一種新型細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子探針及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及熒光分子探針技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種新型細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子 探針及其應(yīng)用。【背景技術(shù)】
[0002] 細(xì)胞是生命體系主要的組織單元，其又由各種細(xì)胞器組成，如：細(xì)胞膜、細(xì)胞壁、細(xì) 胞質(zhì)、葉綠體、高爾基體、核仁、染色質(zhì)、核膜、核液、核孔、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體、細(xì)胞液、 液泡膜等。細(xì)胞器在細(xì)胞、酶和很多人體組織活動(dòng)中起到重要指示作用，如細(xì)胞增殖、細(xì)胞 凋亡、抗藥性、離子傳輸、肌肉收縮等等。對(duì)細(xì)胞器的生長形態(tài)進(jìn)行監(jiān)測(cè)對(duì)于生命細(xì)胞行為 研究和神經(jīng)系統(tǒng)研究具有重要意義。一些細(xì)胞器，如核仁、核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈嗜堿性，而高爾 基體為嗜酸性。
[0003] 高爾基體（Golgiapparatus，Golgicomplex)亦稱高爾基復(fù)合體、高爾基器。是 真核細(xì)胞中內(nèi)膜系統(tǒng)的組成之一。它不僅存在于動(dòng)植物細(xì)胞中，而且也存在于原生動(dòng)物和 真菌細(xì)胞內(nèi)。
[0004] 熒光共聚焦成像法是一種基于光學(xué)信號(hào)建立的檢測(cè)方法，具有高靈敏性、高選擇 性、快速可目視性等優(yōu)點(diǎn)。但現(xiàn)在市場上的高爾基體焚光分子探針如Golgi-TrackerRed， 價(jià)格昂貴，一毫克即數(shù)千元，且在細(xì)胞器成像中選擇性不佳。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明就是為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題而提供一種新型熒光分子探針。
[0006] 本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：
[0007] -種新型細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子探針，具有如下結(jié)構(gòu)式：
[0008]
[0009] 該熒光分子探針的制備反應(yīng)如下式所示，按經(jīng)典的醛酮縮合反應(yīng)條件進(jìn)行。
[0010]
[0011] 較佳地，所述熒光分子探針的熒光響應(yīng)區(qū)域?yàn)閜H為酸性-中性條件，pH值范圍為 2-8 〇
[0012] -種上述的細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子探針的應(yīng)用。
[0013] 較佳地，所述熒光分子探針的應(yīng)用溶液的溶劑選自水、二甲基亞砜中的一種或兩 種。
[0014] 較佳地，所述熒光分子探針在所述應(yīng)用溶液中的使用濃度為1yM-300mM。
[0015] 所述熒光分子探針可以跨膜滲透進(jìn)細(xì)胞內(nèi)，所述熒光分子探針結(jié)合到高爾基體時(shí) 可以發(fā)射熒光，進(jìn)行熒光檢測(cè)或細(xì)胞器成像。
[0016] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
[0017] 本發(fā)明的新型高爾基體熒光分子探針合成原料價(jià)廉、合成步驟簡單，成品價(jià)格低， 對(duì)高爾基體結(jié)合成像選擇性好。
【附圖說明】
[0018] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1采集到的典型高爾基體共聚焦熒光成像圖；其中（a)為熒 光成像圖，（b)為明場圖。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例詳細(xì)描述本發(fā)明。
[0020] 實(shí)施例1
[0021] -種新型細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子探針，具有以下分子結(jié)構(gòu)式：
[0022]
[0023] 其制備方法的一個(gè)實(shí)施例如下：
[0024] 取4-羥基苯甲醛1. 12g(0.Olmol)和環(huán)己酮0.49g(0. 005mol)加入到含有5%硫 酸的四氫呋喃溶液的反應(yīng)器中，室溫反應(yīng)20h。反應(yīng)結(jié)束后，硅膠柱層析（乙酸乙酯/石油 醚梯度淋洗），得到棕黃色油狀物目標(biāo)探針：2, 6-雙（4-羥基苯亞甲基）環(huán)己酮。棕黃色油 狀物目標(biāo)探針的結(jié)構(gòu)確認(rèn)數(shù)據(jù)如下：ES頂S(ESI+) :307. 15(M+H);Ex= 385nm，Em= 520nm。
