專利名稱：一種中藥制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑的質(zhì)量控制方法，特別涉及抗栓制劑質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
抗栓制劑原料藥是由當(dāng)歸尾、丹參、僵蠶、壁虎、土鱉蟲、蜈蚣、水蛭、蜂房、地龍、馬錢子、麝香、蟾酥、甘草、土茯苓、延胡索、骨碎補(bǔ)、烏梢蛇、虻蟲、穿山甲等十九味中藥組成，國內(nèi)有多種劑型上市。但經(jīng)我們研究發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有抗栓制劑存在質(zhì)量控制方法落后，產(chǎn)品質(zhì)量不易控制的缺點(diǎn)?，F(xiàn)有質(zhì)量控制方法中中并沒有對(duì)當(dāng)歸尾、地龍、馬錢子、麝香、延胡索、蟾蜍和甘草進(jìn)行鑒別，或?qū)Φ⑼狪I A和士的寧成分進(jìn)行含量測(cè)定。故現(xiàn)有質(zhì)量控制方法不能有效控制抗栓制劑的質(zhì)量，從而將影響產(chǎn)品的生產(chǎn)和保證質(zhì)量。
為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，我們建立了抗栓制劑的新的質(zhì)量控制方法，該方法采用照薄層色譜法對(duì)當(dāng)歸尾、地龍、馬錢子、麝香、延胡索、蟾蜍和甘草等進(jìn)行鑒別，采用高效液相色譜法對(duì)丹參酮IIA和士的寧成分進(jìn)行含量測(cè)定。該質(zhì)量控制方法精密度、靈敏度、穩(wěn)定性均好，確保產(chǎn)品質(zhì)量的“安全、均一、穩(wěn)定、有效、可控”。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供抗栓制劑的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明是針對(duì)抗栓制劑提出質(zhì)量控制方法的，這種抗栓制劑包括膠囊、片劑、口服液、糖漿、顆粒劑等口服制劑。
本發(fā)明的所述的抗栓制劑是由如下重量份的中藥原料制成的當(dāng)歸尾200g、丹參200g、僵蠶(麩炒)100g、壁虎100g、土鱉蟲200g、蜈蚣50g、水蛭200g、蜂房100g、地龍100g、馬錢子(制)30g、麝香3g、蟾酥(酒制)1g、甘草100g、土茯苓200g、延胡索(醋制)100g、骨碎補(bǔ)(制)200g、烏梢蛇(酒制)200g、虻蟲(去翅)50g、穿山甲(沙燙)50g以上組成可制成藥物制劑1000劑，所述1000劑指，制成的成品藥物制劑，如制成膠囊制劑1000粒，片劑1000片，顆粒劑1000g，液體制劑1000ml等，以上組成是按重量份作為配比的，在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減少，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以公斤為單位，或以噸為單位。
本發(fā)明抗栓制劑的制備方法可以采用以下方法通過將上述配方的中藥原料經(jīng)過提取或其他方式加工，制成藥物活性物質(zhì)，隨后，以該物質(zhì)為原料，需要時(shí)加入藥物可接受的載體，按照制劑學(xué)的常規(guī)技術(shù)制成膠囊、片劑、口服液、糖漿、顆粒劑。所述活性物質(zhì)可以通過選自以下方式的方法得到，如通過粉碎、壓榨、煅燒、研磨、過篩、滲漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、層析等方法得到，這些活性物質(zhì)可以是浸膏形式的物質(zhì)，可以是干浸膏也可以是流浸膏，還可以是高純度提取物，根據(jù)制劑的不同需要決定制成不同的濃度。
本發(fā)明的抗栓制劑，在制成制劑時(shí)根據(jù)需要可以加入藥物可接受的載體，這些載體可以是任何適合制成抗栓制劑的載體，如苯甲酸或鉀鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、尼泊爾甲酯、尼泊爾乙酯、尼泊爾丙酯、尼泊爾丁酯、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素A、維生素C、維生素E、維生素D、氮酮、EDTA二鈉、EDTA鈣鈉，一價(jià)堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、硅衍生物、纖維素及其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、丙二醇、乙醇、土溫60-80、司盤-80、蜂蠟、羊毛脂、液體石蠟、十六醇、沒食子酸酯類、瓊脂、三乙醇胺、堿性氨基酸、尿素、尿囊素、表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、磷脂類材料等。
本發(fā)明提供的是針對(duì)以上抗栓制劑的質(zhì)量控制方法，為控制抗栓制劑的質(zhì)量。針對(duì)的其特點(diǎn)及本發(fā)明配方，我們提供了如下質(zhì)量控制方法本發(fā)明所述質(zhì)量控制方法包括以下步驟對(duì)性狀進(jìn)行觀察，根據(jù)藥典的方法對(duì)內(nèi)容物進(jìn)行檢查，對(duì)內(nèi)容物當(dāng)歸尾、地龍、馬錢子、麝香、延胡索、蟾蜍和甘草進(jìn)行鑒別，對(duì)含有的丹參酮IIA和士的寧進(jìn)行含量測(cè)定。
因此，本發(fā)明的質(zhì)量控制方法主要的步驟是A.對(duì)本發(fā)明藥物制劑中的當(dāng)歸尾、地龍、馬錢子、麝香、延胡索、蟾蜍和甘草進(jìn)行鑒別；B.測(cè)定本發(fā)明藥物制劑中丹參酮IIA和士的寧的含量；其中A鑒別的具體步驟如下(1)取抗栓制劑內(nèi)容物，置顯微鏡下觀察菌絲體近無色，細(xì)長卷曲纏結(jié)在體壁中。體壁碎片深棕色或黃色，其上著生短粗或細(xì)長剛毛，?？梢妱偯撀浜蟮膱A形毛窩。纖維束周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維；具緣紋孔導(dǎo)管較大。草酸鈣針晶束存在于黏液細(xì)胞中或散在。糊化淀粉粒團(tuán)塊淡黃色或近無色。角質(zhì)鱗片近無色或淡黃色；橫紋肌纖維可見，淡黃色或近無色，多碎斷，側(cè)面觀多呈條塊狀。
(2)取抗栓制劑內(nèi)容物3g，加正己烷20ml超聲處理10-20分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸尾對(duì)照藥材0.1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯(6-13∶0.7-1.4)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(3)取抗栓制劑內(nèi)容物10g，加水250ml加熱微沸回流0.5-1.5小時(shí)，濾過，濾液置水浴上濃縮至浸膏，加甲醇8ml，攪拌，放置1小時(shí)，濾過，濾液濃縮至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振搖，分取苯層作為供試品溶液。另取地龍對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯(6-12∶0.7-1.3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(4)取抗栓制劑內(nèi)容物8g，置500ml圓底燒瓶中，加水200ml，苯1.0ml，混勻，連接揮發(fā)油測(cè)定器及回流冷凝管，加熱至沸，并保持微沸1.5-2.5小時(shí)，放冷，分取苯層作為供試品溶液。另取麝香酮對(duì)照品，加苯制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照氣相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI E)，用100％甲基硅酮(OV-1)為固定相；FID檢測(cè)器；彈性石英毛細(xì)管色譜柱(30m×0.25mm×0.32μm)；程序升溫200℃-1min-3℃/min-240℃-0min-20℃/min-260℃-5min。分別吸取上述兩種溶液各4μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。供試品色譜中，應(yīng)有與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰。
(5)取抗栓制劑內(nèi)容物20g，加石油醚(30～60℃)50ml冷浸30分鐘，時(shí)時(shí)振搖，棄去石油醚液，藥渣揮干，加氯仿80ml超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml溶解，濾過，濾液濃縮至約2ml，用中性氧化鋁(100～200目)4g在水浴上攪拌干燥，裝入中性氧化鋁柱(1.5×20cm)，用氯仿50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取華蟾酥毒基、酯蟾毒配基對(duì)照品各適量，加甲醇制成每1ml含華蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；水-乙腈(48-70∶26-52)為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長296±3nm；柱溫20-60℃。理論板數(shù)以華蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰計(jì)，應(yīng)分別不低于4000。分別吸取上述兩種溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品色譜中，應(yīng)有與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰。
(6)取抗栓制劑內(nèi)容物10g，加水40ml，鹽酸3ml加熱微沸回流1-2小時(shí)，濾過，棄去濾液，藥渣揮干，加乙醚30ml回流提取0.5-1.5小時(shí)，棄去乙醚液，藥渣揮干，加氯仿30ml回流提取1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品，加無水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(7-14∶11-30∶3-11∶0.2-1.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(7)取抗栓制劑內(nèi)容物5g，加氨水適量攪拌濕潤后，加乙醚40ml放置24小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并醋酸層，用氨水調(diào)pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并氯仿液，用水洗至中性，加適量無水硫酸鈉，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5μl，對(duì)照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(1.2-2.9∶0.9-2.8)為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，碘熏數(shù)秒后，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
其中B測(cè)定含量的具體步驟如下a.丹參酮IIA含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-水(64-110∶9.5-22)；流速1.0ml/min；柱溫25-55℃；檢測(cè)波長270±3nm。理論板數(shù)以丹參酮IIA(C19H18O3)峰計(jì)，應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取丹參酮IIA對(duì)照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含丹參酮IIA16μg)。
供試品溶液的制備 取抗栓制劑內(nèi)容物3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理10-60分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取上清液用濾膜(0.45μm)濾過，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
b.士的寧含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用硅膠為填充劑；氯仿-環(huán)己烷-二乙胺(52-94∶16-33∶0.9-3.4)為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；柱溫20-60℃；檢測(cè)波長為254±2nm。理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取士的寧對(duì)照品適量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取抗栓制劑內(nèi)容物10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加氯仿50ml與濃氨試液2-8ml，密塞，輕輕振搖，稱定重量，放置24小時(shí)，超聲處理0-40分鐘，放冷，再稱定重量，用提取液補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取5-9次，每次25ml，合并硫酸液，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用氯仿提取5-9次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
以上方法中所述抗栓制劑是指本發(fā)明的成品藥物如膠囊、片劑、口服液、糖漿、顆粒劑。
本發(fā)明質(zhì)量控制方法對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量控制更為有效，方法精密度、靈敏度、穩(wěn)定性均較高。能較好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，確保了產(chǎn)品質(zhì)量的“安全、均一、穩(wěn)定、有效、可控”。
本發(fā)明各實(shí)驗(yàn)例供試品所用制劑均可采用實(shí)施例1所述的抗栓膠囊制劑，也可用與實(shí)施例1所述的抗栓膠囊劑具有相同原料組成的其他制劑。
實(shí)驗(yàn)例1丹參酮II的含量測(cè)定方法研究1.儀器與試藥1.1儀器 日本島津LC-10ATVP高效液相色譜儀，LC-10ATvp輸液泵；SPD-M10Avp二級(jí)陣列檢測(cè)器；SCL-10Avp系統(tǒng)控制器；CTO-10ASvp恒溫柱箱；CLASS-VP6.1工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；微量進(jìn)樣器(25μl)，HAMILTON公司；超聲波清洗機(jī)(250W，北京市醫(yī)療設(shè)備二廠)。
1.1.2試藥 甲醇(分析純)、水為二次重蒸餾水、丹參酮II A對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用，批號(hào)0766-9908)；1.2色譜條件 色譜柱Hypersil C18(5um，250×5.0i.d.mm)大連伊利特；流動(dòng)相甲醇-水(85∶15)；檢測(cè)波長270nm；流速1.0ml/min；柱溫40℃；進(jìn)樣量5μl。
1.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分別取丹參酮IIA對(duì)照品對(duì)照品溶液、供試品溶液和缺丹參藥材的陰性供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜。可知丹參酮IIA的保留時(shí)間(tR)約為9.2分鐘，陰性樣品色譜圖在丹參酮IIA峰位置處無假陽性峰，理論塔板數(shù)以丹參酮IIA峰計(jì)算為5200。與其他組分峰分離度＞1.5。
1.4線性關(guān)系考察1.4.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱取丹參酮II A對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含丹參酮IIA0.0245mg的溶液。
1.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取0.0245mg的溶液2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml，分別置10ml棕色瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，分別精密量吸取上述五種溶液5μl注入液相色譜儀，記錄色譜，見表1，以峰面積A(μV·s)對(duì)濃度C(μg/ml)進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得線性回歸方程為A＝328359.82C+6495.9，r＝0.9999，精密量取0.0245mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液6.5ml，置10ml棕色瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，得對(duì)照品溶液(0.0245mg/ml)。精密量吸取該對(duì)照品溶液5μl注入液相色譜儀，所得峰面積為454684，將一供試品溶液進(jìn)樣分析所得峰面積分別用回歸方程和一點(diǎn)法計(jì)算含量，結(jié)果的相對(duì)偏差0.74％，故本發(fā)明質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用一點(diǎn)法計(jì)算含量。線性范圍4.9～245μg/ml。
表1 丹參酮IIA線性關(guān)系考察

