本實(shí)用新型屬于基因檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體是涉及一種用于唾液DNA離心預(yù)處理的試管。
背景技術(shù)：
：理論上DNA可以從身體的任何細(xì)胞中獲取。人類口腔黏膜的上皮為復(fù)層鱗狀上皮，具有代謝旺盛、更新快、易脫落的特點(diǎn)。它由多層細(xì)胞組成，基底層具有旺盛分裂能力，最表層的角化層已衰老退化，不斷脫落。角化層細(xì)胞可以自然脫落到唾液中，也在外力作用下剝落到載體上。這些脫落口腔細(xì)胞雖然細(xì)胞核固縮，但同樣具有完整人類的基因組DNA序列。有報(bào)道表明，利用分別來自口腔粘膜上皮細(xì)胞與外周血的DNA進(jìn)行PCR反應(yīng)，結(jié)果顯示二者結(jié)果完全一致。因此唾液可以代替血液成為基因組DNA的簡易來源。傳統(tǒng)的方法把唾液添加穩(wěn)定劑后放進(jìn)試管里存在兩大明顯的缺陷：(1)試管易破碎，占用體積大；(2)液體物質(zhì)不方便運(yùn)輸，不能帶上飛機(jī)。針對(duì)這兩個(gè)缺陷，通過試紙采樣的技術(shù)也發(fā)展起來了，最有代表性的是美國通用公司的FTA試紙。但該試紙至少也有兩個(gè)局限性：(1)價(jià)格昂貴，一片試紙超過10美元；(2)試紙能采集的唾液樣本非常有限。一般做基因檢測(cè)需要的2毫升的唾液根本不能放進(jìn)一張比名片還小的試紙里。同樣現(xiàn)有的冷凍干燥技術(shù)需要龐大和昂貴的設(shè)備，成本較高，操作復(fù)雜。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決以上問題，本實(shí)用新型提供以下技術(shù)方案：一種用于唾液DNA離心預(yù)處理的試管，其特征在于，所述試管包括：試管本體和試管蓋；所述試管本體為圓筒形，且所述試管本體在其底部設(shè)有環(huán)繞底部圓周的凸起或者在其下部設(shè)有環(huán)繞管壁的凸起，用于離心時(shí)將試管本體倒掛在離心機(jī)試管孔的四周，所述試管本體在管口處具有密封連接機(jī)構(gòu)；所述試管蓋包括密封連接部，所述密封連接部與所述密封連接機(jī)構(gòu)二者能夠相互配合從而密封連接，使得所述試管本體的管口朝下進(jìn)行離心處理時(shí)，離心后得到的含有唾液DNA的細(xì)胞沉淀在所述試管蓋中。所述試管還包括密封蓋，所述密封蓋包括密封連接結(jié)構(gòu)，所述密封連接結(jié)構(gòu)與所述密封連接部二者能夠相互配合從而密封連接，由此將試管蓋密封，用于儲(chǔ)存離心后得到的所述含有唾液DNA的細(xì)胞。所述密封連接機(jī)構(gòu)為一條環(huán)形卡槽，所述環(huán)形卡槽設(shè)置于試管本體上部的內(nèi)壁，所述密封連接部為與所述環(huán)形卡槽相適配的卡環(huán)，所述卡環(huán)設(shè)置在試管蓋邊沿外側(cè)。所述試管蓋為圓錐形。所述環(huán)形卡槽由上限位環(huán)形臺(tái)階和下限位環(huán)形臺(tái)階組成，所述上限位環(huán)形臺(tái)階剖面為倒鉤形，所述下限位環(huán)形臺(tái)階剖面為倒三角形，使試管本體內(nèi)壁形成錐形坡面，試管本體內(nèi)徑由下向上沿錐形坡面逐漸減小，用于離心過程中，防止沉淀物卡在試管蓋與試管本體的連接處，而使沉淀物質(zhì)能順利滑入試管蓋中。所述密封連接結(jié)構(gòu)包括上限位環(huán)形臺(tái)階，所述上限位環(huán)形臺(tái)階設(shè)置在密封蓋的內(nèi)壁，與底部形成環(huán)形凹槽，該環(huán)形凹槽與試管蓋密封連接部相適配。