專利名稱：：采用內(nèi)部校正系統(tǒng)的診斷性試驗試劑盒的制作方法采用內(nèi)部校正系統(tǒng)的診斷性試驗試劑盒發(fā)明背景測定中普遍采用了各種分析程序和設(shè)備，用以確定測試樣品中可能存在的分析物是否存在和/或濃度。例如，免疫測定法利用免疫系統(tǒng)機(jī)這些抗體和抗原，即免疫反應(yīng)物能句;彼:匕結(jié)合，'由此引起能夠用來確定生物樣品中特定抗原的存在或濃度的高度特異性反應(yīng)機(jī)制。有數(shù)種公知的免疫測定法，這些方法利用由可檢測的成分標(biāo)記的免疫反應(yīng)物，從而能夠?qū)Ψ治鑫镞M(jìn)行分析檢測。例如，"夾心型"測定形式一般涉及使測試樣品與檢測探針混合，這些探針與對分析物具有特異性的結(jié)合成員(例如抗體)綴合，從而在分析物與綴合探針之間形成配合物。然后使這些配合物與固定在檢測區(qū)內(nèi)的受體材料(例如抗體)相接觸。分析物/探針綴合配合物與固定的受體材料之間發(fā)生結(jié)合，從而將可檢測出來以指示分析物存在的"夾心"配合物定位。這項技術(shù)可用于獲得定量或半定量的結(jié)果。這些夾心型測定的一些實例在Grubb等人的U.S.4,168,146和Tom等人的U.S.4,366,241中有所描述。另一種技術(shù)是"竟?fàn)幮?測定。在竟?fàn)幮詼y定中，標(biāo)記探針通常是與分析物相同或類似的分子綴合。因此，標(biāo)記探針與目標(biāo)分析物竟?fàn)幋嬖诘氖荏w材料。竟?fàn)幮詼y定法通常用于檢測諸如半抗原之類的分析物，每種半抗原是單價的并且僅能夠結(jié)合一個抗體分子。竟?fàn)幮悦庖邷y定設(shè)備的實例在Deutsch等人的U.S.4,235,601、Liotta的U.S.4,442,204和Buechler等人的U.S.5,208,535中有所記載。這些測定法中的許多都依賴于校正來提供有效和有意義的結(jié)果，特別是對于半定量和定量檢測而言。在外部校正系統(tǒng)中，通常從含有一組已知量分析物的標(biāo)準(zhǔn)樣品獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將從樣品獲得的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，以便求出樣品中分析物的存在和/或數(shù)量。外部校正方法相對容易設(shè)計和實施簡便。然而，其經(jīng)常受到環(huán)境和批次差異的影響，因此是不可靠的。因而開發(fā)出一些內(nèi)部校正系統(tǒng)來克服這些問題。例如，Sdmer等人的U.S.5，387,503中記載了一種內(nèi)部4交正4支術(shù)，其涉及混合已知體積的樣品和預(yù)定量的校正分析物，并將所述混合物與固相載體相接觸。所述固相載體含有能夠在第一離散區(qū)域選擇性地結(jié)合測試分析物的試劑和能夠在第二離散區(qū)域選擇性地結(jié)合校正分析物的試劑。同樣將針對測試分析物的標(biāo)記試劑和針對校正分析物的類似標(biāo)記試劑的混合物施加于所述固相載體。通過比較分別與測試分析物和校正分析物相結(jié)合的標(biāo)記試劑水平，確定樣品中測試分析物的量。遺憾的是，這種內(nèi)部校正技術(shù)不易結(jié)合到側(cè)流(lateralflow)設(shè)備中，這種側(cè)流設(shè)備涉及利用色譜法對分析物進(jìn)行非均相分離。此外，其對預(yù)混合測定試劑的需要很繁瑣和過于復(fù)雜，特別是對于最終使用者并非受訓(xùn)過的醫(yī)務(wù)專家或技術(shù)人員的采樣現(xiàn)場即時分析(point-of-care)應(yīng)用而言。因此，目前需要一種準(zhǔn)確而相對廉價、簡單并易于使用的用于側(cè)流測定的精確內(nèi)部校正系統(tǒng)。
發(fā)明內(nèi)容根據(jù)本發(fā)明的一種實施方案，公開了一種用于檢測測試樣品中測試分析物的存在或數(shù)量的診斷性試驗試劑盒(diagnostictestkit)。這種診斷性試驗試劑盒包括含有多孔膜的側(cè)流測定設(shè)備。所述多孔膜限定出檢測區(qū)和校正區(qū)。第一受體材料固定在檢測區(qū)內(nèi)而第二受體材料固定在校正區(qū)內(nèi)。除了該側(cè)流測定設(shè)備，所述診斷性試驗試劑盒還包括多種測定試劑，其中的一種或多種設(shè)置在所述側(cè)流測定設(shè)備上。所述測定試劑包括校正分析物、檢測探針和校正探針。所述檢測探針與第一特異性結(jié)合成員綴合，該第一特異性結(jié)合成員經(jīng)構(gòu)造以優(yōu)先與測試分析物、第一受體材料或其組合相結(jié)合。所述校正探針與第二特異性結(jié)合成員綴合，該第二特異性結(jié)合成員經(jīng)構(gòu)造以優(yōu)先與校正分析物、第二受體材料或其組合相結(jié)合。根據(jù)本發(fā)明的另一種實施方案，公開了一種利用側(cè)流設(shè)備來定量或半定量地檢測測試分析物的方法。所述設(shè)備包括與纟企測探針和校正探針相連通的多孔膜，所述檢測探針與第一特異性結(jié)合成員相綴合，所述校正探針與第二特異性結(jié)合成員相綴合。所述多孔膜還限定出檢測區(qū)和校正區(qū)。該方法包括將所述側(cè)流設(shè)備與校正分析物相接觸；將所述側(cè)流設(shè)備與測試樣品相接觸；測量檢測區(qū)產(chǎn)生的檢測信號的強(qiáng)度；以及測量校正區(qū)產(chǎn)生的校正信號的強(qiáng)度。測試分析物的量與用校正信號強(qiáng)度校正后的檢測信號的強(qiáng)度成比例。根據(jù)本發(fā)明的另一種實施方案，公開了一種利用側(cè)流設(shè)備來定量或半定量地檢測測試分析物的方法。所述設(shè)備包括多孔膜，其與校正分析物、綴合有第一特異性結(jié)合成員的檢測探針、以及綴合有第二特異性結(jié)合成員的校正探針相連通。所述多孔膜還限定出檢測區(qū)和校正區(qū)。該方法包括將所述側(cè)流設(shè)備與測試樣品相接觸；測量檢測區(qū)產(chǎn)生的檢測信號的強(qiáng)度；以及測量校正區(qū)產(chǎn)生的校正信號的強(qiáng)度。測試分析物的量與用校正信號強(qiáng)度校正后的檢測信號的強(qiáng)度成比例。以下更詳細(xì)地i侖述本發(fā)明的其它特征和方面。附圖簡要說明針對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，本發(fā)明的全面和可實施的內(nèi)容，包括其最佳方式，都參照附圖在說明書的剩余成員進(jìn)行了更加具體的闡述，其中-.圖1是本發(fā)明的側(cè)流測定設(shè)備的一個實施方案的透視圖；圖2是可以根據(jù)本發(fā)明使用的夾心測定形式的一個實施方案的示意圖；圖3是可以根據(jù)本發(fā)明使用的間接測定形式的一個實施方案的示意圖；以及圖4是可以根據(jù)本發(fā)明使用的竟?fàn)幮詼y定形式的一個實施方案的示意圖。附圖標(biāo)記在本說明書和附圖中的重復(fù)使用意味著其代表本發(fā)明的相同或類似特征或元件。代表性實施方案詳述定義正如本文所用的，術(shù)語"分析物"通常是指待檢測的物質(zhì)。例如，分析物可包括抗原性物質(zhì)、半抗原、抗體以及這些物質(zhì)的組合。分析物包括但不限于毒素、有機(jī)化合物、蛋白質(zhì)、肽、微生物、氨基酸、核酸、激素、類固醇、維生素、藥物(包括那些為了治療目的而施用的藥物和那些為了違法目的而施用的藥物)、藥物中間體或副產(chǎn)物、細(xì)菌、病毒顆粒以及任何上述物質(zhì)的代i射物或抗體。