1.4.3供試品溶液提取時(shí)間的選擇提取方法冷浸過夜，超聲提取，測(cè)定結(jié)果見表2。
表2 甲醇不同超聲時(shí)間的考察(n＝3)

從表2可知，冷浸過夜，超聲提取30min即可將制劑中的丹參酮IIA提取安全，故選擇超聲處理30min。
1.4.4精密度試驗(yàn)取本品(批號(hào)20011105)內(nèi)容物，按本發(fā)明質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)下供試液的制備方法制備供試液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，計(jì)算結(jié)果列入表3，平均含量0.02108，RSD為0.46％，精密度良好。
表3 制劑供試品中丹參酮IIA的精密度試驗(yàn)

1.4.5重現(xiàn)性試驗(yàn)取本品(批號(hào)20011105)內(nèi)容物，按本發(fā)明質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)下供試液的制備方法制備5份供試液，分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算結(jié)果列入表4，平均含量為0.02209％，RSD為1.12％，重現(xiàn)性良好。
表4 制劑供試品中丹參酮IIA的重現(xiàn)性試驗(yàn)

1.4.6供試品溶液中丹參酮IIA穩(wěn)定性試驗(yàn)取本品(批號(hào)20011105)內(nèi)容物，按本發(fā)明質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)下供試液的制備方法制備供試液，分別于0、1、2、4、8小時(shí)測(cè)定丹參酮IIA含量(見表5)，結(jié)果表明，供試品溶液中丹參酮IIA在8小時(shí)內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。
表5 制劑供試品中丹參酮IIA的穩(wěn)定性試驗(yàn)