所述密封連接機(jī)構(gòu)為內(nèi)螺紋結(jié)構(gòu)，所述螺紋結(jié)構(gòu)設(shè)置于試管本體上端的內(nèi)壁，所述密封連接部包括與所述內(nèi)螺紋結(jié)構(gòu)相適配的外螺紋結(jié)構(gòu)，所述外螺紋結(jié)構(gòu)設(shè)置于試管蓋的上部外側(cè)。所述試管蓋為一個(gè)底部為圓錐形、上部為圓筒形的結(jié)構(gòu)。所述密封連接機(jī)構(gòu)還包括下限位環(huán)形臺(tái)階，所述下限位環(huán)形臺(tái)階位于試管本體內(nèi)螺紋結(jié)構(gòu)的下方，所述下限位環(huán)形臺(tái)階剖面為倒三角形，使試管本體內(nèi)壁形成錐形坡面，試管本體內(nèi)徑由下向上沿錐形坡面逐漸減小，用于離心過程中，沉淀物質(zhì)能順利滑入試管蓋，而防止沉淀物卡在試管蓋與試管本體的連接處。所述密封連接部還包括設(shè)置于試管蓋上部外側(cè)的擋邊，該擋邊位于外螺紋結(jié)構(gòu)的下方，所述擋邊外徑大于圓筒的內(nèi)徑，用于試管蓋密封試管本體時(shí)，限定試管蓋旋入試管本體的深度。所述密封連接結(jié)構(gòu)為與試管蓋密封連接機(jī)構(gòu)相適配的內(nèi)螺紋，設(shè)置在密封蓋上部的內(nèi)壁。有益效果：本實(shí)用新型通過試管本體和試管蓋把唾液DNA濃縮成很小體積的半固體狀態(tài)，并保存到試管蓋中；通過密封蓋與試管蓋的結(jié)合用于存儲(chǔ)含有DNA的半固體狀態(tài)細(xì)胞，攜帶體積小，極大的方便了唾液樣本的保存和室溫下運(yùn)輸，且簡單經(jīng)濟(jì)，同時(shí)沒有影響DNA質(zhì)量。附圖說明圖1為本實(shí)用新型用于唾液DNA離心預(yù)處理的試管的卡槽密封整體結(jié)構(gòu)圖；圖2為本實(shí)用新型的試管本體與試管蓋卡槽密封結(jié)構(gòu)圖；圖3為本實(shí)用新型的密封蓋與試管蓋卡槽密封結(jié)構(gòu)圖；圖4為本實(shí)用新型用于唾液DNA離心預(yù)處理的試管的螺紋密封整體結(jié)構(gòu)圖；圖5為本實(shí)用新型的試管本體與試管蓋螺紋密封結(jié)構(gòu)圖；圖6為本實(shí)用新型的密封蓋與試管蓋螺紋密封結(jié)構(gòu)圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型做進(jìn)一步說明，但本實(shí)用新型并不限于以下實(shí)施例。參照?qǐng)D1、2和3，一種用于唾液DNA離心預(yù)處理的試管運(yùn)輸?shù)脑嚬埽ǎ涸嚬鼙倔w01、試管蓋02和密封蓋03；試管本體01為圓筒形，容量根據(jù)需要離心的唾液體積進(jìn)行選擇，例如可以為3-5ml，可采用透明高分子材料制成，如聚丙烯、聚碳酸酯等。在其底部設(shè)有環(huán)繞底部圓周的凸起04，用于離心時(shí)將試管本體01倒掛在離心機(jī)試管孔的四周，試管本體01上部的內(nèi)壁設(shè)有一條環(huán)形卡槽05，所述環(huán)形卡槽05由上限位環(huán)形臺(tái)階06和下限位環(huán)形臺(tái)階07組成，所述上限位環(huán)形臺(tái)階06剖面為倒鉤形，所述下限位環(huán)形臺(tái)階07剖面為倒三角形，使試管本體01內(nèi)壁形成錐形坡面，試管本體01內(nèi)徑由下向上沿錐形坡面逐漸減小，用于離心過程中，防止沉淀物卡在試管蓋02與試管本體01的連接處，而使沉淀物質(zhì)能順利滑入試管蓋02中。試管蓋02與試管本體01相配合，用于唾液的離心。試管蓋02為圓錐形，容量根據(jù)需要離心的唾液體積進(jìn)行選擇，例如可以為0.5-2ml，可采用透明高分子材料制成，如聚丙烯、聚碳酸酯等。試管蓋02邊沿外側(cè)設(shè)有凸起形成卡環(huán)08，與試管本體01中環(huán)形卡槽05相適配從而將試管本體01密封，使得試管本體01的管口朝下進(jìn)行離心處理時(shí)，離心后得到的含有唾液DNA的細(xì)胞沉淀在試管蓋02中。