一些分析物的具體實例包括鐵蛋白；肌酸激酶MB(CK-MB);地高辛；苯妥英；苯巴比妥；卡馬西平；萬古霉素；慶大霉素；茶堿；丙戊酸；奎尼定；促黃體生成激素(LH);促卯泡激素(FSH);雌二醇、黃體酮；C-反應(yīng)蛋白；脂籠蛋白(lipocalins);IgE抗體；細(xì)胞因子；維生素B2微球蛋白；糖化血紅蛋白(Gly.Hb);氫化可的松；毛地黃毒苷；N-乙酰普魯卡因酰胺(NAPA);普魯卡因酰胺；風(fēng)滲抗體，例如風(fēng)滲-IgG和風(fēng)滲IgM;弓形體病抗體，例如弓形體病IgG(Toxo-IgG)和弓形體病IgM(Toxo-IgM);睪酮；水楊酸鹽；對乙酰氨基酚；乙肝病毒表面抗原(HBsAg);乙肝核心抗原的抗體，例如抗-乙肝核心抗原IgG和IgM(抗-HBC);人免疫缺陷病毒1和2(HIV1和2);人T-細(xì)胞白血病病毒1和2(HTLV);乙肝e抗原(HBeAg);乙肝e抗原的抗體(抗-HBe);流感病毒；促曱狀腺素(TSH);曱狀腺素(T4);全三碘曱狀腺原氨酸(全T3);游離三碘曱狀腺原氨酸(游離T3);癌胚抗原(CEA);脂蛋白，膽固醇，和甘油三酯；以及oc-胎兒球蛋白(AFP)。濫用藥物和受控物質(zhì)包括但不限于安非他明；曱基安非他明；巴比妥酸鹽，例如異戊巴比妥、司可巴比妥、戊巴比妥、苯巴比妥和巴比妥；苯二氮雜類，例如利眠寧和安定；大麻素類，例如印度大麻和大麻；可卡因；芬太尼；LSD;安眠酮；鴉片制劑，例如海洛因、嗎啡、可待因、二氬嗎啡酮、氫可酮、美沙酮、氧可酮、氧嗎啡酮和鴉片；苯環(huán)利定；以及丙氧吩。其它可能的分析物在Everhart等人的U.S.6,436,651和Tom等人的U.S.4,366,241中有所記載。本文所用術(shù)語"測試樣品"通常是指被懷疑含有分析物的生物材料。測試樣品可以來自任何生物源，例如生理流體，包括血液、組織液、唾液、眼晶狀體液、腦脊髓液、汗液、尿液、乳液、腹水、粘液、鼻液、痰、滑液、腹膜液、陰道液、月經(jīng)、羊膜液、精液等等。除了生理流體，也可以使用其它的液體樣品，例如用于實施環(huán)境或食品測定的水、食品等。此外，懷疑含有分析物的固體材料也可用作測試樣品。測試樣品可以從生物源獲得后直接使用，或者在預(yù)處理后使用以改良樣品的特性。例如預(yù)處理可包括用血液制備血漿、稀釋粘稠液等等。預(yù)處理方法還包括過濾、沉淀、稀釋、蒸餾、混合、濃縮、干護(hù)L成分的滅活、以及添加試劑、溶菌等等。而且，有益的是，將固體測試樣品改變成液態(tài)介質(zhì)或者釋放分析物?，F(xiàn)在詳細(xì)參照本發(fā)明的多個不同實施方案，其中的一個或多個實例在以下列出。每個實例都是為了解釋本發(fā)明，而對本發(fā)明沒有限定作用。事實上，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，在不脫離本發(fā)明的范圍或精神的情況下能夠?qū)Ρ景l(fā)明作出多種修改和變型。例如，作為一種實施方案的一成員而闡述或描述的特征可用在另一種實施方案上，^v而產(chǎn)生又一種實施方案。因而，本發(fā)明意在覆蓋這樣的修改和變型，即它們在所附的權(quán)利要求書及其等同方式的范圍內(nèi)。總體上，本發(fā)明涉及診斷性試驗試劑盒，其中采用了側(cè)流測定設(shè)備以及用于4企測樣品內(nèi)測試分析物的多個測定試劑。所述測定試劑包4舌能夠產(chǎn)生表明測試樣品中測試分析物存在與否或者數(shù)量的檢測信號的檢測探針。為了進(jìn)一步提高檢測的準(zhǔn)確度，還使用了能夠產(chǎn)生表明校正分析物存在與否或者數(shù)量的校正信號的校正探針。所述校正信號可以用來校正所述檢測信號。校正分析物通常或者對于測試樣品是異源性的或者以恒定的濃度存在，這樣就較容易區(qū)分測試分析物和校正分析物。而且，通常還希望校正分析物表現(xiàn)出類似于測試分析物的與pH值、溫度、鹽濃度等條件相關(guān)的降解性質(zhì)(或者隨時間的活性損失)。以這種方式，校正分析物在相同的反應(yīng)條件和存》文時間下表現(xiàn)行為相似，使得校正分析物的才交正曲線與測試分析物的校正曲線基本上相似。如果需要的話，例如，才交正分析物可以是與測試分析物相同的蛋白質(zhì)家族的成員。在一種實施方案中，測試分析物為C反應(yīng)蛋白("CRP")，它是一種與肺炎鏈球菌的體細(xì)胞C多糖形成沉淀的球蛋白。CRP屬于"五聚環(huán)蛋白(pentraxin)"蛋白質(zhì)家族，它們是寡聚血漿蛋白質(zhì)，是具有五個非共價連接的亞成員的五角環(huán)狀對稱結(jié)構(gòu)。"五聚環(huán)蛋白，，家族有兩個常見分支，即"CRP樣，，蛋白和血清淀粉樣P("SAP")蛋白。與膽堿磷酸結(jié)合的蛋白質(zhì)被認(rèn)為是CRP樣的，而與碳水化合物成員結(jié)合的蛋白質(zhì)被認(rèn)為是SAP樣的。因此，在CRP作為測試分析物的實施方案中，所選擇的校正分析物可以是五聚環(huán)蛋白家族的成員，甚至更希望是與膽堿磷酸結(jié)合的五聚環(huán)蛋白。這種膽堿磷酸結(jié)合的五聚環(huán)蛋白的一些實例包括但不限于五聚環(huán)蛋白3("PTX3")、神經(jīng)元五聚環(huán)蛋白1、以及神經(jīng)元五聚環(huán)蛋白2。參見例^口，Arteriosclerosis,ThrombosisandVascularBiology:ProductionoftheLongPentraxinPTX3inAdvancedAtheroscleroticPlaques;MichaelS.Rolphet.al;2002;22:e10。然而，4交正分沖斤物并非必須是與測試分析物相同家族的成員。事實上，許多應(yīng)用需要較低水平的校正準(zhǔn)確度，因此可以采用較廉價和更容易獲得的校正分析物。在一種實施方案中，例如，針對CRP的校正分析物可以是選自非五聚環(huán)蛋白家族(例如，二聚體、三聚體等)的蛋白質(zhì)，例如白蛋白、牛血清蛋白(BSA)、P-酪蛋白或者h(yuǎn)CG,所有這些被認(rèn)為具有類似于CRP的降解曲線。質(zhì)。任何能夠產(chǎn)生在視覺上或通過儀器設(shè)備可測得的信號的物質(zhì)都可用作檢測或校正探針。合適的可4企測物質(zhì)可包括，例如發(fā)光化合物(例如熒光、磷光等等)；放射性化合物；可見化合物(例如有色染料或金屬物質(zhì)，如金)；脂質(zhì)體或其它含有信號生成物質(zhì)的嚢泡；酶和/或底物等等。其它合適的可檢測物質(zhì)記載于Jou等人的U.S.5,670,381和Tarcha等人的U.S.5,252,459中，本文出于所有目的而引入它們的全文作為參考。如果可檢測物質(zhì)是有色的，則理想的電磁輻射是互補(bǔ)波長的光。例如，藍(lán)色的檢測探針強(qiáng)烈地吸收紅光。在一些實施方案中，可檢測物質(zhì)可以是能產(chǎn)生光學(xué)可檢測信號的發(fā)光化合物。例如，合適的熒光分子可包括但不限于，熒光素、銪螯合物、藻膽蛋白、羅丹明，以及其衍生物和類似物。其它合適的熒光化合物有半導(dǎo)體納米晶體，通常稱作"量子點"。例如，所述納米晶體可包含通式為CdX的核心，其中X為Se、Te、和S等等。納米晶體還可以由通式為YZ的包被殼所鈍化，其中Y是Cd或者Zn,Z是S或Se。其它合適的半導(dǎo)體納米晶體實例還可以記載于Barbera-Guillem等人的U.S.6,261,779和Dapprich的U.S.6,585,939中,本文出于所有目的而引入它們的全文作為參考。此外，合適的磷光化合物可包括一種或多種金屬的金屬配合物，例如釕、鋨、錸、銥、銠、柏、銦、釔、鉬、锝、銅、鐵、鉻、鵠、鋅等等。尤其優(yōu)選的是釕、錸、鋨、鉑和鈀。金屬配合物可包含一個或多個有助于該配合物在含水或非含水環(huán)境中溶解的配體。例如，配體的一些合適實例包括但不限于，吡啶、吡嗪、異煙酰胺、咪唑、聯(lián)吡啶、三聯(lián)吡咬、菲咯啉；聯(lián)吡啶并吩嗪；卟啉、卟吩以及其衍生物。