一種撲草凈分子印跡固相萃取柱及使用方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及固相萃取【技術(shù)領(lǐng)域】，特指一種撲草凈分子印跡固相萃取柱和使用方法。本發(fā)明以撲草凈為模板，甲基丙烯酸為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，偶氮二異丁腈為引發(fā)劑，二氯甲烷為溶劑，采用沉淀聚合法制備撲草凈分子印跡聚合物微球。將微球均勻填充于固相萃取柱內(nèi)，得到撲草凈分子印跡固相萃取柱。以二氯甲烷為樣品溶劑、二氯甲烷-乙腈為淋洗溶劑、甲醇-水為洗脫溶劑，實現(xiàn)了谷物樣品中西瑪津、莠去津、西草凈、撲滅津、莠滅凈、特丁津、撲草凈和特丁凈殘留的同時富集和凈化；與毛細管電泳多殘留檢測方法相結(jié)合，可對谷物樣品中這8種除草劑殘留進行同時檢測。
【專利說明】一種撲草凈分子印跡固相萃取柱及使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及固相萃取【技術(shù)領(lǐng)域】，特指一種撲草凈分子印跡固相萃取柱和使用方法，并和毛細管電泳方法結(jié)合用于選擇性分離、富集和檢測谷物樣品中西瑪津、莠去津、西草凈、撲滅津、莠滅凈、特丁津、撲草凈和特丁凈的殘留。
【背景技術(shù)】
[0002]三嗪類除草劑是在世界范圍內(nèi)被廣泛使用的一類農(nóng)藥，為環(huán)境荷爾蒙的可疑物質(zhì)，能夠引發(fā)癌癥和干擾內(nèi)分泌，然而三嗪類除草劑在食品中的殘留濃度很低，往往需要在檢測前進行適當(dāng)富集，另外，在提取后進行的多殘留色譜檢測中，被同時提取出來的大量共存基質(zhì)特別容易污染色譜柱，還需要通過凈化使基質(zhì)得以去除，即使采用了沒有柱污染問題的毛細管電泳方法，有些種類的樣品由于基質(zhì)復(fù)雜，其基質(zhì)信號與分析物信號有可能發(fā)生重疊，影響到定量結(jié)果的準(zhǔn)確性，同樣需要對樣品進行凈化，因此，對于食品中該類除草劑殘留的檢測來說，富集和凈化是十分必要的。
[0003]固相萃取因使用的試劑量較少，對操作人員的傷害較小，操作耗時較短而被日益廣泛地應(yīng)用于農(nóng)藥殘留檢測的樣品前處理中，成為富集和凈化的最常用方法之一，但是眾所周知，固相萃取柱中使用的填料通常都是一些非特異選擇性的吸附材料，在實際應(yīng)用時，往往容易同時提取出其它的干擾物質(zhì)，影響檢測結(jié)果，再者目前的商用固相萃取柱多為一次性使用，這無形之中也增加了檢測成本；分子印跡聚合物是為模板分子量身定做的高分子聚合物，對模板分子和其結(jié)構(gòu)類似物具有高識別性，而且可重復(fù)使用多次，這些都是普通固相萃取填料所不能比擬的，目前報道的分子印跡固相萃取填料多采用本體聚合法，經(jīng)研磨得到的材料顆粒不均勻，許多結(jié)合位點被包裹于顆粒內(nèi)部，不能充分發(fā)揮印跡材料的功倉泛。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種撲草凈分子印跡固相萃取柱的制備和使用方法，與本發(fā)明不可分割的部分——毛細管電泳多殘留檢測方法相結(jié)合，可實現(xiàn)對谷物中西瑪津、莠去津、西草凈、撲滅津、莠滅凈、特丁津、撲草凈和特丁凈殘留的同時檢測。
