專利名稱：多糖及其保健品去色素的新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種去色素的方法，更具體地說是多糖及其保健品的去色素方法。
以植物和真菌類為原料提取的多糖粗品或作為保健品的多糖，常因含有酚型化合物，使之有較深的色澤，用堿提取獲得的多糖則顏色更深。這些色素的存在，不但影響多糖作為保健品或藥物時的外觀，而且給多糖的進一步分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定帶來極大的困難。目前，主要采用以下三種方法除去多糖粗品(包括保健品多糖)中所含有的色素，然而這三種方法均存在一定的局限性。
1.活性炭吸附脫色?；钚蕴繉Χ嗵蔷哂休^強的吸附作用，多糖的損失較大，而且采用這種方法脫色后，過濾起來也相當困難，可以說這種方法對多糖脫色是不合理的。
2.弱堿性樹脂脫色，如Duolite A-7，DEAE-纖維素等吸附多糖中的色素。這種方法主要應用于除去多糖粗品中游離的色素，如果色素與多糖結(jié)合，多糖也被樹脂同時吸附，用水難以洗脫下來。另外，對酸性多糖不宜采用該方法脫色。
3.雙氧水氧化脫色。采用這種方法對除去與多糖結(jié)合色素具有一定的效果，然而，在脫色過程中，雖然嚴格控制脫色的條件，如溫度、時間、PH值等，但還會引起多糖的部分降解。
以上三種方法應用于醫(yī)藥工業(yè)中多糖粗品的脫色均存在很多缺陷。
本發(fā)明目的是在于多糖具有多方面的功能，如多糖作為廣譜免疫促進劑用以治療與機體免疫系統(tǒng)有關(guān)疾?。欢嗵堑奶擎湻肿俞t(yī)學中具有凝性作用；它在醫(yī)藥上又是一種良好的佐劑。而多糖中的色素存在直接影響多糖作為藥物或保健品的外觀，尋找一種應用新的脫色方法去除多糖粗品中的色素并減少對多糖、保健品本身的影響具有重要的實用意義。
本發(fā)明另一目的是目前采用的脫多糖中的色素常對多糖的分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定工作產(chǎn)生干擾，尋找一種新的脫色素方法，它既可脫去多糖中的色素而且不破壞多糖的結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實施的一種多糖、保健品去色素的方法，其特征在于由反膠束溶液與多糖或保健品粗品預處理液在1∶1～1∶8(V/V)的比例下劇烈混合3分鐘，靜置分層，下層液為脫色后的多糖或保健品樣品液；反膠束溶液由CTAB濃度10-250mM、正己醇5％-35％(V/V)、異辛烷65％-95％(V/V)組成；多糖或保健品的預處理為原料經(jīng)95％乙醇脫脂，殘渣用沸水提取，提取液濃縮后經(jīng)乙醇沉淀得多糖粗提物，粗提物按比例溶于水中，沸水浴加熱30分鐘，振蕩溶解，3000rpm離心3分鐘，上清液加入一定量NaCl，得多糖、保健品預處理液；1.反膠束溶液，多糖或保健品粗品預處理液的比例為1∶1～1∶8(V/V)。
首先制備反膠束溶液，它由十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、正己醇、異辛烷組成。
它們的濃度和含量如下CTAB的濃度為10-250mM正己醇的含量為5％-35％(V/V)異辛烷的含量為65％-95％(V/V)上述按比例組成備用。
2.對多糖粗品預處理液的制備植物和真菌類原料，經(jīng)95％乙醇脫脂，殘渣用沸水提取，提取液濃縮后經(jīng)乙醇沉淀得多糖粗提物。稱取2mg-6mg多糖粗提物于1mL水中，沸水浴加熱30分鐘，震蕩溶解，3000rpm離心3分鐘，根據(jù)不同性質(zhì)的多糖上清液加入氯化鈉50mM-500mM，即為多糖粗品預處理液。
3.多糖的脫色過程取上述反膠束溶液與多糖粗品預處理液，以1∶1～1∶8(V/V)比例，劇烈混合3分鐘，靜置分層后，下層水液即為脫色后的多糖樣品液。該多糖樣品液繼續(xù)進行分離、純化，最終獲得顏色淺淡的脫色后多糖產(chǎn)品。
多糖回收率的計算糖含量的測定硫酸-苯酚法，100μl待測定的樣品液加入0.4mL及2mL硫酸(98％)，振動后顯色，測定λ＝490nm時的吸光度A。
標準曲線的制作準確稱取2mg葡萄糖并溶于5mL相應鹽濃度(與多糖預處理液相同)的水溶液中，分別取0.2mL，0.4mL，0.6mL，0.8mL，1.0mL，稀釋至1.0mL，測定λ＝490nm時的吸光度A，以吸光度對相應的葡萄糖的濃度作圖，得一元線性回歸方程Y＝2.887X，吸光度A小于1.2，均能保持較好的線性關(guān)系。
為消除萃取得到的下層多糖溶液中少量的CTAB及正己醇，對糖含量測定所可能造成的影響，以相應鹽濃度的水溶液與1～8體積的反膠束溶液混合，靜置分層，以下層水溶液配制標準的葡萄糖液，采用上述方法作標準曲線，所得結(jié)果在硫酸苯酚比色測定法的誤差范圍內(nèi)(＜5％)。
多糖的回收率的計算C1/C2×V1/V2×100％＝＝(A11-A12)/(A21-A22)×V1/V2×100％C1-脫色后的下層多糖水溶液的糖濃度C2-多糖粗品預處理液的糖濃度V1-脫色后的下層多糖水溶液的體積V2-多糖粗品預處理液的體積A11-脫色后的下層多糖水溶液，稀釋5倍，加硫酸-苯酚顯色后的吸光度A12-脫色后的下層多糖水溶液，稀釋5倍，加硫酸及0.2mL鹽水，測定的吸光度A21-多糖粗品預處理液，稀釋5倍，加硫酸-苯酚顯色后的吸光度