所述配體可以例如，由烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、羧酸根、曱醛(carboxaldehyde)、酰胺、氰基、氨基、羥基、亞氨基、羥基羰基、氨基羰基、脒、胍鏡、酰脲基、含硫基團(tuán)、含磷基團(tuán)、N-羥基-琥珀酰亞胺的羧酸酯所取代。外啉和吟吩金屬配合物具有用亞甲橋偶聯(lián)在一起的吡咯基，/人而與金屬螯合的內(nèi)部孔洞形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。這些分子中的許多在室溫下在合適溶劑(例如水)中以及無氧環(huán)境下表現(xiàn)出強(qiáng)烈的磷光性質(zhì)。能夠表現(xiàn)出磷光性質(zhì)的一些合適卟啉配合物包括但不限于，鉑(n)糞卟啉-1和m，把(n)糞口卜啉，釕糞p卜啉，鋅(n)-糞卟啉-i，及其衍生物等等。類似地，能夠表現(xiàn)出磷光性質(zhì)的一些合適卟吩配合物包括但不限于，四一meso-氟苯基葉喻柏(II)和四-meso—氟苯基口卜p分釔(II)。還有其它合適的"、啉和/或p卜吩配合物記載于Schmidt等人的U.S.4,614,723;Hendrix的U.S.5,464,741;Somi的U.S.5,518,883;Ewart等人的U.S.5,922,537;Sagner等人的U.S.6,004,530;以及Ponomarev等人的U.S.6，582，930中，本文出于所有目的而引入它們的全文作為參考。還可以利用聯(lián)吡啶金屬配合物作為磷光化合物。合適的聯(lián)吡啶配合物的一些實例包括但不限于，二[(4,4'-曱氧基)-2,2，-聯(lián)吡咬]2-[3-(4-曱基-2,2，-聯(lián)吡啶-4-基)丙基]-1,3-二氧戊環(huán)釕(II);二(2,2'聯(lián)吡啶)[4-(丁-1-醛)4，-甲基-2,2'-聯(lián)吡啶]釕(II);二(2,2'聯(lián)吡啶)[4-(4'-曱基-2,2，—聯(lián)吡啶-4，-基)-丁酸]釕(II);三(2，2，聯(lián)吡啶)釕(II);(2,2，-聯(lián)吡啶)[二-二(1,2-二苯基膦基)亞乙基]2-[3-(4-曱基-2,2，-聯(lián)吡啶-4，-基)丙基]-1,3-二氧戊環(huán)鋨(II);二(2,2，-聯(lián)吡啶)[4-(4，-曱基-2,2，-聯(lián)吡啶)-丁胺]釕(II);二(2,2，聯(lián)吡啶)[1-溴-4(4，-曱基-2,2,-聯(lián)吡咬-4-基)-丁烷]釕(II);二(2,2，-聯(lián)吡啶)馬來酰亞氨基己酸；4-曱基-2,2，-聯(lián)吡啶-4，-丁酰胺釕(II)等等?？杀憩F(xiàn)出磷光性質(zhì)的其它合適的金屬配合物還記載于Richter等人的U.S.6,613,583;Massey等人的U.S.6,468,741;Meade等人的U.S.6,444,423;Massey等人的U.S.6,362,011;Bard等人的U.S.5,731,147;以及Massey等人的U.S.5，591,581在一些情況下，發(fā)光化合物可能具有較長的發(fā)光壽命和較大的"斯托克司頻移"。術(shù)語"斯托克司頻移"通常定義為，發(fā)光輻射的譜線或波段移向比激發(fā)線或波段更長的發(fā)射波長。較大的斯托克司頻移使得發(fā)光化合物的激發(fā)波長保持遠(yuǎn)離其發(fā)射波長，并且由于激發(fā)和發(fā)射波長之間的較大差異使得較容易從發(fā)射信號中去除反射的激發(fā)輻射，因而是人們所希望的。而且，大斯托克司頻移還使得來自樣品中的發(fā)光分子和/或蛋白質(zhì)或膠體的光散射的干擾降到最低，這些蛋白質(zhì)或者膠體存在于一些體液(例如血液)中。此外，大斯托克司頻移還使得對用來消除背景干擾的昂貴、高精度濾光片的需要最小化。例如，在一些實施方案中，發(fā)光化合物具有大于大約50納米的斯托克司頻移，在一些實施方案中大于大約100納米，而在一些實施方案中為大約100到大約350納米。例如，具有大斯托克司頻移的示例性熒光化合物包括釤(Sm(III))、鏑(Dy(III))、銪(Eu(III))和鋱(Tb(III))的鑭系螯合物。在帶、長壽命發(fā)光。通常，由于發(fā)色團(tuán)位于分子中的鑭系元素附近，所以螯合物具有強(qiáng)烈的紫外發(fā)射波帶。由發(fā)色團(tuán)激發(fā)之后，激發(fā)能量可以從激發(fā)的發(fā)色團(tuán)傳遞到鑭系元素上。之后是該鑭系元素的熒光發(fā)射特性。例如，與熒光素僅為大約28納米相比，銪螯合物的斯托克司頻移在大約250到大約350納米。同樣，與其它熒光標(biāo)記的大約1到大約IOO納秒的壽命相比，銪螯合物的熒光壽命很長，其壽命大約為100到大約1000微秒。此外，這些螯合物具有窄發(fā)射波譜，通常在大約50V。的發(fā)射處帶寬小于大約10納米。一種合適的銪螯合物是N-(對異硫氰酸根合千基)二亞乙基三胺四乙酸-Eu"。此外，本發(fā)明中還可以使用在水溶液或懸液中惰性、穩(wěn)定并且具有固有熒光的鑭系元素螯合物，從而無需嚢泡形成試劑，它們通常用來保護(hù)在水溶液或懸液中具有有限溶解度并存在猝滅問題的螯合物。這種螯合物的一個實例是4-[2-(4-異硫氰酸根合苯基)乙炔基]-2,6-二([N,N-二(羧曱基)氨基]甲基)吡啶[參見Lovgren，T.等;Clin.Chem.42,1196-1201(1996)]。一些鑭系元素螯合物還表現(xiàn)出特別高的信噪比。例如，一種此螯合物是四配位基P-二酮化物-銪螯合物[參見Yuan,J.和Matsumoto,K.;Anal.Chem.70,596—601(1998)]。除了上述熒光標(biāo)記之外，適用于本發(fā)明的其它標(biāo)記記載于Mullinax等人的U.S.6,030,840;Davidson的U.S.5,585,279;Singer等人的U.S.5,573,909;Wieder等的U.S.6,242,268;Hemmila等的U.S.5,637,509,可檢測物質(zhì)，例如如上所述，可以單獨使用或者與顆粒(有時稱為"珠"或"微珠")聯(lián)合使用。例如，可以使用天然形成的顆粒，例如胞核、支原體、質(zhì)粒、質(zhì)體、哺乳動物細(xì)胞(例如紅細(xì)力包影)、單細(xì)胞微生物(例如細(xì)菌)、多糖(例如瓊脂糖)等等。此外，也可以利用合成顆粒。例如，在一種實施方案中，采用了標(biāo)記有熒光或有色染料的乳膠微粒。盡管本發(fā)明中可以使用任何合成顆粒，但所述顆粒典型地是由以下物質(zhì)構(gòu)成聚苯乙烯、丁二烯苯乙烯、苯乙烯丙烯酸-乙烯基三聚物、聚甲基丙烯酸甲酯、聚曱基丙烯酸乙酯、苯乙烯-馬來酐共聚物、聚乙酸乙烯酯、聚乙烯基嘧啶、聚二乙烯苯、聚對苯二甲酸丁二醇酯、丙烯腈、氯乙烯-丙烯酸酯等等，或者其醛、羧基、氨基、羥基、或者酰肼衍生物。其它合適的顆粒記載于Jou等人的U.S.5，670,381和Tarcha等人的U.S.5,252,459中。市場上可買到的合適焚光顆粒的實例包括MolecularProbes,Inc.出售的商品名為"FluoSphere"(Red580/605)和"TmnsfluoSphere"(543/620)的焚光羧化微球，以及同樣由MolecularProbes,Inc.出售的"TexasRed",和5—、6—羧基四甲基羅丹明。此外，市場上可買到的合適的有色乳膠微粒實例包括Bang'sLaboratory,Inc.出售的羧化乳膠微珠。本發(fā)明中也可以采用金屬顆粒(例如金顆粒)。當(dāng)使用時，顆粒的形狀一般可以變化。在一種特別的實施方案中，例如，所述顆粒是球狀的。然而，應(yīng)當(dāng)明白的是本發(fā)明也可以構(gòu)思其它的形狀，例如板狀、棒狀、盤狀、條狀、管狀、不規(guī)則形狀等等。此外，顆粒的大小也可以有所不同。例如，顆粒的平均尺寸(例如直徑)范圍可以在大約0.1納米到大約IOOO微米，在一些實施方案中，大約O.l納米到大約100微米，而在一些實施方案中，在大約1納米到大約10微米。