[0005]具體步驟如下:
一種撲草凈分子印跡固相萃取柱，其特征在于:所述的固相萃取柱采用如下制備方法進行制備:
(I)將撲草凈、甲基丙烯酸按照1:4的摩爾比混合溶解于二氯甲烷中，于室溫下放置過夜，其中二氯甲烷體積(mL)與甲基丙烯酸量(mmol)的比值為8?10:1，按照撲草凈與乙二醇二甲基丙烯酸酯摩爾比為1:20的比例以及與偶氮二異丁腈摩爾比為1:0.24的比例將二者加入到上述溶液中超聲振蕩至混合均勻后，向裝有溶液的圓底燒瓶通入氮氣以去除氧氣，保證聚合反應(yīng)能夠順利進行，然后將燒瓶置于50。C-60。C恒溫電熱套中在旋轉(zhuǎn)條件下反應(yīng)，制得聚合物微球，將聚合物微球置于索式提取器中，用乙酸-甲醇混合溶劑洗去模板分子，然后用甲醇清洗去除聚合物微球中殘留的乙酸，并用丙酮反復(fù)沉降除去過細微粒，最后放入真空干燥器中干燥至恒重，得到撲草凈分子印跡聚合物微球。
[0006](2)稱取撲草凈分子印跡聚合物微球，填充至底部裝有篩板的空固相萃取柱中，再在填料的上方放置篩板并壓實，制得撲草凈分子印跡固相萃取柱。
[0007]所述的在旋轉(zhuǎn)條件下反應(yīng)指在100-350rpm轉(zhuǎn)速下反應(yīng)15_24h，在15h聚合反應(yīng)完畢，可以繼續(xù)增加至24h，但對實驗結(jié)果無影響，超過24h這個時間聚合物的吸附能力會有所下降。
[0008]所述的乙酸-甲醇混合溶劑指乙酸和甲醇按照體積比1:9混合得到的溶劑。
[0009]所述的撲草凈分子印跡聚合物微球填充至底部裝有篩板的空固相萃取柱中的填充的高度不低于15mm。
[0010]2、撲草凈分子印跡固相萃取柱的使用方法，按照下述步驟進行:
(I)將上述分子印跡固相萃取柱置于真空固相萃取裝置上，依次用二氯甲烷、甲醇和超純水在負壓狀態(tài)下淋洗活化，并抽干淋洗溶劑，其中三種溶劑的體積比為3:2: 2。
[0011](2)使制備的以二氯甲烷為溶劑的樣品溶液在負壓狀態(tài)下連續(xù)通過固相萃取柱，抽干溶劑。
[0012](3)以二氯甲烷-乙腈混合溶液為淋洗劑，在負壓狀態(tài)下連續(xù)通過固相萃取柱進行淋洗，抽干淋洗劑，并保持連續(xù)抽干狀態(tài)。
[0013](4)以甲醇-水混合溶液作為洗脫溶劑，在負壓狀態(tài)下連續(xù)通過固相萃取柱對分析物進行洗脫，抽干洗脫劑。
[0014](5)將洗脫液用氮氣吹干溶劑，用緩沖溶液定容后供毛細管電泳檢測。
[0015]3毛細管電泳檢測按照下述電泳條件進行:
緩沖液組成為25mmol/L硼酸鹽、15mmol/L磷酸鹽、40mmol/L十二烷基硫酸鈉和3%(V/V)正丙醇，pH為6.5 ;分離電壓20 kV ;進樣量為3.5kPaX90s ;分離柱溫25° C ;檢測波長220nm。
[0016]所述的負壓狀態(tài)指_20kPa?-lOOkPa。
[0017]所述的樣品溶液采用如下步驟制備:
(1)稱取10.0g經(jīng)粉碎并過20目篩后的帶有農(nóng)藥殘留大豆或玉米，置于50mL具塞錐形瓶中或稱取10.0g經(jīng)粉碎并過20目篩后的空白大豆或玉米(沒有農(nóng)藥殘留)，置于50mL具塞錐形瓶中，加入8種三嗪類除草劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，使加標(biāo)量為0.005mg/kg ；
