一類以尼羅藍(lán)為母體的近紅外熒光探針、其制法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一類以尼羅藍(lán)為母體的近紅外熒光探針、其制法及應(yīng)用。所述熒光探針具有通式Ⅰ的結(jié)構(gòu)，如附圖1。本發(fā)明的熒光探針有效地改進(jìn)現(xiàn)有的腫瘤標(biāo)記熒光探針的不足，能夠更加靈敏準(zhǔn)確地反應(yīng)出COX-2表達(dá)量異常變化的靶細(xì)胞，適用于有效的、專一的標(biāo)記癌癥活細(xì)胞的近紅外熒光探針。并且合成簡便，產(chǎn)品易得，在非腫瘤細(xì)胞內(nèi)具有很低的熒光背景，在腫瘤細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的熒光信號，且對腫瘤細(xì)胞具有很強(qiáng)的專一性標(biāo)記。同時，這類化合物具有良好的細(xì)胞膜通透性，并具有較低的生物毒性、光毒性、光漂白性，并且能夠定位于腫瘤細(xì)胞內(nèi)的某種特殊細(xì)胞器。
【專利說明】—類以尼羅藍(lán)為母體的近紅外熒光探針、其制法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一類以尼羅藍(lán)為母體的近紅外熒光探針、其制備方法，以及利用該類熒光探針在制備生物標(biāo)記試劑盒、尤其是腫瘤細(xì)胞標(biāo)記試劑盒中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計(jì)，20世紀(jì)80年代全世界每年新患癌癥的病人約700萬，每年死于癌癥者約500萬人，癌癥正以一股勢不可擋的趨勢向人類進(jìn)攻，因此建立一種簡便、快速、有效、靈敏的癌癥標(biāo)記技術(shù)是一項(xiàng)重要的工作?，F(xiàn)有的標(biāo)記成像的方法主要有:X線檢測技術(shù)、超聲波檢測技術(shù)、CT檢測技術(shù)、核磁共振(MRI)檢測技術(shù)、紅外熱像圖檢測技術(shù)、近紅外線掃描檢測技術(shù)、PET-CT檢測技術(shù)等。但上述方法在實(shí)際成像應(yīng)用中存在以下缺陷:缺乏成像專一性，具有大的放射性損傷，無法獨(dú)立標(biāo)記診斷腫瘤，無法對腫瘤進(jìn)行深度成像等等。
[0003]熒光探針由于具有非侵入性、易操作、能夠?qū)崿F(xiàn)可視化檢測等特點(diǎn)，受到普遍的重視。近年來，應(yīng)用熒光探針對生物標(biāo)志物進(jìn)行識別和檢測的熒光顯微成像及檢測技術(shù)已逐漸被應(yīng)用到生物識別、醫(yī)學(xué)診斷、疾病治療過程中。然而，這些熒光染料激發(fā)、發(fā)射波長都較短，在進(jìn)行活細(xì)胞共聚焦成像時，對活細(xì)胞造成很大的損傷，同時，此類熒光染料容易發(fā)生光漂白，并易受到自發(fā)熒光的干擾，因此開發(fā)一種激發(fā)、發(fā)射波長長，光穩(wěn)定性好，對細(xì)胞具有低毒性的近紅外探針具有重要意義。尼羅藍(lán)類熒光染料具有優(yōu)良的光化學(xué)物理性質(zhì)，例如高的摩爾消光系數(shù)、良好的光穩(wěn)定性、高的熒光量子產(chǎn)率等優(yōu)點(diǎn)。對細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境不敏感，而且可以解決探針對細(xì)胞高毒性和光漂白嚴(yán)重等弊端。
[0004]隨著成像技術(shù)的發(fā)展，熒光顯微鏡在生命科學(xué)的研究中已經(jīng)成為最重要的成像工具。與紫外-可見區(qū)相比，近`紅外熒光成像具有顯著優(yōu)勢，包括暗場成像、避免熒光漂白和光致毒及降低組織自發(fā)熒光干擾等，因此近紅外熒光成像技術(shù)為生物成像提供了一個嶄新的平臺。目前，對腫瘤標(biāo)記成像、其活體內(nèi)分布成像以及腫瘤深度成像的專一性近紅外熒光探針還相對較少，開發(fā)專一性好的標(biāo)記腫瘤的近紅外熒光探針是實(shí)現(xiàn)近紅外腫瘤成像的關(guān)鍵。但現(xiàn)有的靶向到生物標(biāo)志物的熒光染料仍存在著特異性、專一性、靈敏度及生物適應(yīng)性等問題。