通常希望以一些方式改變檢測和校正探針使其更容易與各自的分析物或受體材料結(jié)合。在這種情況下，探針可以通過粘附于其上的某種特異性結(jié)合成員改性以形成綴合探針。特異性結(jié)合成員通常稱為特異性結(jié)合對的一員，即兩個不同分子，其中一個分子化學(xué)和/或物理結(jié)合到第二個分子上。特異性結(jié)合成員的選擇通常依賴于目標(biāo)測試分析物和相應(yīng)的校正分析物。為保證獨立的測定性能，通常希望檢測探針而不是校正探針與不同的特異性結(jié)合對的成員綴合。在這種方式下，綴合的校正探針優(yōu)先地與校正分析物(夾心和間接測定形式)或者針對校正分析物的特異性結(jié)合成員(竟?fàn)帨y定形式)結(jié)合。然而，綴合的校正探針通常不與測試分析物或針對測試分析物的特異性結(jié)合成員相結(jié)合。這樣，可以同時進(jìn)行針對測試分析物和校正分析物的測定，而不用擔(dān)心有實質(zhì)性的交叉反應(yīng)，從而使校正分析物測定可用于校正測試抗原。并且，與校正分析物和待測分析物之間的關(guān)系類似，通常希望在有關(guān)pH值、溫度、鹽濃度、存放時間等的條件下，所述特異性結(jié)合成員表現(xiàn)出類似的降解情況?？捎糜诒景l(fā)明的合適免疫反應(yīng)性特異性結(jié)合成員的一些實例包括，但不限于，抗原、半抗原、適配體、抗體(初級或次級)，和其配合物，包括那些通過重組DNA方法或肽合成形成的物質(zhì)?？贵w可以是單克隆或多克隆抗體、重組蛋白或其混合物或片斷，也可以是抗體和其它特異性結(jié)合成員的混合物。這些抗體的制備細(xì)節(jié)和其用作特異性結(jié)合成員的適用性是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。其它常見的特異性結(jié)合對包括但不限于，生物素和抗生物素蛋白(或其衍生物)，生物素和鏈霉抗生物素蛋白，碳水化合物和凝集素，互補(bǔ)核苷酸序列(包括在DNA雜交測定中用來檢測靶核酸序列的探針和捕獲核酸序列)，互補(bǔ)肽序列，包括通過重組方法所形成的那些，效應(yīng)物和受體分子，激素和激素結(jié)合蛋白，酶輔因子和酶，酶抑制因子和酶等等。此外，特異性結(jié)合對可包括原特異性結(jié)合成員的類似物。例如，可以使用分析物的衍生物或片段，即，分析物-類似物，只要其具有至少一個與分析物相同的抗原決定基即可。特異性結(jié)合成員通?？梢岳萌魏胃鞣N公知的技術(shù)與探針相連。例如，利用羧基、氨基、醛基、溴乙?；?、碘乙?；?、硫醇基、環(huán)氧基和其它反應(yīng)性或連接官能團(tuán)，以及殘余自由基和自由基陽離子，可以實現(xiàn)蛋白質(zhì)的偶聯(lián)反應(yīng)，從而可以實現(xiàn)特異性結(jié)合成員與檢測探針(例如，顆粒)的共價連接。表面官能團(tuán)還可以作為官能化共聚單體被引入，因為所述探針表面可能含有較高表面濃度的極性基團(tuán)。此外，盡管所述探針通常在合成后，例如與聚(苯硫酚)合成后進(jìn)行了功能化，但所述探針也可以直接與蛋白共價連接而無需進(jìn)一步修飾。例如，在一種實施方案中，綴合的第一步是使用碳二亞胺活化探針表面的羧基。在第二步中，活化的羧酸基團(tuán)與抗體的氨基反應(yīng)形成酰胺鍵。所述活化和/或抗體偶聯(lián)過程可以在緩沖液中進(jìn)行，例如磷酸鹽緩沖鹽液(PBS)(例如，pH值7.2)或2-(N-嗎啉代)乙烷磺酸(MES)(例如，pH值5.3)。然后將得到的探針與乙醇胺接觸，例如，用以阻斷任何殘余的活性位點?？傊撨^程形成了綴合的探針，其中抗體與所述探針共價連接。除了共價連接外，本發(fā)明中還可以采用其它的連接技術(shù)，例如物理吸附。無論其采用何種方式形成，所述檢測探針和校正探針通常在測試樣品應(yīng)用之前設(shè)置在測定設(shè)備上。所述探針預(yù)先應(yīng)用到測定設(shè)備具有多種好處。例如，預(yù)先應(yīng)用無需之后的使用者將反應(yīng)物進(jìn)行處理和與待測樣品或稀釋液混合。這在使用者通常不是訓(xùn)練有素的技術(shù)人員或醫(yī)務(wù)專家的采樣現(xiàn)場即時分析中尤為有用。在一些實施方案中，例如，所述檢測和校正探針設(shè)置在測試樣品應(yīng)用位置的下游。通過這種方式，測試樣品能夠根據(jù)應(yīng)用與所述探針混合和選擇性地重懸?；蛘?，所述探針可以設(shè)置在測試樣品應(yīng)用位置的上游。例如，可以采用稀釋劑來重懸所述探針以進(jìn)4亍測定。類似地，校正分析物也可以在應(yīng)用所述測試樣品之前設(shè)置在所述測定設(shè)備上。盡管具體的位置可能有所不同，但通常希望所述校正分析物在檢測探針和校正探針的上游應(yīng)用。通過這種方式，校正分析物在接觸校正探針之前能夠容易地與測試樣品混合，從而增強(qiáng)它們之間的結(jié)合。校正分析物也可以在應(yīng)用到所述測定設(shè)備之前與測試才羊品混合。這樣，在進(jìn)行測定之前，所述校正分析物與測試分析物處于基本上相同的條件下。這可以進(jìn)一步優(yōu)化校正精度。參見圖1,現(xiàn)在將更詳細(xì)地描述一種側(cè)流測定設(shè)備20的實施方案，其可以與根據(jù)本發(fā)明的內(nèi)部校正系統(tǒng)結(jié)合使用。如圖所示，設(shè)備20包含任選地由剛性材料21支撐著的多孔膜23。通常，多孔膜23可以由測試樣品能夠通過的任何各種材料制成。例如，用來形成多孔膜23的材料可包括但不限于，天然的、合成的、或者天然存在并被合成改性的材料，例如多糖(例如，纖維素材料，如紙和纖維素衍生物，像醋酸纖維素和硝基纖維素)；聚醚砜；聚乙烯；尼龍；聚偏二氟乙烯(PVDF);聚酯；聚丙烯；氧化硅；無機(jī)材料，如去活氧化鋁、硅藻土、MgS04或其它均勻分散在多孔聚合物基質(zhì)中的無機(jī)細(xì)碎材料，其中所述聚合物例如氯乙烯、氯乙烯-丙烯共聚物和氯乙烯-醋酸乙烯酯共聚物；布，包括天然存在的(例如棉)和合成的(例如尼龍或人造纖維)；多孔凝膠，例如硅膠、瓊脂糖、葡聚糖和明膠；聚合物膜，例如聚丙烯酰胺等等。在一種特別的實施方案中，所述多孔膜23是由硝基纖維素和/或聚酯砜材料制成的。應(yīng)當(dāng)理解，術(shù)語"硝基纖維素"是指纖維素的硝酸酯，其可以是單獨的硝基纖維素，或者是硝酸與其它酸，例如具有1-7個碳原子的脂族羧酸的混合酯。多孔膜23的尺寸和形狀通?？梢杂兴煌?，如本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易得知的那樣。例如，多孔膜條帶的長度可以從大約10到大約100毫米，在一些實施方案中為大約20到大約80毫米，而在一些實施方案中，為大約40到大約60毫米。膜條帶的寬度范圍也可以在大約0.5到大約20毫米，在一些實施方案中，為大約1到大約15毫米，而在一些實施方案中，為大約2到大約10毫米。同樣，膜條帶厚度通常足夠小以允許基于透過的檢測。例如，所述膜條帶的厚度可以小于大約500微米，在一些實施方案中，小于大約250微米，而在一些實施方案中，小于大約150微米。如上所述，載體21承載著多孔膜23。例如，如圖l所示，載體21可以設(shè)置成直接鄰接多孔膜23,或者可以在多孔膜23和載體21之間設(shè)置一個或更多中間層。無論怎樣，載體21通常都可由能夠承載多孔膜23的任何材料構(gòu)成。載體21可以由可透光的材料形成，例如透明的或光漫射的(例如半透明)材料。而且，通常希望載體21是不透液的，這樣液體流過膜23時不會漏過載體21。合適的載體材料的實例包括但不限于，玻璃；聚合材料，例如聚苯乙烯，聚丙烯，聚酯(例如，Mylar膜)，聚丁二烯，聚氯乙烯，聚酰胺，聚碳酸酯，環(huán)氧化物，甲基丙烯酸酯，和聚密胺(polymelamme)等等。為了使多孔膜23具有足夠的結(jié)構(gòu)化背襯，通常將載體21選擇成具有特定的最小厚度。同樣，載體21的厚度通常也不會大到負(fù)面影響其光學(xué)屬性。