養(yǎng)素；硒的缺乏可能導(dǎo)致某些神經(jīng)疾病，有人提出硒在防止癌癥和神經(jīng)疾病上的功能也能由硒結(jié)合蛋白調(diào)節(jié)。磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白1(STIPl)是調(diào)節(jié)分子伴估HSC70和HSP90(HSPCA和HSPCB)的結(jié)合的一種4妄頭蛋白。轉(zhuǎn)醛醇酶(TALDO)屬于轉(zhuǎn)醛醇酶家族并且是為核酸合成提供核糖-5-磷酸鹽以及為油脂生物合成提供NADPH的非氧化性戊糖磷酸鹽通路的一種關(guān)鍵酶。這條通路也能維護(hù)還原狀態(tài)的谷胱甘肽進(jìn)而在氧自由基下保護(hù)巰基基團(tuán)和細(xì)胞的完整性。甲狀腺素蛋白(TTHY,舊稱前白蛋白)是脊推動(dòng)物血液中發(fā)現(xiàn)的3種曱狀腺激素結(jié)合蛋白質(zhì)之一。它產(chǎn)生于肝臟并在血液中循環(huán)，在那兒它與維生素A和甲狀腺素相結(jié)合。WD重復(fù)蛋白1(WDR1)屬于wd重復(fù)aipl家族并且與ADF/絲切蛋白家族蛋白質(zhì)一起導(dǎo)致肌動(dòng)蛋白細(xì)絲的解聚。癌癥可以通過分析測(cè)試尿樣中的至少一種膀胱癌生物標(biāo)記的表達(dá)才莫式而查出。因此，檢測(cè)尿檢樣品中的至少一種差異表達(dá)的蛋白質(zhì)并與正常尿比較可用來指示BTCC。尿液樣品的組成差異很大。所以，為了計(jì)算總蛋白含量的不同和消除樣品與樣品之間的偏差，標(biāo)準(zhǔn)化是關(guān)鍵。在尿中含量恒定的對(duì)照蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，可由于信號(hào)水平的標(biāo)準(zhǔn)化。文獻(xiàn)中有許多這些非易變蛋白質(zhì)的例子。在本發(fā)明中，鐵傳遞酶顯示為非易變蛋白質(zhì)。本發(fā)明中識(shí)別代表性膀胱癌的蛋白質(zhì)或生物標(biāo)記包括，但不限于TTHY、ACY1、AKR1A1、ALD0B、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP(也在40種膀胱癌生物標(biāo)記中被提到)。本發(fā)明一方面涉及一種非侵入性的體外方法，包括a)檢測(cè)和定量存在于一個(gè)來自個(gè)體的尿檢樣品中的一種或多種生物標(biāo)記；和b)比較a)中測(cè)試尿樣得到的表達(dá)測(cè)量值與正常尿的對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)值，其中a)中得到的測(cè)量值與正常尿的對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)值相比的變化指示了BTCC。該方法適用于檢測(cè)BTCC的存在，4企測(cè)這種癌癥的階|殳或嚴(yán)重程度的篩選。此外，該方法也被用于外科切除術(shù)后估計(jì)疾病的缺乏，建立這種癌癥診斷和預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)對(duì)患有這種癌癥的個(gè)體給藥的治療效果。發(fā)明另一方面涉及應(yīng)用一種或多種來源于尿中存在的生物標(biāo)記的肽序列，通過尿分析檢測(cè)BTCC的存在，確定這種癌癥的階4爻或嚴(yán)重程度，在外科切除術(shù)后估計(jì)缺乏疾病，建立該癌癥診斷和預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)對(duì)患有所述癌癥的個(gè)體給藥的治療效果。發(fā)明另一方面涉及應(yīng)用一種或多種來自40種膀胱癌生物標(biāo)記的核苷酸或肽序列，或它們的轉(zhuǎn)錄或翻譯前的產(chǎn)物，單獨(dú)或任意結(jié)合，用篩選的方式來鑒別，發(fā)現(xiàn)并評(píng)估治療BTCC的藥物。發(fā)明還提供了直接針對(duì)這種膀胱癌生物標(biāo)記的抗體。這些抗體能以適用于一種特殊用途的多種形式被提供，包括，例如，以可溶的形式，固定在基質(zhì)上，或與一種藥學(xué)上可接受的載體相結(jié)合。發(fā)明另一方面涉及前定義的執(zhí)行該方法的試劑盒包括l)至少一種尿中的癌癥生物標(biāo)記的特異性識(shí)別抗體和2)—種適于包裝的載體。發(fā)明另一方面涉及與BTCC參考表達(dá)諳，包括一種或多種膀胱癌生物標(biāo)記表達(dá)的^t式。不同的BTCC參考表達(dá)譜可能建立并可能與不同的癌癥階段相關(guān)。本發(fā)明目的使用了以下定義術(shù)語"癌癥"是指以異?；驘o序的細(xì)胞成長(zhǎng)為典型特征的，能夠侵略相鄰組織并傳播到遠(yuǎn)處器官的疾病。術(shù)語"癌"是指由異?；驘o序的細(xì)胞長(zhǎng)成的組織。術(shù)語"過渡膀胱細(xì)胞癌"或它的簡(jiǎn)稱"BTCC"是指其中任一種在膀胱上皮細(xì)胞中惡性增生性的失調(diào)。術(shù)語"腫瘤"是指一種從新塑造過程引起的任何組織的異常大量增生，不論它是良性的(非癌)或惡性的(癌)。術(shù)語"膀胱癌蛋白質(zhì)或生物標(biāo)記，，是指有在BTCC中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，即，來自一個(gè)健康個(gè)體的尿的與來自一個(gè)BTCC患者的尿的相比在表達(dá)上的不同的蛋白質(zhì)。本發(fā)明中包括的差異表達(dá)的蛋白質(zhì)組中的蛋白質(zhì)，包括選自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALD0B、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、E醒、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP的所有40種生物標(biāo)記，還有當(dāng)二種不同尿樣，一種來自一個(gè)健康個(gè)體且一種來自移行細(xì)胞癌的患者，相比較時(shí)，比率變化至少為二倍的尿樣中任何蛋白質(zhì)量化使用了圖像分析軟件如ProgenesisPG220軟件。這里描述的膀胱癌生物標(biāo)記可以是任意長(zhǎng)度的并進(jìn)一步包括從原生蛋白質(zhì)獲得的附加序列和/或異種序列，任何轉(zhuǎn)錄的或轉(zhuǎn)錄后的變異，以及所有與所述序列有至少95%同一性的序列，其中同一性被定義為二個(gè)字列之間殘基相同的百分比。那些本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知的這些其它部分或變異也可用于癌癥的治療和檢測(cè)中。術(shù)語"測(cè)量一種或多種生物標(biāo)記"意味確定一種或多種生物標(biāo)記的存在，然而術(shù)語"定量一種或多種生物標(biāo)記"意味一種或多種生物標(biāo)記表達(dá)存在的值(例如作為強(qiáng)度值)。術(shù)語"BTCC的指示"意味著在測(cè)試尿樣中一種或多種生物標(biāo)記的測(cè)量中找到的變異與正常尿?qū)?yīng)的標(biāo)準(zhǔn)值相比作為BTCC存在的證明。術(shù)浯"變異，，是指在蛋白質(zhì)的表示上的水平的一個(gè)變化。術(shù)語"差異表達(dá)的蛋白質(zhì)"是指BTCC患者的尿與一個(gè)健康個(gè)體尿相比有變化(增加或減少)的蛋白質(zhì)。術(shù)語"倒轉(zhuǎn)表達(dá)"是指二種表達(dá)模式相反的差異表達(dá)的蛋白質(zhì)(即，當(dāng)在樣品中一種過度表達(dá)時(shí)另一種被抑制，反之亦然)。術(shù)語"蛋白質(zhì)提取物"對(duì)應(yīng)于尿樣在離心后得到的上清液。術(shù)語"個(gè)體"是指哺乳動(dòng)物類的所有動(dòng)物種類并且包括，但是不限于，家畜和牲口、靈長(zhǎng)類和人，并優(yōu)選是指所有年齡或種族的一個(gè)雄性或雌性。術(shù)語"健康個(gè)體"是指一個(gè)未得BTCC的人，也可能包括其他泌尿道疾病的患者。術(shù)語"以前被診斷的"是指一個(gè)已經(jīng)收到了BTCC的肯定診斷的人。術(shù)語"以前未被診斷的"與從未收到了BTCC的肯定診斷(重新診斷)的人。術(shù)語"正常尿中的標(biāo)準(zhǔn)值"是指在已知未患BTCC的個(gè)體的單獨(dú)尿樣測(cè)量一種或多種生物標(biāo)記的平均表達(dá)水平的量化。術(shù)語BTCC的"診斷"是指通過評(píng)估一種或多種BTCC生物標(biāo)記來辨認(rèn)或確定BTCC的種類和起因的過程。術(shù)語"預(yù)后"是指疾病的可能結(jié)果，即痊愈或復(fù)發(fā)的可能性。術(shù)語"監(jiān)測(cè)"意味在不同時(shí)間個(gè)體中BTCC存在或不在的評(píng)估。術(shù)語"治療"是指所有直接或間接的過程、行動(dòng)、應(yīng)用或類似物，其中個(gè)體是在醫(yī)療幫助下改善他的情況。術(shù)語"特異性"是指當(dāng)疾病實(shí)際上不存在時(shí)，一種測(cè)試排除疾病的存在的能力。特異性被表示為有正確的否定測(cè)試結(jié)果的健康個(gè)體的數(shù)量(這個(gè)小組稱為真陰性組)，除以真陰性和有不正確的肯定測(cè)試結(jié)果的健康個(gè)體的數(shù)量(這個(gè)小組稱為假陽性組)的總和。術(shù)語"敏感性"是指當(dāng)疾病真實(shí)地存在時(shí)，測(cè)試查出疾病的能力。^t感性被表示為有正確的肯定測(cè)試結(jié)果的患病的患者的數(shù)量(這個(gè)小組稱為真肯定組)，除以真肯定組和有不正確的否定測(cè)試結(jié)果的患病的患者的數(shù)量(這個(gè)小組稱為假否定組)的總和。術(shù)語"穩(wěn)定性"定義了數(shù)字表示方法盡管最初樣品發(fā)生了變異仍能提供同樣結(jié)果的能力。