(2)加入50%(V/V)甲醇水溶液30mL,于水浴振蕩器中振搖30 min, 4000 r/min下離心5 min，取上清液，樣品殘渣再加入50% (V/V)甲醇水溶液10mL，重復(fù)上述操作，合并兩次提取液于蒸發(fā)瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)近干，用20mL 二氯甲烷溶解干渣。
[0018]所述的二氯甲烷-乙腈混合溶液指二氯甲烷和乙腈按照體積比75:25混合得到的溶液，二氯甲烷-乙腈混合溶液的加入量應(yīng)采用不使被測物質(zhì)從柱中淋洗出來的最大用量，目的是使樣品中共存的干擾物被最大程度地洗掉，而被測物沒有在這一步產(chǎn)生損失，本發(fā)明中選擇3-10mL。
[0019]所述的甲醇-水混合溶液指甲醇和水按照體積比4:1混合得到的溶液，甲醇-水混合溶液加入量應(yīng)采用使被測物質(zhì)從柱中完全洗脫出來的最小用量，目的是使樣品中的被測物在這一步用最小的溶劑消耗即可被完全洗脫，本發(fā)明中選擇3-10mL。[0020]所述步驟5中的緩沖溶液含體積百分比為20%的甲醇、25mmol/L硼酸鹽和15mmol/L磷酸鹽。
[0021]現(xiàn)有的三嗪類分子印跡固相萃取柱材料多采用本體聚合法制備，但是本體聚合法制備的分子印跡聚合物呈塊狀，需要經(jīng)過研磨，這就造成所得填料形狀不規(guī)則，且研磨過程容易使印跡空穴遭到破壞，最終使整個分子印跡固相萃取柱的吸附能力受到影響。為了解決傳統(tǒng)分子印跡技術(shù)所存在的上述缺陷，本發(fā)明采用了一種沉淀聚合的方法，并且只采用撲草凈單一模板即可制備出能對谷物樣品中含有的西瑪津、莠去津、西草凈、撲滅津、莠滅凈、特丁津、撲草凈和特丁凈殘留同時進行高效富集和凈化的印跡聚合物微球，方法操作簡單，成本低，不需要在反應(yīng)體系中加入任何穩(wěn)定劑，即可獲得粒徑均勻的單分散微球聚合物，微球粒徑約為0.2μπι，具有很大的比表面積，使得聚合物上形成的選擇性位點可以被充分利用。方法避免了繁瑣的粉碎和研磨過程，具有較高的得率和較好的印跡效果，用該聚合物微球填充的固相萃取柱重復(fù)使用10次后效能基本無下降；采用本發(fā)明固相萃取柱對谷物樣品進行富集和凈化，結(jié)合毛細管電泳方法可對8種三嗪類除草劑進行多殘留同時檢測，有望成為谷物樣品中這8種三嗪類除草劑殘留檢測的必備手段，目前尚未有人將三嗪類分子印跡固相萃取柱與毛細管在線推掃技術(shù)相結(jié)合進行這8種三嗪類除草劑殘留的同時檢測，與傳統(tǒng)的高效液相色譜法相比毛細管在線富集檢測方法具有靈敏度高、檢測時間短、消耗溶劑少等優(yōu)點。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]圖1為分別利用撲草凈分子印跡固相萃取柱和商品ENVI?_18固相萃取柱對加標(biāo)大豆樣品中8種三嗪類除草劑進行富集和凈化后的效果比較電泳圖；
圖2為分別利用撲草凈分子印跡固相萃取柱和商品ENVI?-18固相萃取柱對加標(biāo)玉米樣品中8種三嗪類除草劑進行富集和凈化后的效果比較電泳圖；
1.西瑪津，2.莠去津，3.西草凈，4.撲滅津，5.莠滅凈，6.特丁津，7.撲草凈，8.特丁凈。
