專利名稱：堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種水解酶——堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，屬于酶學(xué)領(lǐng)域。
近年來(lái)，酶學(xué)在臨床診斷與治療中的應(yīng)用發(fā)展非常迅速，現(xiàn)已分別發(fā)展為醫(yī)學(xué)中的兩個(gè)新領(lǐng)域，即診斷酶學(xué)和治療酶學(xué)。目前已有上百種酶試驗(yàn)可用于臨床診斷。臨床酶學(xué)的這一發(fā)展，部分是由于測(cè)定技術(shù)的發(fā)展，使許多酶的測(cè)定已日益精確和簡(jiǎn)便，可用于常規(guī)測(cè)定。部分是由于認(rèn)識(shí)到某些疾病發(fā)展過(guò)程中酶活力必然發(fā)生改變這一客觀事實(shí)，特別是在疾病的早期，用X光片、CT還未能發(fā)現(xiàn)病灶時(shí)，而體內(nèi)的酶活性已開(kāi)始發(fā)生變化。如果能定期查體，可做到對(duì)疾病的早期發(fā)現(xiàn)。值得一提的是，目前臨床上診斷酶學(xué)的應(yīng)用多數(shù)是對(duì)酶的總活性的測(cè)定，并且市場(chǎng)上已有相應(yīng)試劑盒銷(xiāo)售，其缺點(diǎn)是缺乏器官特異性。目前有關(guān)酶活性測(cè)定的試劑盒約有20～30種，同工酶檢測(cè)試劑盒約有3～5種，但多數(shù)用的是化學(xué)抑制法或免疫抑制法。而同工酶是指酶蛋白結(jié)構(gòu)不同而具有相同的催化特性的一類酶，不同的同工酶來(lái)自不同的組織和細(xì)胞。當(dāng)某一組織或器官發(fā)生病變時(shí)，由于組織受損或細(xì)胞膜通透性的變化，引起細(xì)胞內(nèi)酶大量釋入血液而引起血清酶活性的改變。通過(guò)同工酶的檢測(cè)可確定患病部位，從而提高酶學(xué)診斷的特異性和敏感性，還可判斷預(yù)后。目前由于自行配制酶顯示液，因所用試劑品種繁多，規(guī)格不一，致使酶顯示結(jié)果不穩(wěn)定，結(jié)果判定不統(tǒng)一，且同工酶檢測(cè)操作較繁瑣，費(fèi)時(shí)等等，特別是大型生化分析儀的應(yīng)用，使臨床生化檢測(cè)的操作更簡(jiǎn)便，省時(shí)、省力，但其是對(duì)總酶活性的測(cè)定，缺乏組織特異性，相比較，同工酶的檢測(cè)使病變?cè)缙诙ㄐ院投ㄎ痪途_的多了。
本發(fā)明的目的在于提供一種質(zhì)量?jī)?yōu)良、性能穩(wěn)定、重復(fù)性能好，同時(shí)大大簡(jiǎn)化了檢測(cè)的操作過(guò)程且使用該試劑盒可使同工酶的檢測(cè)操作規(guī)范化，從而使酶活性的檢測(cè)及質(zhì)量控制達(dá)到統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)的水解酶診斷試劑盒的制備。