術(shù)語"基因"是指編碼蛋白質(zhì)的脫氧核苷酸分子鏈的一個(gè)區(qū)域，并且可能代表編碼序列的一部分或一個(gè)完整的編碼序列。術(shù)語"蛋白質(zhì)"是指分子間通過共價(jià)或非共價(jià)鍵連接的至少一條氨基酸分子鏈。該術(shù)語包括所有翻譯后蛋白質(zhì)修飾的所有形式，如糖基化、磷酸化或乙?；?。術(shù)語"肽"和"多肽"是指蛋白質(zhì)片段的氨基酸分子鏈。術(shù)語"蛋白質(zhì)"和"肽"是難以區(qū)分的。術(shù)語"抗體，，是指回應(yīng)抗原刺激而被分泌入血液或淋巴的，并且顯示出和稱作"抗原"的目標(biāo)分子的特異性結(jié)合活性的B細(xì)胞表面的一種Y形蛋白質(zhì)(叫作免疫球蛋白)，抗原如一種外來的蛋白質(zhì)、細(xì)菌、病毒、寄生生物或被移植的器官。免疫球蛋白的抗原結(jié)合區(qū)域可以被劃分成F(ab')2或Fab片段。術(shù)語"抗體'，包括單克隆和多克隆抗體，和來自它們的完整個(gè)體或片段；還包括人的抗體、人源化的抗體和非人源化的抗體。"非人抗體"是指除人類外的動(dòng)物種類產(chǎn)生的抗體。"人源化抗體，，是將鼠抗體中最小的鼠源部位熔合在人的抗體上的基因工程抗體。通常，人源化抗體5-10%來源于老鼠和90-95%來源于人。"人的抗體"是抗體獲得從運(yùn)載人的抗體基因的基因改造的老鼠或從人類細(xì)胞。"單克隆抗體"是同種的，直接針對(duì)一個(gè)唯一抗原位點(diǎn)或"決定部位"目標(biāo)分子的高度特異性抗體種類。"多克隆抗體"包括異種的，針對(duì)不同的抗原決定的目標(biāo)分子的抗體種類。術(shù)語"特異性抗體"是指所產(chǎn)生的針對(duì)特異性蛋白的抗體(在這種情況下針對(duì)一種特殊膀胱癌標(biāo)記)。術(shù)語"抗體蛋白質(zhì)復(fù)合體"是指抗原和它的特異性抗體形成的復(fù)合體。術(shù)語"組合體"(組合抗體)是指在纖維狀噬菌體上顯示的抗體，允許cDNA庫直接篩選細(xì)胞表面易反應(yīng)抗體的表達(dá)，抗體的生產(chǎn)和純化不需要使用細(xì)菌或真核狀態(tài)的細(xì)胞系統(tǒng)。術(shù)語"Fab重組抗體"是指只包含單價(jià)的Fab片段的重組抗體，抗體對(duì)其抗原時(shí)有非常高的親合力。如果知道蛋白質(zhì)序列，它們可由細(xì)胞重組獲得。術(shù)語"ScFv抗體片段"是指可用細(xì)菌培養(yǎng)表達(dá)的一個(gè)單鏈易變的片段(scFv)。術(shù)語"表位"是指蛋白質(zhì)的一個(gè)抗原決定部位，是特異性抗體識(shí)別蛋白質(zhì)的氨基酸序列。這些表位也許包括相鄰分枝的氨基酸(線性表位)或由于多縮氨基酸鏈的三維折疊被帶入而接近的不相鄰的氨基酸(不連續(xù)的表位)。術(shù)語"固相"是指抗體可結(jié)合的一種非水的基質(zhì)。固相材料的例子包括，但是不限制于玻璃、多聚糖(例如瓊脂糖)，聚丙烯酰胺、多苯乙烯、聚乙烯醇和硅。固相形式的例子是平板的孔或凈化柱。術(shù)語"試紙，，是指浸入液體以確定和/或定量液體的一些特性(化學(xué)的，物理的，等等)的一個(gè)測(cè)試設(shè)備。這種試紙通常由紙或紙板制成并用以顏色變化指示某些特性的液體浸透。術(shù)語"載體"是指用于運(yùn)栽或傳遞某些物品的一個(gè)機(jī)械或設(shè)備。術(shù)語"包裝"是指在銷售前以產(chǎn)品的購(gòu)買和使用為根本目的包裹和裝入。術(shù)語"生物芯片"是指為了達(dá)到更高的生產(chǎn)量和速度的，能使許多測(cè)試同時(shí)執(zhí)行的排列在固體物質(zhì)上的小型化的測(cè)試位點(diǎn)的集合。在發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量來自個(gè)體的一個(gè)尿檢樣品中的一種或多種生物標(biāo)記，其選自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALD0B1、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL1、GDIB、GPX3、GS服、GSTP1、歷C、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1、AMY、AP0A1、GS詣、GSN80和RETBP(也指40種膀胱癌生物標(biāo)記)或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量來自個(gè)體的一個(gè)尿4企樣品中的一種或多種生物標(biāo)記，其選自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALD0B、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO和WDR1或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的笫一步包括檢測(cè)尿枱r樣品中至少二種生物標(biāo)記或其中的一個(gè)轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括檢測(cè)尿檢樣品中至少三種生物標(biāo)記或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括檢測(cè)尿檢樣品中至少四種生物標(biāo)記或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括檢測(cè)尿檢樣品中至少五種生物標(biāo)記或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿檢樣品中一種或多種生物標(biāo)記，其選自TTHY、ACY1、AKR1A1、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、I匿、LY6G6E、MSP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP或其轉(zhuǎn)錄或翻i奪后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿檢樣品中一種或多種生物標(biāo)記，其選自TTHY、ACY1、AKR1A1、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LY6G6E、駄SP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1和STIP1或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿;^樣品中一種或多種生物標(biāo)記，其選自TTHY、CATDHl、CATDK、ENOA、FRIL、GSHB、GSTP1、IDCH、MASP2、PRDX2、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿檢樣品中一種或多種生物標(biāo)記，其選自TTHY、CATDH、CATDK、EN0A、FRIL、GSHB、GSTP1、IDCH、MASP2和PRDX2或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿檢樣品中一種或多種生物標(biāo)記，其選自TTHY、AMY、AP0A1、GSN40和GSN80或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿檢樣品中AP0A1和RETBP或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿檢樣品中AMY、AP0A1和GSN40或其轉(zhuǎn)錄或翻i奪后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿^r樣品中AMY、AP0A1和ENOA或其轉(zhuǎn)錄或翻i奪后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿^r樣品中AP0A1、GSN40和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括在測(cè)量尿檢樣品中CATDK、GSN80和IDHC或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿檢樣品中AMY、AP0A1、GSN40和IDHC或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿檢樣品中AP0A1、GSN40、GSN80和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿檢樣品中CATDH、ENOA、GSTP1和PRDX2或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿檢樣品中CATDK、EN0A、PRDX2和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿檢樣品中AMY、CATDK，EN0A、IDHC和PRDX2或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿檢樣品中AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻i奪后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿檢樣品中CATDH、ENOA、GSTP1、MASP2、PRDX2和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻;奪后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿檢樣品中AMY、AP0A1、CATDK,ENOA、IDHC、PRDX2和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻i奪后