1.4.7回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，分別精密稱取5份已測(cè)定含量的樣品(批號(hào)20011105，平均含量為0.02209％)適量，置具塞錐形瓶中，精密加入丹參酮IIA對(duì)照品溶液(其中以甲醇為溶劑，0.00808mg/ml)50ml，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取上清液用濾膜(0.45um)濾過，制得供試液。分別精密吸取5ul注入液相色譜儀，記錄色譜，測(cè)定含量，計(jì)算回收率(結(jié)果見表6)，平均回收率為99.21％，RSD為1.34％。
表6 供試品溶液中丹參酮II A測(cè)定回收率試驗(yàn)


1.4.8樣品測(cè)定按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制備供試液和對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣5μl，記錄色譜，測(cè)定峰面積，按下式計(jì)算含量

式中Ai供試品溶液峰面積As對(duì)照品溶液峰面積Cs對(duì)照品溶液濃度(μg/ml)W供試品稱樣量(mg)W1平均粒重(mg)根據(jù)嚴(yán)格按照生產(chǎn)工藝制備的3批樣品，測(cè)定樣品中丹參酮II含量，測(cè)定結(jié)果見表7。
表7 3批樣品中丹參酮II含量測(cè)定結(jié)果

制劑中丹參酮II含量限度計(jì)算如下丹參酮II含量低限＝制劑含丹參藥材(g/g)×藥材含丹參酮II量低限(藥典規(guī)定)×收率＝(200/2184)×0.2％×95％＝1.740×10-4。每粒含量低限＝1.740×10-4×0.3g/?！?06＝52ug/粒。
故定本品每粒含丹參以丹參酮II(C19H18O3)不得少于52ug。根據(jù)樣品測(cè)定結(jié)果，3批樣品中的丹參酮II(C19H18O3)的含量均大于52ug/粒。
實(shí)驗(yàn)例2士的寧的含量測(cè)定方法研究2.儀器與試藥2.1儀器 日本島津LC-10ATVP高效液相色譜儀，LC-10ATvp輸液泵；SPD-M10Avp二級(jí)陣列檢測(cè)器；SCL-10Avp系統(tǒng)控制器；CTO-10ASvp恒溫柱箱；CLASS-VP6.1工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；微量進(jìn)樣器(25μl)，HAMILTON公司；超聲波清洗機(jī)(250W，北京市醫(yī)療設(shè)備二廠)。
2.1.2試藥 氯仿(分析純)、環(huán)己烷(分析純)、乙二胺(分析純)、氨水(分析純)、濃硫酸(分析純)、醋酸乙酯(分析純)、士的寧對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用，批號(hào)0705-200005)；2.1.3色譜條件 色譜柱Hypersil C18(5um，250×5.0i.d.mm)大連伊利特；流動(dòng)相甲醇-水(85∶15)；檢測(cè)波長270nm；流速1.0ml/min；柱溫40℃；進(jìn)樣量5μl。
2.2系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分別取士的寧對(duì)照品對(duì)照品溶液、供試品溶液和缺馬錢子藥材的陰性供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜?？芍康膶幍谋Ａ魰r(shí)間(tR)約為12.3分鐘，陰性樣品色譜圖在士的寧峰位置處無假陽性峰，士的寧和相近的雜質(zhì)峰分離完全(分離度＞1.5)，即本試驗(yàn)條件下與其他組分峰分離完全。理論塔板數(shù)以士的寧峰計(jì)算為4500。
2.3線性關(guān)系考察2.4標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱取士的寧對(duì)照品適量，加醋酸乙酯溶解制成每1ml含士的寧0.206mg的對(duì)照品溶液。
2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取對(duì)照品溶液2、4、6、8、10ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜，見表8，以峰面積A(μV·s)對(duì)質(zhì)數(shù)x(μg)進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得線性回歸方程為A＝1466315.7767×X+19673.9000，r＝0.9999，精密量吸取該對(duì)照品溶液5μl注入液相色譜儀，所得峰面積為1528781，將一供試品溶液進(jìn)樣分析所得峰面積分別用回歸方程和一點(diǎn)法計(jì)算含量，結(jié)果的相對(duì)偏差0.045％，故本發(fā)明質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用一點(diǎn)法計(jì)算含量。線性范圍0.412～2.06μg。
表8 士的寧線性關(guān)系考察

2.6提取選擇 根據(jù)士的寧在堿性條件下易于被有機(jī)溶劑提取的特征，我們?cè)谠囼?yàn)中選擇了常用于提取生物堿的氯仿-濃氨為提取液，由于制劑成分較多，所含士的寧不易提取完全，分別以氯仿-濃氨(50∶2)、氯仿-濃氨(50∶5)、氯仿-濃氨(50∶8)提取后測(cè)含量，結(jié)果見表9。試驗(yàn)結(jié)果表明，用氯仿-濃氨(50∶8)為提取劑能將士的寧提取完全，因此本質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用氯仿-濃氨(50∶8)為提取劑。
表9 不同提取溶劑對(duì)士的寧含量測(cè)定的影響(n＝2)

2.7超聲提取時(shí)間的選擇 提取方法放置24小時(shí)，超聲提取，測(cè)定結(jié)果見表10。
表10 不同超聲時(shí)間的考察(n＝3)

從表10可知，放置24小時(shí)，超聲提取20min即可將制劑中的士的寧提取安全，故選擇放置24小時(shí)，超聲提取20min。
2.8提取樣品溶液的次數(shù)與士的寧含量測(cè)定的影響結(jié)果考察用硫酸溶液(3→100)提取合并硫酸液，加濃氨試液調(diào)解PH值至9-10，再用氯仿提取，其提取次數(shù)與士的寧含量測(cè)定的結(jié)果見表11。
表11 提取樣品溶液的次數(shù)與士的寧含量測(cè)定結(jié)果(n＝2)

從表可知，提取7次與8次、9次的結(jié)果無顯著差異，因此本質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)選用提取次數(shù)為7次。
2.9精密度試驗(yàn)取本品(批號(hào)20011105)內(nèi)容物，按本發(fā)明質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)下供試液的制備方法制備供試液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，計(jì)算結(jié)果列入表12，平均含量0.02067，RSD為0.27％，精密度良好。
表12 制劑供試品中士的寧的精密度試驗(yàn)

2.10重現(xiàn)性試驗(yàn)取本品(批號(hào)20011105)內(nèi)容物，按本發(fā)明質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)下供試液的制備方法制備5份供試液，分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算結(jié)果列入表13，平均含量為0.02078％，RSD為1.72％，重現(xiàn)性良好。
表13 制劑供試品中士的寧的重現(xiàn)性試驗(yàn)

2.11供試品溶液中士的寧穩(wěn)定性試驗(yàn)取本品(批號(hào)20011105)內(nèi)容物，按本發(fā)明質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)下供試液的制備方法制備供試液，分別于0、2、4、6、8小時(shí)測(cè)定士的寧含量(見表14)，平均含量為0.02066％，RSD為0.36％，結(jié)果表明，供試品溶液中士的寧在8小時(shí)內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。
表14 制劑供試品中士的寧的穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.12回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，分別精密稱取5份已測(cè)定含量的樣品(批號(hào)20011105，平均含量為0.02078％)適量，置具塞錐形瓶中，精密加入士的寧對(duì)照品溶液(其中以氯仿為溶劑，0.024mg/ml)50ml與濃氨試液8ml，密塞，輕輕振搖，稱定重量，放置24小時(shí)，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用提取液補(bǔ)足減失的重量，充分搖勻，濾過，制得供試液。精密量取續(xù)濾液25m，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取7次，每次30ml，合并硫酸液，加濃氨試液調(diào)解PH值至9-10，再用氯仿提取7次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，制得供試液。分別精密吸取5ul注入液相色譜儀，記錄色譜，測(cè)定含量，計(jì)算回收率(結(jié)果見表15)，平均回收率為98.34％，RSD為1.60％。
表15 供試品溶液中士的寧測(cè)定回收率試驗(yàn)