本發(fā)明的目的由如下技術(shù)方案實(shí)施做醋酸纖維素薄膜電泳，其包括有(1)、配制濃度為0.02～0.1mol/L電極液，pH為7.5-9.0；(2)、用冰乙酸做為固定劑；(3)、配制濃度為0.03～0.2mol/L泡醋纖膜緩沖液；將(3)所述的泡醋纖膜緩沖液分裝安瓿A中；將(2)所述的固定劑分裝安瓿E；(4)配制顯色液(a)、配制濃度為0.05～0.3mol/L緩沖液，pH為9.0～11.0，分裝安瓿B中，(b)將底物和重氮鹽染料分裝安瓿C；(c)、將瓊脂糖或瓊脂分裝安瓿D；其中安瓿C中的內(nèi)容物底物和重氮鹽染料、安瓿D中的內(nèi)容物瓊脂糖或瓊脂，按重量百分比，底物、重氮鹽染料、瓊脂糖或瓊脂分別為20.0％～86.7％、10.5％～75.2％、1.2％～28.6％，將濃度為0.05～0.3mol/L的緩沖液為100ml～250ml分裝安瓿B，用時(shí)將安瓿D加水加熱溶解，然后將安瓿B、安瓿C、安瓿D的內(nèi)容物混合即為顯色液。
做瓊脂糖凝膠電泳，其包括有(1)、配制濃度為0.02～0.1mol/L電極液，pH為7.5-9.0(2)、用冰乙酸做為固定劑分裝安瓿E；(3)、瓊脂糖凝膠的配制將瓊脂糖(或瓊脂)0.5g-1g加入濃度為0.05～0.2mol/L泡醋纖膜緩沖液80ml～120ml，加熱溶解，趁熱分裝，制備為安瓿A；或瓊脂糖凝膠的配制也可以是將瓊脂糖(或瓊脂)、蔗糖和聚乙烯吡咯烷酮，按重量百分比分別為7.0％～32.3％、55.6％～91.0％、1.4％～19.4％，加入100ml～250ml濃度為0.05mol/L～0.2mol/L的泡醋纖膜緩沖液，加熱溶解，趁熱分裝，制備為安瓿A。
(4)配制顯色液(a)、配制濃度為0.05～0.3mol/L緩沖液，pH為9.0～11.0，分裝安瓿B中，(b)將底物和重氮鹽染料分裝安瓿C；(c)、將瓊脂糖或瓊脂分裝安瓿D；其中安瓿C中的內(nèi)容物底物和重氮鹽染料、安瓿D中的內(nèi)容物瓊脂糖或瓊脂，按重量百分比，底物、重氮鹽染料、瓊脂糖或瓊脂分別為20.0％～86.7％、10.5％～75.2％、1.2％～28.6％，將濃度為0.05～0.3mol/L的緩沖液100ml～250ml分裝安瓿B，用時(shí)將安瓿B、安瓿C、安瓿D的內(nèi)容物混合即為顯色液。
顯色液可以制備為凍干粉試劑，其是將所述安瓿B內(nèi)裝緩沖液和底物，溶解后冷凍干燥；其是將0.3g-1.5g底物加入100ml-250ml緩沖液分裝安瓿B。所述安瓿C內(nèi)裝緩沖液和重氮鹽染料，溶解后冷凍干燥，其是將0.2g-1g的重氮鹽染料加入100ml-250ml的緩沖液分裝安瓿C；用時(shí)將安瓿B內(nèi)加水溶解，安瓿C內(nèi)加水溶解，將安瓿B、安瓿C內(nèi)容物混合，即為顯色液。
所述安瓿B中配制的緩沖液，可用Tris系列的緩沖液、磷酸系列的緩沖液或硼酸緩沖液、二氨基二甲基1.3丙二醇-HCL緩沖液；所述安瓿C中底物可用萘酚或它的衍生物的磷酸酯，如α-萘酚磷酸或β-萘酚磷酸或α-萘酚磷酸鹽類化合物、萘酚AS-MX磷酸、萘酚AS-BI磷酸，或其萘酚AS-MX磷酸鹽類和萘酚AS-BI磷酸鹽類，甲苯胺-5-溴-3-吲哚磷酸、硝基苯-5-溴-3-吲哚磷酸、磷酸甲苯胺鹽；重氮鹽染料可用固藍(lán)B或固藍(lán)BB、固藍(lán)R或固藍(lán)RR、固紫B、柘石榴紅GBC、固紅RC、固紅TR、六偶氮付品紅等。
此外，為提高ALP的特異性及敏感性，可結(jié)合用抑制劑和熱失活法。顯色時(shí)在顯色液中加入下列任一種試劑，可特異性抑制某帶而顯示其它成份。這對(duì)于闡明ALP的臟器來(lái)源和病變定位，均具有重要價(jià)值。
