專利名稱：冬凌草及其制劑中冬凌草甲素、迷迭香酸含量的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種冬凌草及其制劑中冬凌草甲素、迷迭香酸含量的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
冬凌草為唇形科香茶菜屬植物碎米亞。味甘苦，性微寒，有清熱解毒、消炎止痛、健胃活血之功。用于治療熱毒癰腫、瘀血癥瘕等癥。
冬凌草中化學(xué)成分甚為復(fù)雜，其中冬凌草甲素、迷迭香酸是冬凌草及其制劑提取物的有效活性成分。
冬凌草甲素(oridonin)是一種抗癌藥物，它對(duì)各種癌癥有明顯治療作用，且副作用小。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明，冬凌草甲素腹腔注射10mg/kg，對(duì)艾氏腹水癌、肝癌及肉瘤S180腹水型等均有明顯抗腫瘤作用，使動(dòng)物平均存活期在100％以上。對(duì)體外培養(yǎng)的艾氏腹水瘤細(xì)胞具有較明顯的細(xì)胞毒作用。并發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素小鼠給藥后胸腺噴院核育參人腫瘤細(xì)胞的酸不溶部分(DNA)減少，而酸溶部分游離的胸腺喀院核著酸增多，其中以胸腺嘧啶核苷三磷酸增加明顯，提示冬凌草甲素可能阻斷了脫氧甘酸底物聚合形成DNA過(guò)程，而不影響胸腺嘧啶核苷的磷酸化。冬凌草甲素與博萊霉素A5合用對(duì)小鼠體內(nèi)外P388白血病、艾氏腹水癌細(xì)胞大分子合成有明顯抑制DNA合成的作用，對(duì)腫瘤DNA合成的抑制作用強(qiáng)于對(duì)骨髓細(xì)胞。若用冬凌草素、博萊霉素A5和消瘤芥組合運(yùn)用，對(duì)移植瘤小鼠的生命延長(zhǎng)率，體內(nèi)肉瘤180細(xì)胞增殖抑制作用和體外艾氏腹水癌細(xì)胞殺傷作用最佳。
冬凌草及其制劑中冬凌草甲素、迷迭香酸的含量是確定冬凌草及其制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的重要參數(shù)，但現(xiàn)在還沒(méi)有一種準(zhǔn)確地測(cè)定冬凌草及其制劑中冬凌草甲素、迷迭香酸含量的測(cè)定方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的問(wèn)題就在于提供一種準(zhǔn)確測(cè)定冬凌草及其制劑中冬凌草甲素、迷迭香酸含量的測(cè)定方法。
為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案本發(fā)明冬凌草甲素、迷迭香酸含量測(cè)定方法，它是以高效液相色譜法測(cè)定冬凌草甲素、迷迭香酸的含量，它包括下列步驟A、實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備B、對(duì)照品溶液的制備；C、供試品溶液的制備；D、含量測(cè)定。
優(yōu)選地，本發(fā)明測(cè)定步驟為A、實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備a、制備流動(dòng)相濃度為分析純的甲醇和重量濃度為0.5％的磷酸水溶液以1∶0.5-1∶2的比例配制成流動(dòng)相；b、色譜柱要求色譜柱為CLC-ODS柱，柱高×直徑為100mm×2mm-200mm×10mm，毛細(xì)管色譜柱孔徑為2-10μm，柱溫為20-35℃；c、檢測(cè)波長(zhǎng)340-350mm；d、流速0.5-1ml/min；B、對(duì)照品溶液的制備精密稱取分析純的冬凌草甲素、迷迭香酸對(duì)照品，分別加入分析純的甲醇制成每1ml溶液含1mg的冬凌草甲素或迷迭香酸的溶液；C、供試品溶液的制備精密稱量待測(cè)冬凌草或其制劑1g，用超聲波提取兩次，每次加分析純甲醇20ml，超聲處理20-50分鐘，過(guò)濾，合并兩次的濾液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙庵苽涑?5ml供試品溶液；D、含量測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5ml，分別注入液相色譜儀，測(cè)定。