2.13樣品測(cè)定按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制備供試液和對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣5μl，記錄色譜，測(cè)定峰面積，按下式計(jì)算含量

式中Ai供試品溶液峰面積As對(duì)照品溶液峰面積Cs對(duì)照品溶液濃度(μg/ml)W供試品稱樣量(g)W1平均粒重(g)根據(jù)嚴(yán)格按照生產(chǎn)工藝制備的3批樣品，測(cè)定樣品中士的寧含量，測(cè)定結(jié)果見表16。
表16 3批樣品中士的寧含量測(cè)定結(jié)果

制劑中士的寧含量限度計(jì)算如下士的寧含量低限＝制劑含馬錢子藥材(g/g)×藥材含士的寧含量低限(藥典規(guī)定)×收率＝(30/2184)×1.2％×95％＝1.5659×10-4。每粒含量低限＝1.5659×10-4×0.3g/粒×106＝46.98ug/粒；士的寧含量高限＝制劑含馬錢子藥材(g/g)×藥材含士的寧含量低限(藥典規(guī)定)×收率＝(30/2184)×2.2％×95％＝2.8709×10-4。每粒含量低限＝2.8709×10-4×0.3g/?！?06＝86.13ug/粒；。
故定本品每粒含馬錢子以士的寧(C21H22N2O2)計(jì)為47-86ug。根據(jù)樣品測(cè)定結(jié)果，3批樣品中的士的寧(C21H22N2O2)的含量均在該限度范圍內(nèi)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明的質(zhì)量控制方法保證了本發(fā)明的制劑的質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)能夠較全面有效控制制劑的質(zhì)量特征，具有準(zhǔn)確性和先進(jìn)性，可作為質(zhì)量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的有效技術(shù)手段。對(duì)提高產(chǎn)品質(zhì)量有重大意義。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合事實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，下列各事實(shí)例僅用于說明本發(fā)明，對(duì)本發(fā)明并無限制。
以下發(fā)明實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述效果。
實(shí)施例1抗栓膠囊[處方]當(dāng)歸尾200g、丹參200g、僵蠶(麩炒)100g、壁虎100g、土鱉蟲200g、蜈蚣50g、水蛭200g、蜂房100g、地龍100g、馬錢子(制)30g、麝香3g、蟾酥(酒制)1g、甘草100g、土茯苓200g、延胡索(醋制)100g、骨碎補(bǔ)(制)200g、烏梢蛇(酒制)200g、虻蟲(去翅)50g、穿山甲(沙燙)50g制法以上原料，除麝香、蟾酥外，其余當(dāng)歸尾等十七味粉碎成細(xì)粉，將麝香、蟾酥分別研細(xì)，與上述粉末配研，過篩，混勻，裝入膠囊，即得。
鑒別(1)取抗栓膠囊內(nèi)容物2g，置顯微鏡下觀察菌絲體近無色，細(xì)長卷曲纏結(jié)在體壁中。體壁碎片深棕色或黃色，其上著生短粗或細(xì)長剛毛，?？梢妱偯撀浜蟮膱A形毛窩。纖維束周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維；具緣紋孔導(dǎo)管較大。草酸鈣針晶束存在于黏液細(xì)胞中或散在。糊化淀粉粒團(tuán)塊淡黃色或近無色。角質(zhì)鱗片近無色或淡黃色；橫紋肌纖維可見，淡黃色或近無色，多碎斷，側(cè)面觀多呈條塊狀。
(2)取抗栓膠囊內(nèi)容物3g，加正己烷20ml超聲處理15分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸尾對(duì)照藥材0.1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(3)取本品內(nèi)容物10g，加水250ml加熱微沸回流1小時(shí)，濾過，濾液置水浴上濃縮至浸膏，加甲醇8ml，攪拌，放置1小時(shí)，濾過，濾液濃縮至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振搖，分取苯層作為供試品溶液。另取地龍對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(4)取抗栓膠囊內(nèi)容物8g，置500ml圓底燒瓶中，加水200ml，苯1.0ml，混勻，連接揮發(fā)油測(cè)定器及回流冷凝管，加熱至沸，并保持微沸2小時(shí)，放冷，分取苯層作為供試品溶液。另取麝香酮對(duì)照品，加苯制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照氣相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI E)，用100％甲基硅酮(OV-1)為固定相；FID檢測(cè)器；彈性石英毛細(xì)管色譜柱(30m×0.25mm×0.32μm)；程序升溫200℃-1min-3℃/min-240℃-0min-20℃/min-260℃-5min。分別吸取上述兩種溶液各4μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。供試品色譜中，應(yīng)有與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰。
(5)取抗栓膠囊內(nèi)容物20g，加石油醚(30～60℃)50ml冷浸30分鐘，時(shí)時(shí)振搖，棄去石油醚液，藥渣揮干，加氯仿80ml超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml溶解，濾過，濾液濃縮至約2ml，用中性氧化鋁(100～200目)4g在水浴上攪拌干燥，裝入中性氧化鋁柱(1.5×20cm)，用氯仿50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取華蟾酥毒基、酯蟾毒配基對(duì)照品各適量，加甲醇制成每1ml含華蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；水-乙腈(60∶40)為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長296nm；柱溫40℃。理論板數(shù)以華蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰計(jì)，應(yīng)分別不低于4000。分別吸取上述兩種溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品色譜中，應(yīng)有與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰。
(6)取抗栓膠囊內(nèi)容物10g，加水40ml，鹽酸3ml加熱微沸回流1.5小時(shí)，濾過，棄去濾液，藥渣揮干，加乙醚30ml回流提取1小時(shí)，棄去乙醚液，藥渣揮干，加氯仿30ml回流提取1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品，加無水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(7)取抗栓膠囊內(nèi)容物5g，加氨水適量攪拌濕潤后，加乙醚40ml放置24小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并醋酸層，用氨水調(diào)pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并氯仿液，用水洗至中性，加適量無水硫酸鈉，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5μl，對(duì)照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(2∶1.7)為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，碘熏數(shù)秒后，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
含量測(cè)定a.丹參酮IIA含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-水(85∶15)；流速1.0ml/min；柱溫40℃；檢測(cè)波長270nm。理論板數(shù)以丹參酮IIA(C19H18O3)峰計(jì)，應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹參酮IIA對(duì)照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含丹參酮IIA16μg)。
供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取上清液用濾膜(0.45μm)濾過，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本實(shí)施例本品每粒含丹參以丹參酮IIA(C19H18O3)計(jì)不得少于52μg。
b.士的寧的含量測(cè)定 照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用硅膠為填充劑；氯仿-環(huán)己烷-二乙胺(75∶25∶2)為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；柱溫40℃；檢測(cè)波長為254nm。理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取士的寧對(duì)照品適量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加氯仿50ml與濃氨試液8ml，密塞，輕輕振搖，稱定重量，放置24小時(shí)，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用提取液補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取7次，每次25ml，合并硫酸液，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用氯仿提取7次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙猓D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
每粒含馬錢子以士的寧(C21H22N2O2)計(jì)為47～86μg。
實(shí)施例2抗栓片[處方]當(dāng)歸尾200g、丹參200g、僵蠶(麩炒)100g、壁虎100g、土鱉蟲200g、蜈蚣50g、水蛭200g、蜂房100g、地龍100g、馬錢子(制)30g、麝香3g、蟾酥(酒制)1g、甘草100g、土茯苓200g、延胡索(醋制)100g、骨碎補(bǔ)(制)200g、烏梢蛇(酒制)200g、虻蟲(去翅)50g、穿山甲(沙燙)50g制法以上原料，除麝香、蟾酥外，其余當(dāng)歸尾等十七味粉碎成細(xì)粉，將麝香、蟾酥分別研細(xì)，與上述粉末配研，過篩，混勻，整粒，經(jīng)常規(guī)制成片劑，0.4g/片，即得。
質(zhì)量控制方法鑒別、含量測(cè)定方法同實(shí)施例1，其中含量每片含丹參以丹參酮II A(C19H18O3)計(jì)不得少于52μg；每片含士的寧(C21H22N2O2)計(jì)為47～86μg)。
實(shí)施例3抗栓顆粒[處方]當(dāng)歸尾200g、丹參200g、僵蠶(麩炒)100g、壁虎100g、土鱉蟲200g、蜈蚣50g、水蛭200g、蜂房100g、地龍100g、馬錢子(制)30g、麝香3g、蟾酥(酒制)1g、甘草100g、土茯苓200g、延胡索(醋制)100g、骨碎補(bǔ)(制)200g、烏梢蛇(酒制)200g、虻蟲(去翅)50g、穿山甲(沙燙)50g制法以上原料，除麝香、蟾酥外，其余當(dāng)歸尾等十七味粉碎成細(xì)粉，將麝香、蟾酥分別研細(xì)，與上述粉末配研，過篩，混勻，經(jīng)常規(guī)制成顆粒劑，5g/袋。即得。