特異性抑制劑在顯色液中加入濃度為5～10mM L-苯丙氨酸，抑制ALP4、ALP5；濃度為5～10mM L-高精氨酸，抑制ALP2；濃度為5～10mM L-色氨酸或亮氨酸，抑制ALP4；濃度為3～5M尿素，抑制ALP3；濃度為1M乙二胺四乙酸，除ALP4外，其余均受抑制。
熱失活法將樣品在65℃水浴30分鐘，除ALP4外，其余均受抑制。
堿性磷酸酶同工酶(ALP EC 3.1.3.1)是在堿性條件下水解多種磷酸酯的酶，廣泛分布于人體各組織。同工酶的檢測(cè)有助于肝臟疾患和骨骼疾患的診斷和鑒別診斷。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是將試劑分裝于安瓿內(nèi)，便于保存，性能穩(wěn)定，重復(fù)性好，減輕了勞動(dòng)強(qiáng)度，改變了傳統(tǒng)的人工配制試劑的繁瑣。并由此而引起的操作過(guò)程中個(gè)體間存在的差異，從而使操作規(guī)范化，使酶的檢測(cè)及質(zhì)量控制達(dá)到統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)使用試劑盒簡(jiǎn)化了操作過(guò)程，省時(shí)、快速、便于推廣。尤其是當(dāng)做大量樣品檢測(cè)時(shí)試劑盒更方便適用，為臨床疾病的診斷與鑒別診斷提供依據(jù)。
實(shí)施例實(shí)施例1、醋酸纖維素薄膜電泳，其包括有(1)、配制濃度為0.02mol/L巴比妥緩沖液為電極液，pH為8.0；(2)、用冰乙酸做為固定劑，取2ml分裝安瓿E；(3)、配制濃度為0.2mol/L泡醋纖膜緩沖液，分裝安瓿A中；(4)配制顯色液(a)、配制濃度為0.05mol/LTris緩沖液100ml，pH為9.0，分裝安瓿B中，(b)將底物3mg和重氮鹽染料10mg分裝安瓿C；(c)、將瓊脂糖0.3mg分裝安瓿D；用時(shí)將安瓿B的內(nèi)容物、安瓿C的內(nèi)容物混合、安瓿D內(nèi)容物加水加熱溶解后，加入安瓿B的內(nèi)容物、安瓿C的內(nèi)容物的混合液，混合后即為顯色液。
應(yīng)用首先泡膜打開(kāi)安瓿A加水至25ml，將醋纖膜泡在該液內(nèi)20分鐘。然后將醋纖膜取出，夾在濾紙中間吸去多余水份，膜條無(wú)光澤面朝上。用點(diǎn)樣片醮血清點(diǎn)在距膜一端2cm處。將配制好的電極緩沖液倒入電泳槽內(nèi)，使槽內(nèi)電極緩沖液處于同一水平。在電泳槽的陰、陽(yáng)極槽內(nèi)分別用合適尺寸的濾紙折疊4層搭在槽的兩側(cè)，做為鹽橋。將點(diǎn)樣的膜條點(diǎn)樣面朝下，點(diǎn)樣處朝向陰極端搭在鹽橋上，膜條需與鹽橋貼緊，繃展。接通電源，調(diào)節(jié)電壓100～260v，10～30分鐘后，關(guān)閉電源。然后進(jìn)行同工酶顯色將安瓿B內(nèi)液體加入安瓿C，使溶解，然后將安瓿D內(nèi)干粉倒入一小試管，加1ml水，加熱溶解，然后將安瓿B、安瓿C混合液加入溶解好的安瓿D液內(nèi)，混勻，趁熱鋪在一個(gè)玻璃板上，冷卻后，將電泳過(guò)膜條取出，點(diǎn)樣面貼在膠板上，在37℃溫育20～30分鐘，即可見(jiàn)同工酶譜。