因而，例如，載體21的厚度范圍可以在大約100到大約5000微米，在一些實施方案中，為大約150到大約2000微米，而在一些實施方案中，為大約250到大約1000微米。例如一種適合的膜條帶，厚度大約為125微米，可以購自MilliporeCorp.ofBedford,Massachusetts,名為"SHF180UB25"。正如本領(lǐng)域所公知，多孔膜23可以澆注在載體21上，其中可以將得到的疊層沖切成預(yù)期的大小和形狀?；蛘?，所述多孔膜23可以僅利用諸如粘合劑之類的方式層壓到載體21上。在一些實施方案中，是將硝基纖維素或尼龍多孔膜粘貼在Mylar⑧膜上。粘合劑用于將多孔膜粘結(jié)到Mylar⑧膜上，例如壓力敏感型粘合劑。這類層壓結(jié)構(gòu)能夠從MilliporeCorp.ofBedford,Massachusetts買到。還有其它合適的層壓測定設(shè)備結(jié)構(gòu)的實例記載于Durley,III等人美國專利US5,075,077中，本文出于所有目的而引入它們的全文作為參考。設(shè)備20還可以包含吸收墊28。所述吸收墊28通常接收已經(jīng)通過整個多孔膜23的流體。正如本領(lǐng)域內(nèi)所公知，吸收墊28可以幫助促進(jìn)毛細(xì)作用和流體流過力莫23。為了在測試樣品中啟動分析物的檢測，使用者可以直接將測試樣品加到所述多孔膜23的一成員，通過其樣品然后沿著圖1中箭頭L所示的方向移動?；蛘?，可以先將測試樣品加到與多孔膜23流體連通的樣品墊24上。可以用來形成樣品墊24的一些適宜材料包括但不限于，硝基纖維素素、纖維素、多孔聚乙烯墊和玻璃纖維濾紙。如果需要的話，樣品墊24還可以含有以擴(kuò)散或非擴(kuò)散的形式附著于其上的一種或多種測定預(yù)處理試劑。例如，在一種實施方案中，可以將校正分析物設(shè)置在樣品墊24上以便其與應(yīng)用于其上時的測試樣品相接觸。在圖示的實施方案中，測試樣品從樣品墊24移動到設(shè)置成與該樣品墊24—端連通的綴合墊22上。綴合墊22由能夠通過測試樣品的材料制成。例如，在一種實施方案中，綴合墊22由玻璃纖維制成。雖然僅示出一個綴合墊22，但是應(yīng)該理解，本發(fā)明中也可以使用多個綴合墊。在本發(fā)明的一個特別實施方案中，檢測和校正探針(未示出)被應(yīng)用于所述綴合墊22。應(yīng)用之后，使探針干燥以防止其在上面移動。綴合墊22提供了用于沉積探針的基質(zhì)，以使它們在重新水合時可以自由地遷移。更具體來說，當(dāng)液體測試樣品接觸探針時，它們重新水合并發(fā)生重懸和/或重新溶解。當(dāng)然，應(yīng)當(dāng)明白的是，所述探針也可以應(yīng)用到測定設(shè)備20的其它不同位置，例如直接應(yīng)用到膜23上，只要它們在與測試樣品接觸后能夠被其重新水合。再參見圖1,多孔膜23也限定了經(jīng)構(gòu)造用以進(jìn)行測定的不同區(qū)域。例如，多孔膜23限定了含有第一受體材料的檢測區(qū)31,該第一受體材料能夠與通過了膜23長度的綴合檢測探針(或其配合物)相結(jié)合。所述第一受體材料固定在多孔膜23上，其可以選自與上述特異性結(jié)合成員相同的材料，包括，例如，抗原；半抗原；抗體結(jié)合蛋白，例如蛋白A，蛋白G,或蛋白A/G;中性抗生物素蛋白(一種脫糖基化抗生物素蛋白衍生物)，抗生物素蛋白(66000道爾頓的高度陽離子型糖蛋白)，鏈抗生物素蛋白(52800道爾頓的非糖基化蛋白)，或者captavidin(—種灘化抗生物素蛋白衍生物)；初級或次級抗體，及其衍生物或片段。在一些實施方案中，第一受體材料是對在測試樣品中的抗原有特異性的抗體。例如，在夾心型測定形式中，所述第一受體材料可以用作針對分析物和綴合檢測探針之間形成的配合物的固定結(jié)合位點。尤其是，分析物例如抗體、抗原等，通常具有兩個或多個結(jié)合位點(即，抗原決定基)。在到達(dá)檢測區(qū)31時，這些結(jié)合位點之一被綴合探針的特異性結(jié)合成員所占據(jù)。然而，分析物的自由結(jié)合位點可以結(jié)合到固定的第一受體材料上。在與所述固定的受體材料結(jié)合時，所述配合探針便形成了一種新的三元夾心配合物。測定設(shè)備20還包括校正區(qū)32。在該實施方案中，校正區(qū)32形成于多孔膜23上，并設(shè)置在檢測區(qū)31的下游。然而，可替代地，校正區(qū)32也可以設(shè)置在檢測區(qū)31的上游。校正區(qū)32具有第二受體材料，其能夠與通過了膜23長度的綴合校正探針(或其配合物)相結(jié)合。第二受體下:第^受體材料優(yōu)先與校正探針(或其配合物)結(jié)合。例如，當(dāng)校l分析物為抗原時，第二受體材料可以是抗體(例如，夾心或竟?fàn)幮詼y定形式)或抗原(例如，間接測定形式)。而且，如上所述，通常希望第一和第二受體材料表現(xiàn)出相似的與pH值、溫度、鹽濃度、存放時間等條件相關(guān)的降解行為。檢測區(qū)31和校正區(qū)32可以分別具有任意數(shù)量的不同檢測區(qū)域，使得使用者可以更好地確定測試樣品中分析物的濃度。每個區(qū)域可以包含相同的受體材料，或者可以包含不同的受體材料。例如，所述區(qū)可以包括兩個或多個不同的區(qū)域(如線、點等)。所述區(qū)域可以設(shè)置成基本上垂直于測試^^羊品流動通過測定i殳備20方向的線條形式。同^H在一些實施方案中，所述區(qū)域可以設(shè)置成基本上平行于測試樣品流動通過測定設(shè)備20方向的線條形式。當(dāng)希望半定量或定量測定測試樣品中分析物的濃度時，可以將檢測區(qū)31處所生成的檢測信號強(qiáng)度"Is"與校正區(qū)32處所生成的校正信號強(qiáng)度相比較。例如，在一些實施方案中(例如，夾心測定形式)，分析物的量與Is與Ic之比成正比。在另一些實施方案中(例如，竟?fàn)幮院烷g接測定形式)，超出預(yù)定基礎(chǔ)量的分析物的量與Is與Ic之比成反比。基于該比例所在的范圍，可以測定出分析物的大致濃度范圍。如果希望的話，可以針對已知的分析物濃度范圍繪制Is與Ic之比與分析物濃度關(guān)系的曲線圖，從而形成校正曲線。為了測定未知待測樣品中超出預(yù)定基礎(chǔ)量的分析物的量，則可以根據(jù)校正曲線將信號比轉(zhuǎn)換成分析物的濃度。應(yīng)當(dāng)注意的是，也可以繪制Is與Ic之間的替代性數(shù)學(xué)關(guān)系與分析物濃度關(guān)系的曲線，從而形成校正曲線。例如，在一種實施方案中，可以繪制V(Is+L)值與分析物濃度的關(guān)系曲線，從而形成校正曲線。不管靠并且i敏度較高的i量或半定i結(jié)果。、'z八°如果需要的話，在一些實施方案中可以使用光學(xué)讀取設(shè)備來測量檢測區(qū)31和/或校正區(qū)32處的探針強(qiáng)度。此光學(xué)讀取設(shè)備的實際構(gòu)造和結(jié)構(gòu)通常可以有所不同，本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易理解。例如，可以利用的光學(xué)檢測技術(shù)包括但不限于，發(fā)光(例如熒光、磷光等)，吸光度(例如焚光或非熒光)，衍射等等。例如，在Kaylor等人的公開號為2003/0119202的美國專利申請中描述了一種適合的反射分光光度計，本文出于所有目的而引入它們的全文作為參考。在另一種實施方案中，可以使用反射模式分光熒光計來檢測顯出熒光的探針的存在。例如，在Song等人的公開號為2004/0043502的美國專利申請中描述了適合的分光熒光計和相關(guān)的檢測技術(shù)，本文出于所有目的而引入它們的全文作為參考。同樣地，透射模式檢測系統(tǒng)也可以用來檢測所述檢測探針的存在。典型地，光學(xué)讀取設(shè)備包含能夠發(fā)射電磁輻射的照明源和能夠記錄信號(例如，透射或反射光，發(fā)射的焚光或磷光等)的檢測器。