質(zhì)量控制方法鑒別、含量測(cè)定方法同實(shí)施例1，其中含量每袋含丹參以丹參酮IIA(C19H18O3)計(jì)不得少于52μg；每袋含士的寧(C21H22N2O2)計(jì)為47～86μg。
實(shí)施例4抗栓膠囊[處方]當(dāng)歸尾200g、丹參200g、僵蠶(麩炒)100g、壁虎100g、土鱉蟲200g、蜈蚣50g、水蛭200g、蜂房100g、地龍100g、馬錢子(制)30g、麝香3g、蟾酥(酒制)1g、甘草100g、土茯苓200g、延胡索(醋制)100g、骨碎補(bǔ)(制)200g、烏梢蛇(酒制)200g、虻蟲(去翅)50g、穿山甲(沙燙)50g制法以上原料，除麝香、蟾酥外，其余當(dāng)歸尾等十七味粉碎成細(xì)粉，將麝香、蟾酥分別研細(xì)，與上述粉末配研，過篩，混勻，裝入膠囊，即得。
鑒別(1)取抗栓膠囊內(nèi)容物，置顯微鏡下觀察菌絲體近無色，細(xì)長卷曲纏結(jié)在體壁中。體壁碎片深棕色或黃色，其上著生短粗或細(xì)長剛毛，?？梢妱偯撀浜蟮膱A形毛窩。纖維束周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維；具緣紋孔導(dǎo)管較大。草酸鈣針晶束存在于黏液細(xì)胞中或散在。糊化淀粉粒團(tuán)塊淡黃色或近無色。角質(zhì)鱗片近無色或淡黃色；橫紋肌纖維可見，淡黃色或近無色，多碎斷，側(cè)面觀多呈條塊狀。
(2)取抗栓膠囊內(nèi)容物3g，加正己烷20ml超聲處理10分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸尾對(duì)照藥材0.1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯(6∶0.7)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(3)取抗栓制劑內(nèi)容物10g，加水250ml加熱微沸回流0.5小時(shí)，濾過，濾液置水浴上濃縮至浸膏，加甲醇8ml，攪拌，放置1小時(shí)，濾過，濾液濃縮至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振搖，分取苯層作為供試品溶液。另取地龍對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯(6∶0.7)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(4)取抗栓膠囊內(nèi)容物8g，置500ml圓底燒瓶中，加水200ml，苯1.0ml，混勻，連接揮發(fā)油測(cè)定器及回流冷凝管，加熱至沸，并保持微沸1.5小時(shí)，放冷，分取苯層作為供試品溶液。另取麝香酮對(duì)照品，加苯制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照氣相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI E)，用100％甲基硅酮(OV-1)為固定相；FID檢測(cè)器；彈性石英毛細(xì)管色譜柱(30m×0.25mm×0.32μm)；程序升溫200℃-1min-3℃/min-240℃-0min-20℃/min-260℃-5min。分別吸取上述兩種溶液各4μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。供試品色譜中，應(yīng)有與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰。
(5)取抗栓膠囊內(nèi)容物20g，加石油醚(30～60℃)50ml冷浸30分鐘，時(shí)時(shí)振搖，棄去石油醚液，藥渣揮干，加氯仿80ml超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml溶解，濾過，濾液濃縮至約2ml，用中性氧化鋁(100～200目)4g在水浴上攪拌干燥，裝入中性氧化鋁柱(1.5×20cm)，用氯仿50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取華蟾酥毒基、酯蟾毒配基對(duì)照品各適量，加甲醇制成每1ml含華蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；水-乙腈(48∶26)為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長293nm；柱溫20℃。理論板數(shù)以華蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰計(jì)，應(yīng)分別不低于4000。分別吸取上述兩種溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品色譜中，應(yīng)有與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰。
(6)取抗栓膠囊內(nèi)容物10g，加水40ml，鹽酸3ml加熱微沸回流1小時(shí)，濾過，棄去濾液，藥渣揮干，加乙醚30ml回流提取0.5小時(shí)，棄去乙醚液，藥渣揮干，加氯仿30ml回流提取1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品，加無水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(7∶11∶3∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(7)取抗栓膠囊內(nèi)容物5g，加氨水適量攪拌濕潤后，加乙醚40ml放置24小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并醋酸層，用氨水調(diào)pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并氯仿液，用水洗至中性，加適量無水硫酸鈉，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5μl，對(duì)照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(1.2∶0.9)為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，碘熏數(shù)秒后，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
含量測(cè)定a.丹參酮IIA含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-水(64∶9.5)；流速1.0ml/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長273nm。理論板數(shù)以丹參酮IIA(C19H18O3)峰計(jì)，應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取丹參酮IIA對(duì)照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含丹參酮IIA16μg)。
供試品溶液的制備 取抗栓膠囊內(nèi)容物3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理10分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取上清液用濾膜(0.45μm)濾過，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每粒含丹參以丹參酮IIA(C19H18O3)計(jì)不得少于52μg。
b.士的寧的含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用硅膠為填充劑；氯仿-環(huán)己烷-二乙胺(52∶16∶0.9)為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；柱溫20℃；檢測(cè)波長為252nm。理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取士的寧對(duì)照品適量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取抗栓膠囊內(nèi)容物10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加氯仿50ml與濃氨試液2ml，密塞，輕輕振搖，稱定重量，放置24小時(shí)，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用提取液補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取5次，每次25ml，合并硫酸液，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用氯仿提取5次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品每粒含馬錢子以士的寧(C21H22N2O2)計(jì)為47～86μg。
實(shí)施例5抗栓膠囊[處方]當(dāng)歸尾200g、丹參200g、僵蠶(麩炒)100g、壁虎100g、土鱉蟲200g、蜈蚣50g、水蛭200g、蜂房100g、地龍100g、馬錢子(制)30g、麝香3g、蟾酥(酒制)1g、甘草100g、土茯苓200g、延胡索(醋制)100g、骨碎補(bǔ)(制)200g、烏梢蛇(酒制)200g、虻蟲(去翅)50g、穿山甲(沙燙)50g制法以上原料，除麝香、蟾酥外，其余當(dāng)歸尾等十七味粉碎成細(xì)粉，將麝香、蟾酥分別研細(xì)，與上述粉術(shù)配研，過篩，混勻，裝入膠囊，即得。
鑒別(1)取抗栓膠囊內(nèi)容物，置顯微鏡下觀察菌絲體近無色，細(xì)長卷曲纏結(jié)在體壁中。體壁碎片深棕色或黃色，其上著生短粗或細(xì)長剛毛，常可見剛毛脫落后的圓形毛窩。纖維束周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維；具緣紋孔導(dǎo)管較大。草酸鈣針晶束存在于黏液細(xì)胞中或散在。糊化淀粉粒團(tuán)塊淡黃色或近無色。角質(zhì)鱗片近無色或淡黃色；橫紋肌纖維可見，淡黃色或近無色，多碎斷，側(cè)面觀多呈條塊狀。
(2)取抗栓膠囊內(nèi)容物3g，加正己烷20ml超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸尾對(duì)照藥材0.1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯(13∶1.4)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(3)取抗栓膠囊內(nèi)容物10g，加水250ml加熱微沸回流1.5小時(shí)，濾過，濾液置水浴上濃縮至浸膏，加甲醇8ml，攪拌，放置1小時(shí)，濾過，濾液濃縮至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振搖，分取苯層作為供試品溶液。另取地龍對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯12∶1.3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(4)取抗栓膠囊內(nèi)容物8g，置500ml圓底燒瓶中，加水200ml，苯1.0ml，混勻，連接揮發(fā)油測(cè)定器及回流冷凝管，加熱至沸，并保持微沸2.5小時(shí)，放冷，分取苯層作為供試品溶液。另取麝香酮對(duì)照品，加苯制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照氣相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI E)，用100％甲基硅酮(OV-1)為固定相；FID檢測(cè)器；彈性石英毛細(xì)管色譜柱(30m×0.25mm×0.32μm)；程序升溫200℃-1min-3℃/min-240℃-0min-20℃/min-260℃-5min。分別吸取上述兩種溶液各4μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。供試品色譜中，應(yīng)有與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰。