更優(yōu)選地，本發(fā)明測(cè)定步驟為A、實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備a、制備流動(dòng)相濃度為分析純的甲醇和重量濃度為0.5％的磷酸水溶液以1∶1的比例配制成流動(dòng)相；b、色譜柱要求色譜柱為CLC-ODS柱，柱高×直徑為150mm×6.0mm，毛細(xì)管色譜柱孔徑為5μm，柱溫為30℃；c、檢測(cè)波長(zhǎng)335mm；d、流速0.8ml/min；B、對(duì)照品溶液的制備精密稱取分析純的冬凌草甲素、迷迭香酸對(duì)照品，分別加入分析純的甲醇制成每1ml溶液含1mg的冬凌草甲素或迷迭香酸的溶液；C、試品溶液的制備精密稱量待測(cè)冬凌草或其制劑1g，用超聲波提取兩次，每次加分析純甲醇20ml，超聲處理30分鐘，過(guò)濾，合并兩次的濾液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙庵苽涑?5ml供試品溶液；D、含量測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5ml，分別注入液相色譜儀，測(cè)定。
本發(fā)明所用高效液相色譜儀配紫外、示差折光檢測(cè)器，通過(guò)本發(fā)明測(cè)定方法可以準(zhǔn)確地測(cè)定冬凌草及其制劑中冬凌草甲素、迷迭香酸的含量，掌握冬凌草及其制劑的質(zhì)量，為制備冬凌草植物圖譜提供真實(shí)、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1A、實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備a、制備流動(dòng)相濃度為分析純的甲醇和重量濃度為0.5％的磷酸水溶液以1∶0.5的比例配制成流動(dòng)相100ml；
b、色譜柱要求色譜柱為CLC-ODS柱，柱高×直徑為100mm×2mm，毛細(xì)管色譜柱孔徑為2μm，柱溫為20℃；c、檢測(cè)波長(zhǎng)340mm；d、流速0.5ml/min；B、對(duì)照品溶液的制備精密稱取分析純的冬凌草甲素、迷迭香酸對(duì)照品，分別加入分析純的甲醇制成每1ml溶液含1mg的冬凌草甲素或迷迭香酸的溶液；C、供試品溶液的制備精密稱量待測(cè)冬凌草粉末1g，用KQ-700E超聲波清洗器提取兩次，每次加分析純甲醇20ml，超聲處理20分鐘，過(guò)濾，合并兩次的濾液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙庵苽涑?5ml供試品溶液；D、含量測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5ml，分別注入液相色譜儀，如LC-2900型高效液相色譜儀，測(cè)定，即得供試品溶液冬凌草甲素、迷迭香酸含量。
實(shí)施例2A、實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備a、制備流動(dòng)相濃度為分析純的甲醇和重量濃度為0.5％的磷酸水溶液以1∶2的比例配制成流動(dòng)相100ml；b、色譜柱要求色譜柱為CLC-ODS柱，柱高×直徑為200mm×10mm，毛細(xì)管色譜柱孔徑為10μm，柱溫35℃；c、檢測(cè)波長(zhǎng)350mm；d、流速1ml/min；B、對(duì)照品溶液的制備精密稱取分析純的冬凌草甲素、迷迭香酸對(duì)照品，分別加入分析純的甲醇制成每1ml溶液含1mg的冬凌草甲素或迷迭香酸的溶液；C、供試品溶液的制備精密稱量待測(cè)冬凌草片粉末1g，用KQ-700E超聲波清洗器提取兩次，每次加分析純甲醇20ml，超聲處理50分鐘，過(guò)濾，合并兩次的濾液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙庵苽涑?5ml供試品溶液；D、含量測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5ml，分別注入液相色譜儀，如LC-VP高效液相色譜儀，測(cè)定，即得供試品溶液冬凌草甲素、迷迭香酸含量。
實(shí)施例3A、實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備a、制備流動(dòng)相濃度為分析純的甲醇和重量濃度為0.5％的磷酸水溶液以1∶1的比例配制成流動(dòng)相100ml；b、色譜柱要求色譜柱為CLC-ODS柱，柱高×直徑為150mm×6.0mm，毛細(xì)管色譜柱孔徑為5μm，柱溫為30℃；c、檢測(cè)波長(zhǎng)335mm；d、流速0.8ml/min；B、對(duì)照品溶液的制備精密稱取分析純的冬凌草甲素、迷迭香酸對(duì)照品，分別加入分析純的甲醇制成每1ml溶液含1mg的冬凌草甲素或迷迭香酸的溶液；C、供試品溶液的制備精密稱量待測(cè)冬凌草糖漿1g，用KQ-700E超聲波清洗器提取兩次，每次加分析純甲醇20ml，超聲處理30分鐘，過(guò)濾，合并兩次的濾液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙庵苽涑?5ml供試品溶液；D、含量測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5ml，分別注入液相色譜儀，如TLG-100A高效液相色譜儀，測(cè)定，即得供試品溶液冬凌草甲素、迷迭香酸含量。