【具體實施方式】
[0023]實施例1
一撲草凈分子印跡固相萃取柱制備
A將撲草凈(0.242 g)、甲基丙烯酸按照摩爾比為1:4的比例混合溶解于35 mL二氯甲烷中，于室溫下放置過夜，按照撲草凈與乙二醇二甲基丙烯酸酯摩爾比為1:20的比例以及與偶氮二異丁腈摩爾比為1:0.24的比例將二者加入到上述溶液中超聲振蕩5min，向裝有溶液的圓底燒瓶通入氮氣5min,然后將燒瓶置于55 C恒溫電熱套中在350rpm轉(zhuǎn)速下反應(yīng)15h，制得聚合物微球，將聚合物微球置于索式提取器中，用乙酸-甲醇(10:90，V/V)混合溶劑洗去模板分子，然后用甲醇清洗去除聚合物微球中殘留的乙酸，并用丙酮反復(fù)沉降除去過細微粒，最后放入真空干燥器中干燥至恒重。
[0024]B稱取250mg上述撲草凈分子印跡聚合物微球，填充至6mL底部裝有篩板的空固相萃取柱中，再在填料的上方放置篩板并壓實。
[0025]二撲草凈分子印跡固相萃取柱用于加標(biāo)大豆樣品的富集和凈化 A稱取10.0g經(jīng)粉碎并過20目篩后的空白大豆，置于50mL具塞錐形瓶中，加入8種三嗪類除草劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，使加標(biāo)量為0.005mg/kg,加入50% (V/V)甲醇水溶液30mL，于水浴振蕩器中振搖30 min, 4000 r/min下離心5 min,取上清液,樣品殘洛再加入50% (V/V)甲醇水溶液10mL，重復(fù)上述操作，合并兩次提取液于蒸發(fā)瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)近干，用20mL 二氯甲烷溶解干洛。
[0026]B將撲草凈分子印跡固相萃取柱置于真空固相萃取裝置上，依次用15mL 二氯甲烷、IOmL甲醇和IOmL超純水在負壓狀態(tài)下淋洗活化，并抽干淋洗溶劑。
[0027]C使制備的樣品溶液在負壓狀態(tài)下連續(xù)通過固相萃取柱，抽干溶劑。
[0028]D以5 mL 二氯甲烷-乙腈(75:25，V/V)為淋洗劑，在負壓狀態(tài)下連續(xù)通過固相萃取柱進行淋洗，抽干淋洗劑，并保持連續(xù)抽干狀態(tài)lOmin。
[0029]E以5mL甲醇-水(80:20，V/V)作為洗脫溶劑，在負壓狀態(tài)下連續(xù)通過固相萃取柱對分析物進行洗脫，抽干洗脫劑。
[0030]F將洗脫液用氮氣吹干溶劑，用500 μ L含20%甲醇、25mmol/L硼酸鹽和15mmol/L磷酸鹽的緩沖溶液定容后供毛細管電泳檢測。
[0031 ] 三加標(biāo)樣品的毛細管電泳檢測
A電泳條件:緩沖液組成為25mmol/L硼酸鹽、15mmol/L磷酸鹽、40mmol/L十二燒基硫酸鈉和3% (V/V)正丙醇，pH為6.5;分離電壓20 kV ;進樣量為3.5kPaX90s ;分離柱溫25。C ;檢測波長220nm。
[0032]B上述加標(biāo)大豆樣品三嗪類除草劑的回收率分別為:西瑪津88.31%,莠去津82.01%，西草凈97.76%，撲滅津91.92%，莠滅凈96.24%，特丁津77.99%，撲草凈100.3%，特丁凈 93.15%。
[0033]C上述加標(biāo)大豆樣品分別經(jīng)撲草凈分子印跡固相萃取柱和商品ENVI?-18固相萃取柱富集和凈化后的效果比較電泳圖如附圖1所示。