結(jié)果血清堿性磷酸酶(ALP)同工酶從正極向負(fù)極可出現(xiàn)ALP1-6條區(qū)帶，正常人血清出現(xiàn)ALP2(肝型)和ALP3(骨型)兩種同工酶。原發(fā)性肝癌、肝硬化時(shí)，肝型同工酶活性增強(qiáng)。成骨肉瘤、甲亢時(shí)骨型同工酶活性增強(qiáng)。妊娠中，血清可出現(xiàn)ALP4，如果ALP4活性急劇下降，常常是胎盤(pán)機(jī)能不全或胎兒已經(jīng)死亡的診斷標(biāo)志，其他人出現(xiàn)ALP4，預(yù)示有腫瘤疾患，ALP1和ALP6在病理情況時(shí)出現(xiàn)。
實(shí)施例2、做醋酸纖維素薄膜電泳，其包括有(1)、配制濃度為0.1mol/Ltris-硼酸緩沖液為電極液，pH為9.0；(2)、用冰乙酸做為固定劑，取2.5ml分裝安瓿E；(3)、配制濃度為0.1mol/Ltris-HCL泡醋纖膜緩沖液，分裝安瓿A中；(4)配制顯色液(a)、配制濃度為0.2mol/L硼酸-NaOH緩沖液100ml，pH為10.0，分裝安瓿B中，(b)將底物10mg和重氮鹽染料6mg分裝安瓿C；(c)、將瓊脂糖2mg分裝安瓿D；用時(shí)將安瓿B的內(nèi)容物、安瓿C的內(nèi)容物混合、安瓿D內(nèi)容物加水加熱溶解后，加入安瓿B的內(nèi)容物、安瓿C的內(nèi)容物的混合液，混合后即為顯色液。
應(yīng)用如實(shí)施例1所述，結(jié)果也相同。
實(shí)施例3、做瓊脂糖凝膠電泳，其包括有(1)、配制濃度為0.08mol/Ltris-硼酸緩沖液電極液，pH為8.6；(2)、用冰乙酸做為固定劑，取2.5m1分裝安瓿E；(3)、瓊脂糖凝膠的配制將瓊脂糖0.5g加入濃度為0.1mol/L泡醋纖膜緩沖液80ml，加熱溶解，趁熱分裝，制備為安瓿A；(4)配制顯色液(a)、配制濃度為0.2mol/L二氨基二甲基1.3丙二醇緩沖液100ml，pH為11.0，分裝安瓿B中，(b)將底物15mg和重氮鹽染料6mg分裝安瓿C；用時(shí)將安瓿B的內(nèi)容物、安瓿C的內(nèi)容物混合，即為顯色液。
應(yīng)用將安瓿A隔水加熱溶解，趁熱澆在一玻璃板上，冷卻后在距膜一端約2cm處放0.3×1cm的濾紙。約10分鐘后取下濾紙，在該處加樣8微升，放置5分鐘。然后將凝膠板放在加好電極液的電泳槽架上，兩端用4層紗布搭橋，電壓100v，電泳30分鐘，關(guān)閉電源。將膠板取出加入上述已混合好的顯色液，放在37℃溫箱里溫育20-30分鐘，即可見(jiàn)同工酶顯色帶。
結(jié)果血清堿性磷酸酶(ALP)同工酶從正極向負(fù)極可出現(xiàn)ALP1-6條區(qū)帶，正常人血清出現(xiàn)ALP2(肝型)和ALP3(骨型)兩種同工酶。原發(fā)性肝癌、肝硬化時(shí)，肝型同工酶活性增強(qiáng)。成骨肉瘤、甲亢時(shí)骨型同工酶活性增強(qiáng)。妊娠中，血清可出現(xiàn)ALP4，如果ALP4活性急劇下降，常常是胎盤(pán)機(jī)能不全或胎兒已經(jīng)死亡的診斷標(biāo)志，其他人出現(xiàn)ALP4，預(yù)示有腫瘤疾患，ALP1和ALP6在病理情況時(shí)出現(xiàn)。
實(shí)施例4、做瓊脂糖凝膠電泳，其包括有(1)、配制濃度為0.03mol/L巴比妥緩沖液做為電極液，pH為8.6；(2)、用冰乙酸做為固定劑，取2.5ml分裝安瓿E；(3)、瓊脂糖凝膠的配制是將瓊脂1g、蔗糖2g和聚乙烯吡咯烷酮0.5g，加入100ml濃度為0.06mol/L的泡醋纖膜緩沖液，加熱溶解，趁熱分裝，制備為安瓿A。(4)配制顯色液(a)、配制濃度為0.2mol/L硼酸-NaOH緩沖液100ml，pH為9.8，分裝安瓿B中，(b)將底物8mg和重氮鹽染料4mg分裝安瓿C；用時(shí)將安瓿B、安瓿C的內(nèi)容物混合即為顯色液。