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿^t全樣品中一種或多種生物標(biāo)記，其選自AMY、AP0A1、GSN40、GSN80或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異，和一種或多種生物標(biāo)記，其選自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALDOB、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、E歸、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、,C、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1和RETBP，或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量尿檢樣品中一種或多種生物標(biāo)記，其選自AMY、AP0A1、GSN40、GSN80或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異，和一種或多種生物標(biāo)記，其選自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALDOB、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、擺C、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO和WDR1或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量一種或多種生物標(biāo)記，其選自CATDH、CATDK、EN0A、GSHB、GSTP1、IDHC、PRDX2和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異，和一種或多種生物標(biāo)記，其選自ACY1、AKR1A1、ALD0B、ANXA4、BIEA、BLVRB、C03、CPGL1、FRIL、GDIB、GPX3、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1、AMY、AP0A1、GS詣、GSN80和RETBP或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，膀胱癌評(píng)估方法的第一步包括測(cè)量一種或多種生物標(biāo)記，其選自TTHY、CATDH、CATDK、ENOA、GSTP1、IDHC、MASP2、PRDX2、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及一種非侵入性的體外方法，其包括定量?jī)煞N不同的生物標(biāo)記之間的一個(gè)或多個(gè)比值，其選自來自個(gè)體的尿抬r樣品的40種膀胱癌生物標(biāo)記或與其相關(guān)的轉(zhuǎn)錄或翻"i奪后的變異，并且將尿4全樣品所得的測(cè)量值與正常尿的相對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)值相比，其中的變化指示BTCC。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，方法允許比較得自同一病人在BTCC進(jìn)程的不同時(shí)間的不同樣品中的同樣一種或多種蛋白以確定疾病的進(jìn)程。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，一種或多種發(fā)明的生物標(biāo)記也可被用于監(jiān)測(cè)藥物或手術(shù)治療的效果。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，被分析的樣品得自以前未被診斷為BTCC的個(gè)體。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，被分析的樣品得自以前被診斷為BTCC的個(gè)體。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，4皮分析的樣品得自目前正在接受治療對(duì)抗BTCC的個(gè)體。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，方法包括得到樣品的蛋白質(zhì)提取物。檢測(cè)典型地包括光譜法或免疫測(cè)定法。光譜法是典型地表面增強(qiáng)的激光解吸附或電離(SELDI)質(zhì)語法/矩陣協(xié)助的激光解吸附/電離(MALDI)質(zhì)譜法。免疫測(cè)定法包括免疫印跡、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附分析)，RIA(放射免疫分析)，竟?fàn)幮訣IA(竟?fàn)幮悦该庖叻治?，DAS-ELISA(雙重抗體夾心ELISA),免疫細(xì)胞化學(xué)或免疫組織化學(xué)的技術(shù)，根據(jù)生物芯片或包括特異性抗體的蛋白質(zhì)微矩陣應(yīng)用的技術(shù)，根據(jù)膠質(zhì)金沉淀以例如試紙的形式的分析，或通過親合色i普法技術(shù)、配基結(jié)合分析或凝集素結(jié)合分析。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，癌癥檢查方法包括與一種膀胱癌生物標(biāo)記特異性結(jié)合的分子與尿樣接觸并對(duì)這種結(jié)合定量。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)的檢測(cè)和量化包括第一步，其中樣品蛋白質(zhì)提取物依靠蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)的一個(gè)或更多表位與一種或多種特異性抗體相接觸，和第二步，定量抗體和蛋白質(zhì)形成的復(fù)合體。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的特異性抗體是人源的，人源化的或非人源的，和選自單克隆或多克隆抗體，抗體的整個(gè)或重組片段、組合抗體和Fab或scFv抗體片#爻。另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及一種或多種肽序列，其衍生自選自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALD0B、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1、AMY、AP0A1、GS詣、GSN80和RETBP或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的生物標(biāo)記，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及一種或多種肽序列，其衍生自選自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALDOB、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO和WDR1或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的生物標(biāo)記，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及衍生自癌癥生物標(biāo)記的一種或多種肽序列的使用，并且將尿檢樣品所得的這些生物標(biāo)記的測(cè)量結(jié)果與正常尿的相對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)值相比，其中的變化指示BTCC。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，至少使用了二種尿中的生物標(biāo)記或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，至少使用了三種尿中的生物標(biāo)記或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，至少使用了四種尿中的生物標(biāo)記或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，至少使用了五種尿中的生物標(biāo)記或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及一種或多種肽序列的使用，其衍生自選自TTHY、ACY1、AKR1A1、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的生物標(biāo)記，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及一種或多種肽序列的使用，其衍生自選自TTHY、ACY1、AKR1A1、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1和STIP1或其轉(zhuǎn)錄或翻i奪后的變異的生物標(biāo)記，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及一種或多種肽序列的使用，其衍生自選自TTHY、CATDH、CATDK、ENOA、FRIL、GSHB、GSTP1、IDCH、MASP2、PRDX2、AMY、APOAl、GSN40、GSN80和RETBP或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的生物標(biāo)記，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及一種或多種肽序列的使用，其衍生自選自TTHY、CATDH、CATDK、ENOA、FRIL、GSHB、GSTP1、IDCH、MASP2和PRDX2或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