(5)取抗栓膠囊內(nèi)容物20g，加石油醚(30～60℃)50ml冷浸30分鐘，時(shí)時(shí)振搖，棄去石油醚液，藥渣揮干，加氯仿80ml超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml溶解，濾過，濾液濃縮至約2ml，用中性氧化鋁(100～200目)4g在水浴上攪拌干燥，裝入中性氧化鋁柱(1.5×20cm)，用氯仿50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取華蟾酥毒基、酯蟾毒配基對(duì)照品各適量，加甲醇制成每1ml含華蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；水-乙腈(70∶52)為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長299nm；柱溫60℃。理論板數(shù)以華蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰計(jì)，應(yīng)分別不低于4000。分別吸取上述兩種溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品色譜中，應(yīng)有與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰。
(6)取抗栓膠囊內(nèi)容物10g，加水40ml，鹽酸3ml加熱微沸回流2小時(shí)，濾過，棄去濾液，藥渣揮干，加乙醚30ml回流提取1.5小時(shí)，棄去乙醚液，藥渣揮干，加氯仿30ml回流提取1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品，加無水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(14∶30∶11∶1.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(7)取抗栓膠囊內(nèi)容物5g，加氨水適量攪拌濕潤后，加乙醚40ml放置24小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并醋酸層，用氨水調(diào)pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并氯仿液，用水洗至中性，加適量無水硫酸鈉，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5μl，對(duì)照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(2.9∶2.8)為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，碘熏數(shù)秒后，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
含量測(cè)定a.丹參酮IIA含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-水(110∶22)；流速1.0ml/min；柱溫55℃；檢測(cè)波長273nm。理論板數(shù)以丹參酮IIA(C19H18O3)峰計(jì)，應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取丹參酮IIA對(duì)照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含丹參酮IIA16μg)。
供試品溶液的制備 取抗栓膠囊內(nèi)容物3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理60分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取上清液用濾膜(0.45μm)濾過，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每粒含丹參以丹參酮IIA(C19H18O3)計(jì)不得少于52μg。
b.士的寧的含量測(cè)定 照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用硅膠為填充劑；氯仿-環(huán)己烷-二乙胺(94∶33∶3.4)為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；柱溫60℃；檢測(cè)波長為256nm。理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取士的寧對(duì)照品適量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取抗栓膠囊內(nèi)容物10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加氯仿50ml與濃氨試液8ml，密塞，輕輕振搖，稱定重量，放置24小時(shí)，超聲處理40分鐘，放冷，再稱定重量，用提取液補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取9次，每次25ml，合并硫酸液，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用氯仿提取9次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每粒含馬錢子以士的寧(C21H22N2O2)計(jì)為47～86μg。
權(quán)利要求
1.一種抗栓制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，包括對(duì)性狀進(jìn)行觀察，根據(jù)藥典的方法對(duì)內(nèi)容物進(jìn)行檢查，對(duì)內(nèi)容物當(dāng)歸尾、地龍、馬錢子、麝香、延胡索、蟾蜍和甘草進(jìn)行鑒別，對(duì)含有的丹參酮IIA和士的寧進(jìn)行含量測(cè)定。
2.權(quán)利要求1的方法，其特征在于，所述抗栓制劑是口服制劑。
3.權(quán)利要求2的方法，其特征在于，所述口服制劑是膠囊、片劑、口服液、糖漿或顆粒劑。
4.權(quán)利要求1的方法，其特征在于，所述抗栓制劑由如下重量份的中藥原料制成當(dāng)歸尾200g、丹參200g、麩炒僵蠶100g、壁虎100g、土鱉蟲200g、蜈蚣50g、水蛭200g、蜂房100g、地龍100g、制馬錢子30g、麝香3g、蟾酥酒制1g、甘草100g、土茯苓200g、醋制延胡索100g、制骨碎補(bǔ)200g、酒制烏梢蛇200g、去翅虻蟲50g、沙燙穿山甲50g。
5.權(quán)利要求1的方法，其特征在于，所述對(duì)內(nèi)容物當(dāng)歸尾、地龍、馬錢子、麝香、延胡索、蟾蜍和甘草進(jìn)行鑒別是以下方法的一種或幾種a.取抗栓制劑內(nèi)容物3g，加正己烷20ml超聲處理10-20分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取當(dāng)歸尾對(duì)照藥材0.1g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照中國藥典2000年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯6-13∶0.7-1.4為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；b.取抗栓制劑內(nèi)容物10g，加水250ml加熱微沸回流0.5-1.5小時(shí)，濾過，濾液置水浴上濃縮至浸膏，加甲醇8ml，攪拌，放置1小時(shí)，濾過，濾液濃縮至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振搖，分取苯層作為供試品溶液；另取地龍對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照中國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯6-12∶0.7-1.3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；c.取抗栓制劑內(nèi)容物10g，加水250ml加熱微沸回流0.5-1.5小時(shí)，濾過，濾液置水浴上濃縮至浸膏，加甲醇8ml，攪拌，放置1小時(shí)，濾過，濾液濃縮至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振搖，分取苯層作為供試品溶液；另取地龍對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照中國藥典2000年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯6-12∶0.7-1.3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；d.取抗栓制劑內(nèi)容物20g，加30～60℃石油醚50ml冷浸30分鐘，時(shí)時(shí)振搖，棄去石油醚液，藥渣揮干，加氯仿80ml超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml溶解，濾過，濾液濃縮至約2ml，用100～200目中性氧化鋁4g在水浴上攪拌干燥，裝入1.5×20cm中性氧化鋁柱，用氯仿50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取華蟾酥毒基、酯蟾毒配基對(duì)照品各適量，加甲醇制成每1ml含華蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國藥典2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；水-乙腈48-70∶26-52為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長296±3nm；柱溫20-60℃；理論板數(shù)以華蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰計(jì)，應(yīng)分別不低于4000；分別吸取上述兩種溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；供試品色譜中，應(yīng)有與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰；e.取抗栓制劑內(nèi)容物10g，加水40ml，鹽酸3ml加熱微沸回流1-2小時(shí)，濾過，棄去濾液，藥渣揮干，加乙醚30ml回流提取0.5-1.5小時(shí)，棄去乙醚液，藥渣揮干，加氯仿30ml回流提取1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液；另取甘草次酸對(duì)照品，加無水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚-苯-醋酸乙酯-冰醋酸7-14∶11-30∶3-11∶0.2-1.1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；f.