[0034]從附圖1中可看出，用撲草凈分子印跡固相萃取柱對大豆樣品的凈化效果要明顯優(yōu)于商品ENVI?-18固相萃取柱，采用后者，在2-6min之間的雜質(zhì)峰、西瑪津前的雜質(zhì)峰以及西草凈和撲滅津間的雜質(zhì)峰都未被去除干凈，而采用前者，這些雜質(zhì)峰全部消失。除西瑪津、莠去津和特丁津外，撲草凈分子印跡固相萃取柱的回收率均高于ENVI?-18柱，其中撲草凈的回收率最高。
[0035]實施例2
一撲草凈分子印跡固相萃取柱制備
A將撲草凈(0.242g)、甲基丙烯酸按照摩爾比為1:4的比例混合溶解于35 mL 二氯甲烷中，于室溫下放置過夜。按照撲草凈與乙二醇二甲基丙烯酸酯摩爾比為1:20的比例以及與偶氮二異丁腈摩爾比為1:0.24的比例將二者加入到上述溶液中超聲振蕩5min，向裝有溶液的圓底燒瓶通入氮氣5min,然后將燒瓶置于55 C恒溫電熱套中在350rpm轉(zhuǎn)速下反應(yīng)15h，制得聚合物微球，將聚合物微球置于索式提取器中，用乙酸-甲醇(10:90，V/V)混合溶劑洗去模板分子，然后用甲醇清洗去除聚合物微球中殘留的乙酸，并用丙酮反復(fù)沉降除去過細微粒，最后放入真空干燥器中干燥至恒重。
[0036]B稱取250mg上述撲草凈分子印跡聚合物微球，填充至6mL底部裝有篩板的空固相萃取柱中，再在填料的上方放置篩板并壓實。[0037]二撲草凈分子印跡固相萃取柱用于加標(biāo)大豆樣品的富集和凈化
A稱取10.0g經(jīng)粉碎并過20目篩后的空白玉米，置于50mL具塞錐形瓶中，加入8種三嗪類除草劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，使加標(biāo)量為0.02mg/kg。加入50% (V/V)甲醇水溶液30mL，于水浴振蕩器中振搖30 min, 4000 r/min下離心5 min,取上清液。樣品殘洛再加入50% (V/V)甲醇水溶液10mL，重復(fù)上述操作，合并兩次提取液于蒸發(fā)瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)近干。用20mL 二氯甲烷溶解干洛。
[0038]B將撲草凈分子印跡固相萃取柱置于真空固相萃取裝置上，依次用15mL 二氯甲烷、IOmL甲醇和IOmL超純水在負壓狀態(tài)下淋洗活化，并抽干淋洗溶劑。
[0039]C使制備的樣品溶液在負壓狀態(tài)下連續(xù)通過固相萃取柱，抽干溶劑。
[0040]D以5mL 二氯甲烷-乙腈(75:25，V/V)為淋洗劑，在負壓狀態(tài)下連續(xù)通過固相萃取柱進行淋洗，抽干淋洗劑，并保持連續(xù)抽干狀態(tài)lOmin。
[0041]E以5mL甲醇-水(80:20，V/V)作為洗脫溶劑，在負壓狀態(tài)下連續(xù)通過固相萃取柱對分析物進行洗脫，抽干洗脫劑。
[0042]F將洗脫液用氮氣吹干溶劑，用500 μ L含20%甲醇、25mmol/L硼酸鹽和15mmol/L磷酸鹽的緩沖溶液定容后供毛細管電泳檢測。
[0043]三加標(biāo)樣品的毛細管電泳檢測
A電泳條件:緩沖液組成為25mmol/L硼酸鹽、15mmol/L磷酸鹽、40mmol/L十二燒基硫酸鈉和3% (V/V)正丙醇，pH為6.5;分離電壓20 kV ;進樣量為3.5kPaX90s ;分離柱溫25。C ;檢測波長220nm。
