比率存在。在一些實(shí)施方案中，所述組合物還包含至少5%w/w和高達(dá)約10%、 20%、30%、40%或50%w/w的包含ω -3脂肪酸部分的乙酯（即乙酯的重量/組合物的總重 量）。在一些實(shí)施方案中，所述組合物包含至少10 % w/w和高達(dá)約20 %、30 %、40 %或50 % w/w 的包含ω-3脂肪酸部分的甘油酯化合物（即，甘油酯化合物的重量/組合物的總重量）。在一 些實(shí)施方案中，所述組合物包含蝦青素。在一些實(shí)施方案中，所述組合物包含至少第二抗氧 化劑。在一些實(shí)施方案中，所述組合物部分或全部來源于磷蝦。
[0031 ]在一些實(shí)施方案中，所述組合物在選自由以下組成的組的制劑中提供:膠囊劑、片 劑、液體、粉劑、乳劑、膳食補(bǔ)充劑、營養(yǎng)補(bǔ)充劑、飲料和功能性食品。
[0032] 在一些實(shí)施方案中，將所述組合物用于向受試者口服或靜脈內(nèi)施用以降低血清甘 油三酯，降低血清膽固醇，減少噬斑形成，減少血小板聚集，治療動(dòng)脈粥樣硬化，改善心血管 健康，減少炎癥，減少冠心病，治療抑郁癥，治療阿爾茨海默病，治療注意力缺陷癥，和治療 代謝綜合征。在一些實(shí)施方案中，將所述組合物以約〇. 1至約3克的日劑量施用。在一些實(shí)施 方案中，將組合物向選自由以下組成的組的受試者施用：人、非人靈長類動(dòng)物、家養(yǎng)動(dòng)物或 農(nóng)場動(dòng)物以及伴侶動(dòng)物。
[0033] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于產(chǎn)生橡皮糖產(chǎn)品的方法，所述方法包括:將 如上產(chǎn)生的洗滌的富含極性脂質(zhì)的提取物、富含極性脂質(zhì)的沉淀、固體的富含極性脂質(zhì)的 組合物或混合脂質(zhì)組合物或如上所述的磷脂組合物混合至凝膠基質(zhì)中，以提供混合的橡皮 糖混合物并由混合的橡皮糖混合物形成橡皮糖。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了由上述 方法制成的產(chǎn)品。
[0034] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在固體凝膠基質(zhì)中包含如上所述產(chǎn)生的洗滌的富 含極性脂質(zhì)的提取物、富含極性脂質(zhì)的沉淀、固體的富含極性脂質(zhì)的組合物或混合脂質(zhì)組 合物或如上所述的磷脂組合物的組合物。
[0035] 定義
[0036] 如本文中所用，〃磷脂〃是指具有以下通式的有機(jī)化合物：
[0037]
[0038] 其中R1是脂肪酸部分或-H，R2是脂肪酸部分或-H，并且R3是-H或磷脂頭基部分諸 如膽堿(HOCH2CH 2N+(CH3)3〇H-)部分、乙醇胺(HOCH2CH2NH 2)部分、絲氨酸部分或肌醇部分諸如 環(huán)己烷多元醇肌醇或其衍生物。優(yōu)選地，R1和R2不能同時(shí)為-H。當(dāng)R3是-H時(shí)，所述化合物是 二酰基甘油磷酸酯，而當(dāng)R3是含氮化合物時(shí)，所述化合物是磷脂諸如卵磷脂、腦磷脂、磷脂 酰絲氨酸或縮醛磷脂。
[0039] 如本文中所用，術(shù)語"長鏈多不飽和脂肪酸"是指具有20或更多個(gè)碳并且在兩個(gè)或 多個(gè)鍵上是不飽和的脂肪酸。
[0040] 如本文中所用，術(shù)語ω-3脂肪酸是指在從該分子的甲基末端開始的第三與第四個(gè) 碳原子之間的烴鏈中具有最后的雙鍵的多不飽和脂肪酸。ω-3脂肪酸的非限制性實(shí)例包 括，5,8，11，14，17-二十碳五烯酸化卩厶）、4,7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸(0骱)和7，10， 13，16,19-二十二碳五烯酸(DPA)。