應(yīng)用如實(shí)施例3所述，結(jié)果也相同。
實(shí)施例5、做醋酸纖維素薄膜電泳，其包括有(1)、配制濃度為0.02mol/L巴比妥緩沖液為電極液，pH為8.0；(2)、用冰乙酸做為固定劑，取2ml分裝安瓿E；(3)、配制濃度為0.1mol/L泡醋纖膜緩沖液，分裝安瓿A中；(4)配制顯色液(a)、配制濃度為0.05mol/LTris緩沖液100ml，pH為10.2，分裝安瓿B中，(b)將底物3mg和重氮鹽染料10mg分裝安瓿F；(c)、將瓊脂糖0.3mg分裝安瓿D；(d)、將6mmol/L L-苯丙氨酸分裝安瓿E，用時(shí)將安瓿B的內(nèi)容物、安瓿C的內(nèi)容物和安瓿E的內(nèi)容物混合、安瓿D內(nèi)容物加水加熱溶解后，加入安瓿B的內(nèi)容物、安瓿C的內(nèi)容物、安瓿E的內(nèi)容物的混合液，混合后趁熱鋪板，即為顯色膠板。
應(yīng)用首先泡膜打開(kāi)安瓿A加水至25ml，將醋纖膜泡在該液內(nèi)20分鐘。然后將醋纖膜取出，夾在濾紙中間吸去多余水份，膜條無(wú)光澤面朝上。用點(diǎn)樣片醮血清點(diǎn)在距膜一端2cm處。將配制好的電極緩沖液倒入電泳槽內(nèi)，使槽內(nèi)電極緩沖液處于同一水平。在電泳槽的陰、陽(yáng)極槽內(nèi)分別用合適尺寸的濾紙折疊4層搭在槽的兩側(cè)，做為鹽橋。將點(diǎn)樣的膜條點(diǎn)樣面朝下，點(diǎn)樣處朝向陰極端搭在鹽橋上，膜條需與鹽橋貼緊，繃展。接通電源，調(diào)節(jié)電壓100～260v，10～30分鐘后，關(guān)閉電源。然后進(jìn)行同工酶顯色將電泳過(guò)膜條取出，點(diǎn)樣面貼在上述顯色膠板上，在37℃溫育20～30分鐘，即可見(jiàn)同工酶譜。
結(jié)果妊娠中可出現(xiàn)ALP4，其它人出現(xiàn)ALP4，提示有腫瘤疾患，用上述試劑顯示后，ALP4消失，ALP5肝臟疾患時(shí)出現(xiàn)，加上述抑制劑ALP5消失。由此可鑒別ALP4、ALP5的臟器來(lái)源或病變定位。
實(shí)施例6、做瓊脂糖凝膠電泳，其包括有(1)、配制濃度為0.05mol/L巴比妥緩沖液電極液，pH為8.6；(2)、用冰乙酸做為固定劑，取2.0ml分裝安瓿E；(3)、瓊脂糖凝膠的配制將瓊脂糖0.7g加入濃度為0.08mol/L泡醋纖膜緩沖液100ml，加熱溶解，趁熱分裝，制備為安瓿A；(4)配制顯色液顯色液可以制備為凍干粉試劑，其是將0.5g底物和100ml緩沖液溶解后分裝安瓿B，冷凍干燥；將0.7g重氮鹽染料和100ml緩沖液，溶解后分裝安瓿C，冷凍干燥，用時(shí)將安瓿B內(nèi)加水溶解，安瓿C內(nèi)加水溶解，將安瓿B、安瓿C內(nèi)容物混合，即為顯色液。
應(yīng)用將安瓿A隔水加熱溶解，趁熱澆在一玻璃板上，冷卻后在距膜一端約2cm處放0.3×1cm的濾紙。約10分鐘后取下濾紙，在該處加樣8微升，放置5分鐘。然后將凝膠板放在加好電極液的電泳槽架上，兩端用4層紗布搭橋，電壓100v，電泳30分鐘，關(guān)閉電源。將膠板取出加入上述已混合好的顯色液，放在37℃溫箱里溫育20-30分鐘，即可見(jiàn)同工酶顯色帶。