取抗栓制劑內(nèi)容物5g，加氨水適量攪拌濕潤后，加乙醚40ml放置24小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取，每次20、20、10ml，合并醋酸層，用氨水調(diào)pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取，每次20、20、10ml，合并氯仿液，用水洗至中性，加適量無水硫酸鈉，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5ml的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5μl，對(duì)照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚-醋酸乙酯1.2-2.9∶0.9-2.8為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，碘熏數(shù)秒后，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；所述對(duì)含有的丹參酮IIA和士的寧進(jìn)行含量測(cè)定包括以下步驟照高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-水64-110∶9.5-22；流速1.0ml/min；柱溫25-55℃；檢測(cè)波長270±3nm；理論板數(shù)以丹參酮IIAC19H18O3峰計(jì)，應(yīng)不低于2000；對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹參酮IIA對(duì)照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每1ml中含丹參酮IIA16μg；供試品溶液的制備取抗栓制劑內(nèi)容物3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理10-60分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取上清液用濾膜0.45μm濾過，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
6.權(quán)利要求1的方法，其特征在于，該方法中含量測(cè)定方法為照高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-水85∶15；流速1.0ml/min；柱溫40℃；檢測(cè)波長270nm；理論板數(shù)以丹參酮IIAC19H18O3峰計(jì)，應(yīng)不低于2000；對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹參酮IIA對(duì)照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每1ml中含丹參酮IIA16μg；供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取上清液用濾膜0.45μm濾過，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本品每粒含丹參以丹參酮IIAC19H18O3計(jì)不得少于52μg。
7.權(quán)利要求1的方法，其特征在于，該方法中的含量測(cè)定方法為照高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用硅膠為填充劑；氯仿-環(huán)己烷-二乙胺52-94∶16-33∶0.9-3.4為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；柱溫20-60℃；檢測(cè)波長為254±2nm；理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算應(yīng)不低于2000；對(duì)照品溶液的制備精密稱取士的寧對(duì)照品適量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取抗栓制劑內(nèi)容物10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加氯仿50ml與濃氨試液2-8ml，密塞，輕輕振搖，稱定重量，放置24小時(shí)，超聲處理0-40分鐘，放冷，再稱定重量，用提取液補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置分液漏斗中，按3→100用硫酸溶液提取5-9次，每次25ml，合并硫酸液，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用氯仿提取5-9次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
8.權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，該方法中含量測(cè)定方法為照高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用硅膠為填充劑；氯仿-環(huán)己烷-二乙胺75∶25∶2為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；柱溫40℃；檢測(cè)波長為254nm；理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算應(yīng)不低于2000；對(duì)照品溶液的制備 精密稱取士的寧對(duì)照品適量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加氯仿50ml與濃氨試液8ml，密塞，輕輕振搖，稱定重量，放置24小時(shí)，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用提取液補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液3→100提取7次，每次25ml，合并硫酸液，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用氯仿提取7次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙猓D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；每粒含馬錢子以士的寧C21H22N2O2計(jì)為47～86μg。
9.權(quán)利要求1的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟鑒別a.取抗栓制劑內(nèi)容物3g，加正己烷20ml超聲處理10-20分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取當(dāng)歸尾對(duì)照藥材0.1g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯6-13∶0.7-1.4為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；b.取抗栓制劑內(nèi)容物10g，加水250ml加熱微沸回流0.5-1.5小時(shí)，濾過，濾液置水浴上濃縮至浸膏，加甲醇8ml，攪拌，放置1小時(shí)，濾過，濾液濃縮至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振搖，分取苯層作為供試品溶液；另取地龍對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯6-12∶0.7-1.3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；c.取抗栓膠囊制劑內(nèi)容物8g，置500ml圓底燒瓶中，加水200ml，苯1.0ml，混勻，連接揮發(fā)油測(cè)定器及回流冷凝管，加熱至沸，并保持微沸1.5-2.5小時(shí)，放冷，分取苯層作為供試品溶液；另取麝香酮對(duì)照品，加苯制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照氣相色譜法，用100％甲基硅酮OV-1為固定相；FID檢測(cè)器；彈性石英毛細(xì)管色譜柱30m×0.25mm×0.32μm；程序升溫200℃-1min-3℃/min-240℃-0min-20℃/min-260℃-5min；分別吸取上述兩種溶液各4μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖；供試品色譜中，應(yīng)有與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰；d.取抗栓膠囊制劑內(nèi)容物20g，加30～60℃石油醚50ml冷浸30分鐘，時(shí)時(shí)振搖，棄去石油醚液，藥渣揮干，加氯仿80ml超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml溶解，濾過，濾液濃縮至約2ml，用中性氧化鋁100～200目4g在水浴上攪拌干燥，裝入中性氧化鋁柱1.5×20cm，用氯仿50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取華蟾酥毒基、酯蟾毒配基對(duì)照品各適量，加甲醇制成每1ml含華蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照高效液相色譜法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；水-乙腈48-70∶26-52為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長296±3nm；柱溫20-60℃；理論板數(shù)以華蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰計(jì)，應(yīng)分別不低于4000；分別吸取上述兩種溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；供試品色譜中，應(yīng)有與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰；e.取抗栓膠囊制劑內(nèi)容物10g，加水40ml，鹽酸3ml加熱微沸回流1-2小時(shí)，濾過，棄去濾液，藥渣揮干，加乙醚30ml回流提取0.5-1.5小時(shí)，棄去乙醚液，藥渣揮干，加氯仿30ml回流提取1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液；另取甘草次酸對(duì)照品，加無水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚-苯-醋酸乙酯-冰醋酸7-14∶11-30∶3-11∶0.2-1.1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；f.取抗栓膠囊制劑內(nèi)容物5g，加氨水適量攪拌濕潤后，加乙醚40ml放置24小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取，每次20、20、10ml)，合并醋酸層，用氨水調(diào)pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取，每次20、20、10ml，合并氯仿液，用水洗至中性，加適量無水硫酸鈉，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5ml的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5μl，對(duì)照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚-醋酸乙酯1.2-2.9∶0.9-2.8為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，碘熏數(shù)秒后，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；含量測(cè)定a.