本發(fā)明涉及一種色素的提取方法，具體而言就是指利用烏飯樹葉為原料，通過生物酶促反應(yīng)獲得一種高水溶性的植物色素的提取方法。
背景技術(shù)：
烏飯樹（vacciniumbracteatumthunb.）為杜鵑花科越橘屬植物，又名南燭、烏飯子等。烏飯樹枝葉中有效成分有花青苷類、黃酮類、丹寧類、三萜類等，其中水溶性藍(lán)色素含量高，具有促進(jìn)是視紅素再合成、vp樣機(jī)能、改善血液微循環(huán)、抗?jié)?、抗炎癥、抗衰老等多種生理活性。
目前國內(nèi)烏飯樹葉色素的傳統(tǒng)提取方式為將烏飯樹葉搗碎，然后加水靜置，令樹葉中的色素溶于水中，而后對(duì)其進(jìn)行后續(xù)處理得到色素。這種方式比較簡(jiǎn)單，需要的材料也很常見，但是由于烏飯樹葉色素在水中的溶解度十分有限，傳統(tǒng)的方式并不能將所有的色素析出溶解，色素的獲取率在60-%80%之間，這樣顯然造成了一部分原材料的無端浪費(fèi)。企業(yè)在同行業(yè)的競(jìng)爭(zhēng)中沒有較大的優(yōu)勢(shì)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供一種全新的烏飯樹葉色素的提取方法。
本發(fā)明采用如下技術(shù)手段實(shí)現(xiàn)：一種烏飯樹葉色素的提取方法，包括如下步驟：
1）將新鮮的烏飯樹葉洗凈，殺青，將樹葉烘干14-30h，放入粉碎機(jī)內(nèi)破碎成烏飯樹葉粉末；
2）在烏飯樹葉粉末中添加一定量的含水有機(jī)溶劑，冷浸或加熱回流提取1-4次，每次4-12小時(shí)，而后將提取液過濾，得到濾液；
3）濾液進(jìn)行2400-2800rpm的冷凍離心分離，祛除沉淀后得到上清液；
4）將上清液利用超濾膜祛除高分子物質(zhì)，得到色素前體的濃縮液；
5）根據(jù)濃縮液中的總酚質(zhì)量投入多酚氧化酶，在35～40℃的條件下進(jìn)行保溫反應(yīng)，并持續(xù)通入空氣，反應(yīng)完畢后得到色素粗品溶液；
6）黑色粗品溶液用聚酰胺柱吸附，用去離子水洗去不吸附的雜質(zhì)，直至流出液變澄清為止，然后用一定濃度的有機(jī)溶劑解析出色素溶液；
7）將所述色素溶液在≤60℃的溫度下減壓回收有機(jī)溶劑，再經(jīng)噴霧干燥得到無定形的植物色素粉末。
步驟2中的有機(jī)溶劑為極性有機(jī)溶劑，所述極性有機(jī)溶劑為乙醇或丙酮，含水有機(jī)溶劑為含有低于80％(v/v)有機(jī)溶劑的水溶液，每公斤干燥粉末中加入3-5l含水有機(jī)溶劑。
步驟3中離心時(shí)間介于30min-40min之間。
步驟4中的超濾膜為能截留分子量在10000以上的聚砜膜。
步驟5中保溫反應(yīng)的時(shí)間為2-7h，通入的空氣量為7-12l/min。
步驟6中所述有機(jī)溶劑為含有20-80％(v/v)乙醇的水溶液、或含有20-80％(v/v)丙酮的水溶液。
步驟7中在0.1mpa、60℃條件下脫除有機(jī)溶劑。
本發(fā)明與現(xiàn)有的技術(shù)相比較，具有以下優(yōu)勢(shì)：
1、其將烏飯樹葉烘干打碎，這樣增加了烏飯樹葉的反應(yīng)面積，令色素的提取更為充分；
2、利用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，色素溶解量大，提取效率高；
3、選用較高濃度的乙醇水溶液或丙酮水溶液作提取溶劑，可使溶出的大分子蛋白質(zhì)沉淀下來，從而過濾除去，濾除效果更顯著；
4、采用膜過濾屬物理除雜，不僅能耗低、污染小，還可以減少因高溫色素分解，提高色素的回收率。
具體實(shí)施方式
為了能夠進(jìn)一步了解本發(fā)明的結(jié)構(gòu)、特征及其他目的，現(xiàn)結(jié)合所附較佳實(shí)施例詳細(xì)說明如下，所說明的較佳實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的技術(shù)方案，并非限定本發(fā)明。