的生物標(biāo)記，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及一種或多種肽序列的使用，其衍生自選自TTHY、AMY、AP0A1、GSN40和GSN80或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的生物標(biāo)記，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及衍生自AP0A1和RETBP或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的肽序列的使用，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及衍生自AMY、AP0A1和GSN40或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的肽序列的使用，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及衍生自AMY,AP0A1和ENOA或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的肽序列的使用，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及書t生自AP0A1、GSN40和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的肽序列的使用，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及衍生自CATDK、GSN80和IDHC或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的肽序列的使用，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及書亍生自AP0A1、GSN40、GSN80和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的肽序列的使用，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及衍生自AMY、AP0A1、GSN40和IDHC或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的肽序列的使用，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及衍生自CATDH、ENOA、GSTP1和PRDX2或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的肽序列的使用，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及書f生自CATDK、EN0A、PRDX2和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的肽序列的使用，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一具體實(shí)施方式涉及衍生自組Y、CATDK、EN0A、IDHC和PRDX2或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的肽序列的使用，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一具體實(shí)施方式涉及書t生自AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的肽序列的使用，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及衍生自CATDH、ENOA、GSTP1、MASP2、PRDX2和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的肽序列的使用，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及衍生自AMY、AP0A1、CATDK、ENOA、IDHC、PRDX2和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的肽序列的使用，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及一種或多種肽序列的使用，其衍生自的生物標(biāo)記選自AMY、AP0A1、GSN40和GSN80或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異，和一種或多種肽序列，其衍生自的生物標(biāo)記選自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALDOB、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1和RETBP或一個(gè)其在轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異，其中生物標(biāo)記在尿中存在。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及一種或多種肽序列的使用，其衍生自的生物標(biāo)記選自AMY、AP0A1、GSN4Q和GSN8G或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異，和一種或多種肽序列，其衍生自的生物標(biāo)記選自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALDOB、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTPl、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO和WDR1或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及一種或多種肽序列的使用，其衍生自的生物標(biāo)i己選自CATDH、CATDK、ENOA、GSHB、GSTP1、IDHC、PRDX2和TTHY或一個(gè)其在轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異，和一種或多種肽序列，其衍生自的生物標(biāo)記選自ACY1、AKR1A1、ALDOB、ANXA4、BIEA1、BLVRB、C03、CPGL1、FRIL、GDIB、GPX3、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP或一個(gè)其在轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異，其中生物標(biāo)記存在于尿中。發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及一種或多種肽序列的使用，其衍生自的生物標(biāo)記選自TTHY、CATDH、CATDK、ENOA、GSTP1、IDHC、MASP2、PRDX2、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP或一個(gè)其在轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異，其中生物標(biāo)記存在于尿中。另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及實(shí)施前面定義的方法的一種試劑盒，包括1)特異性識(shí)別一種或多種這些蛋白的抗體組合2)—種適合包裝的載體，用于檢測(cè)BTCC存在，確定該癌癥的階段或嚴(yán)重程度，評(píng)估外科切除術(shù)后疾病缺乏，建立該癌癥診斷和預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)對(duì)患有所述癌癥個(gè)體的治療效果的試劑盒。試劑盒可從包括裝入至少一種結(jié)合尿樣中所存在的一種生物標(biāo)記的試劑的一個(gè)容器；和至少一種檢測(cè)BTCC狀態(tài)的至少一個(gè)試劑的說明書。該試劑盒可包括一個(gè)載體、包裝或容器，其用以分區(qū)接受一個(gè)或多個(gè)容器例如小瓶，管，等等，每一個(gè)容器含有該方法中單獨(dú)使用的元素。例如，容器可包含被標(biāo)記和進(jìn)一步被檢測(cè)的探針。探針可分別對(duì)膀胱癌蛋白質(zhì)或膀胱癌基因有特異性的抗體或多聚核苷酸?；蛘?，試劑盒可能包括一根質(zhì)譜分析(MS)探針。試劑盒也可能包括包含使目標(biāo)核酸序列擴(kuò)增或沉默的核苷酸的容器，和/或容器包含記錄含意，例如生物素結(jié)合蛋白質(zhì)，即，抗生物素蛋白或鏈霉親和素，結(jié)合著一個(gè)可檢測(cè)的標(biāo)記，即，一種酶，螢光或放射性同位素標(biāo)記的區(qū)域。試劑盒可能包括全部或部份的膀胱癌生物標(biāo)記的氨基酸順序，或編碼這樣的氨基酸順序的一個(gè)核酸分子。發(fā)明的試劑盒典型地將包括上述容器和包括一種或多種滿足商業(yè)和用戶立場(chǎng)的材料的其他容器，包括緩沖液、稀釋劑、過濾器、針、注射器和帶使用說明書的包裝內(nèi)容物。此外，容器上提供的標(biāo)簽表明組合物用于一種具體治療或非治療的應(yīng)用，也可表明如上所述的那些使用的指導(dǎo)。指導(dǎo)和或其他信息也可能被包括在試劑盒的內(nèi)容物中。另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及實(shí)施前面定義的方法的一種包括生物芯片的試劑備jnL。另一個(gè)具體實(shí)施方式涉及實(shí)施前面定義的方法的一種包括生物芯片的試劑盒，其中生物芯片包含檢測(cè)選自40種膀胱癌生物標(biāo)記或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后的變異的一種或多種生物標(biāo)記的抗體。