一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置的制造方法
【技術領域】
[0001] 本實用新型涉及一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置。
【背景技術】
[0002] 變性梯度聚丙烯酰胺凝膠電泳（DGGE)是分析核酸分子的堿基差異，有效檢測基 因突變和復雜微生物群落成分的必備實驗技術，是微生物學、遺傳學和分子生物學研宄的 有力工具。
[0003] 目前克隆測序法和DGGE法均為分析微生物群落的結(jié)構(gòu)和種群多樣性變異的分子 遺傳學手段。這兩種技術的優(yōu)勢均為通過核酸信息對微生物群落進行表征測定，比傳統(tǒng)的 菌種分離培養(yǎng)方法更快捷，可鑒定出難培養(yǎng)或不能培養(yǎng)分離的菌種。DGGE法比克隆測序更 為快捷，由于省去了將PCR產(chǎn)物連接到載體并克隆擴增的步驟，因此實驗周期更短，費用更 低。并且可對DGGE條帶切割分離后進行DNA序列分析，或與特異性探針雜交分析鑒定微生 物種屬，現(xiàn)有配制該凝膠的有一種梯度混合儀，而在制備過程中，常常因為聚合反應過快， 造成制備凝膠的各組成還沒充分混均，凝膠便已經(jīng)聚合，這樣部分濃度會不均一，同時易產(chǎn) 生氣泡；此外，商用的混合儀一般價格較高。 【實用新型內(nèi)容】
[0004] 本實用新型的目的是提供一種結(jié)構(gòu)簡單、造價低廉、容易操作的變性梯度聚丙烯 酰胺凝膠配制裝置。
[0005] 為了達成上述目的，本實用新型采用如下技術方案：
[0006] 一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置，包括由高到低、按照設定高度梯度依次 設置的1號瓶，2號瓶和制膠板，1號瓶與2號瓶之間、2號瓶與制膠板之間分別設置聯(lián)通管， 1號瓶上設置與外界相通的空氣聯(lián)通管，在2號瓶的底部放置磁力攪拌器，1號瓶與2號瓶 的瓶口設置密封塞。
[0007] 1號瓶和所述2號瓶均為帶膠塞的玻璃瓶。
[0008] 磁力攪拌器帶有磁力攪拌棒。
[0009] 該裝置的具體制作步驟是：將2個25mL帶膠塞玻璃瓶與制膠板按設定梯度放置 好，在2個玻璃瓶之間、第二個玻璃瓶和制膠板之間設置聯(lián)通管，第一玻璃瓶內(nèi)設置與空氣 相通的空氣聯(lián)通管，第一個玻璃瓶即1號瓶內(nèi)放置低變性濃度丙烯酰胺溶液，第二個玻璃 瓶即2號瓶內(nèi)放置高變性濃度丙烯酰胺溶液，在使用過程中，整個裝置的工作動力來自于 玻璃瓶內(nèi)液體的自動虹吸作用，且使用中要保持瓶塞與瓶口之間以及瓶塞與聯(lián)通管之間的 密封性。
[0010] 本實用新型的有益效果是：
[0011] 1)整個裝置結(jié)構(gòu)簡單、造價低廉、容易操作；
[0012] 2)該裝置利用的是玻璃瓶內(nèi)的自動虹吸作用，除攪拌外不需要借助外力，非常環(huán) 保；
[0013] 3)可隨意調(diào)整凝膠內(nèi)的變性劑濃度梯度以滿足不同的分析目的；
[0014] 4)經(jīng)過計算發(fā)現(xiàn)凝膠內(nèi)變性劑濃度梯度呈指數(shù)變化，能顯著提高核酸分子的分離 效果。
【附圖說明】
[0015] 圖1是本實用新型的結(jié)構(gòu)原理圖；
[0016] 其中，L空氣聯(lián)通管；2.1號瓶；3.聯(lián)通管；4. 2號瓶；5.磁力攪拌棒；6.磁力攪拌 器；7.制膠板。
【具體實施方式】
[0017] 下面將結(jié)合本實用新型實施例中的附圖，對本實用新型實施例中的技術方案進行 清楚、完整的描述。
[0018] 如圖1所示，一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置，包括由高到低、按照設定高 度梯度依次設置的1號瓶2, 2號瓶4和制膠板7,1號瓶2與2號瓶4之間、2號瓶4與制 膠板7之間分別設置聯(lián)通管3,1號瓶上設置與外界相通的空氣聯(lián)通管1，在2號瓶的底部 放置磁力攪拌器6,1號瓶與2號瓶的瓶口設置密封塞，在實際應用中，聯(lián)通管的前側(cè)要沒入 1號瓶液體液面以下位置，聯(lián)通管的后側(cè)設置在2號瓶液體液面以上位置，另一聯(lián)通管的前 側(cè)要沒入2號瓶液體液面以下位置。
[0019] 1號瓶和所述2號瓶均為帶膠塞的玻璃瓶。
[0020] 磁力攪拌器帶有磁力攪拌棒5,磁力攪拌棒的上端固定在磁力攪拌器上，磁力攪拌 棒為一塊順磁性鐵氧體棒或者普通的鐵棒，外裹一層聚四氟乙烯塑料，外形接近長橢圓形。
