18]其中，Poly(EGDMA-Co-VPy)微球加入到納米金顆粒溶液中震蕩是在氣浴振蕩器中進(jìn)行的，溫度設(shè)定為20?50攝氏度，優(yōu)選30?40攝氏度。
[0019]可選擇地，Poly(EGDMA-Co-VPy)微球加入到納米金顆粒溶液中震蕩可以采用其他方式進(jìn)行。
[0020]可選擇地，準(zhǔn)備Poly(EGDMA-Co-VPy)微球可包括步驟:(4.1)、準(zhǔn)備乙腈和4-乙烯吡啶，4-乙烯吡啶的體積為乙腈體積的2%?40Z0，將準(zhǔn)備好的4-乙烯吡啶加入到乙腈中，配制成反應(yīng)液；(4.2)、反應(yīng)液加入二甲基丙烯酸二醇酯(EGDMA)做為交聯(lián)劑，交聯(lián)劑投入量為反應(yīng)液總體積的1.5 %?8.5%，并且，反應(yīng)液加入偶氮二異丁腈AIBN做為引發(fā)劑，引發(fā)劑的投入量為反應(yīng)液總體積的1%?5%;以及(4.3)、在步驟(4.2)配置好的混合液中加入沸石，緩慢加熱混合液，加熱溫度設(shè)定為70?90攝氏度，加熱時(shí)間設(shè)定為60?90分鐘，過(guò)濾溶液得至IjP0Iy(EGDMA-C0-VPy)微球后分別用四氫呋喃和無(wú)水乙醇浸泡三十分鐘，真空干燥至恒重得到Poly(EGDMA-C0-VPy)微球，真空干燥溫度設(shè)定為40?60攝氏度。
[0021]其中，交聯(lián)劑二甲基丙烯酸二醇酯投入量?jī)?yōu)選為反應(yīng)液總體積的2.5%?7.5%，更優(yōu)選3%?5 %。
[0022]其中，引發(fā)劑偶氮二異丁腈的投入量?jī)?yōu)選為反應(yīng)液總體積的2%?4%。
[0023]其中，制備Poly(EGDMA-co-VPy)微球的混合液加熱時(shí)，為避免反應(yīng)生成副產(chǎn)物，控制反應(yīng)溫度使混合液25?30分鐘內(nèi)沸騰并開(kāi)始蒸出溶劑乙腈。
[0024]可選擇地，Poly(EGDMA-Co-VPy)微球也可以直接從商家購(gòu)買，其中文名稱為“聚(二甲基丙烯酸乙二醇酯-共-4-乙烯吡啶)”。
[0025]優(yōu)選的，準(zhǔn)備的石墨烯是0.4-0.6納米厚的單層石墨烯粉末。
[0026]可選擇地，準(zhǔn)備的石墨烯也可以是單層石墨烯、雙層石墨烯和多層石墨烯的一種或幾種混合物。
[0027]可選擇地，洗滌石墨烯玻碳電極的硝酸溶液由體積比0.5?3:1的硝酸與去離子水混合制得。
[0028]可選擇地，納米金顆粒包覆Poly (E⑶MA-co-VPy)微球的自組裝溶液用乙醇-水混合溶液離心洗滌3?5次后，用乙醇-水混合溶液保存，其中，乙醇-水混合溶液體積比為3?5:1。
[0029]可選擇地，DNA探針修飾的摻石墨烯玻碳電極上涂敷牛血清蛋白溶液，自組裝一層牛血清蛋白分子層。
[0030]可選擇地，電解液選用0.1?0.3摩爾/升的硫酸。氯金酸溶液的濃度可選擇性設(shè)為
0.01?0.1毫摩爾/升，檸檬酸鈉溶液的濃度可選擇性設(shè)為0.1?0.4毫摩爾/升。
[0031 ] 可選擇地，本實(shí)用新型制得的納米金的粒徑為20?50納米。