[0044]B上述加標(biāo)玉米樣品三嗪類除草劑的回收率分別為:西瑪津87.66%,莠去津82.10%，西草凈98.17%，撲滅津90.67%，莠滅凈94.98%，特丁津77.48%，撲草凈99.36%，特丁凈 94.85%。
[0045]C上述加標(biāo)玉米樣品分別經(jīng)撲草凈分子印跡固相萃取柱和商品ENVI?-18固相萃取柱富集和凈化后的效果比較電泳圖如附圖2所示。
[0046]從附圖2中可看出，用撲草凈分子印跡固相萃取柱對玉米樣品的凈化效果要優(yōu)于商品ENVI?-18固相萃取柱，采用后者，雜質(zhì)存在導(dǎo)致的斜坡形基線在采用前者時都已消失。撲草凈回收率遠遠高于ENVI?-18 ;西草凈、撲滅津、莠滅凈和特丁凈的回收率也高于ENVI?-18，不低于86% ;西瑪津、莠去津和特丁津的回收率低于ENVI?-18，但也不低于77%。該結(jié)果表明印跡聚合物微球?qū)Y(jié)構(gòu)相似度高的硫三嗪的選擇性優(yōu)于氯三嗪。
【權(quán)利要求】
1.一種撲草凈分子印跡固相萃取柱，其特征在于:所述的固相萃取柱采用如下制備方法進行制備: (1)將撲草凈、甲基丙烯酸按照1:4的摩爾比混合溶解于二氯甲烷中，于室溫下放置過夜，其中二氯甲烷體積(mL)與甲基丙烯酸量(mmol)的比值為8?10:1，按照撲草凈與乙二醇二甲基丙烯酸酯摩爾比為1:20的比例以及與偶氮二異丁腈摩爾比為1:0.24的比例將二者加入到上述溶液中超聲振蕩至混合均勻后，向裝有溶液的圓底燒瓶通入氮氣以去除氧氣，保證聚合反應(yīng)能夠順利進行，然后將燒瓶置于50。C-60。C恒溫電熱套中在旋轉(zhuǎn)條件下反應(yīng)，制得聚合物微球，將聚合物微球置于索式提取器中，用乙酸-甲醇混合溶劑洗去模板分子，然后用甲醇清洗去除聚合物微球中殘留的乙酸，并用丙酮反復(fù)沉降除去過細微粒，最后放入真空干燥器中干燥至恒重，得到撲草凈分子印跡聚合物微球； (2)稱取撲草凈分子印跡聚合物微球，填充至底部裝有篩板的空固相萃取柱中，再在填料的上方放置篩板并壓實，制得撲草凈分子印跡固相萃取柱。
2.如權(quán)利要求1所述的一種撲草凈分子印跡固相萃取柱，其特征在于:所述的在旋轉(zhuǎn)條件下反應(yīng)指在100-350rpm轉(zhuǎn)速下反應(yīng)15_24h，在15h聚合反應(yīng)完畢，能夠繼續(xù)增加至24h，但對實驗結(jié)果無影響，超過24h這個時間聚合物的吸附能力會有所下降。
3.如權(quán)利要求1所述的一種撲草凈分子印跡固相萃取柱，其特征在于:所述的乙酸-甲醇混合溶劑指乙酸和甲醇按照體積比1:9混合得到的溶劑。
4.如權(quán)利要求1所述的一種撲草凈分子印跡固相萃取柱，其特征在于:所述的撲草凈分子印跡聚合物微球填充至底部裝有篩板的空固相萃取柱中的填充的高度不低于15mm。