有許多免疫學(xué)分析可用于試樣檢測(cè)和/或定量特異性抗原-抗體復(fù)合體的形成；前面已描述了眾多的竟?fàn)幮曰蚍蔷範(fàn)幮缘牡鞍踪|(zhì)結(jié)合分析，并且這些中很多是買得到的。因此，定量蛋白質(zhì)的抗體可以是，例如單克隆抗體、多克隆抗體，其完整或重組的片斷，對(duì)蛋白質(zhì)有特異性的組合抗體和抗體的Fab或scFv片段。這些抗體可以是人源的，人源化的或動(dòng)物源的。另一方面，它們是被標(biāo)記的或未被標(biāo)記的，并可用于許多種的分析?？杀挥糜跇?biāo)記抗體的標(biāo)記分子包括放射性核素、酶、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光試劑、酶基體或輔助因子、酶抑制劑、微粒、染料和衍生物。抗體結(jié)合特異性越高，能檢測(cè)出抗原的含量越低。那些本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知的許多種分析可用于本發(fā)明，使用未被標(biāo)記的抗體(主要抗體)和被標(biāo)記的抗體(次要抗體)；這些技術(shù)包括，但是不限于免疫印跡或免疫轉(zhuǎn)移，ELISA(酶聯(lián)免疫吸附分析)，RIA(^:射免疫測(cè)定)，竟?fàn)嶦IA(竟?fàn)幮悦该庖邷y(cè)定法)，DAS-ELISA(雙重抗體-夾心ELISA),免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫組織化學(xué)技術(shù)，才艮據(jù)生物芯片或包括特異性抗體的蛋白質(zhì)微矩陣應(yīng)用的技術(shù)，或膠體沉淀的形式例如試紙。其他檢測(cè)和/或定量蛋白質(zhì)的方式包括親合色鐠技術(shù)、配合基結(jié)合分析或凝集素結(jié)合分析。發(fā)明在這方面優(yōu)選的具體實(shí)施方式是蛋白質(zhì)微矩陣和雙重抗體夾心ELISA(DAS-ELISA)。在這些免疫測(cè)定法中能^f吏用任何特異性針對(duì)發(fā)明的40種蛋白質(zhì)的一種或多種表位的抗體，或抗體的組合。例如該分析的許多可能的格式之一，識(shí)別發(fā)明的40種蛋白質(zhì)的一種或多種表位的單克隆或多克隆的抗體，或該抗體的片段，或這些抗體的組合被附著在固相支持的表面并與樣品放置相接觸以進(jìn)行分析，在特定時(shí)間孵育，在適當(dāng)?shù)臈l件下形成抗原-抗體復(fù)合物。用適當(dāng)?shù)臈l件清洗以去除非特異性的復(fù)合物后，一種指示試劑，存在于識(shí)別發(fā)明的40種蛋白質(zhì)的一種或多種表位的單克隆或多克隆的抗體、或該抗體的片段、或這些抗體的組合中，與一個(gè)信號(hào)發(fā)生分子相連4妄，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間和溫度條件下與抗原-抗體復(fù)合物孵育。樣品中選自發(fā)明的40種蛋白質(zhì)的一種或多種蛋白質(zhì)的存在以對(duì)檢測(cè)定量和產(chǎn)生測(cè)定信號(hào)。為了防止由于樣品中總蛋白濃度的不同引起的信號(hào)變異，所有測(cè)量被標(biāo)準(zhǔn)化。如上所示，發(fā)明的方法包括通過特異性抗體定量尿樣中的差異表達(dá)的可溶蛋白質(zhì)來監(jiān)測(cè)膀胱癌的階^a。那些本領(lǐng)域普通技術(shù)人員會(huì)能使用所有特異性識(shí)別和定量這些蛋白質(zhì)的手段來完成。在下面的描述中，公開了獲得和分析人尿樣(在此被稱為樣品)的總蛋白含量的常規(guī)方法。方法涉及樣品處理，使用2D電泳法分離在樣品內(nèi)的蛋白質(zhì)，通過圖像分析和統(tǒng)計(jì)不同的樣品的方式選擇差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，以及使用一種或多種發(fā)明的差異表達(dá)的蛋白質(zhì)以產(chǎn)生蛋白質(zhì)特異性抗體作為膀胱癌標(biāo)志。在從健康個(gè)體得到的樣品(對(duì)照)和被診斷為BTCC(Ta、Tl-低度惡性，Tl高度惡性和T2)的患者之間為嘗試識(shí)別在膀胱癌各階段和在膀胱癌進(jìn)展期中的差異表達(dá)蛋白質(zhì)進(jìn)行了比較蛋白質(zhì)組分析。在所有顯示差異表達(dá)的蛋白質(zhì)中，40種蛋白質(zhì)可再生地改變超過了二倍。使用質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫搜索，通過肽質(zhì)量指紋圖語識(shí)別了它們。圖1:從尿樣得到二維電泳(2D)凝膠并顯示四個(gè)不同的研究區(qū)域A、K、R和S(圖1A),區(qū)域A(圖lg),區(qū)域K(圖1C),區(qū)域R(圖1D)和區(qū)域S(圖1E)。圖2:二維電泳法(2D)凝膠的區(qū)域R中對(duì)應(yīng)BIEA的斑點(diǎn)R211,得自一個(gè)健康個(gè)體尿樣(圖2A)，患癌癥的在Ta階段患者的(圖2B)，患癌癥的在Tl低度惡性階段患者的(T1-LG，圖2C),患癌癥的在T1高度惡性階^R患者的(Tl-HG,圖2D)和患癌癥的在T2階段患者的(圖2E)。圖3:在樣品CV、Ta、T1低度惡性(T1-LG),Tl高度惡性(T1-HG)和T2中斑點(diǎn)R211的強(qiáng)度。每個(gè)小組的樣品數(shù)量如括號(hào)內(nèi)所示。圖4:不同尿樣中斑點(diǎn)R211的強(qiáng)度檢測(cè)的穩(wěn)定性。這被表示為在被分析的每塊凝膠中持續(xù)出現(xiàn)或缺少斑點(diǎn)R211的凝膠的百分比。每個(gè)小組的樣品數(shù)量如括號(hào)內(nèi)所示。具體實(shí)施例方式本發(fā)明將由以下例子進(jìn)一步說明。這些例子僅是舉例證明并不被解釋為限制。I.差異表達(dá)蛋白質(zhì)的識(shí)別識(shí)別隨膀胱癌進(jìn)展而差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，將健康尿的蛋白語與使用一種蛋白組方法的早期階段和發(fā)展期的膀胱胂瘤患者的那些圖語相比較。尿液樣品(總計(jì)150個(gè))收集自前往屬于西班牙公共衛(wèi)生網(wǎng)絡(luò)醫(yī)院的泌尿科的健康個(gè)體和有過渡膀胱癌的病人。這些樣品被分類如下a)沒有癌(63個(gè)樣品)包括-對(duì)照(CV，32個(gè)樣品)曾有膀胱癌，但已經(jīng)切除了肺瘤的和已得到控制的患者(膀胱鏡檢察沒有顯示其他病變)。-有其他泌尿系統(tǒng)疾病的患者(31個(gè)樣品，包括在其他前列腺良性增生，前列腺癌)。b)BTCC(87個(gè)樣品)患者診斷按疾病在不同的發(fā)展階段包括-Ta(21個(gè)樣品)-Tl-低度惡性(29個(gè)樣品)-Tl-高度惡性(19個(gè)樣品)-T2(18個(gè)樣品)BTCC組的樣品所伴隨的切片檢查是它們?cè)诎螂装┑陌l(fā)展階段分類的關(guān)鍵。A.尿樣處理和蛋白質(zhì)分離。尿樣冷凍于-80°C并被放在干冰中運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室，不需要打開冷凍系統(tǒng)。樣品被保存在-80°C，直到它們被處理。樣品非常不同，從淡黃色尿到有血塊的紅色尿，透明或含有懸浮組織?？傮w積變化也非常大，從5到100ml。樣品的蛋白質(zhì)濃度范圍從20|ig/mL到2mg/mL(150jag/mL是平均濃度)。要得到蛋白質(zhì)濃度，樣品在水上被解凍并在4°C下2000xg離心5min。上清液用來確定蛋白質(zhì)濃度。沉淀100|ig蛋白質(zhì)的必要體積是根據(jù)蛋白質(zhì)與15%w/v三氯乙酸(TCA)沉淀的效率為75°/。計(jì)算出的。其余尿樣再冷凍于-80°C并被保存用于進(jìn)一步的2D電泳法(若需要)。在水上混合TCA和尿1個(gè)小時(shí)，然后在4°C下16000xg離心20min以獲得被沉淀的蛋白質(zhì)小球。該小球用丙酮洗滌，在-20°C保存并且蒸發(fā)溶劑至干。要進(jìn)行二維(2D)電泳法實(shí)驗(yàn)，第一個(gè)維度是IEF(等電子聚焦)，蛋白質(zhì)按它們的電荷(pl)分離；第二個(gè)維度是SDS-PAGE,蛋白質(zhì)按它們的分子量分離。要進(jìn)行第一個(gè)維度，蛋白質(zhì)干小球與450再水合化緩沖液(尿素7M，硫脲2M,CHAPS2%,IPG緩沖液2。/。，溴苯酚藍(lán)0.002%)在室溫下重新懸浮1小時(shí)。使用IPG緩沖液(Amersham，ref#17-600-88)，以使IEF的pH在3-10的范圍。對(duì)IEF,Amersham的Ettan，IPGphor等電聚焦系統(tǒng)使用了下述制造商的說明。IEF在被固定的pH梯度下進(jìn)行，稱為IPG條帶，購(gòu)買自Amersham(ref#17-6002-45)。在30V下凝膠再J^合活化16小時(shí)后，已溶解的蛋白質(zhì)聚焦于第一個(gè)維度的條帶中。然后電壓增加到8000V,強(qiáng)度不高于50iuA每塊凝膠。當(dāng)電壓到達(dá)90000V小時(shí),IEF完成。對(duì)于第二個(gè)維度，在實(shí)驗(yàn)室中使用Amersham的EttanDALT12凝膠槽聚合出26x20cm12.5%的丙烯酰胺。在EttanDALT12大型垂直系統(tǒng)中跑凝膠，并按照制造商的說明書進(jìn)行直到電泳前端離開凝膠。按照制造商的說明使用Amersham(17-1150-01)的染料試劑盒，用硝酸銀洗染凝膠。然后為了對(duì)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)(圖1A)進(jìn)行隨后的圖像分析，凝膠被干燥并保存。有些尿樣跑了超過l塊的2D-凝膠。B.對(duì)凝膠上蛋白質(zhì)斑點(diǎn)的分析掃描每塊凝膠以獲得用于圖像分析的斑點(diǎn)圖。使用來自非線性動(dòng)力學(xué)(UK)的ProgenesisPG220軟件以300dpi(每英寸點(diǎn)數(shù))格式和8bits/channel分析圖像文件。