酸性溶液與有機(jī)溶劑的體積比為（2 :8)-(5 :5)，所述酸性溶液為pH值2-4的水溶液，所述 有機(jī)溶劑為乙醇、乙腈或正丁醇。同時，由于黃色素的吸收波長為440nm，因此選擇在該波 長處對洗脫液進(jìn)行收集，可以將洗脫劑的體積控制為2-4個柱體積，進(jìn)樣量中的有效成分 便能洗脫完畢，其中柱體積V根據(jù)式（1)進(jìn)行計(jì)算。將該洗脫液在35°C進(jìn)行濃縮處理，在壓 力為0. 22MPa，溫度為冷凍干燥，制得黃色素初品。
[0023] 經(jīng)過上述處理后得到的黃色素初品中，黃色素的純度已高達(dá)70%以上，大部分的 藍(lán)色素以及酚酸類物質(zhì)已經(jīng)被去除，為了得到臘八蒜中單一的黃色素成分，對上述黃色素 初品進(jìn)行步驟5)中的高效液相色譜制備，所選用的色譜柱為常規(guī)C 18色譜柱。進(jìn)一步地，步 驟 5)中，所述 C18色譜柱為 XBridge C 18或 ZORBAX SB-C 18。
[0024] 進(jìn)一步地，步驟5)中，將所述黃色素初品制成濃度為55_65mg/L的黃色素溶液 后再進(jìn)行所述純化，并且控制所述液相色譜的進(jìn)樣量500-3000 μ L，柱溫20-30°C，流速 4-7mL/min，檢測波長440nm。在本發(fā)明的具體實(shí)施方法中，將所述黃色素初品溶解于雙 蒸水中配制為濃度為55-65mg/L的水溶液后在進(jìn)行高效液相色譜分離。為了得到純度更 高的黃色素，在具體分離過程中，可以采用梯度洗脫，具體梯度洗脫的條件為流動相A為 0. 3-0. 6 %的甲酸水溶液，流動相B為0. 3-0. 6 %乙腈溶液，洗脫梯度為0-3min 15 % B， 3-10min 20% B，根據(jù)色譜圖收集最大吸收峰值處的洗脫液，在35°C下濃縮去除有機(jī)溶劑， 而后在壓力0. 22MPa，冷凍干燥得到黃色素終品。
[0025] 本發(fā)明方案的實(shí)施，能夠從臘八蒜中分離并純化制得成分單一的天然黃色素，操 作簡單，可實(shí)施性高，最終產(chǎn)品經(jīng)高效液相色譜檢測純度可達(dá)90%以上。
【附圖說明】
[0026] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1制備的黃色素終品的高效液相色譜圖；
[0027] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例2制備的黃色素終品的高效液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例，對本 發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí) 施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造 性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0029] 下述實(shí)施例所采用的臘八蒜均為已經(jīng)綠變完全的臘八蒜。
[0030] 實(shí)施例1
[0031] 將Ikg臘八蒜破碎至50目后，浸泡于pH = 3 (乙酸調(diào)pH)的2000mL80%乙醇溶液 中，在-4°C提取3次，每次12h，將3次的提取液合并。
[0032] 將提取液按體積比1:1的比例與乙酸乙酯混合，萃取3次，每次3h，取3次有機(jī)相 合并，制得第一粗提物。
[0033] 將上述第一粗提物在35°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)進(jìn)行濃縮至干，按照重量體積比1:2的比例溶 于雙蒸水，以AB-8樹脂作為固定相，固定相的質(zhì)量與第一粗提物的質(zhì)量比為35:1，進(jìn)行柱 層析處理。首先采用2倍柱體積的pH = 3 (乙酸調(diào)pH值）的純水進(jìn)行洗滌，控制流速為 5mL/min，而后用2倍柱體積的pH = 3 (乙酸調(diào)pH值）的乙醇進(jìn)行洗脫，控制流速為5mL/ min，收集洗脫液，制得第二粗提物。
[0034] 在35°C下將上述第二粗提物旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)進(jìn)行濃縮，并將該濃縮物按重量體積比1:2 的比例溶于PH = 3的酸水（乙酸調(diào)pH值）制成第二粗提液，用凝膠樹脂柱進(jìn)行凝膠層析， 收集440nm處的洗脫液。具體的，控制第二粗提液的進(jìn)樣量為3mL，加載至Sephadex LH-20， 用3倍柱體積的pH = 3 (乙酸調(diào)pH值）的酸性溶液和有機(jī)溶劑的混合液作為洗脫劑（體 積比，pH = 3的水溶液：乙醇=1 :1)進(jìn)行洗脫，控制流速I. 5mL/min，收集440nm下最大吸 收峰處的洗脫液，35°C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥制得黃色素初品，該黃色素初品為黃色粉 末。
[0035] 將上述黃色素初品加入雙蒸水中配置成濃度為60mg/mL的黃色素溶液，進(jìn)行梯度 液相色譜處理。采用ZORBAX SB-C18(250X9. 4mm內(nèi)徑）的C18色譜柱，控制柱溫30°C，流 速4mL/min，進(jìn)樣量1000 uL ;其中，流動相A為0. 5%的甲酸水溶液，流動相B為乙腈溶液， 控制梯度洗脫條件〇_3min 15% B，3-10min 20% B，以440nm為檢測波長，收集最大吸收峰 處的洗脫液，在溫度35°C下，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，冷凍干燥，得到I. Ig黃色素終品。圖1為 本發(fā)明實(shí)施例1制備的黃色素終品的高效液相色譜圖，結(jié)果見圖1以及表1。