照明源可以是本領(lǐng)域中公知的能夠提供電磁輻射的任何設(shè)備，例如在可見或接近可見光(例如，紅外或紫外光)范圍內(nèi)的光。例如，可以用于本發(fā)明的合適照明源包括但不限于，發(fā)光二極管(LED)，閃光燈，冷陰極熒光燈，電致發(fā)光燈等等。所述照明可以是多路復(fù)合的和/或準(zhǔn)直的。在一些情況下，所述照明可以進(jìn)行脈沖調(diào)制以減小任何背景干擾。此外，照明可以是連續(xù)的或可以結(jié)合連續(xù)波(cw)和脈沖照明，其中將多個照明光束進(jìn)行了多路復(fù)合(例如，脈沖光束與CW光束相復(fù)合)，從而允許在cw源引起的信號與脈沖光源引起的信號之間允許信號區(qū)別。例如，在一些實施方案中，用LED(例如，砷化鋁鎵紅光二極管，或磷化鎵綠光二極管，磷砷化鎵綠光二極管，或者銦鎵氮化物紫/藍(lán)/紫外(UV)光二級管)作為脈沖照明源。適用于本發(fā)明的一種市場上可買到的合適UVLED激發(fā)二極管實例是ModelNSHU550E(NichiaCorporation),它在10毫安(3.5-3.9伏)的正向電流下發(fā)出750到1000微瓦的光能形成光束，其半峰值全寬為10度，峰值波長為370-375納米，光譜半寬為12納米。在一些情況下，照明源可以向所述測定設(shè)備提供漫射照明。例如，可以僅采用多點光源(例如LED)陣列來提供相對漫射的照明。能夠以相對廉價的方式提供漫射照明的另一種特別符合需要的照明源是電致發(fā)光(EL)設(shè)備。EL設(shè)備通常是一種采用夾在電極之間的發(fā)光材料(例如磷光顆粒)的電容結(jié)構(gòu)，至少一個所述電極是透明的以使得光漏出。在所述電極之間施加電壓可在發(fā)光材料之中生成變化的電場，其能引起發(fā)光材料發(fā)光。檢測器通?？梢允潜绢I(lǐng)域已知的能夠感測信號的任何設(shè)備。例如，所述檢測器可以是設(shè)置成空間分辨的電子成像檢測器。這種電子成像檢測器的一些實例包括高速線性電荷耦合(CCD)設(shè)備，電荷注入設(shè)備(CID)，互補(bǔ)金屬氧化物半導(dǎo)體(CMOS)設(shè)備等等。這些成像檢測器例如，通常是電子光傳感器的二維陣列，盡管也可以使用線性成像檢測器(例如，線性CCD檢測器)，其包括單線的檢測器像素或者光傳感器，例如用于掃描圖像的那些。每個陣列都包括一套已知的唯一位置，其可以稱為"地址"。在成像檢測器中的每個地址都被覆蓋一域(例如，通常成方形或矩形的區(qū)域)的傳感器所占據(jù)。這個區(qū)域通常稱為"像素，，或"像素區(qū)，，。例如，檢測器像素可以是CCD、CID或CMOS傳感器，或者其它可檢測或測量光的任何設(shè)備或傳感器。檢測器像素的大小可以有很大不同，在一些情況下其直徑或長度可以小到0.2微米。在另一些實施方案中，檢測器可以是缺乏空間分辨能力的光傳感器。例如，這種光傳感器的實例可包括光電倍增設(shè)備，光電二極管，例如雪崩光電二極管或硅光電二極管等等。有時硅光電二極管很有優(yōu)勢，因為其廉價、靈敏、能夠高速工作(上升時間短/高帶寬)，并且容易集成到大多數(shù)其它的半導(dǎo)體技術(shù)和單片電路中。此外，硅光電二極管物理尺寸小，這使得其很容易結(jié)合到與基于膜的設(shè)備一起使用的系統(tǒng)中。如果使用硅光電二極管，則發(fā)射信號的波長范圍可以在其靈敏度，即400到1100納米的范圍內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明，檢測和校正可以自動和/或手動進(jìn)4亍。例如，可以任選地采用微處理器來將檢測器的信號強(qiáng)度轉(zhuǎn)換成表明分析物濃度的定量或半定量結(jié)果，所述微處理器可包括存儲能力，以使使用者能夠重新調(diào)用最后的幾個結(jié)果。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道，可以采用任何合適的計算機(jī)可讀存儲設(shè)備，例如RAM,ROM,EPROM，EEPROM,閃存卡，數(shù)字視頻盤，Bernoulli磁帶等等。如果需要的話，可以將結(jié)果利用液晶(LCD)或LED顯示器傳送給使用者。參見圖2，現(xiàn)在將更詳細(xì)地描述一種利用夾心測定形式來檢測測試抗原A(例如CRP)是否存在的方法實施方案。首先，將校正抗原A*(例如，PTX3)預(yù)先應(yīng)用到樣品墊24上，并將綴合檢測探針41和綴合校正探針43預(yù)先應(yīng)用到綴合墊22上。例如，在一種實施方案中，檢測探針41是與CRP抗體(例如，CRPIgGi)綴合的染色顆粒，校正探針43是與PTX3抗體綴合的染色顆粒，所述PTX3抗體不會與其它五聚環(huán)蛋白家族成員(例如，鼠PTX3抗體(MNB4克隆))發(fā)生交叉反應(yīng)。為了啟動測定，將含有測試抗原A的測試樣品應(yīng)用于樣品墊22上，在此處其與一交正抗原A"昆合。測試抗原A和一交正抗原八*沿著方向"L"移動到綴合墊22上，在此處它們與檢測探針41和校正探針43混合。測試抗原A與檢測探針41結(jié)合形成分析物/探針配合物49，而校正抗原八*與校正探針43結(jié)合形成分析物/探針配合物50。然后所述配合物49和50移動到檢測區(qū)31，在該區(qū)域內(nèi)固定有第一受體材料51。例如，第一受體材料可以是不同于綴合檢測探針抗體(例如，抗CRPIgG2)的CRP抗體，或者是與綴合到檢測探針上的抗體相同的CRP抗體。配合物49與固定受體材料51上的可用結(jié)合位點結(jié)合。接著剩余配合物50移動到校正區(qū)32，在該區(qū)域內(nèi)固定有第二受體材料53。例如，第二受體材料可以是與綴合校正探針抗體(例如，鼠PTX3抗體的不同克隆)相同或不同的PTX3抗體。配合物50與固定受體材料53上的可用結(jié)合位點結(jié)合。然后測量檢測區(qū)31處捕獲的由檢測探針41產(chǎn)生的信號強(qiáng)度和在校正區(qū)32處捕獲的由校正探針43產(chǎn)生的信號強(qiáng)度。參見圖3，現(xiàn)在將更加詳細(xì)地描述利用間接測定形式來檢測測試抗原A是否存在的方法的另一種實施方案。在該實施方案中，檢測探針41與針對測試抗原A的抗體綴合，而校正探針43與針對校正抗原A"々抗體綴合。此外，第一受體材料51性質(zhì)上類似于測試抗原A,而第二受體材料"性質(zhì)上類似于校正抗原A^以這種方式，測試抗原A和第一受體材料51竟?fàn)幘Y合檢測探針41上的可用結(jié)合位點，而校正抗原八*和第二受體材料53竟?fàn)幘Y合校正探針43上的可用結(jié)合位點。同樣，參見圖4,現(xiàn)在將更加詳細(xì)地描述利用竟?fàn)帨y定形式來;f全測測試抗原A是否存在的方法的另一種實施方案。在該實施方案中，檢測探針41與性質(zhì)上類似于測試抗原A的抗原綴合，而校正探針43與性質(zhì)上類似于校正抗原A"々抗原綴合。此外，第一受體材料51是針對測試抗原A的抗體，第二受體材料53是針對校正抗原A1々抗體。以這種方式，測試抗原A和綴合檢測探針41竟?fàn)幍谝皇荏w材料51上的可用結(jié)合位點，而校正抗原八*和綴合校正探針43竟?fàn)幍诙荏w材料53上的可用結(jié)合位點。盡管上面描述了設(shè)備構(gòu)造的各種實施方案，但應(yīng)當(dāng)明白，本發(fā)明的設(shè)備通?？梢跃哂腥魏涡枰臉?gòu)造，并且無需包含所有的上述部件。例如，在Lambotte等人的U.S.5,395,754;Jou等人的U.S.5,670,381;Malick等人的U.S.6，194，220中描述了各種其它的設(shè)備構(gòu)造，本文出于所有目的而引入它們的全文作為參考。參考下面的實施例可以更好地理解本發(fā)明。實施例1證實了制備根據(jù)本發(fā)明的側(cè)流測試設(shè)備的能力。