為了增加分辨率，分析在凝膠的不連續(xù)區(qū)域進(jìn)行。每個(gè)區(qū)域，稱為A(圖1B)，K(圖1C),R(圖1D)和S(圖1E),選擇最佳的凝膠并將其掃描用于圖像分析。ProgenesisPG220軟件將平面圖像的信息轉(zhuǎn)換成3D圖像，每個(gè)斑點(diǎn)的強(qiáng)度與個(gè)體尿中對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)的相對(duì)量有關(guān)。每塊凝膠中每個(gè)斑點(diǎn)的強(qiáng)度得自軟件表。這些原始數(shù)據(jù)是隨后統(tǒng)計(jì)分析的依據(jù)。對(duì)每個(gè)單獨(dú)的斑點(diǎn)進(jìn)4亍統(tǒng)計(jì)分析并比較二個(gè)不同組中它的強(qiáng)度(例如，CV和Ta),必須證實(shí)這些數(shù)據(jù)是正態(tài)分布的。比較屬于二個(gè)組的斑點(diǎn)，要使用學(xué)生的t檢驗(yàn)并得到p值這是評(píng)價(jià)一個(gè)亞組對(duì)另一個(gè)亞組斑點(diǎn)的理論誤差。僅選擇p值".05的斑點(diǎn)。這些斑點(diǎn)的倍數(shù)變化和平均率按下述任一種方法計(jì)算1)樣品的總斑點(diǎn)量，即理論總蛋白質(zhì)濃度，或2)連續(xù)表達(dá)的蛋白質(zhì)在每個(gè)樣品中恒定的量，或3)同樣樣品中二次差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。n值或樣品數(shù)量也被計(jì)算。比較對(duì)照病人的尿樣與來自已經(jīng)被診斷為過渡膀胱癌的病人的尿樣，40種蛋白質(zhì)在它們的倍數(shù)變化上顯示了統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性和穩(wěn)定性。通過MALDI-TOF(介質(zhì)輔助激光脫附/飛行離子化時(shí)間)光譜法識(shí)別這些斑點(diǎn)。那些2D電泳法顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性斑點(diǎn)的尿樣，被再次送入2D電泳并斑點(diǎn)被從凝膠中切下。蛋白被消化并被MALDI-T0F光譜法分析。肽質(zhì)量指紋圖鐠能識(shí)別40種蛋白質(zhì)，即^吏別TTHY、ACY1、AKR1A1、ALD0B、ANXA4、BIEA、BLVRB1、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、EN0A、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、P腿2、PT廳2、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP(見表1)。因此，這40種蛋白質(zhì)，已#皮_〖正明在BTCC病人診斷中是差異表達(dá)的，被作為對(duì)疾病的診斷、預(yù)后、監(jiān)控和治療有重要價(jià)值的生物標(biāo)記而識(shí)別。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>細(xì)胞質(zhì)非特異性二肽酶蛋白標(biāo)、志序列ID號(hào)位點(diǎn)號(hào)GI聯(lián)M白OMIM蛋白名稱EN0A13R383R058R0544503571P06733172430(X-烯醇化酵14A519A524A53031873302FRIL15S444182516P02792134790鐵蛋白輕鏈GDIB16A499廳l6598323P50395600767RabGDP分離抑制劑PGPX317S777404108P22352138321血漿谷胱甘肽過氧化物酵GSHB18K72308248826P48637601002谷胱甘肽合成酶GSTP119S34620664359P09211134660谷胱甘肽好u轉(zhuǎn)移酶匿C20R11949168486075874147700細(xì)胞質(zhì)異檸檬酸脫氮酶服N221K1187K7280K72925803023Q12907無完整囊泡膜蛋白VIP36前體LY6G6E22K735955961604Q5SRS9無'淋巴細(xì)l包^元原6復(fù)合體MASP223S77550513646000187605102甘露糖-結(jié)合凝集素絲氨酸蛋白胞腸C24K116614603130Q15274606248尼克酰胺乙酰乙酸水解酵<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>舉例，圖2顯示了二維電泳法(2D)凝膠的區(qū)域R中對(duì)應(yīng)BIEA的斑點(diǎn)R211,得自一個(gè)健康個(gè)體尿樣(圖2A),患癌癥的在Ta階段患者的(圖2B),患癌癥在Tl低級(jí)階段患者的(Tl-LG,圖2C),患癌癥在Tl高級(jí)階段患者的(Tl-HG，圖2D)和患癌癥在T2階段患者的(圖2E)。能看到與健康尿樣相比，斑點(diǎn)R211的強(qiáng)度在不同階段的癌癥患者的樣品中明顯減少。這些區(qū)別在ProgenesisPG220軟件的統(tǒng)計(jì)分析后顯示有顯著性。圖3顯示了在樣品CV、Ta、Tl低度惡性(Tl-LG)，Tl高度惡性(T1-HG)和T2中斑點(diǎn)R211的強(qiáng)度。每個(gè)小組的樣品數(shù)量如括號(hào)內(nèi)所示。圖4顯示了不同尿樣中斑點(diǎn)R211的強(qiáng)度檢測(cè)的穩(wěn)定性。這被表示為在被分析的每塊凝膠中持續(xù)出現(xiàn)或缺少斑點(diǎn)R211的凝膠的百分比。每個(gè)小組的樣品數(shù)量如括號(hào)內(nèi)所示。表2顯示了癌癥不同階段的樣品與一個(gè)非癌個(gè)體的樣品相比較(CV)，斑點(diǎn)R211的p和倍數(shù)變化統(tǒng)計(jì)分析值。斑點(diǎn)R211的倍數(shù)變化用每塊單獨(dú)凝膠的總斑點(diǎn)容量(TSV)標(biāo)準(zhǔn)化。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>n.尿樣中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)的抗體展開測(cè)試可用的多克隆和/或單克隆抗體(或商業(yè)購(gòu)買或用下述免疫協(xié)議產(chǎn)生)的反應(yīng)性和敏感性，通常用于繪制被監(jiān)測(cè)蛋白的標(biāo)準(zhǔn)("劑量反應(yīng)")曲線。a.免疫協(xié)議1.多克隆抗體用標(biāo)準(zhǔn)方法學(xué)可提高多克隆抗血清以對(duì)抗特定蛋白質(zhì)，例如那些數(shù)不清的已公開了的可利用的本領(lǐng)域通常使用的技術(shù)。在本實(shí)施例中，雄性新西蘭白兔用蛋白質(zhì)制劑免疫，首先用Freund完全輔劑(Gibco,GrandIsland,紐約)，然后三個(gè)月中每月用不完全的輔劑蛋白質(zhì)。兔子血清和小鼠血清在融合前被用作多克隆抗血清并由標(biāo)準(zhǔn)免疫印跡技術(shù)證明是易與蛋白質(zhì)制劑反應(yīng)的。2.重組蛋白質(zhì)的生產(chǎn)凝膠中找到的蛋白數(shù)量太低不足以引起免疫，因此使用pET28b(+)克隆載體在E.coli內(nèi)表達(dá)。得到的前述粗提物(BoronatA.,etal.,J.Bacteriol.1981,147:181-85)在SDS-PAGE凝膠上跑膠。重組蛋白質(zhì)被從凝膠中切下并釋放于丙烯酰胺中。為了生產(chǎn)對(duì)應(yīng)重組蛋白質(zhì)的抗體，釋放的蛋白質(zhì)直接被用于上述免疫的兔子。B.免疫印跡實(shí)驗(yàn)在上樣到6%聚丙烯酰胺凝膠前，蛋白質(zhì)樣品(總蛋白質(zhì)20jug)與補(bǔ)充了5%(3-巰基乙醇的SDS-PAGE凝膠上樣緩沖液混合并在100°C孵育5min。電泳后，蛋白質(zhì)被轉(zhuǎn)移到硝化纖維素膜上。跑了復(fù)制凝膠并顯示斑點(diǎn)。一張膜證明了抗體對(duì)應(yīng)著發(fā)明所選擇的40種蛋白質(zhì)中的一種或多種(圣克魯斯生物科技公司，圣克魯斯，加州，美國(guó))。當(dāng)?shù)诙埬ぷC明了抗體對(duì)應(yīng)著作為蛋白質(zhì)上樣對(duì)照的肌動(dòng)蛋白(Amersham,LittleChalfont,英國(guó))。最終，膜和與過氧化物酶(Amersham)共軛的次要抗體雜交，并使用ECL系統(tǒng)(Amersham)與高性能化學(xué)感光膠片(HyperfilmECL,Amersham)才全測(cè)化學(xué)發(fā)光信號(hào)。III.用免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)?zāi)驒z樣品幾種生物標(biāo)記用于盲法一企測(cè)40個(gè)尿樣包括a)沒有癌的(12個(gè)樣品)b)BTCC包括Ta(8個(gè)樣品)，Tl-低度惡性(6個(gè)樣品)，Tl高度惡性(6個(gè)樣品)和T2(8個(gè)樣品)。得到的敏感度、特異性和準(zhǔn)確性的值如表3所示。使用這些公式計(jì)算敏感度、特異性和準(zhǔn)確性的值(真陰性+真陽性)準(zhǔn)確性=-^-樣品數(shù)量真陽性~(真陽性+fi陰性)真陰性特射生=_^_(真陰性4i陽性)例如，生物標(biāo)記AMY顯示為敏感性89%,85%的準(zhǔn)確性的值及其特異性為75%。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>通過由這些實(shí)驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行二項(xiàng)式邏輯回歸，可獲得通常增加診斷方法的敏感性和特異性的生物標(biāo)記的不同組合，如表4所示。