[0041] 如本文中所用，術(shù)語"部分"，當(dāng)用于指脂肪酸時(shí)，是指通過鍵諸如酯或醚鍵結(jié)合于 另一個(gè)分子例如甘油酯或磷酸甘油酯分子的脂肪酸的部分。脂肪酸"部分"從而指脂肪酸的 脂肪鏈或指脂肪酸的脂酰基。在本文中定義的磷脂結(jié)構(gòu)中，當(dāng)脂肪酸部分是脂?；鶗r(shí)，脂酰 基的脂肪鏈通過酯鍵連接并且當(dāng)脂肪酸部分是脂肪酸的脂肪鏈時(shí)，所述脂肪鏈通過醚鍵連 接。當(dāng)結(jié)合本發(fā)明的磷脂(例如，ΕΡΑ或DHA)提及特定的脂肪酸時(shí)，其從而應(yīng)當(dāng)被視為提及相 關(guān)脂?；蚱渲炬?。
[0042]如本文中所用，術(shù)語"生理學(xué)上可接受的載體"是指通常與油狀藥物一起使用的任 何載體或賦形劑。此類載體或賦形劑包括但不限于油、淀粉、蔗糖和乳糖。
[0043]如本文中所用，術(shù)語"口服遞送媒介物"是指口服遞送藥物的任何裝置，包括，但不 限于，膠囊劑、丸劑、片劑和糖漿劑。
[0044]如本文中所用，術(shù)語"食品"是指適合于被人、非反芻動(dòng)物或反芻動(dòng)物消費(fèi)的任何 食物或飼料。"食品"可以是經(jīng)制備和包裝的食物(例如，蛋黃醬、色拉醬、面包或乳酪食物） 或動(dòng)物飼料(例如，擠出和粒化的動(dòng)物飼料或粗混合飼料）。"預(yù)制食品"意指經(jīng)批準(zhǔn)供人消 費(fèi)的任何預(yù)包裝食品。
[0045]如本文中所用，術(shù)語"食料"是指適合人或動(dòng)物消費(fèi)的任何物質(zhì)。
[0046]如本文中所用，術(shù)語"功能性食品"是指已向其中添加了生物活性補(bǔ)充劑的食品。 [0047]如本文中所用，術(shù)語"嬰兒食品"是指針對嬰兒配制的食品諸如嬰兒食品。
[0048]如本文中所用，術(shù)語"老年食品"是指針對老年人配制的食品。
[0049]如本文中所用，術(shù)語"孕期食品"是指針對孕婦配制的食品。
[0050]如本文中所用，術(shù)語"營養(yǎng)補(bǔ)充劑"是指被配制成膳食或營養(yǎng)補(bǔ)充劑以用作飲食的 一部分的食品。
[0051] 發(fā)明詳述
[0052] 本發(fā)明提供了用于從生物源提取和制備用于藥物、營養(yǎng)品和功能性食品的脂質(zhì)的 改進(jìn)方法。
[0053] 在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了被設(shè)計(jì)來從起始生物材料提供中性和極性 脂質(zhì)提取物的多級提取工藝。在一些實(shí)施方案中，分離的中性和極性脂質(zhì)提取物隨后被組 合以提供具有所需中性和極性脂質(zhì)含量的脂質(zhì)組合物。
[0054] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，用目標(biāo)濃度的質(zhì)子溶劑對脂質(zhì)進(jìn)行單步提取，將其 調(diào)整至生物材料的水含量?？赏ㄟ^溶劑的極性平衡或優(yōu)化極性脂質(zhì)與中性脂質(zhì)之間的比 率?？赏ㄟ^利用下述質(zhì)子溶劑的后續(xù)洗滌過程來進(jìn)一步提高極性脂質(zhì)的比率。在所述單步 提取和隨后3-5個(gè)洗滌步驟后，當(dāng)從其中磷脂包含40%w/w的脂質(zhì)（即，磷脂的重量/原料的 總重量）的原料產(chǎn)生時(shí)，富含極性脂質(zhì)的提取物通常含有約55-60%w/w的磷脂（即，磷脂的 重量/洗滌的磷脂提取物的總重量）。在其它實(shí)施方案中，將生物原料與較強(qiáng)的質(zhì)子溶劑接 觸，以獲得磷脂被高度富集的脂質(zhì)提取物。