[0032]本實(shí)用新型的有益效果是:(I)、采用Poly(EGDMA-Co-VPy)微球作為載體與納米金顆粒自組裝，納米金顆粒包覆Poly (EGDMA-co-VPy)微球提供更多DNA探針結(jié)合位點(diǎn)，納米金顆粒與Poly(E⑶MA-co-VPy)微球結(jié)合緊密、牢固、不易脫落；(2)、本實(shí)用新型所選用的DNA探針兩端分別有巰基和熒光素修飾，納米金顆粒吸附熒光素使得DNA探針彎曲成弓形，弓型DNA探針與待檢測(cè)DNA結(jié)合時(shí)，DNA探針由弓形變成直立，導(dǎo)致工作電極電阻變化，通過(guò)電流檢測(cè)裝置測(cè)得的響應(yīng)電流可以確定溶液中是否含有靶DNA; (3)、用摻石墨烯玻碳電極作為工作電極，可以利用石墨烯良好的導(dǎo)電性對(duì)系統(tǒng)電流變化記錄準(zhǔn)確、靈敏，采用摻石墨烯玻碳電極作為工作電極而非石墨烯膜包覆工作電極的方式，降低了生產(chǎn)成本，節(jié)約了生產(chǎn)材料；(4)、在DNA探針修飾的摻石墨烯玻碳電極上涂敷牛血清蛋白溶液，自組裝一層牛血清蛋白分子層，可以封閉未結(jié)合DNA探針的金納米顆粒的結(jié)合位點(diǎn)，防止非靶DNA與金納米顆粒發(fā)生非特異性結(jié)合，影響測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性。
【附圖說(shuō)明】
[0033]圖1示出了本實(shí)用新型制備熒光素標(biāo)記的DNA探針的基因檢測(cè)系統(tǒng)的工作電極的流程示意圖。
[0034]圖2為9?光素標(biāo)記的DNA探針的基因檢測(cè)系統(tǒng)的構(gòu)造不意圖。
[0035]圖3為DNA探針修飾的摻石墨烯玻碳電極與靶DNA結(jié)合前狀態(tài)示意圖。
[0036]圖4為DNA探針修飾的摻石墨烯玻碳電極與靶DNA結(jié)合后狀態(tài)示意圖。
[0037]圖5為包覆金納米顆粒的Poly(E⑶MA-co-VPy)微球與DNA探針自組裝的構(gòu)造示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0038]下面通過(guò)參考附圖和實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)闡述，但這些闡述并不對(duì)本實(shí)用新型做任何形式的限定。除非另有說(shuō)明，否則本文所用的所有科學(xué)和技術(shù)術(shù)語(yǔ)具有本實(shí)用新型所屬和相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域的一般技術(shù)人員通常理解的含義。
[0039]實(shí)施例1
[0040]請(qǐng)參照附圖1，本實(shí)用新型的熒光素標(biāo)記的DNA探針的基因檢測(cè)系統(tǒng)的工作電極的制備方法，包括如下制備步驟。
[0041]在步驟SI中，按質(zhì)量比25:1準(zhǔn)備聚丙烯腈樹脂和石墨烯，將準(zhǔn)備好的聚丙烯腈樹脂在氬氣氣氛中緩慢加熱至1200攝氏度得到玻碳，玻碳降溫至900攝氏度加入準(zhǔn)備好的石墨烯攪拌混合后冷卻得到摻石墨烯玻碳，其中，石墨烯是0.4-0.6nm厚的單層石墨烯粉末。
[0042]在步驟S2中，按所需尺寸切割摻石墨烯玻碳獲得摻石墨烯玻碳電極。
[0043]在步驟S3中，將得到的摻石墨烯玻碳電極依次在硝酸溶液、二次蒸餾水、丙酮中超聲洗滌各5分鐘，其中，硝酸溶液由體積比1:1的硝酸與去離子水混合制得。