結(jié)果血清堿性磷酸酶(ALP)同工酶從正極向負(fù)極可出現(xiàn)ALP1-6條區(qū)帶，正常人血清出現(xiàn)ALP2(肝型)和ALP3(骨型)兩種同工酶。原發(fā)性肝癌、肝硬化時(shí)，肝型同工酶活性增強(qiáng)。成骨肉瘤、甲亢時(shí)骨型同工酶活性增強(qiáng)。妊娠中，血清可出現(xiàn)ALP4，如果ALP4活性急劇下降，常常是胎盤(pán)機(jī)能不全或胎兒已經(jīng)死亡的診斷標(biāo)志，其他人出現(xiàn)ALP4，預(yù)示有腫瘤疾患，ALP1和ALP6在病理情況時(shí)出現(xiàn)。
權(quán)利要求
1.一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，做醋酸纖維素薄膜電泳，其包括有(1)、配制0.02～0.1mol/L電極液，pH為7.5-9.0；(2)、將冰乙酸做為固定劑；(3)、配制0.05～0.2mol/L泡醋纖膜緩沖液；其特征在于將(3)所述的泡醋纖膜緩沖液分裝安瓿A中；將(2)所述的固定劑分裝安瓿E；(4)配制顯色液(a)、配制濃度為0.05～0.3mol/L緩沖液，pH為9.0～11.0，分裝安瓿B中；(b)將底物和重氮鹽染料分裝安瓿C；(c)、將瓊脂糖或瓊脂分裝安瓿D；其中安瓿C中的內(nèi)容物底物和重氮鹽染料、安瓿D中的內(nèi)容物瓊脂糖或瓊脂，按重量百分比，底物、重氮鹽染料、瓊脂糖或瓊脂分別為20.0％～86.7％、10.5％～75.2％、1.2％～28.6％，將濃度為0.05～0.3mol/L的緩沖液為100ml～250ml分裝安瓿B，用時(shí)將安瓿B加入安瓿C內(nèi)、安瓿D的內(nèi)容物加水加熱溶解，然后將安瓿B、安瓿C的混合液，加入安瓿D內(nèi)混合即為顯色液。
2.一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，做瓊脂糖凝膠電泳，其包括有(1)、配制濃度為0.02～0.1mol/L電極液，pH為7.5-9.0；(2)、用冰乙酸做為固定劑；其特征在于將(2)所述的固定劑分裝安瓿E；(3)、瓊脂糖凝膠的配制將瓊脂糖(或瓊脂)0.5g-1g加入濃度為0.05～0.2mol/L泡醋纖膜緩沖液80ml～120ml，加熱溶解，趁熱分裝，制備為安瓿A；(4)配制顯色液(a)、配制濃度為0.05～0.3mol/L緩沖液，pH為9.0～11.0，分裝安瓿B中，(b)將底物和重氮鹽染料分裝安瓿C；(c)、將瓊脂糖或瓊脂分裝安瓿D；其中安瓿C中的內(nèi)容物底物和重氮鹽染料、安瓿D中的內(nèi)容物瓊脂糖或瓊脂，按重量百分比，底物、重氮鹽染料、瓊脂糖或瓊脂分別為20.0％～86.7％、10.5％～75.2％、1.2％～28.6％，將濃度為0.05～0.3mol/L的緩沖液為100ml～250ml分裝安瓿B，用時(shí)將安瓿B、安瓿C、安瓿D的內(nèi)容物混合即為顯色液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于顯色時(shí)在所述顯色液中加入特異性抑制劑分裝安瓿F，其中安瓿F中可加入濃度為5～10mM L-苯丙氨酸，抑制ALP4、ALP5；或濃度為5～10mM L-高精氨酸，抑制ALP2；或濃度為5～10mM