密封蓋03與試管蓋02相配合，用于儲(chǔ)存唾液離心后得到的含有唾液DNA的細(xì)胞。密封蓋03為圓筒形，可采用透明高分子材料制成，如聚丙烯、聚碳酸酯等。密封蓋03內(nèi)壁設(shè)有上限位環(huán)形臺(tái)階06，與底部形成環(huán)形凹槽09，該環(huán)形凹槽09與試管蓋02的卡環(huán)08相適配，用于密封試管蓋02。參照?qǐng)D4、5和6，一種用于唾液DNA離心預(yù)處理的試管運(yùn)輸?shù)脑嚬埽ǎ涸嚬鼙倔w01、試管蓋10和密封蓋03；試管本體01為圓筒形，容量根據(jù)需要離心的唾液體積進(jìn)行選擇，例如可以為2-5ml，可采用透明高分子材料制成，如聚丙烯、聚碳酸酯等。環(huán)繞試管本體01底部圓周設(shè)有一圈凸起，用于離心時(shí)將試管本體01倒掛在離心機(jī)試管孔的四周；試管本體01上端的內(nèi)壁設(shè)置有內(nèi)螺紋結(jié)構(gòu)13，內(nèi)螺紋結(jié)構(gòu)13下方設(shè)有下限位環(huán)形臺(tái)階07，所述下限位環(huán)形臺(tái)階07剖面為倒三角形，使試管本體01內(nèi)壁形成錐形坡面，試管本體01內(nèi)徑由下向上沿錐形坡面逐漸減小，用于離心過程中，沉淀物質(zhì)能順利滑入試管蓋10，而防止沉淀物卡在試管蓋10與試管本體01的連接處。試管蓋10與試管本體01相配合，通過螺紋密封連接，用于唾液的離心。試管蓋10為一個(gè)底部為圓錐形、上部為圓筒形的結(jié)構(gòu)，容量根據(jù)需要離心的唾液體積進(jìn)行選擇，例如可以為0.5-2ml，可采用透明高分子材料制成，如聚丙烯、聚碳酸酯等。試管蓋10圓筒形上部的外壁設(shè)置有與試管本體01內(nèi)螺紋結(jié)構(gòu)13相適配的外螺紋結(jié)構(gòu)12，圓筒形上部外壁還設(shè)有一圈擋邊12，該擋邊12位于外螺紋結(jié)構(gòu)12的下方，擋邊12外徑大于圓筒的內(nèi)徑，用于試管蓋10密封試管本體01時(shí)，限定試管蓋10旋入試管本體01的深度。密封蓋03與試管蓋10相配合通過螺紋密封連接，用于儲(chǔ)存唾液離心后的沉淀物質(zhì)。密封蓋03為圓筒形，可以根據(jù)具體情況進(jìn)行選擇，采用透明高分子材料制成，如聚丙烯、聚碳酸酯等。所述密封蓋03上部的內(nèi)壁設(shè)有與試管蓋10上部的外螺紋結(jié)構(gòu)12相適配的內(nèi)螺紋14。一種唾液DNA的提純和常溫下保存運(yùn)輸?shù)脑嚬艿氖褂梅椒ǎ?1)將唾液加入試管本體中，再加入適量磷酸緩沖鹽溶液或無菌水，用移液槍吹打混勻后，用試管蓋密封，試管本體的管口朝下，倒掛在離心機(jī)試管孔的四周，在離心機(jī)離心，其中磷酸緩沖鹽溶液或無菌水的加入量根據(jù)需要離心的唾液體積進(jìn)行選擇；(2)離心后，丟棄試管本體及其中的液體，并取出試管蓋中的上清液，保留試管蓋及其中的沉淀物質(zhì)，滴入DNA穩(wěn)定劑，蓋上密封蓋后，室溫下存放，其中DNA穩(wěn)定劑的加入量根據(jù)需要離心的唾液體積進(jìn)行選擇。同時(shí)，使用本實(shí)用新型收集和存放的唾液DNA的質(zhì)量與傳統(tǒng)方法相比沒有受到影響，具體評(píng)價(jià)方法如下：一、通過三種不同的方法來收集和存放DNA。在收集唾液之前，讓志愿者用水漱口，以確?？谇粵]有異物和食物，并且確保收集前30分鐘沒有進(jìn)食。