實(shí)施例1
取1kg新鮮烏飯樹葉，將其洗凈、殺青，殺青后烘干16h，而后進(jìn)行粉碎，然后將烏飯樹葉粉末轉(zhuǎn)移至反應(yīng)釜中，加2l60％(v/v)乙醇水溶液，在50℃溫度下提取2.5hr，濾除殘?jiān)?，得到濾液，減壓脫除乙醇，直至無醇味止，得到的濃縮液補(bǔ)充去離子水至最初濾液體積，過amicon-聚砜p100的超濾膜，就得到色素前體的水溶液溶液，并依照gb8313-87測(cè)得色素前體溶液中總酚質(zhì)量為24.5g。
向色素前體溶液中投入2.45g(即10wt.％)多酚氧化酶(此多酚氧化酶的比活為10000單位/g以上)，在37℃的條件下，保溫反應(yīng)5hr，并以5-10l/min的流速通入空氣。反應(yīng)完畢后，反應(yīng)液經(jīng)過amicon-聚砜p100的超濾膜過濾。
濾液上聚酰胺柱，以去離子水洗柱直至流出液為澄清止，隨后用約500ml50％乙醇溶液為解析劑，得到色素溶液。
色素溶液在0.09mpa真空、60℃條件下回收溶劑，然后進(jìn)行噴霧干燥，并過60目篩，得到植物色素產(chǎn)品。
實(shí)施例2
取1kg新鮮烏飯樹葉，將其洗凈、殺青，殺青后烘干16h，而后進(jìn)行粉碎，然后將烏飯樹葉粉末轉(zhuǎn)移至反應(yīng)釜中，加1l80％(v/v)丙酮水溶液，在約25℃溫度下提取2.5hr，濾除殘?jiān)玫綖V液，減壓脫除丙酮，直至無丙酮味止，得到的濃縮液補(bǔ)充去離子水至最初濾液體積，過amicon-聚砜p100的超濾膜，就得到色素前體的水溶液溶液，并依照gb8313-87測(cè)得色素前體溶液中總酚質(zhì)量為22.1g。
向色素前體溶液中投入4.42g(即20wt.％)多酚氧化酶(此多酚氧化酶的比活為10000單位/g以上)，在35℃的條件下，保溫反應(yīng)3hr，并以5-10l/min的流速通入空氣。反應(yīng)完畢后，反應(yīng)液經(jīng)過amicon-聚砜p100的超濾膜過濾。
濾液上聚酰胺柱，以去離子水洗柱直至流出液為澄清止，隨后用約500ml80％丙酮溶液為解析劑，得到色素溶液。
色素溶液在0.09mpa真空、60℃條件下回收溶劑，然后進(jìn)行噴霧干燥，并過60目篩，得到植物色素產(chǎn)品。
實(shí)施例3
取1kg新鮮烏飯樹葉，將其洗凈、殺青，殺青后烘干16h，而后進(jìn)行粉碎，然后將烏飯樹葉粉末轉(zhuǎn)移至反應(yīng)釜中，加3l50％(v/v)丙酮水溶液，在約50℃溫度下提取2.5hr，濾除殘?jiān)?，得到濾液，減壓脫除丙酮，直至無丙酮味止，得到的濃縮液補(bǔ)充去離子水至最初濾液體積，過amicon-聚砜p100的超濾膜，就得到色素前體的水溶液溶液，并依照gb8313-87測(cè)得色素前體溶液中總酚質(zhì)量為25.0g。
向色素前體溶液中投入25.0g(即100wt.％)多酚氧化酶(此多酚氧化酶的比活為10000單位/g以上)，在42℃的條件下，保溫反應(yīng)2hr，并以5-10l/min的流速通入空氣。反應(yīng)完畢后，反應(yīng)液經(jīng)過amicon-聚砜p100的超濾膜過濾。
濾液上聚酰胺柱，以去離子水洗柱直至流出液為澄清止，隨后用約500ml80％丙酮溶液為解析劑，得到色素溶液。
色素溶液在0.09mpa真空、60℃條件下回收溶劑，然后進(jìn)行噴霧干燥，并過60目篩，得到植物色素產(chǎn)品。
實(shí)施例4
取1kg新鮮烏飯樹葉，將其洗凈、殺青，殺青后烘干16h，而后進(jìn)行粉碎，然后將烏飯樹葉粉末轉(zhuǎn)移至反應(yīng)釜中，加5l80％(v/v)乙醇水溶液，在約50℃溫度下提取2.5hr，濾除殘?jiān)?，得到濾液，減壓脫除乙醇，直至無醇味止，得到的濃縮液補(bǔ)充去離子水至最初濾液體積，過amicon-聚砜p100的超濾膜，就得到色素前體的水溶液溶液，并依照gb8313-87測(cè)得色素前體溶液中總酚質(zhì)量為26.2g。