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>權(quán)利要求1、一種非侵入性的體外方法，包括a)檢測(cè)和定量存在于來自個(gè)體的一個(gè)尿檢樣品中的一種或多種生物標(biāo)記；和b)比較a)中的尿檢樣品得到的表達(dá)測(cè)量值與正常尿的對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)值，其中在a)得到的測(cè)量值與正常尿的對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)值相比的變化指示了膀胱移行細(xì)胞癌。2、根據(jù)權(quán)利要求l的非侵入性的體外方法，其中步驟a)包括檢測(cè)和定量選自下組的一種或多種生物標(biāo)記，該組為TTHY(SEQID1)，ACYl(SEQID2),AKR1A1(SEQID3)，ALDOB(SEQID4),ANXA4(SEQID5)，BIEA(SEQID6)，BLVRB(SEQID7)，CATDH(SEQID8)，CATDK(SEQID9),C03(SEQID10,SEQID11)，CPGL1(SEQID12),ENOA(SEQID13,SEQID14),FRIL(SEQID15),GDIB(SEQID16)，GPX3(SEQID17)，GSHB(SEQID18)，GSTPl(SEQID19),IDHC(SEQID20),LMAN2(SEQID21)，LY6G6E(SEQID22)，MASP2(SEQID23)，NADC(SEQID24),NAPSA(SEQID25),PA2G4(SEQID26),PARK7(SEQID27)，PCBPl(SEQID28),PDC6I(SEQID29),PPAL(SEQID30),PRDX2(SEQID31)，PTD012(SEQID32),QPCT(SEQID33)，SBPl(SEQID34),STIPl(SEQID35)，TALDO(SEQID36)，WDR1(SEQID37)，AMY(SEQID38，SEQID39，SEQID40),AP0A1(SEQID41),GSN40(SEQID42),GS腦(SEQID43)和RETBP(SEQID44)或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后變異。3、根據(jù)權(quán)利要求2的非侵入性的體外方法，其中步驟a)包括檢測(cè)和定量一種或多種生物標(biāo)記選自TTHY,ACYl,AKR1A1,ALDOB,ANXA4,BIEA，BLVRB,CATDH，CATDK，C03，CPGL1，ENOA，F(xiàn)RIL,GDIB,GPX3，GSHB，GSTPl,IDHC,LMAN2，LY6G6E，MASP2，NADC,NAPSA,PA2G4,PARU，PCBPl，PDC6I,PPAL,PRDX2，PTD012,QPCT，SBP1，STIP1,TALD0和麵l或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后變異。4、根據(jù)權(quán)利要求2的非侵入性的體外方法，其中步驟a)包括檢測(cè)和定量一種或多種生物標(biāo)記選自TTHY，AMY,AP0A1，GSN40和GSN80或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后變異。5、根據(jù)權(quán)利要求2的非侵入性的體外方法，其中步驟a)包括，險(xiǎn)測(cè)和定量一種或多種生物標(biāo)記選自AMY,APOAl，GSN40和GSN80或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后變異，和一種或多種生物標(biāo)記選自TTHY，ACY1，AKR1Al，ALDOB,ANXA4，BIEA,BLVRB，CATDH，CATDK，C03,CPGL1,EN0A1FRIL,GDIB，GPX3,GSHB,GSTP1，IDHC，LMAN2,LY6G6E,MASP2，NADC，NAPSA，PA2G4，PARK7,PCBP1，PDC6I,PPAL1PRDX2，PT歸2，QPCT,SBP1，STIP1,TALDO和WDR1或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后變異。6、沖艮據(jù)權(quán)利要求2的非侵入性的體外方法，其中步驟a)包括;險(xiǎn)測(cè)和定量一種或多種生物標(biāo)記選自CATDH,CATDK，ENOA,GSHB，GSTP1，IDHC,PRDX2和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后變異，和一種或多種生物標(biāo)記選自ACY1，AKR1A1,ALDOB，ANXA4，BIEA，BLVRB，C03，CPGL1,FRIL,GDIB,GPX3,LMAN2,LY6G6E,MASP2,腸C,NAPSA，PA2G4,PARK7，PCBP1,PDC6I,PPAL，PT顧2，QPCT,SBP1:STIP1，TALDO,WDR1,AMY,AP0A1,GSN40，GSN80和RETBP或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后變異。7、根據(jù)權(quán)利要求2的非侵入性的體外方法，其中步驟a)包括檢測(cè)和定量一種或多種生物標(biāo)記選自TTHY,CATDH，CATDK，ENOA,GSTP1，I匿,MASP2，PRDX2，AMY,AP0A1，GSN40，GSN80和RETBP或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后變異。8、根據(jù)權(quán)利要求2-7中任一項(xiàng)的非侵入性的體外方法，其中包括;險(xiǎn)測(cè)和定量至少2種選自權(quán)利要求2中定義的生物標(biāo)記。9、根據(jù)權(quán)利要求2-7中任一項(xiàng)的非侵入性的體外方法，其中包括檢測(cè)和定量至少3種選自權(quán)利要求2中定義的生物標(biāo)記。10、根據(jù)權(quán)利要求2-7中任一項(xiàng)的非侵入性的體外方法，其中包括;險(xiǎn)測(cè)和定量至少4種選自權(quán)利要求2中定義的生物標(biāo)記。11、根據(jù)權(quán)利要求2-7中任一項(xiàng)的非侵入性的體外方法，其中包括檢測(cè)和定量至少5種選自權(quán)利要求2中定義的生物標(biāo)記。12、根據(jù)權(quán)利要求2的非侵入性的體外方法，其中步驟a)包括檢測(cè)和定量生物標(biāo)記AP0A1，GSN40和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后各自的變異。13、根據(jù)權(quán)利要求2的非侵入性的體外方法，其中步驟a)包括檢測(cè)和定量生物標(biāo)記AP0A1,GSN40,GSN80和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后各自的變異。14、根據(jù)權(quán)利要求2的非侵入性的體外方法，其中步驟a)包括;險(xiǎn)測(cè)和定量生物標(biāo)記AMY，AP0A1，GSN40，GSN80和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后各自的變異。15、根據(jù)權(quán)利要求2的非侵入性的體外方法，其中步驟a)包括檢測(cè)和定量生物標(biāo)記CATDH，EN0A,GSTP1，MASP2，PRDX2和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后各自的變異。16、根據(jù)權(quán)利要求2的非侵入性的體外方法，其中步驟a)包括檢測(cè)和定量生物標(biāo)記AMY，AP0A1,CATDK，EN0A，IDHC，PRDX2和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后各自的變異。17、根據(jù)權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)的非侵入性的體外方法，其用于檢測(cè)膀胱移行細(xì)胞癌的存在，用來確定該癌癥的階段或嚴(yán)重程度，評(píng)估外科切除術(shù)后疾病缺乏，建立該癌癥診斷和預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)對(duì)患有所述癌癥的個(gè)體的治療效果。18、根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的非侵入性的體外方法，其中被分析的尿樣得自從前從未被診斷為膀胱移行細(xì)胞癌的個(gè)體。19、根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的非侵入性的體外方法，其中被分析的尿樣得自從前已經(jīng)被診斷為膀胱移行細(xì)胞癌的個(gè)體。20、根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的非侵入性的體外方法，其中被分析的尿樣得自目前正在接受治療對(duì)抗膀胱移行細(xì)胞癌的個(gè)體。21、根據(jù)權(quán)利要求1-20中任一項(xiàng)的非侵入性的體外方法，其特征在于，蛋白質(zhì)的檢測(cè)和量化包括笫一步，其中樣品蛋白質(zhì)提取物依靠權(quán)利要求2的蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)的一個(gè)或更多表位與一種或多種特異性抗體相接觸，和第二步，定量所生成的抗體和蛋白質(zhì)形成的復(fù)合體。22、根據(jù)權(quán)利要求21的非侵入性的體外方法，其特征在于，所述抗體是人源的，人源化的或非人源的和選自單克隆或多克隆抗體，抗體的整個(gè)或重組片段、組合抗體和Fab或scFv抗體片段。23、根據(jù)權(quán)利要求21或22的非侵入性的體外方法，其特征在于，在對(duì)所生成的抗體-蛋白質(zhì)復(fù)合物的檢測(cè)和定量中，所用的技術(shù)選自下組免疫印跡、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附分析)，RIA(放射免疫分析)，竟?fàn)幮訣IA(竟?fàn)幮悦该庖叻治?