將長度大約30厘米的硝基纖維素多孔膜(HF120,購自Millipore,Inc.)層壓到載體卡片上。將C反應(yīng)蛋白的單克隆抗體固定在該多孔膜上形成檢測區(qū)。所述抗體來自BioPacific，Inc.(目錄號存A58040136P),濃度為1毫克每毫升。將P-HCG的單克隆抗體(1毫克每毫升)也固定在所述多孔膜上形成校正區(qū)。將纖維素芯吸墊(MilliporeCo.)與所述膜的一端(靠近校正區(qū)的)一起進(jìn)行層壓。然后將膜樣品在37。C的溫度下千燥1小時。將36微升綴合有抗CRP單克隆抗體(BiosPacific,Inc.,目錄號#A58110228P)的金顆粒，100微升綴合有抗a-hCG單克隆抗體的金顆粒，500毫升蔗糖水溶液(20%)和1200微升水混合形成顆粒懸液。綴合有抗CRP單克隆抗體的金顆粒的顆粒尺寸為40納米，光密度為50.2，購自BritishBiocellInternational綴合有抗a-hCG單克隆抗體的金顆粒顆粒尺寸為40納米，光密度為10.1，購自BritishBiocellInternational,Inc.。然后將所述顆粒懸液加載到30厘米長的玻璃纖維綴合墊(Millipore,Co.)上。之后在37。C干燥所述玻璃纖維墊2小時制成綴合墊。接著將該綴合墊層壓到所述多孔膜的另一端(靠近檢測區(qū)的)。將纖維素芯吸墊(MilliporeCo.)樣品墊進(jìn)一步層壓到所述綴合墊上。將層壓后的整個卡片切割成4毫米寬的側(cè)流測定設(shè)備。實施例2證實了根據(jù)本發(fā)明檢測CRP的能力。如實施例1所述制備五個側(cè)流設(shè)備(樣品1-5)。將含有60微升CRP(90納克每毫升)和60微升卩-hCG(50納克每毫升)的混合溶液施加到五個側(cè)流設(shè)備的每個的樣品墊上。在室溫下顯影30分鐘后，用反射分光光度計測量檢測區(qū)和校正區(qū)的色密度。每個區(qū)域的色強(qiáng)度列于下表1中。表l:色強(qiáng)度數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>Id的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和。/。cv(變化系數(shù)，或標(biāo)準(zhǔn)偏差與平均值的比)分別為92.111、2.33127和2.531。另一方面，WIc的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和。/。CV分別為0.9323、0.01081和1.1159。因此，如上所示，經(jīng)校正的信號強(qiáng)度比未經(jīng)校正的信號強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)偏差和％CV低得多。實施例3證實了根據(jù)本發(fā)明檢測CRP的能力。如實施例1所述制備十五個側(cè)流設(shè)備(樣品1-15)并分成三組。第一組存放在室溫下，第二組在65。C下加熱40分鐘，第三組在65。C下加熱210分鐘。將含有在具有l(wèi)%Tween20(ICIAmericas)的三羥甲基氨基甲烷緩沖液中的60微升CRP(100納克每毫升)和60微升(3-hCG(50納克每毫升)的混合溶液施加到十五個側(cè)流設(shè)備的每個的樣品墊上。在室溫下顯影30分鐘后，用反射分光光度計測量檢測區(qū)和校正區(qū)的色密度。每組色強(qiáng)度列于下表2-4中。表2:第一組的色強(qiáng)度數(shù)據(jù)樣品檢測區(qū)強(qiáng)度(Id)才全測區(qū)強(qiáng)度(Ic)194.30399.1060.95154293.98097.9330.9596494.71997.6180.97030490.33295.0880.94998593.34396.0320.97200Id的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和。/。CV分別為93.3354、1.75261和1.878。另一方面，Id/Ic的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和yoCV分別為0.96069、0.01024和1.066。表3:第二組的色強(qiáng)度數(shù)據(jù)樣品檢測區(qū)強(qiáng)度(Id)檢測區(qū)強(qiáng)度a)190.911094.1890.96520290.413094.2660.95913390.486093.6140.96659490.439996.6660.97655585.278088.9780.95842Id的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和Q/oCV分別為90.2974、3.25741和3.607。另一方面，Id/I。的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和n/。CV分別為0.96517、0.00732和0.758。表4:第三組的色強(qiáng)度數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>Id的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和Q/。CV分別為87.842、2.204和2.509。另一方面，WIe的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和。/。CV分別為0.95935、0.01074和1.12。實施例4證實了根據(jù)本發(fā)明制備側(cè)流測定設(shè)備的能力。將長度大約30厘米的硝基纖維素多孔膜(HF120，購自Millipore，Inc.)層壓到載體卡片上。將C反應(yīng)蛋白的單克隆抗體固定在該多孔膜上形成檢測區(qū)。所述抗體來自BiosPacific，Inc.(目錄號存A58040136P)，濃度為1毫克每毫升。將卩-HCG的單克隆抗體(1毫克每毫升)也固定在所述多孔膜上形成校正區(qū)。將纖維素芯吸墊(MilliporeCo.)與所述膜的一端(靠近校正區(qū)的)一起進(jìn)行層壓。然后將膜樣品在37。C的溫度下干燥1小時。將36微升綴合有抗CRP單克隆抗體(BiosPacific,Inc.，目錄號#A58110228P)的金顆粒，100微升綴合有抗a-hCG單克隆抗體的金顆粒，500毫升蔗糖水溶液(20%)和1400微升水混合形成顆粒懸液。綴合有抗CRP單克隆抗體的金顆粒顆粒尺寸為40納米，光密度為50.2，購自BritishBiocellInternational綴合有抗a-hCG單克隆抗體的金顆粒顆粒尺寸為40納米，光密度為10.1,購自BritishBiocellInternational然后將所述顆粒懸液加載到30厘米長的玻璃纖維綴合墊(Millipore，Co.)上。之后在37。C干燥所述玻璃纖維墊2小時制成綴合墊。接著將該綴合墊層壓到所述多孔膜的另一端(靠近檢測區(qū)的)。將纖維素芯吸墊(MilliporeCo.)樣品墊進(jìn)一步層壓到所述綴合墊上。將層壓后的整個卡片切割成4毫米寬的側(cè)流測定設(shè)備。實施例5證實了根據(jù)本發(fā)明檢測CRP的能力。如實施例4所述制備十五個側(cè)流設(shè)備(樣品1-15)并分成三組。第一組存放在室溫下，第二組在65。C下加熱40分鐘，第三組在65。C下加熱210分鐘。將含有在20毫摩具有l(wèi)%Tween20(ICIAmericas)的Hepes緩沖液(pH值7.51)中的60微升CRP(100納克每毫升)和60微升卩-hCG(50納克每毫升)的混合溶液施加到第一組的樣品墊上。將含有在20毫摩具有l(wèi)%Tween20(ICIAmericas)的Hepes緩沖液(pH值8.0)中的60微升CRP(100納克每毫升)和60微升卩-hCG(50納克每毫升)的混合溶液施加到第二組的樣品墊上。