br>[0178] 圖1和圖2顯示分別于pH 6. 25使用MES和于pH 7. 0使用MOPS的收率的等高線 圖。如文獻(xiàn)預(yù)期的，對(duì)于給定的pH和MES濃度，收率隨精氨酸濃度增加單調(diào)增加。令人驚 訝的是，對(duì)于給定的pH和精氨酸濃度，收率也隨MES和MOPS的濃度單調(diào)增加。定量上，發(fā) 現(xiàn)MES在解吸中至少與精氨酸同樣有效，而MOPS的有效性相比精氨酸略低。綜上所述，MES 和MOPS在從多峰樹脂解吸生物分子中都與添加劑如精氨酸發(fā)揮相似的作用。
[0179] 認(rèn)為MES和MOPS是對(duì)于在下游加工中生物分子的洗脫特別適合的添加劑。這是 由于（i)MES和MOPS溶液比精氨酸和胍具有較低導(dǎo)電性，使得后續(xù)的離子交換步驟更易進(jìn) 行，和（ii)由于MES和MOPS的生物分子溶液通常作為Good's緩沖系統(tǒng)的一部分用于生物 化學(xué)，因此認(rèn)為包含MES和MOPS的溶液比其他添加劑更少破壞生物分子。
[0180] 正如其他添加劑（如NaCl、尿素、胍鹽等）可應(yīng)用于許多不同多峰層析樹脂， MES和MOPS可用于從其他可用的多峰層析樹脂（如Pal I PPA HyperCe 1?、Pal I HEA HyperCel?、Pall MEP HyperCelTM、Capto? MMC和潛在的多種其他組合疏水、離子和/或氫 鍵相互作用的多峰樹脂）解吸生物分子。
[0181] 此外，預(yù)期其他 Good's 緩沖液（例如，ADA、ACES、BES、Bicine、CAPS、CAPSO、CHES、 HEPES、MES、MOPS、PIPES、TAPS、TES和Tris)在從多峰層析樹脂解吸生物分子中呈現(xiàn)與MES 和MOPS相似的具有優(yōu)勢(shì)的特性。
[0182] 賣施例2:伸用Good's緩沖液和二醇的組合解吸牛物分子
[0183] 對(duì)來(lái)自實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了修飾，其中用乙二醇取代精氨酸。該實(shí)驗(yàn)的等高線 圖示于圖3。
[0184] 表2:用MES和二醇洗脫的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和結(jié)果
[0185]
[0186] *大于100%的收率是不可能的且僅為測(cè)量誤差的結(jié)果。然而，認(rèn)為其接近100%。
[0187] 其他實(shí)施方案在權(quán)利要求中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于純化和富集生物分子的方法，所述方法包括如下步驟： (a) 提供包含所述生物分子的水溶液； (b) 將所述水溶液與多峰（multimodal)樹脂接觸； (c) 任選地用水性洗滌緩沖液洗滌所述多峰樹脂； (d) 通過(guò)水性緩沖溶液從所述多峰樹脂洗脫所述生物分子， 其中所述水性緩沖溶液包含如下的一種或多種： (i) 至少15mM的Good's緩沖液； (ii) 0-400mM的丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘 氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色 氨酸、酪氨酸或纈氨酸； (iii) 0-400mM的鹽酸胍、硫氰酸胍、氯化銨、硫酸銨、磷酸銨、乙酸銨、氯化鈉、檸檬酸 鈉、辛酸鈉、磷酸鈉、碘化鈉、氯化鉀、檸檬酸鉀、硫酸鉀、磷酸鉀、碘化鉀、氯化鎂、硫酸鎂、磷 酸鎂、氯化鈣、硫酸鈣、磷酸鈣或?；撬?；和 (iv) l%-60% (v/v)的乙二醇或丙二醇或乙二醇和丙二醇的混合物； 和 (e) 收集包含生物分子的級(jí)分，由此獲得純化或富集形式的生物分子。2. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述水性緩沖溶液包含15mM至2. 5M的Good' s緩沖 液。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中所述Good's緩沖液是MES、M0PS或Tris。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中所述Good' s緩沖液是MES。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中所述Good' s緩沖液是MOPS。6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)的方法，其中所述生物分子是蛋白。7. 根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述蛋白是酶。8. 根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述酶是糖苷酶。9. 根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述糖苷酶是α -半乳糖苷酶。