[0025] 該熒光分子探針的應(yīng)用：將該熒光分子探針以20iiM的濃度分散于二甲基亞砜 和水的混合液（體積比1 :9)中，與人乳癌細(xì)胞共孵育1小時(shí)，60倍物鏡，以385nm光激 發(fā)，對(duì)520nm處的聚焦熒光圖像進(jìn)行成像，得到如圖1所示的高爾基體熒光成像圖。從圖 中顯示結(jié)果可見，僅嗜酸性高爾基體細(xì)胞器具熒光，其它非嗜酸性細(xì)胞器則無熒光。并且， 發(fā)明人經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，確定本發(fā)明的新型細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子探針的使用濃度為 1uM-300mM〇
[0026] 以上本發(fā)明的新型細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子探針的制備方法和應(yīng)用實(shí)例僅為舉 例，本領(lǐng)域技術(shù)人員在上述公開的范圍內(nèi)還可做出多種變形實(shí)施方式，這些變形實(shí)施方式 均在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0027] 在本發(fā)明及上述實(shí)施例的教導(dǎo)下，本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易預(yù)見到，本發(fā)明所列舉 或例舉的各原料或其等同替換物、各加工方法或其等同替換物都能實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，以及各原 料和加工方法的參數(shù)上下限取值、區(qū)間值都能實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，在此不一一列舉實(shí)施例。
[0028] 以上公開的僅為本申請(qǐng)的幾個(gè)具體實(shí)施例，但本申請(qǐng)并非局限于此，任何本領(lǐng)域 的技術(shù)人員能思之的變化，都應(yīng)落在本申請(qǐng)的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子探針，其特征在于，具有如下結(jié)構(gòu)式：2. 如權(quán)利要求1所還的細(xì)尚小趣棒災(zāi)亢力、卞秌訂，兵苻佌仕丁，所述細(xì)胞內(nèi)高爾 基體熒光分子探針的熒光響應(yīng)區(qū)域?yàn)閜H為酸性-中性條件，pH值范圍為2-8。3. 如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子探針，其特征在于，所述細(xì)胞內(nèi)高爾 基體熒光分子探針能夠跨膜滲透進(jìn)細(xì)胞內(nèi)。4. 如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子探針，其特征在于，所述細(xì)胞內(nèi)高爾 基體熒光分子探針結(jié)合到高爾基體時(shí)能夠發(fā)射熒光，能夠進(jìn)行熒光檢測(cè)或細(xì)胞器成像。5. -種權(quán)利要求1-4中任一所述的細(xì)胞內(nèi)高爾基體焚光分子探針的應(yīng)用。6. 如權(quán)利要求5所述的細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子探針的應(yīng)用，其特征在于，所述細(xì)胞 內(nèi)高爾基體熒光分子探針的應(yīng)用溶液的溶劑選自水、二甲基亞砜中的一種或兩種。7. 如權(quán)利要求6所述的細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子探針，其特征在于，在所述應(yīng)用溶液 中，所述細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子探針的使用濃度為1yM-300mM。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種新型細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子探針，具有如下結(jié)構(gòu)式：本發(fā)明的新型細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子探針，其熒光響應(yīng)區(qū)域?yàn)閜H為酸性-中性條件，pH范圍為2-8，可以跨膜滲透進(jìn)細(xì)胞內(nèi),結(jié)合到高爾基體時(shí)可以發(fā)射熒光，能夠進(jìn)行熒光檢測(cè)或細(xì)胞器成像。本發(fā)明的新型細(xì)胞內(nèi)高爾基體熒光分子探針的合成原料價(jià)廉、合成步驟簡單，對(duì)高爾基體結(jié)合成像選擇性好。
【IPC分類】C07C49/743, C09K11/06, G01N21/64, C07C45/74
【公開號(hào)】CN105112048
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510514205
【發(fā)明人】孟慶華, 湯淏渂
【申請(qǐng)人】上海交通大學(xué)
【公開日】2015年12月2日
【申請(qǐng)日】2015年8月20日