丹參酮IIA含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-水64-110∶9.5-22；流速1.0ml/min；柱溫25-55℃；檢測(cè)波長270±3nm；理論板數(shù)以丹參酮IIAC19H18O3峰計(jì)，應(yīng)不低于2000；對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹參酮IIA對(duì)照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每1ml中含丹參酮IIA16μg；供試品溶液的制備取抗栓制劑內(nèi)容物3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理10-60分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取上清液用濾膜0.45μm濾過，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；b.士的寧含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用硅膠為填充劑；氯仿-環(huán)己烷-二乙胺52-94∶16-33∶0.9-3.4為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；柱溫20-60℃；檢測(cè)波長為254±2nm；理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算應(yīng)不低于2000；對(duì)照品溶液的制備精密稱取士的寧對(duì)照品適量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取抗栓制劑內(nèi)容物10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加氯仿50ml與濃氨試液2-8ml，密塞，輕輕振搖，稱定重量，放置24小時(shí)，超聲處理0-40分鐘，放冷，再稱定重量，用提取液補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液3→100提取5-9次，每次25ml，合并硫酸液，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用氯仿提取5-9次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
10.權(quán)利要求1的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟鑒別a.取抗栓膠囊制劑內(nèi)容物3g，加正己烷20ml超聲處理15分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取當(dāng)歸尾對(duì)照藥材0.1g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯9∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；取本品內(nèi)容物10g，加水250ml加熱微沸回流1小時(shí)，濾過，濾液置水浴上濃縮至浸膏，加甲醇8ml，攪拌，放置1小時(shí)，濾過，濾液濃縮至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振搖，分取苯層作為供試品溶液；另取地龍對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯9∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；b.取抗栓膠囊制劑內(nèi)容物10g，加水250ml加熱微沸回流1小時(shí)，濾過，濾液置水浴上濃縮至浸膏，加甲醇8ml，攪拌，放置1小時(shí)，濾過，濾液濃縮至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振搖，分取苯層作為供試品溶液；另取地龍對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯9∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；c.取抗栓膠囊制劑內(nèi)容物8g，置500ml圓底燒瓶中，加水200ml，苯1.0ml，混勻，連接揮發(fā)油測(cè)定器及回流冷凝管，加熱至沸，并保持微沸2小時(shí)，放冷，分取苯層作為供試品溶液；另取麝香酮對(duì)照品，加苯制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照氣相色譜法，用100％甲基硅酮OV-1為固定相；FID檢測(cè)器；彈性石英毛細(xì)管色譜柱30m×0.25mm×0.32μm；程序升溫200℃-1min-3℃/min-240℃-0min-20℃/min-260℃-5min；分別吸取上述兩種溶液各4μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖；供試品色譜中，應(yīng)有與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰；d.取抗栓膠囊制劑內(nèi)容物20g，加30～60℃石油醚50ml冷浸30分鐘，時(shí)時(shí)振搖，棄去石油醚液，藥渣揮干，加氯仿80ml超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml溶解，濾過，濾液濃縮至約2ml，用中性氧化鋁100～200目4g在水浴上攪拌干燥，裝入中性氧化鋁柱1.5×20cm，用氯仿50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取華蟾酥毒基、酯蟾毒配基對(duì)照品各適量，加甲醇制成每1ml含華蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照高效液相色譜法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；水-乙腈60∶40為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長296nm；柱溫40℃；理論板數(shù)以華蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰計(jì)，應(yīng)分別不低于4000；分別吸取上述兩種溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；供試品色譜中，應(yīng)有與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰；e.取抗栓膠囊制劑內(nèi)容物10g，加水40ml，鹽酸3ml加熱微沸回流1.5小時(shí)，濾過，棄去濾液，藥渣揮干，加乙醚30ml回流提取1小時(shí)，棄去乙醚液，藥渣揮干，加氯仿30ml回流提取1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液；另取甘草次酸對(duì)照品，加無水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚-苯-醋酸乙酯-冰醋酸10∶20∶7∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；f.取抗栓膠囊制劑內(nèi)容物5g，加氨水適量攪拌濕潤后，加乙醚40ml放置24小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取，每次20、20、10ml，合并醋酸層，用氨水調(diào)pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取，每次20、20、10ml，合并氯仿液，用水洗至中性，加適量無水硫酸鈉，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5ml的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5μl，對(duì)照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同-以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚-醋酸乙酯2∶1.7為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，碘熏數(shù)秒后，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；含量測(cè)定a.丹參酮IIA含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-水85∶15；流速1.0ml/min；柱溫40℃；檢測(cè)波長270nm；理論板數(shù)以丹參酮IIAC19H18O3峰計(jì)，應(yīng)不低于2000；對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹參酮IIA對(duì)照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每1ml中含丹參酮IIA16μg；供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取上清液用濾膜0.45μm濾過，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本品每粒含丹參以丹參酮IIAC19H18O3計(jì)不得少于52μg；b.士的寧的含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用硅膠為填充劑；氯仿-環(huán)己烷-二乙胺75∶25∶2為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；柱溫40℃；檢測(cè)波長為254nm；理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算應(yīng)不低于2000；對(duì)照品溶液的制備精密稱取士的寧對(duì)照品適量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加氯仿50ml與濃氨試液8ml，密塞，輕輕振搖，稱定重量，放置24小時(shí)，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用提取液補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液3→100提取7次，每次25ml，合并硫酸液，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用氯仿提取7次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；每粒含馬錢子以士的寧C21H22N2O2計(jì)為47～86μg。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥制劑的質(zhì)量控制方法，針對(duì)現(xiàn)有抗栓制劑存在質(zhì)量控制方法落后，產(chǎn)品質(zhì)量不易控制的缺點(diǎn)。我們采用照薄層色譜法對(duì)當(dāng)歸尾、地龍、馬錢子、麝香、延胡索、蟾蜍和甘草等進(jìn)行鑒別，采用高效液相色譜法對(duì)丹參酮IIA和士的寧成分進(jìn)行含量測(cè)定。該質(zhì)量控制方法精密度、靈敏度、穩(wěn)定性均好，制劑以每日服用生藥量的成品量為單位量，每單位量含丹參以丹參酮IIAC
文檔編號(hào)G01N33/15GK1785380SQ20051000331
公開日2006年6月14日 申請(qǐng)日期2005年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月9日
發(fā)明者葉湘武, 王澤坤 申請(qǐng)人:貴州益佰制藥股份有限公司