5.如權(quán)利要求1所述的一.種撲草凈分子印跡固相萃取柱的使用方法，其特征在于按照下述步驟進行: (1)將上述分子印跡固相萃取柱置于真空固相萃取裝置上，依次用二氯甲烷、甲醇和超純水在負壓狀態(tài)下淋洗活化，并抽干淋洗溶劑，其中三種溶劑的體積比為3:2:2 ； (2)使制備的以二氯甲烷為溶劑的樣品溶液在負壓狀態(tài)下連續(xù)通過固相萃取柱，抽干溶劑； (3)以二氯甲烷-乙腈混合溶液為淋洗劑，在負壓狀態(tài)下連續(xù)通過固相萃取柱進行淋洗，抽干淋洗劑，并保持連續(xù)抽干狀態(tài)； (4)以甲醇-水混合溶液作為洗脫溶劑，在負壓狀態(tài)下連續(xù)通過固相萃取柱對分析物進行洗脫，抽干洗脫劑； (5)將洗脫液用氮氣吹干溶劑，用緩沖溶液定容后供毛細管電泳檢測。
6.如權(quán)利要求5所述的一種撲草凈分子印跡固相萃取柱的使用方法，其特征在于:所述的負壓狀態(tài)指_20kPa?-lOOkPa。
7.如權(quán)利要求5所述的一種撲草凈分子印跡固相萃取柱的使用方法，其特征在于:所述的樣品溶液采用如下步驟制備: (1)稱取10.0g經(jīng)粉碎并過20目篩后的帶有農(nóng)藥殘留大豆或玉米，置于50mL具塞錐形瓶中或稱取10.0g經(jīng)粉碎并過20目篩后的空白大豆或玉米(沒有農(nóng)藥殘留)，置于50mL具塞錐形瓶中，加入8種三嗪類除草劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，使加標(biāo)量為0.005mg/kg ； (2)加入50%(V/V)甲醇水溶液30mL,于水浴振蕩器中振搖30 min, 4000 r/min下離心5 min，取上清液，樣品殘渣再加入50% (V/V)甲醇水溶液10mL，重復(fù)上述操作，合并兩次提取液于蒸發(fā)瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)近干，用20mL 二氯甲烷溶解干渣。
8.如權(quán)利要求5所述的一種撲草凈分子印跡固相萃取柱的使用方法，其特征在于:所述的二氯甲烷-乙腈混合溶液指二氯甲烷和乙腈按照體積比75:25混合得到的溶液，二氯甲烷-乙腈混合溶液的加入量應(yīng)采用不使被測物質(zhì)從柱中淋洗出來的最大用量，目的是使樣品中共存的干擾物被最大程度地洗掉，而被測物沒有在這一步產(chǎn)生損失，本發(fā)明中選擇3-10mL ;所述的甲醇-水混合溶液指甲醇和水按照體積比4:1混合得到的溶液，甲醇-水混合溶液加入量應(yīng)采用使被測物質(zhì)從柱中完全洗脫出來的最小用量，目的是使樣品中的被測物在這一步用最小的溶劑消耗即可被完全洗脫，本發(fā)明中選擇3-10mL。
9.如權(quán)利要求5所述的一種撲草凈分子印跡固相萃取柱的使用方法，其特征在于:所述步驟5中的緩沖溶液含體積百分比為20%的甲醇、25mmol/L硼酸鹽和15mmol/L磷酸鹽。
10.如權(quán)利要求5所述的一種撲草凈分子印跡固相萃取柱的使用方法，其特征在于:所述的毛細管電泳檢測按照下述電泳條件進行: 緩沖液組成為25mmol/L硼酸鹽、15mmol/L磷酸鹽、40mmol/L十二烷基硫酸鈉和3%(V/V)正丙醇，pH為6.5 ;分離電壓20 kV ;進樣量為3.5kPaX90s ;分離柱溫25° C ;檢測波長220nm。`
【文檔編號】B01J20/30GK103433009SQ201310384267
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月30日
【發(fā)明者】方柔, 陳冠華, 伊聆曉, 張麗, 邵鈺秀 申請人:江蘇大學(xué)