(1)使用Oragene試管(DNAGenotek制造，型號(hào)OGD-500)：取2毫升唾液加入Oragene試管中，并加入穩(wěn)定劑混合，室溫下存放；(2)使用本實(shí)用新型試管(試管本體容量為3ml，試管蓋容量為0.5ml，試管整體采用聚丙烯材料制成，試管本體和試管蓋及試管蓋和密封蓋之間通過螺紋密封)：取2毫升唾液，加500μL的磷酸緩沖鹽溶液，用移液槍吹打混勻后，開始離心，室溫下相對(duì)離心力為8000g，離心5分鐘。離心后，丟棄試管本體01及其中的液體，并取出試管蓋02中的上清液，保留試管蓋02及其中的沉淀物質(zhì)，滴入0.2mlDNA穩(wěn)定劑，蓋上密封蓋03后，室溫下存放；(3)冰柜冷凍干燥：取2毫升唾液，存放到-20℃冰柜。二、七天后對(duì)上述三種方法得到的樣品分別進(jìn)行DNA提純，具體步驟如下：(1)細(xì)胞裂解：加入500μL細(xì)胞裂解液，用移液槍吹打使沉淀重新懸浮，室溫放置30min，期間顛倒數(shù)次；(2)RNA去除：加入10μL濃度為10mg/mL的RNaseA(核糖核酸酶A)溶液，37℃下育溫15分鐘；(3)蛋白質(zhì)和脂類的去除：加入500μL體積比為24:1的氯仿/異戊醇混合液，顛倒離心管5-10次，然后放入離心機(jī)中離心10min，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為10000rpm，離心后取上清，注意小心不要吸到下面的有機(jī)溶劑層，重復(fù)上述步驟；(4)分離和純化gDNA(基因組DNA)：加入等體積預(yù)冷(-20℃)的異丙醇，顛倒混勻，于-20℃靜置至少30min；取出離心管，于4℃下12000rpm離心5min，離心后棄上清；然后加入500μL70％乙醇清洗沉淀兩次，棄上清，倒置風(fēng)干；(5)溶解基因組gDNA：樣品干燥后，加入20μL的TE緩沖液(或者無菌水，看后續(xù)具體需要)，使gDNA沉淀溶解，所述TE緩沖液由Tris和EDTA配置而成；然后以中等速度漩渦振蕩5秒，并65℃水浴一小時(shí)；從水浴鍋取出，室溫靜置過夜。三、DNA質(zhì)量的評(píng)價(jià)：使用NanoDrop1000(Thermo公司)超微量分光光度計(jì)檢測(cè)260/280比值(正常值1.7-1.9之間)、260/230比值和核酸濃度，即通過對(duì)比DNA純度和濃度對(duì)上述三種方法得到的DNA質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，表1為三種不同方法得到的DNA濃度和純度。參照表1，使用本實(shí)用新型收集并在常溫下保存的唾液DNA，與傳統(tǒng)方法如采用Oragene試管保存唾液樣本或冰凍的方法相比，特制試管所得到的DNA純度和濃度沒有顯著差異。表1檢測(cè)方法采集方法樣本1樣本2樣本3樣本4樣本5濃度(ng/ml)Oragene34.032.330.235.333.0特制試管33.231.130.632.433.4冷凍31.929.931.534.132.5260/280Oragene1.701.871.701.661.70特制試管1.721.751.721.801.72冷凍1.791.761.791.731.79260/230Oragene2.002.202.072.032.09特制試管2.122.182.112.112.11冷凍2.152.152.092.162.09本文中應(yīng)用了具體個(gè)例對(duì)本實(shí)用新型的原理及實(shí)施方式進(jìn)行了闡述，以上實(shí)施例的說明只是用于幫助理解本實(shí)用新型的裝置及其核心思想；同時(shí)，對(duì)于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員，依據(jù)本實(shí)用新型的思想，在具體實(shí)施方式及應(yīng)用范圍上均會(huì)有改變之處，綜上所述，本說明書內(nèi)容不應(yīng)理解為對(duì)本實(shí)用新型的限制。當(dāng)前第1頁1 2 3