將含有60微升CRP(100納克每毫升)和60微升卩-hCG(50納克每毫升)在20毫摩具有l(wèi)°/。Tween20(ICIAmericas)的Hepes緩沖液(pH值8.5)中的混合溶液施加到第三組的樣品墊上。在室溫下顯影30分鐘后，用反射分光光度計測量檢測區(qū)和校正區(qū)的色密度。每組的統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)列于下表5中。表5:統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>如上所示，在pH值范圍內(nèi)檢測區(qū)經(jīng)校正的數(shù)據(jù)比未經(jīng)校正的數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)偏差和MCV低得多。盡管已經(jīng)就本發(fā)明的具體實施方案詳細(xì)描述了本發(fā)明，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解，在領(lǐng)會上述內(nèi)容之后，很容易構(gòu)思這些實施方案的替換形式、變型方式和等同方式。因此，本發(fā)明的范圍應(yīng)當(dāng)由所附權(quán)利要求書及其等同方式來確定。權(quán)利要求1.一種用于檢測測試樣品中測試分析物的存在或數(shù)量的診斷性試驗試劑盒，所述診斷性試驗試劑盒包括含有多孔膜的側(cè)流測定設(shè)備，所述多孔膜限定出檢測區(qū)和校正區(qū)，其中第一受體材料固定在檢測區(qū)內(nèi)而第二受體材料固定在校正區(qū)內(nèi)；和多種測定試劑，其中的一種或多種設(shè)置在所述側(cè)流測定設(shè)備上，其中所述測定試劑包括校正分析物、檢測探針和校正探針，所述檢測探針與第一特異性結(jié)合成員綴合，該第一特異性結(jié)合成員經(jīng)構(gòu)造以優(yōu)先與測試分析物、第一受體材料或其組合結(jié)合，所述校正探針與第二特異性結(jié)合成員綴合，該第二特異性結(jié)合成員經(jīng)構(gòu)造以優(yōu)先與校正分析物、第二受體材料或其組合結(jié)合。2.權(quán)利要求1所述的診斷性試驗試劑盒，其中所述第一特異性結(jié)合成員、第二特異性結(jié)合成員、第一受體材料和第二受體材料是免疫反應(yīng)性結(jié)合成員。3.權(quán)利要求1或2所述的診斷性試驗試劑盒，其中所述校正分析物和測試分析物是同一蛋白質(zhì)家族的成員。4.權(quán)利要求1或2所述的診斷性試驗試劑盒，其中校正分析物和測試分析物是不同蛋白質(zhì)家族的成員。5.權(quán)利要求1到4中任意一項的診斷性試驗試劑盒，其中所述測試分析物、校正分析物、或二者均為五聚環(huán)蛋白。6.權(quán)利要求5所述的診斷性試驗試劑盒，其中所述測試分析物是C反應(yīng)蛋白。7.權(quán)利要求5所述的診斷性試驗試劑盒，其中所述校正分析物是膽堿磷酸結(jié)合性五聚環(huán)蛋白。8.權(quán)利要求1到7中任意一項的診斷性試驗試劑盒，其中所述第一特異性結(jié)合成員經(jīng)構(gòu)造以與所述測試分析物結(jié)合，第二特異性結(jié)合成員經(jīng)構(gòu)造以與所述校正分析物結(jié)合。9.權(quán)利要求8所述的診斷性試驗試劑盒，其中所述第一受體材料經(jīng)構(gòu)造以與所述測試分析物結(jié)合形成夾心配合物，所述第二受體材料經(jīng)構(gòu)造以與所述校正分析物結(jié)合形成夾心配合物。10.權(quán)利要求8所述的診斷性試驗試劑盒，其中所述第一受體材料和測試分析物經(jīng)構(gòu)造以竟?fàn)幗Y(jié)合所述第一特異性結(jié)合成員，所述第二受體材料和校正分析物經(jīng)構(gòu)造以竟?fàn)幗Y(jié)合所述第二特異性結(jié)合成員。11.權(quán)利要求1到7中任意一項的診斷性試驗試劑盒，其中所述第一特異性結(jié)合成員和測試分析物經(jīng)構(gòu)造以竟?fàn)幗Y(jié)合所述第一受體材料，所述第二特異性結(jié)合成員和校正分析物經(jīng)構(gòu)造以竟?fàn)幗Y(jié)合所述第二受體材料。12.上述權(quán)利要求中任意一項的診斷性試驗試劑盒，其中所述校正區(qū)位于所述;f全測區(qū)的下游。13.上述權(quán)利要求中任意一項的所述的診斷性試驗試劑盒，其中所述側(cè)流測定設(shè)備進(jìn)一步包括與所述多孔膜流體連通的綴合墊，其中一種或多種所述測定試劑設(shè)置在所述綴合墊上。14.權(quán)利要求13所述的診斷性試驗試劑盒，其中所述檢測探針和校正探針設(shè)置在所述綴合墊上。15.權(quán)利要求13或14所述的診斷性試驗試劑盒，進(jìn)一步包括設(shè)置在所述綴合墊上游并且限定了測試樣品施加位點的樣品墊，其中所述校正分析物設(shè)置在所述樣品墊上。16.—種利用側(cè)流設(shè)備來定量或半定量地才全測測試樣品中的測試分析物的方法，所述設(shè)備包括與檢測探針和校正探針相連通的多孔膜，所述檢測探針與第一特異性結(jié)合成員相綴合，所述校正探針與第二特異性結(jié)合成員相綴合，所述多孔膜限定出檢測區(qū)和校正區(qū)，所述方法包括i)將所述側(cè)流設(shè)備與校正分析物相接觸；ii)將所述側(cè)流設(shè)備與測試樣品相接觸；iii)測量檢測區(qū)產(chǎn)生的檢測信號的強(qiáng)度；以及iv)測定校正區(qū)產(chǎn)生的校正信號的強(qiáng)度，其中所述測試分析物的量與用校正信號強(qiáng)度校正后的檢測信號的強(qiáng)度成比例。17.權(quán)利要求16所述的方法，進(jìn)一步包括在與所述側(cè)流設(shè)備接觸之前將所述校正分析物與測試樣品混合。18.—種利用側(cè)流設(shè)備來定量或半定量地才企測測試才羊品中的測試分析物的方法，所述設(shè)備包括多孔膜，其與校正分析物、綴合有第一特異性結(jié)合成員的檢測探針、以及綴合有第二特異性結(jié)合成員的校正探針相連通，所述多孔膜限定出檢測區(qū)和校正區(qū)，所述方法包括i)將所述側(cè)流設(shè)備與測試樣品相接觸；ii)測定檢測區(qū)產(chǎn)生的檢測信號的強(qiáng)度；以及l(fā)lO測定校正區(qū)產(chǎn)生的校正信號的強(qiáng)度，其中所述測試分析物的量與用校正信號強(qiáng)度校正后的檢測信號的強(qiáng)度成比例。19.權(quán)利要求16到18中任意一項的方法，其中所述測試分析物的量與通過校正信號強(qiáng)度校正的檢測信號強(qiáng)度成正比。20.權(quán)利要求16到18中任意一項的方法，其中所述測試分析物的量與通過校正信號強(qiáng)度校正的檢測信號強(qiáng)度成反比。21.權(quán)利要求16到20中任意一項的方法，進(jìn)一步包括通過繪制多個預(yù)定分析物濃度下的檢測信號強(qiáng)度與校正信號強(qiáng)度之比關(guān)系圖來形成校正曲線。全文摘要本發(fā)明公開了一種采用側(cè)流測定設(shè)備和多種測定試劑來檢測測試樣品中的測試分析物的診斷性試驗試劑盒。所述測定試劑包括能夠生成指示測試樣品中測試分析物的存在或數(shù)量的檢測信號的檢測探針。為了進(jìn)一步提高檢測精度，還使用了能夠生成指示校正分析物的存在或數(shù)量的校正信號的校正探針。可以利用校正信號來校正檢測信號。文檔編號G01N33/543GK101151531SQ200680010107公開日2008年3月26日申請日期2006年1月19日優(yōu)先權(quán)日2005年3月30日發(fā)明者C·O·奇德貝盧-埃澤,R·M·M·凱洛,宋旭東申請人:金伯利—克拉克環(huán)球有限公司