[0055] 在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述提取在使得極性脂質(zhì)被提取至液相（即，極性脂質(zhì)溶液） 中并且中性脂質(zhì)優(yōu)先保持與生物材料結(jié)合的條件下進(jìn)行。質(zhì)子溶劑包括具有與氧(如在羥 基中）或氮(如在胺基中）結(jié)合的氫原子的任何溶劑。一般而言，含有不穩(wěn)定的H+的任何溶劑 被稱為質(zhì)子溶劑。此類溶劑的分子容易將質(zhì)子(H+)供給試劑。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述質(zhì)子 溶劑是有機(jī)質(zhì)子溶劑。合適的有機(jī)質(zhì)子溶劑包括，但不限于，正-丁醇、正-丙醇、異丙醇、硝 基甲烷、乙醇和甲醇。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述質(zhì)子溶劑是乙醇。在優(yōu)選實(shí)施方案中， 在約-10C至約50C，優(yōu)選地約10C至30C的溫度下用質(zhì)子溶劑提取生物原料。在優(yōu)選實(shí)施方案 中，所述質(zhì)子溶劑的濃度為至少超過90%、95%或98%w/w的質(zhì)子溶劑（即，質(zhì)子溶劑的重 量/稀釋的溶劑溶液的總重量），或?yàn)榧s100%純。在一些實(shí)施方案中，以質(zhì)子溶劑:生物原料 為約1:1至10:1，優(yōu)選地約3:1至7:1，最優(yōu)選約5:1的比率使用質(zhì)子溶劑。在一些優(yōu)選實(shí)施方 案中，添加質(zhì)子溶劑以使得當(dāng)與所述生物材料中的水分組合時(shí)質(zhì)子溶劑的濃度為約70%至 約95%。該步驟產(chǎn)生極性脂質(zhì)(尤其是磷脂）富集的極性脂質(zhì)溶液，和含有中性脂質(zhì)的生物 殘留物。優(yōu)選例如通過離心或過濾或其它合適的方法分離所述極性脂質(zhì)溶液與生物殘留 物。
[0056] 在一些實(shí)施方案中，將水溶液添加至極性脂質(zhì)溶液以稀釋質(zhì)子溶劑。在優(yōu)選實(shí)施 方案中，質(zhì)子溶劑的稀釋導(dǎo)致溶液分離成包含稀釋的質(zhì)子溶劑的上相和下部富含極性脂質(zhì) 的底相。在一些實(shí)施方案中，所述質(zhì)子溶劑的濃度被稀釋至約50%至70%w/w(g卩，質(zhì)子溶劑 的重量/稀釋的溶劑溶液的總重量），優(yōu)選至約60%w/w。在一些實(shí)施方案中，分離所述富含 極性脂質(zhì)的底相，以提供富含極性脂質(zhì)的提取物。隨后可洗滌所述富含極性脂質(zhì)的提取物 或可以例如通過蒸發(fā)除去殘留溶劑和水分。
[0057] 在一些實(shí)施方案中，用質(zhì)子溶劑溶液(優(yōu)選地包含用于初始提取步驟的同一質(zhì)子 溶劑)洗滌所述富含極性脂質(zhì)的提取物。優(yōu)選地以極性脂質(zhì)(尤其是磷脂)難溶于其中的濃 度使用質(zhì)子溶劑。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述洗滌步驟提供包含質(zhì)子溶劑溶液的上相和當(dāng)分 離時(shí)提供富含極性脂質(zhì)的提取物的富含極性脂質(zhì)的底相。在每一個(gè)洗滌步驟中，將從先前 步驟分離的富含極性脂質(zhì)的提取物與新鮮質(zhì)子溶劑溶液再混合，并且優(yōu)選地再次分離所述 富含極性脂質(zhì)的提取物。