10. 根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述α -半乳糖苷酶選自下組：阿加糖酶 (agalsidase) α和阿加糖酶β。11. 根據(jù)權(quán)利要求1至10任一項(xiàng)的方法，其中所述多峰樹脂選自下組：CaptO ? Adhere、Capto? MMC、Pall PPA HyperCel?、Pall HEA HyperCel?、Pall MEP HyperCel?和 Eshmuno? HCX。12. -種通過(guò)根據(jù)權(quán)利要求1至11任一項(xiàng)的方法獲得的純化的生物分子。13. -種制備物，其包含： (a) 生物分子；和 (b) 水性緩沖溶液，其包含如下的一種或多種： (i) 至少15mM的Good's緩沖液； (ii) 0-400mM的丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘 氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色 氨酸、酪氨酸或纈氨酸； (iii) 0-400mM的鹽酸胍、硫氰酸胍、氯化銨、硫酸銨、磷酸銨、乙酸銨、氯化鈉、檸檬酸 鈉、辛酸鈉、磷酸鈉、碘化鈉、氯化鉀、檸檬酸鉀、硫酸鉀、磷酸鉀、碘化鉀、氯化鎂、硫酸鎂、磷 酸鎂、氯化鈣、硫酸鈣、磷酸鈣或?；撬?；和 (iv) l%-60% (v/v)的乙二醇或丙二醇或乙二醇和丙二醇的混合物。14. 根據(jù)權(quán)利要求13的制備物，其中所述水性緩沖溶液包含15mM和2. 5M的Good' s 緩沖液。15. 根據(jù)權(quán)利要求13或14的制備物，其中所述至少一種Good's緩沖液選自下組:MES、 MOPS 或 Tris。16. 根據(jù)權(quán)利要求13或14的制備物，其中所述Good' s緩沖液是MES。17. 根據(jù)權(quán)利要求13或14的制備物，其中所述Good' s緩沖液是MOPS。18. 根據(jù)權(quán)利要求13至17任一項(xiàng)的制備物，其中所述生物分子是蛋白。19. 根據(jù)權(quán)利要求18的制備物，其中所述蛋白是酶。20. 根據(jù)權(quán)利要求19的制備物，其中所述酶是糖苷酶。21. 根據(jù)權(quán)利要求20的制備物，其中所述糖苷酶是α -半乳糖苷酶。22. 根據(jù)權(quán)利要求21的制備物，其中所述α-半乳糖苷酶選自下組：阿加糖酶α和阿 加糖酶β。23. -種用于從多峰樹脂解吸生物分子的方法，包括將結(jié)合于多峰樹脂的生物分子與 水性緩沖液接觸，其中所述水性緩沖液包含如下的一種或多種： (i) 至少15mM的Good's緩沖液； (ii) 0-400mM的丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘 氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色 氨酸、酪氨酸或纈氨酸； (iii) 0-400mM的鹽酸胍、硫氰酸胍、氯化銨、硫酸銨、磷酸銨、乙酸銨、氯化鈉、檸檬酸 鈉、辛酸鈉、磷酸鈉、碘化鈉、氯化鉀、檸檬酸鉀、硫酸鉀、磷酸鉀、碘化鉀、氯化鎂、硫酸鎂、磷 酸鎂、氯化鈣、硫酸鈣、磷酸鈣或?；撬?；和 (iv) l%-60% (v/v)的乙二醇或丙二醇或乙二醇和丙二醇的混合物。24. -種通過(guò)將其上已吸附所述生物分子的多峰樹脂與水性緩沖溶液接觸來(lái)增加吸附 在多峰樹脂上的生物分子回收率的方法，其中所述水性緩沖溶液包含如下的一種或多種： (i) 至少15mM的Good's緩沖液； (ii) 0-400mM的丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘 氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色 氨酸、酪氨酸或纈氨酸； (iii) 0-400mM的鹽酸胍、硫氰酸胍、氯化銨、硫酸銨、磷酸銨、乙酸銨、氯化鈉、檸檬酸 鈉、辛酸鈉、磷酸鈉、碘化鈉、氯化鉀、檸檬酸鉀、硫酸鉀、磷酸鉀、碘化鉀、氯化鎂、硫酸鎂、磷 酸鎂、氯化鈣、硫酸鈣、磷酸鈣或?；撬?；和 (iv) l%-60% (v/v)的乙二醇或丙二醇或乙二醇和丙二醇的混合物。25. 權(quán)利要求23或權(quán)利要求24的方法，其中所述水性緩沖溶液包含15mM-2. 5M的 Good's緩沖液。26. 權(quán)利要求23至25任一項(xiàng)的方法，其中所述Good's緩沖液選自下組：MES、MOPS或 Tris027. 權(quán)利要求23至25任一項(xiàng)的方法，其中所述Good's緩沖液是MES。28. 權(quán)利要求23至25任一項(xiàng)的方法，其中所述Good's緩沖液是MOPS。29. 權(quán)利要求23至28任一項(xiàng)的方法，其中所述生物分子是蛋白。30. 權(quán)利要求29的方法，其中所述蛋白是酶。31. 權(quán)利要求30的方法，其中所述酶是糖苷酶。32. 