A22-多糖粗品預處理液，稀釋5倍，加硫酸及0.2mL鹽水，測定的吸光度本發(fā)明具有如下優(yōu)點1.采用本法脫色效果較好，對色澤愈深的多糖粗品，脫色效果更佳，而且對未經(jīng)脫蛋白質(zhì)處理的多糖粗品具有同樣的脫色效果。
2.采用本法多糖的回收率較高，在90％以上，對酸性多糖含量較高的粗品回收率也超過80％。
3.采用本法可以一次性除去多糖中的絕大部分色素，無需多次脫色。
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做詳細說明。
實施例首先制備反膠束溶液，它由十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、正己醇、異辛烷組成。
它們的濃度和含量如下CTAB的濃度為10-250mM正己醇的含量為5％-35％(V/V)異辛烷的含量為65％-95％(V/V)上述按比例組成備用。
實施例一 積雪草(中性)多糖粗提物的脫色準確稱取32mg積雪草多糖粗提物，加入8mL水，沸水浴30分鐘，攪拌溶解，3000rpm離心3分鐘，上清液中加入氯化鈉(300mM)，得積雪草多糖預處理液，取4mL與1mL反膠束溶液混合3分鐘，靜置30分鐘分層，萃取分離得下層多糖溶液，按照前述方法，測得的結(jié)果為A11＝0.570A12＝0.011A21＝0.647A22＝0.013積雪草多糖的回收率為(0.570-0.011)/(0.647-0.013)×4.4/4×100％＝97.4％
實施例二 螺旋藻(肽)多糖粗提物的脫色準確稱取32.2mg螺旋藻多糖粗提物(未經(jīng)脫蛋白質(zhì)處理)，加入8mL水，沸水浴30分鐘，攪拌溶解，3000rpm離心3分鐘，上清液中加入氯化鈉(100mM)，得螺旋藻多糖預處理液，取8mL與1mL反膠束溶液混合3分鐘，靜置30分鐘分層，萃取分離得下層多糖溶液，按照前述方法，測得的結(jié)果為A11＝0.447A12＝0.000A21＝0.543A22＝0.000螺旋藻多糖的回收率為(0.570-0.000)/(0.647-0.000)×4.4/4×100％＝90.6％實施例三 靈芝(中性)多糖粗提物的脫色準確稱取17.3mg靈芝多糖粗提物(未經(jīng)脫蛋白質(zhì)處理)，加入5mL水，沸水浴30分鐘，攪拌溶解，3000rpm離心3分鐘，上清液中加入氯化鈉(100mM)，得靈芝多糖預處理液，取5mL與1mL反膠束溶液混合3分鐘，靜置30分鐘分層，萃取分離得下層多糖溶液，按照前述方法，測得的結(jié)果為A11＝0.236A12＝0.000A21＝0.264A22＝0.000靈芝多糖的回收率為(0.236-0.000)/(0.264-0.000)×4.4/4×100％＝98.3％實施例四 石見穿(酸性)多糖粗提物的脫色準確稱取24.6mg石見穿多糖粗提物，加入6mL水，沸水浴30分鐘，攪拌溶解，3000rpm離心3分鐘，上清液中加入氯化鈉(500mM)，得石見穿多糖預處理液，取1mL與1mL反膠束溶液混合3分鐘，靜置30分鐘分層，萃取分離得下層多糖溶液，按照前述方法，測得的結(jié)果為A11＝0.236A12＝0.000A21＝0.348A22＝0.000石見穿多糖的回收率為(0.236-0.000)/(0.348-0.000)×4.4/4×100％＝80.87％
權(quán)利要求
1.一種多糖、保健品去色素的方法，其特征在于由反膠束溶液與多糖或保健品粗品預處理液在一定的比例下劇烈混合3分鐘，靜置分層，下層液為脫色后的多糖或保健品樣品液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述多糖、保健品去色素的方法，其特征在于反膠束溶液由濃度10-250mM CTAB、正己醇5％-35％(V/V)、異辛烷65％-95％(V/V)組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述多糖、保健品去色素的方法，其特征在于多糖或保健品的預處理為原料經(jīng)95％乙醇脫脂，殘渣用沸水提取提取液經(jīng)乙醇沉淀得多糖粗提物，粗提物按比例溶于水中，沸水浴加熱30分鐘，振蕩溶解，3000rpm離心3分鐘，上清液加入50-500mM NaCl，得多糖、保健品預處理液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述多糖、保健品去色素的方法，其特征在于反膠束溶液與多糖或保健品粗品預處理液的比例為1∶1～1∶8(V/V)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種多糖及其保健品的去色素方法,該方法采用反膠束溶液與多糖或保健品粗品預處理液在一定比例下激烈混合,放置分層,下層即為脫色后的多糖或保健品液。
文檔編號B01D11/04GK1369510SQ01105320
公開日2002年9月18日 申請日期2001年2月13日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月13日
發(fā)明者段金友, 方積年 申請人:中國科學院上海藥物研究所