，DAS-ELISA(雙重抗體夾心ELISA)，免疫細(xì)胞化學(xué)或免疫組織化學(xué)的技術(shù)，根據(jù)生物芯片或包括特異性抗體的蛋白質(zhì)微矩陣所使用的技術(shù)，根據(jù)月^:金沉淀以例如試紙的形式的分析；或通過親合色語法技術(shù)、配基結(jié)合分析或凝集素結(jié)合分析。24、根據(jù)權(quán)利要求1-23中任一項(xiàng)的非侵入性的體外方法，其中該方法用于監(jiān)測(cè)藥學(xué)上或外科學(xué)上的功效。25、根據(jù)權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)的非侵入性的體外方法，其中該方法在膀胱移行細(xì)胞癌的評(píng)估中來自同一病人不同時(shí)間獲得的不同尿樣的蛋白質(zhì)中的同一種或同一些蛋白質(zhì)相比較用于檢測(cè)疾病的進(jìn)程。26、衍生自尿液中存在的生物標(biāo)記的一種或多種肽序列通過尿液分析以檢測(cè)膀胱移行細(xì)胞癌的存在，4企測(cè)該癌癥的階段或嚴(yán)重程度，評(píng)估外科切除術(shù)后疾病缺乏，建立該癌癥診斷和預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)對(duì)患有所述癌癥的個(gè)體的治療效果的體外用途。27、根據(jù)權(quán)利要求26的衍生自選自TTHY(SEQID1),ACY1(SEQID2),AKR1A1(SEQID3)，ALD0B(SEQID4),ANXA4(SEQID5)，BIEA(SEQID6)，BLVRB(SEQID7)，CATDH(SEQID8),CATDK(SEQID9)，C03(SEQID10，SEQID11),CPGL1(SEQID12)，ENOA(SEQID13，SEQID14),FRIL(SEQID15)，GDIB(SEQID16),GPX3(SEQID17)，GSHB(SEQID18),GSTP1(SEQID19)，IDHC(SEQID20)，LMAN2(SEQID21),LY6G6E(SEQID22)，MASP2(SEQID23)，NADC(SEQID24),NAPSA(SEQID25),PA2G4(SEQID26),PARK7(SEQID27)，PCBP1(SEQID28)，PDC6I(SEQID29)，PPAL(SEQID30),PRDX2(SEQID31)，PTD012(SEQID32),QPCT(SEQID33),SBP1(SEQID34)，STIP1(SEQID35),TALDO(SEQID36)，WDR1(SEQID37)，AMY(SEQID38,SEQID39，SEQID40),AP0A1(SEQID41)，GSN40(SEQID42)，GSN80(SEQID43)和RETBP(SEQID44)或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后變異的生物標(biāo)記的一種或多種肽序列的用途。28、根據(jù)權(quán)利要求27的衍生自選自TTHY，ACY1,AKR1A1,ALD0B，ANXA4，BIEA，BLVRB,CATDH,CATDK,C03，CPGL1,ENOA，F(xiàn)RIL，GDIB,GPX3，GSHB，GSTP1,I匿，LMAN2,LY6G6E,MASP2,腸C,NAPSA，PA2G4，PARK7，PCBP1，PDC6I,PPAL，PRDX2，PTD012,QPCT,SBP1,STIP1,TALDO和WD或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后變異的生物標(biāo)記的一種或多種肽序列的用途。29、根據(jù)權(quán)利要求27的衍生自選自TTHY，AMY,APOAl，GSN40和GSN80或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后變異的生物標(biāo)記的一種或多種肽序列的用途。30、根據(jù)權(quán)利要求27的衍生自選自AMY,APOAl，GSN40和GSN80或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后變異的生物標(biāo)記的一種或多種肽序列，和衍生自選自TTHY，ACY1,AKR1A1，ALDOB，ANXA4，BIEA，BLVRB,CATDH，CATDK，C03,CPGL1，ENOA,FRIL，GDIB，GPX3,GSHB，GSTP1，IDHC，LMAN2,LY6G6E,MASP2，NADC,NAPSA，PA2G4,PARK7，PCBP1,PDC61，PPAL，PRDX2,PTD012，QPCT，SBP1，STIP1,TALDO和WDR1或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后變異的生物標(biāo)記的一種或多種肽序列的用途。31、根據(jù)權(quán)利要求27的衍生自選自CATDH,CATDK，ENOA，GSHB,GSTP1，IDHC,PRDX2和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后變異的生物標(biāo)記的一種或多種肽序列，和右t生自選自ACY1,AKR1A1，ALDOB，ANXA4，BIEA，BLVRB，C03，CPGL1，F(xiàn)RIL，GDIB,GPX3,LMAN2,LY6G6E,MASP2，NADC,NAPSA,PA2G4，PARK7,PCBP1，PDC6IPPAL,PTD012,QPCT，SBP1，STIP1，TALDO，WDR1，AMY,AP0A1，GSN40，GSN80和RETBP或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后變異的生物標(biāo)記的一種或多種狀序列的用途。32、根據(jù)權(quán)利要求27的衍生自選自TTHY,CATDH,CATDK,ENOA，GSTP1，IDHC，MASP2，PRDX2，AMY,APOAl,GSN40,GSN80和RETBP或其舉爭(zhēng)錄或翻譯后變異的生物標(biāo)記的一種或多種肽序列的用途。33、根據(jù)權(quán)利要求27-32中任一項(xiàng)的用途，其中尿檢樣品中這些生物標(biāo)記物的測(cè)定值與正常尿中的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)值相比的變化指示了膀胱移行細(xì)胞癌。34、根據(jù)權(quán)利要求27-32中任一項(xiàng)的至少2種肽序列的用途。35、根據(jù)權(quán)利要求27-32中任一項(xiàng)的至少3種肽序列的用途。36、根據(jù)權(quán)利要求27-32中任一項(xiàng)的至少4種肽序列的用途。37、根據(jù)權(quán)利要求27-32中任一項(xiàng)的至少5種肽序列的用途。38、根據(jù)權(quán)利要求27的衍生自AP0A1，GSN40和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后各自的變異的肽序列的用途。39、才艮據(jù)權(quán)利要求27的書亍生自AP0A1，GSN40,GSN80和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后各自的變異的肽序列的用途。40、根據(jù)權(quán)利要求27的衍生自AMY,AP0A1，GSN40,GSN80和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后各自的變異的肽序列的用途。41、根據(jù)權(quán)利要求27的衍生自CATDH，EN0A，GSTP1，MASP2，PRDX2和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后各自的變異的肽序列的用途。42、根據(jù)權(quán)利要求27的衍生自AMY,AP0A1，CATDK，EN0A，IDHC，PRDX2和TTHY或其轉(zhuǎn)錄或翻譯后各自的變異的肽序列的用途。43、衍生自選自權(quán)利要求2中所定義的一系列蛋白質(zhì)中的一種或多種的一種或多種核苷或肽序列，單獨(dú)的或聯(lián)合的，在篩選鑒定，發(fā)展和/或提高治療膀胱移行細(xì)胞癌的治療藥物的療效方法中的用途。44、一種實(shí)施如權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)定義的方法的試劑盒，包括1)至少一種特異性識(shí)別權(quán)利要求2的蛋白質(zhì)的抗體和2)—種適于包裝的載體。45、一種根據(jù)權(quán)利要求44的用于檢測(cè)膀胱移行細(xì)胞癌的存在的試劑盒，用來確定該癌癥的階段或嚴(yán)重程度，評(píng)估外科切除術(shù)后疾病缺乏，建立該癌癥診斷和預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)對(duì)患有所述癌癥的個(gè)體的治療效果。46、一種根據(jù)權(quán)利要求44或45的試劑盒，包括一個(gè)生物芯片。47、一種根據(jù)權(quán)利要求46的試劑盒，其中生物芯片包括選自用于檢測(cè)權(quán)利要求2定義的系列中的蛋白質(zhì)的抗體。全文摘要本發(fā)明涉及一種通過尿分析檢測(cè)個(gè)體的膀胱移行細(xì)胞癌的非侵入性體外方法，用于確定個(gè)體中這種癌癥的階段或嚴(yán)重程度或監(jiān)測(cè)對(duì)患有這種癌癥的個(gè)體給藥的治療效果。文檔編號(hào)G01N33/68GK101300491SQ200680041276公開日2008年11月5日申請(qǐng)日期2006年10月10日優(yōu)先權(quán)日2005年10月11日發(fā)明者伊瑪·瑞蒙斯·偌瑞古茲,克帕·埃斯克如瑞德·伽瑞克亞·卡得埃諾,勞瑞諾·斯蒙·布?，?安娜·斯樂阿格·維樂克,安特尼諾·瑪瑞提茲·瑪瑞提茲,路易斯·何塞·凱斯崔樂·迪茲申請(qǐng)人:雷波瑞特瑞爾斯薩瓦特股份公司