[0036] 表1實(shí)施例1中黃色素終品的高效液相色譜結(jié)果
[0037]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從臘八蒜中提取和分離黃色素的方法，其特征在于，包括如下步驟： 1) 采用PH值為2-4的酸性乙醇溶液對臘八蒜進(jìn)行提取，制得提取液； 2) 采用有機(jī)溶劑對所述提取液進(jìn)行萃取，收取萃取液，制得含有黃色素的第一粗提 物； 3) 采用大孔樹脂對所述第一粗提物中的黃色素進(jìn)行吸附，并對吸附后的大孔樹脂進(jìn)行 洗脫，收集洗脫液，制得第二粗提物； 4) 采用酸性溶液將所述第二粗提物制成第二粗提液后，用凝膠樹脂柱進(jìn)行凝膠層析， 收集440nm處的洗脫液，制得黃色素初品；其中，所述凝膠層析采用的洗脫劑為酸性溶液和 有機(jī)溶劑的混合液，所述混合液中酸性溶液與有機(jī)溶劑的體積比為（2 :8)-(5 :5)，所述酸 性溶液為PH值2-4的水溶液，所述有機(jī)溶劑為乙醇、乙腈或正丁醇。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，還包括： 5) 采用高效液相色譜對所述黃色素初品進(jìn)行純化，所述高效液相色譜采用C18色譜柱， 流動相A為0. 3-0. 6 %的甲酸水溶液，流動相B為0. 3-0. 6 %乙腈溶液，洗脫梯度為0-3min 15%B，3-10min20%B，收集最大吸收峰值處的洗脫液，并去除洗脫液中的有機(jī)溶劑，制得 黃色素終品。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)中，采用所述酸性乙醇溶液提取臘 八蒜一次以上，并且控制所述酸性乙醇溶液中乙醇的體積含量為50-90%，所述臘八蒜與所 述酸性乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1: (1-8)，提取溫度為-4-25°C，提取時間為12-24h。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中，采用所述有機(jī)溶劑萃取所述 提取液一次以上，并且控制所述提取液與所述有機(jī)溶劑的體積比為1: (1-5)，萃取時間為 2-6h;其中，所述有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述大孔樹脂為XAD-7大孔樹脂、AB-8大 孔樹脂或YWD-Ol大孔樹脂。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的方法，其特征在于，步驟3)包括： 對所述第一粗提物濃縮，并將濃縮物溶于雙蒸水中，制得第一粗提液，其中控制所述濃 縮物與雙蒸水的質(zhì)量體積比為1 : (〇. 5-4); 將所述第一粗提液上裝有所述大孔樹脂的層析柱，采用PH值為2-4的水溶液以3-8mL/min的流速洗滌2-4個柱體積，隨后采用pH值為2-4的酸性乙醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，制 得第二粗提物。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述凝膠樹脂柱中填裝的凝膠樹 脂為SephadexG-25凝膠樹脂、SephadexLH-20凝膠樹脂、SephadexG-20凝膠樹脂或 SephadexG-15 凝膠樹脂。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的方法，其特征在于，步驟4)中，在將所述第二粗提物制成 第二粗提液之前，先對所述第二粗提物進(jìn)行濃縮，并將濃縮物溶于所述酸性溶液中，制得第 二粗提液，其中控制所述濃縮物與酸性溶液的質(zhì)量體積比為1 : (〇. 5-3)，并且控制第二粗 提液的進(jìn)樣量為2-6mL，所述洗脫液的流速為l-4mL/min。
9. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟5)中，所述C18色譜柱為XBridgeC18 或ZORBAXSB-C18。
10. 根據(jù)權(quán)利要求2或9所述的方法，其特征在于，步驟5)中，將所述黃色素初品制
【專利摘要】本發(fā)明提供一種從臘八蒜中提取和分離黃色素的方法，包括以下步驟：1)采用酸性乙醇溶液對臘八蒜進(jìn)行提取，制得提取液；2)采用有機(jī)溶劑對提取液進(jìn)行萃取，制得含有黃色素的第一粗提物；3)采用大孔樹脂對第一粗提物中的黃色素進(jìn)行吸附，并對吸附后的大孔樹脂進(jìn)行洗脫，制得第二粗提物；4)采用酸性溶液將第二粗提物制成第二粗提液后，用凝膠樹脂柱進(jìn)行凝膠層析，收集440nm處的洗脫液，制得黃色素初品；其中，采用的洗脫劑為酸性溶液和有機(jī)溶劑的混合液，酸性溶液與有機(jī)溶劑的體積比為(2：8)-(5：5)，酸性溶液為pH值2-4的水溶液，有機(jī)溶劑為乙醇、乙腈或正丁醇。該方法操作簡單、可實(shí)施性高，能夠從臘八蒜中分離出高純度的天然黃色素。
【IPC分類】C09B61-00
【公開號】CN104788990
【申請?zhí)枴緾N201510205714
【發(fā)明人】王丹, 劉盼盼, 趙曉燕, 馬越, 張超
【申請人】北京市農(nóng)林科學(xué)院
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2015年4月27日