權(quán)利要求
1.一種冬凌草及其制劑中冬凌草甲素、迷迭香酸含量的測(cè)定方法，它是以高效液相色譜法測(cè)定冬凌草甲素、迷迭香酸的含量，它包括下列步驟A、實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備B、對(duì)照品溶液的制備；C、供試品溶液的制備；D、含量測(cè)定。
2.如權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于它包括下列步驟A、實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備a、制備流動(dòng)相濃度為分析純的甲醇和重量濃度為0.5％的磷酸水溶液以1∶0.5-1∶2的比例配制成流動(dòng)相；b、色譜柱要求色譜柱為CLC-ODS柱，柱高×直徑為100mm×2mm-200mm×10mm，毛細(xì)管色譜柱孔徑為2-10μm，柱溫為20-35℃；c、檢測(cè)波長(zhǎng)340-350mm；d、流速0.5-1ml/min；B、對(duì)照品溶液的制備精密稱取分析純的冬凌草甲素、迷迭香酸對(duì)照品，分別加入分析純的甲醇制成每1ml溶液含1mg的冬凌草甲素或迷迭香酸的溶液；C、供試品溶液的制備精密稱量待測(cè)冬凌草或其制劑1g，用超聲波提取兩次，每次加分析純甲醇20ml，超聲處理20-50分鐘，過(guò)濾，合并兩次的濾液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙庵苽涑?5ml供試品溶液；D、含量測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5ml，分別注入液相色譜儀，測(cè)定。
3.如權(quán)利要求2所述的測(cè)定方法，其特征在于它包括下列步驟A、實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備a、制備流動(dòng)相濃度為分析純的甲醇和重量濃度為0.5％的磷酸水溶液以1∶1的比例配制成流動(dòng)相；b、色譜柱要求色譜柱為CLC-ODS柱，柱高×直徑為150mm×6.0mm，毛細(xì)管色譜柱孔徑為5μm，柱溫為30℃；c、檢測(cè)波長(zhǎng)335mm；d、流速0.8ml/min；B、對(duì)照品溶液的制備精密稱取分析純的冬凌草甲素、迷迭香酸對(duì)照品，分別加入分析純的甲醇制成每1ml溶液含1mg的冬凌草甲素或迷迭香酸的溶液；試品溶液的制備精密稱量待測(cè)冬凌草或其制劑1g，用超聲波提取兩次，每次加分析純甲醇20ml，超聲處理30分鐘，過(guò)濾，合并兩次的濾液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙庵苽涑?5ml供試品溶液；E、含量測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5ml，分別注入液相色譜儀，測(cè)定。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種冬凌草及其制劑中冬凌草甲素、迷迭香酸含量的測(cè)定方法，它是以高效液相色譜法測(cè)定冬凌草甲素、迷迭香酸的含量，它包括下列步驟A.實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備；B.對(duì)照品溶液的制備；C.供試品溶液的制備；D.含量測(cè)定。通過(guò)本發(fā)明測(cè)定方法可以準(zhǔn)確地測(cè)定冬凌草及其制劑中冬凌草甲素、迷迭香酸的含量，掌握冬凌草及其制劑的質(zhì)量，為制備冬凌草植物圖譜提供真實(shí)、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。
文檔編號(hào)G01N30/00GK1645131SQ20051000485
公開(kāi)日2005年7月27日 申請(qǐng)日期2005年2月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月2日
發(fā)明者張海 申請(qǐng)人:張海