[0021] 該裝置的具體制作步驟是：將2個25mL帶膠塞玻璃瓶與制膠板按設定梯度放置 好，在2個玻璃瓶之間、第二個玻璃瓶和制膠板之間設置聯(lián)通管，第一玻璃瓶內(nèi)設置與空氣 相通的空氣聯(lián)通管，第一個玻璃瓶即1號瓶內(nèi)放置低變性濃度丙烯酰胺溶液，第二個玻璃 瓶即2號瓶內(nèi)放置高變性濃度丙烯酰胺溶液，在使用過程中，整個裝置的工作動力來自于 玻璃瓶內(nèi)液體的自動虹吸作用，且使用中要保持瓶塞與瓶口之間以及瓶塞與聯(lián)通管之間的 密封性；再者，使用該裝置時，根據(jù)事先確定的變性梯度范圍，可以確定1號瓶和2號瓶內(nèi)應 設置的溶液體積，具體推導過程如下：
[0022] 設定1號瓶內(nèi)低變性濃度丙烯酰胺溶液變性濃度為a，2號瓶內(nèi)高變性濃度丙烯酰 胺溶液初始濃度為bmax，體積為V tl。由于制膠過程中2號瓶中的液體流入速度和流出速度 相等，故Vtl保持恒定。輸液管的容積忽略不計。設制膠板的有效容積為V。
[0023] 制膠過程可以等效為2號瓶中的高變性濃度膠液被1號瓶中的低變性濃度膠液連 續(xù)等比例稀釋。為便于計算，假設共作η次稀釋，所以每次稀釋時2號瓶中的入液量和出液 量均為V/n，
[0024] 稀釋一次后2號瓶中膠液濃度：
[0026] 每次的稀釋比：
[0028] 灌膠完成后制膠板中最上層濃度：
[0030] 由于液體的流動是連續(xù)的，相當于在整個制膠過程中共對2號瓶中的膠液作無限 多次稀釋，即η -c?，制膠完成時制膠板最上端的膠液變性梯度最低，其值為：
[0032] 制膠板最下端的膠液變性梯度最高且等于2號瓶內(nèi)膠液的初始變性濃度，因此變 性梯度
[0033] 范圍是 bmin- b max。
[0034] 為了解本方法所配制變性膠的濃度變化規(guī)律，可假設制膠板的高度為h，與高垂直 的截面積為s，則式（4)可寫為：
[0036] 由式（5)可見用此裝置制作的凝膠變性梯度在垂直方向上呈指數(shù)變化，隨著電泳 過程的進行，條帶內(nèi)核酸分子迅速到達高變性濃度區(qū)域，能顯著提高核酸分子的分離效果， 而商業(yè)制膠設備制作的凝膠其變性梯度為線性變化。
[0037] 而商業(yè)制膠設備制作的凝膠其變性梯度為線性變化。
[0038] 由式（5)可知，在已知V。，b_，a，s，h的情況下，可算得I^niin;反之，如事先確定變 性梯度的范圍值，也可通過計算得出高變性濃度溶液量的體積。
[0039] 以上所述，僅為本實用新型的具體實施方案，但本實用新型的保護范圍并不局限 于此，任何未違背本實用新型的精神實質(zhì)與原理下所作的變化或替換，都包含在本實用新 型的保護范圍之內(nèi)。因此，本實用新型的保護范圍應以權(quán)利要求書所限定的保護范圍為準。
【主權(quán)項】
1. 一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置，其特征在于，包括由高到低、按照設定高度 梯度依次設置的1號瓶，2號瓶和制膠板，1號瓶與2號瓶之間、2號瓶與制膠板之間分別設 置聯(lián)通管，1號瓶上設置與外界相通的空氣聯(lián)通管，在2號瓶的底部放置磁力攪拌器，1號瓶 與2號瓶的瓶口設置密封塞。2. 如權(quán)利要求1所述的一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置，其特征在于，所述1號 瓶和所述2號瓶均為帶膠塞的玻璃瓶。3. 如權(quán)利要求1所述的一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置，其特征在于，所述磁 力攪拌器帶有磁力攪拌棒。
【專利摘要】本實用新型提供的一種變性梯度聚丙烯酰胺凝膠配制裝置，包括由高到低、按照設定高度梯度依次設置的1號瓶，2號瓶和制膠板，1號瓶與2號瓶之間、2號瓶與制膠板之間分別設置聯(lián)通管，1號瓶上設置與外界相通的空氣聯(lián)通管，在2號瓶的底部放置磁力攪拌器，1號瓶與2號瓶的瓶口設置密封塞。本實用新型的有益效果是：整個裝置結(jié)構(gòu)簡單、造價低廉、容易操作；該裝置利用的是玻璃瓶內(nèi)的自動虹吸作用，除攪拌外不需要借助外力，非常環(huán)保。
【IPC分類】C12M1/02
【公開號】CN204676067
【申請?zhí)枴緾N201520356431
【發(fā)明人】王希娣, 姜國勝, 劉振東, 張華 , 成麗娟, 刁玉濤, 趙穎馨
【申請人】山東省醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所
【公開日】2015年9月30日
【申請日】2015年5月28日