L-色氨酸或亮氨酸，抑制ALP4；或濃度為3～5M尿素，抑制ALP3；或濃度為1M乙二胺四乙酸，抑制ALP2、ALP3、ALP5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于所述安瓿B中配制的緩沖液，可用Tris系列的緩沖液、磷酸系列的緩沖液或硼酸緩沖液、二氨基二甲基1.3丙二醇-HCL緩沖液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于所述安瓿C中底物可用萘酚或它的衍生物的磷酸酯，如α-萘酚磷酸或β-萘酚磷酸或α-萘酚磷酸鹽類化合物、萘酚AS-MX磷酸、萘酚AS-BI磷酸，或其萘酚AS-MX磷酸鹽類和萘酚AS-BI磷酸鹽類，甲苯胺-5-溴3-吲哚磷酸、硝基苯-5-溴-3-吲哚磷酸、磷酸甲苯胺鹽；重氮鹽染料可用固藍(lán)B或固藍(lán)BB、固藍(lán)R或固藍(lán)RR、固紫B、柘石榴紅GBC、固紅RC、固紅TR、六偶氮付品紅等。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于所述顯色液的配制，其中所述安瓿B內(nèi)裝緩沖液和底物，溶解后冷凍干燥；其是將0.3g-1.5g底物加入100ml-250ml緩沖液溶解后分裝安瓿B。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于所述顯色液的配制，其中所述安瓿C內(nèi)裝緩沖液和重氮鹽染料，溶解后冷凍干燥，其是將0.2g-1g的重氮鹽染料加入100ml-250ml的緩沖液溶解后分裝安瓿C。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于所述瓊脂糖凝膠的配制也可以是將瓊脂糖(或瓊脂)、蔗糖和聚乙烯吡咯烷酮，按重量百分比分別為7.0％～32.3％、55.6％～91.0％、1.4％～19.4％，加入100ml～250ml濃度為0.05mol/L～0.2mol/L的泡醋纖膜緩沖液，加熱溶解，趁熱分裝，制備為安瓿A。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種水解酶——堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備,屬于酶學(xué)領(lǐng)域。其是將試劑分裝于安瓿內(nèi),便于保存,性能穩(wěn)定,重復(fù)性好,減輕了勞動(dòng)強(qiáng)度,改變了傳統(tǒng)的人工配制試劑的繁瑣。并由此而引起的操作過(guò)程中個(gè)體間存在的差異,從而使操作規(guī)范化,使酶的檢測(cè)及質(zhì)量控制達(dá)到統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn),同時(shí)使用試劑盒簡(jiǎn)化了操作過(guò)程,省時(shí)、快速、便于推廣。尤其是當(dāng)做大量樣品檢測(cè)時(shí)試劑盒更方便適用,為臨床疾病的診斷與鑒別診斷提供依據(jù)。
文檔編號(hào)G01N33/531GK1381725SQ0111075
公開(kāi)日2002年11月27日 申請(qǐng)日期2001年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月20日
發(fā)明者閻美容, 舍英, 侯金鳳, 陳必珍 申請(qǐng)人:呼和浩特同日試劑有限公司