向色素前體溶液中投入13.1g(即50wt.％)多酚氧化酶(此多酚氧化酶的比活為10000單位/g以上)，在42℃的條件下，保溫反應(yīng)2hr，并以5-10l/min的流速通入空氣。反應(yīng)完畢后，反應(yīng)液經(jīng)過amicon-聚砜p100的超濾膜過濾。
濾液上聚酰胺柱，以去離子水洗柱直至流出液為澄清止，隨后用約500ml70％乙醇溶液為解析劑，得到色素溶液。
色素溶液在0.09mpa真空、60℃條件下回收溶劑，然后進(jìn)行噴霧干燥，并過60目篩，得到植物色素產(chǎn)品。
實(shí)施例5
取1kg新鮮烏飯樹葉，將其洗凈、殺青，殺青后烘干16h，而后進(jìn)行粉碎，然后將烏飯樹葉粉末轉(zhuǎn)移至反應(yīng)釜中，加3l60％(v/v)丙酮水溶液，在約60℃溫度下提取2.5hr，濾除殘?jiān)玫降臑V液，補(bǔ)充去離子水至最初濾液體積，過amicon-聚砜p100的超濾膜，得到色素前體溶液，并依照gb8313-87測(cè)得色素前體溶液中總酚質(zhì)量為27.8g。
向前體溶液中投入8.34g(即30wt.％)多酚氧化酶(此多酚氧化酶的比活為10000單位/g以上)，在40℃的條件下，保溫反應(yīng)5hr，并以5-10l/min的流速通入空氣。反應(yīng)完畢后，反應(yīng)液經(jīng)過amicon-聚砜p100的超濾膜過濾。
濾液上聚酰胺柱，以去離子水洗柱直至流出液為澄清止，隨后用約500ml50％丙酮溶液為解析劑，得到色素溶液。
色素溶液在0.09mpa真空、60℃條件下回收溶劑，然后進(jìn)行噴霧干燥，并過60目篩，得到植物色素產(chǎn)品。
實(shí)施例6
取1kg新鮮烏飯樹葉，將其洗凈、殺青，殺青后烘干16h，而后進(jìn)行粉碎，然后將烏飯樹葉粉末轉(zhuǎn)移至反應(yīng)釜中，加5l50％(v/v)乙醇水溶液，在約60℃溫度下提取3hr，濾除殘?jiān)?，得到的濾液，過amicon-聚砜p100的超濾膜，得到色素前體溶液，并依照gb8313-87測(cè)得色素前體溶液中總酚質(zhì)量為28.6g。
向前體溶液中投入5.72g(即20wt.％)多酚氧化酶(此多酚氧化酶的比活為10000單位/g以上)，在40℃的條件下，保溫反應(yīng)6hr，并以5-10l/min的流速通入空氣。反應(yīng)完畢后，反應(yīng)液經(jīng)過amicon-聚砜p100的超濾膜過濾。
濾液上聚酰胺柱，以去離子水洗柱直至流出液為澄清止，隨后用約500ml40％乙醇溶液為解析劑，得到色素溶液。
色素溶液在0.09mpa真空、60℃條件下回收溶劑，然后進(jìn)行噴霧干燥，并過60目篩，得到植物色素產(chǎn)品。
實(shí)施例7
取1kg新鮮烏飯樹葉，將其洗凈、殺青，殺青后烘干16h，而后進(jìn)行粉碎，然后將烏飯樹葉粉末轉(zhuǎn)移至反應(yīng)釜中，加6l60％(v/v)乙醇水溶液，在約60℃溫度下提取2.5hr，濾除殘?jiān)玫降臑V液，過amicon-聚砜p100的超濾膜，得到色素前體溶液，并依照gb8313-87測(cè)得色素前體溶液中總酚質(zhì)量為26.1g。
向前體溶液中投入5.22g(即20wt.％)多酚氧化酶(此多酚氧化酶的比活為10000單位/g以上)，在40℃的條件下，保溫反應(yīng)5hr，并以5-10l/min的流速通入空氣。反應(yīng)完畢后，反應(yīng)液經(jīng)過amicon-聚砜p100的超濾膜過濾。
濾液上聚酰胺柱，以去離子水洗柱直至流出液為澄清止，隨后用約500ml50％乙醇溶液為解析劑，得到色素溶液。
色素溶液在0.09mpa真空、60℃條件下回收溶劑，然后進(jìn)行噴霧干燥，并過60目篩，得到植物色素產(chǎn)品。