[0044]在步驟S4中，準(zhǔn)備粒徑約500納米的Poly(EGDMA-co-VPy)微球。
[0045]在步驟S5中，準(zhǔn)備氯金酸溶液和檸檬酸鈉溶液，將準(zhǔn)備好的氯金酸溶液加入到超純水中加熱至沸騰后加入檸檬酸鈉溶液，充分?jǐn)嚢枞芤翰⑹谷芤罕３址序v態(tài)40分鐘，當(dāng)溶液顏色變成酒紅色后停止加熱，溶液自然冷卻至室溫后冷凍分離提純，得到納米金顆粒溶液，其中，氯金酸溶液和梓檬酸鈉溶液體積比為I: I，氯金酸溶液與超純水體積比為0.005:1，其中，氯金酸溶液的濃度選用0.2毫摩爾/升，檸檬酸鈉溶液的濃度選用0.35毫摩爾/升，制得的納米金粒徑約為30?35納米。
[0046]在步驟S6中，將準(zhǔn)備好的Poly(E⑶MA-co-VPy)微球分散到納米金顆粒溶液，在氣浴振蕩器震蕩，時(shí)間設(shè)定為30分鐘，溫度設(shè)定為40攝氏度，得到納米金顆粒包覆Poly(EGDMA-co-VPy)微球的自組裝溶液，用體積比為4:1的乙醇_水混合溶液離心洗滌自組裝溶液3次后，用乙醇-水混合溶液保存。
[0047]在步驟S7中，將摻石墨烯玻碳電極放入到納米金顆粒包覆Poly(EGDMA-Co-VPy)微球的自組裝溶液中，密封浸泡3小時(shí)，取出后用去離子水沖洗，氮?dú)獯蹈?，完成納米金顆粒包覆Poly (EGDMA-co-VPy)微球與摻石墨稀玻碳電極的自組裝，在摻石墨稀玻碳電極上形成包覆Po Iy (EGDMA-co-VPy)微球的納米金層。
[0048]在步驟S8中，將裝配有巰基和熒光素的DNA探針溶液滴涂在摻石墨烯玻碳電極的納米金層上，晾干后用二次水清洗，氮?dú)獯蹈珊笸糠笈Ｑ宓鞍兹芤海古Ｑ宓鞍追肿訉幼越M裝在DNA探針修飾的摻石墨烯玻碳電極上。
[0049]其中，準(zhǔn)備PoIy(EGDMA-co-VPy)微球包括步驟:
[0050]準(zhǔn)備乙腈和4-乙烯吡啶，4-乙烯吡啶的體積為乙腈體積的約3%，將準(zhǔn)備好的4-乙稀P比啶加入到乙腈中，配制成反應(yīng)液。
[0051]反應(yīng)液中加入二甲基丙烯酸二醇酯，投入量為反應(yīng)液總體積的4%，加入偶氮二異丁腈AIBN，投入量為反應(yīng)液總體積的3%。
[0052]在配置好的混合液中加入沸石，緩慢加熱混合液至80攝氏度，加熱70分鐘，控制反應(yīng)溫度使混合液30分鐘內(nèi)沸騰并開(kāi)始蒸出溶劑乙腈，過(guò)濾溶液得到Po Iy (EGDMA-co-VPy)微球，得到的PoIy (EGDMA-co-VPy)微球分別用四氫呋喃和無(wú)水乙醇浸泡三十分鐘，再分別用四氫呋喃、丙酮和無(wú)水乙醇分別洗滌一遍，50攝氏度條件下真空干燥得到Poly (E⑶MA-CO-VPy)微球。
[0053]實(shí)施例2
[0054]除了步驟SI中聚丙烯腈樹脂和石墨烯質(zhì)量比調(diào)整為30:1外，其它條件同實(shí)施例1。
[0055]實(shí)施例3
[0056]除了步驟SI中聚丙烯腈樹脂在氬氣中加熱穩(wěn)定至調(diào)整1500攝氏度、玻碳降溫至800攝氏度加入準(zhǔn)備好的石墨烯攪拌混合后冷卻得到摻石墨烯玻碳外，其它條件同實(shí)施例1o
[0057]實(shí)施例4
[0058]除了步驟SI中聚丙烯腈樹脂在氬氣中加熱穩(wěn)定至調(diào)整1800攝氏度外、玻碳降溫至1000攝氏度加入準(zhǔn)備好的石墨烯攪拌混合后冷