[0005]環(huán)氧合酶-2 (C0X-2)屬于一種同工的應(yīng)激酶，一般情況下不表達(dá)。只有在機(jī)體處于炎癥期間以及癌癥的時候才表達(dá)，并且過度表達(dá)，隨著炎癥和癌癥的發(fā)生與發(fā)展，C0X-2的表達(dá)量也逐漸增加。并且已有文獻(xiàn)報(bào)道，某些特定的C0X-2羧酸類抑制劑可以通過氫鍵很好地與C0X-2的膜結(jié)合區(qū)內(nèi)的氨基酸(Argl20，Tyr355和Glu522)結(jié)合?；诖耍訡0X-2為生物標(biāo)志物，將C0X-2的羧酸類抑制劑——吲哚美辛引入至可檢測的診斷劑中，使其作為分子的識別基團(tuán)，靶向引導(dǎo)結(jié)合至C0X-2的膜結(jié)合區(qū)域，從而實(shí)現(xiàn)靶細(xì)胞的檢測是本研究領(lǐng)域極具吸引力的研究方向。CN101528222(
【公開日】2009-09-09)所公開用于診斷性和治療性靶向C0X-2的方法和組合物(包括吲哚美辛通過連接單元與尼羅藍(lán)分子連接而成的診斷劑27uu)即體現(xiàn)了此研究思路。然而，這類診斷劑在應(yīng)用中仍然存在的問題是:當(dāng)作為檢測對象的組織、器官或個體中無高C0X-2表達(dá)的靶標(biāo)細(xì)胞時，熒光仍然存在，這會影響C0X-2表達(dá)量增加初期的準(zhǔn)確診斷，實(shí)際應(yīng)用中，極可能導(dǎo)致腫瘤或炎癥發(fā)生初期的診斷失準(zhǔn)。因此，需要開發(fā)更為靈敏的診斷試劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對現(xiàn)有技術(shù)的應(yīng)用缺陷，本發(fā)明擬提供一類新的包括尼羅藍(lán)和吲哚美辛結(jié)構(gòu)單元的近紅外突光探針，所述的突光探針應(yīng)當(dāng)能夠更加靈敏地反應(yīng)出C0X-2表達(dá)量的變化，所述熒光探針具有如下結(jié)構(gòu)通式1:
[0007]
【權(quán)利要求】
1.一類以尼羅藍(lán)為母體的近紅外熒光探針，所述熒光探針具有如下結(jié)構(gòu)通式1:
2.權(quán)利要求1所述的以尼羅藍(lán)為母體的近紅外熒光探針，其特征在于所述的η為3~7的整數(shù)。
3.權(quán)利要求1所述的以尼羅藍(lán)為母體的近紅外熒光探針，其特征在于所述的η是4~6的整數(shù)。
4.權(quán)利要求1中任一權(quán)利要求所述的以尼羅藍(lán)為母體的近紅外熒光探針，其特征在于所述的R4和R5各自獨(dú)立地選自-OCH3或鹵素。
5.權(quán)利要求4所述的以尼羅藍(lán)為母體的近紅外熒光探針，其特征在于所述的R4為-OCH3, R5選自F或Cl。·
6.權(quán)利要求1所述的以尼羅藍(lán)為母體的近紅外熒光探針，其特征在于所述的R1和R2各自獨(dú)立地選自Cm烷基或Cy烷基磺酸基。
7.權(quán)利要求1所述的以尼羅藍(lán)為母體的近紅外熒光探針，選自化合物II和II’:
8.權(quán)利要求1所述的以尼羅藍(lán)為母體的近紅外熒光探針的制備方法，包括以下步驟: I) 1-溴萘與H2N-R3-NH2按摩爾比1:1-1:5反應(yīng)，制備化合物II1:
9.權(quán)利要求1所述的以尼羅藍(lán)為母體的近紅外熒光探針在制備生物樣品標(biāo)記試劑中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述的生物樣品是腫瘤細(xì)胞。
【文檔編號】C09K11/06GK103820104SQ201410072966
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年2月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月28日
【發(fā)明者】樊江莉, 王本花, 彭孝軍, 仉華 申請人:大連理工大學(xué)