權(quán)利要求31的方法，其中所述糖苷酶是α -半乳糖苷酶。33. 權(quán)利要求32的方法，其中所述α-半乳糖苷酶選自下組：阿加糖酶α和阿加糖酶 β O34. 權(quán)利要求23至33任一項(xiàng)的方法，其中所述多峰樹脂選自下組：Capto ? Adhere、 Capto? MMC、Pall PPA HyperCel?、Pall HEA HyperCel?、Pall MEP HyperCeln^ Eshmuno? HCX035. -種制品，其包含： (a) 包裝材料或容器； (b) 水性緩沖溶液，所述水性緩沖溶液包含如下的一種或多種： (i) 至少15mM的Good's緩沖液； (ii) 0-400mM的丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘 氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色 氨酸、酪氨酸或纈氨酸； (iii) 0-400mM的尿素、鹽酸胍、硫氰酸胍、氯化銨、硫酸銨、磷酸銨、乙酸銨、氯化鈉、檸 檬酸鈉、辛酸鈉、磷酸鈉、碘化鈉、氯化鉀、檸檬酸鉀、硫酸鉀、磷酸鉀、碘化鉀、氯化鎂、硫酸 鎂、磷酸鎂、氯化鈣、硫酸鈣、磷酸鈣或?；撬?；和 (iv) l%-60% (v/v)的乙二醇或丙二醇或乙二醇和丙二醇的混合物，和 (c) 包含用于實(shí)施根據(jù)權(quán)利要求1至11任一項(xiàng)的方法的說(shuō)明的數(shù)據(jù)載體。36. 根據(jù)權(quán)利要求35的制品，其中所述數(shù)據(jù)載體是在所述包裝材料或容器或包裝說(shuō)明 書上存在的標(biāo)簽。37. 根據(jù)權(quán)利要求35或權(quán)利要求36的制品，其中所述數(shù)據(jù)載體包括書面信息、視覺(jué)信 息或計(jì)算機(jī)可讀信息。38. 根據(jù)權(quán)利要求35至37任一項(xiàng)的制品，其中所述數(shù)據(jù)載體進(jìn)一步包括一種或多種下 列信息： (i) 使用水性緩沖溶液的說(shuō)明； (ii) 質(zhì)量信息如關(guān)于所述水性緩沖溶液的批次/批號(hào)、制造或組裝地點(diǎn)或過(guò)期或銷售 日期的信息，或關(guān)于制品正確的儲(chǔ)存或處理的信息； (iii) 關(guān)于所述水性緩沖溶液的組成的信息； (iv) 關(guān)于實(shí)施根據(jù)權(quán)利要求1至11任一項(xiàng)的方法時(shí)獲得的信息解讀的信息； (V)關(guān)于采用不適合的方法時(shí)可能的誤解或錯(cuò)誤結(jié)果的警告；和 (vi)關(guān)于使用不合適的試劑和/或緩沖液時(shí)可能的誤解或錯(cuò)誤結(jié)果的警告。39. 根據(jù)權(quán)利要求35至38任一項(xiàng)的制品，其進(jìn)一步包含一種或多種如下組分： (d) 層析介質(zhì)； (e) 層析柱；和 (f) 可用于校準(zhǔn)純化或富集生物分子的方法的參照生物分子。40. 根據(jù)權(quán)利要求39的制品，其中所述層析柱預(yù)裝有所述層析介質(zhì)。41. 根據(jù)權(quán)利要求39至40任一項(xiàng)的制品，其中所述層析介質(zhì)是多峰層析樹脂。42. 根據(jù)權(quán)利要求41的制品，其中所述多峰層析樹脂選自下組：Capto ? Adhere、 Capto? MMC、Pall PPA HyperCel?、Pall HEA HyperCel?、Pall MEP HyperCeln^ Eshmuno? HCX043. 根據(jù)權(quán)利要求39至42任一項(xiàng)的制品，其中所述參照生物分子是蛋白或核酸。44. 根據(jù)權(quán)利要求35至43任一項(xiàng)的制品，其中所述水性緩沖溶液包含15mM-2. 5M的 Good's緩沖液。45. 根據(jù)權(quán)利要求35至44任一項(xiàng)的制品，其中所述至少一種Good's緩沖液選自下組： MES、MOPS 和 Tris。46. 根據(jù)權(quán)利要求35至45任一項(xiàng)的制品，其中所述Good's緩沖液是MES。47. 根據(jù)權(quán)利要求35至45任一項(xiàng)的制品，其中所述Good's緩沖液是MOPS。
【專利摘要】本發(fā)明涉及使用多峰樹脂和包含Good's緩沖液的洗脫緩沖液用于純化或富集生物分子的方法。
【IPC分類】B01D15/38, C07K1/16
【公開號(hào)】CN104884147
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201380067814
【發(fā)明人】R·戈達(dá)瓦特, D·卡明斯, V·瓦里庫(kù)
【申請(qǐng)人】建新公司
【公開日】2015年9月2日
【申請(qǐng)日】2013年10月23日
【公告號(hào)】CA2888824A1, EP2911759A1, US20150275195, WO2014066471A1