在優(yōu)選實(shí)施方案中，洗滌步驟中使用的質(zhì)子溶劑溶液包含約30% 至約70%w/w的質(zhì)子溶劑（即，質(zhì)子溶劑的重量/稀釋的溶劑溶液的總重量），優(yōu)選約40%至 60%w/w的質(zhì)子溶劑，溶液的其余部分為水或其它用于質(zhì)子溶劑的合適的稀釋劑。在優(yōu)選實(shí) 施方案中，所述洗滌步驟使用約0.5:1至5:1的極性脂質(zhì)提取物:稀釋的質(zhì)子溶劑的比率。所 述洗滌步驟可重復(fù)多次，例如，至少2次、3次、4次、5次或多至約10次，優(yōu)選地重復(fù)約2至5次。 所述洗滌過程導(dǎo)致洗滌的富含極性脂質(zhì)的提取物。
[0058] 在一些實(shí)施方案中，提供了甚至更純的磷脂濃縮物。這些濃縮物可通過使本發(fā)明 中描述的富含極性脂質(zhì)的提取物經(jīng)歷本領(lǐng)域中已知的沉淀來獲得。在一些實(shí)施方案中，所 述沉淀步驟在約-20C至約+20C的溫度下，更優(yōu)選在約4C的溫度下利用純丙酮進(jìn)行以提供富 含極性脂質(zhì)的沉淀。在一些實(shí)施方案中，重復(fù)該沉淀步驟例如2至5次，優(yōu)選約3次，以提供富 含極性脂質(zhì)的沉淀。通過該技術(shù)，可除去幾乎全部的剩余中性脂質(zhì)。在其他實(shí)施方案中，磷 脂可以通過色譜，例如，硅膠色譜來濃縮。
[0059] 在一些實(shí)施方案中，優(yōu)選地通過減壓蒸發(fā)從洗滌的富含極性脂質(zhì)的提取物或富含 極性脂質(zhì)的沉淀中除去殘留溶劑和水分，以提供固體的富含極性脂質(zhì)的組合物。
[0060] 在一些實(shí)施方案中，洗滌的富含極性脂質(zhì)的提取物的特征優(yōu)選地在于包含至少 50 %、60 %、70 %或75 %w/w的磷脂（即，磷脂的重量/洗滌的富含極性脂質(zhì)的提取物的總重 量）。在一些實(shí)施方案中，洗滌的富含極性脂質(zhì)的提取物包含約30%至99%w/w、40%至60% w/w或50 %至70 %w/w的磷脂。在一些實(shí)施方案中，洗滌的富含極性脂質(zhì)的提取物的特征在 于包含少于約3 %、2 %、1 %、0.5 %或0.1 %w/w的溶血磷脂（即，溶血磷脂的重量/洗滌的富 含極性脂質(zhì)的提取物的總重量）。在一些實(shí)施方案中，洗滌的富含極性脂質(zhì)的提取物的特征 在于具有小于500113/〇11，優(yōu)選小于300113/〇11，最優(yōu)選小于200113/〇11(在飽和的60%的乙醇溶 液中測量的）的電導(dǎo)率。
[0061] 在一些實(shí)施方案中，所述富含極性脂質(zhì)的沉淀的特征優(yōu)選地在于包括至少75%， 80%，85%或80%?/?的磷脂（8卩，磷脂的重量/富含極性脂質(zhì)的沉淀的總重量）。在一些實(shí)施 方案中，洗滌的富含極性脂質(zhì)的提取物的特征在于包含小于約3%、2%、1 %、0.5%或0.1% w/w的溶血磷脂（即，溶血磷脂的重量/富含極性脂質(zhì)的沉淀的總重量）。
[0062] 從所述方法獲得的富含極性脂質(zhì)的磷蝦油組合物不同于天然存在的磷蝦油。然而 溶血磷脂的含量優(yōu)選為低的并且本發(fā)明提供了溶血磷脂含量的提高(與可獲得的磷蝦油相 比），在一些實(shí)施方案中，所述組合物包含大于0.01 %、〇. 05 %、0.1 %或0.2%w/w(即，溶血 磷脂的重量/富含極性脂質(zhì)的沉淀的總重量）的磷脂的下限。至于所述溶血磷脂含量，2-溶 血磷脂通常占優(yōu)勢。游離脂肪酸表明C-14、C-16和C-18脂肪酸而非EPA和DHA的存在如在SN-2位置水解后所預(yù)期的?？稍O(shè)想，該降解途徑是在SN-1位置上進(jìn)行水解，隨后進(jìn)行體外反式 酯化，從而產(chǎn)生2-溶血磷脂。從本發(fā)明的方法獲得的富含極性脂質(zhì)的磷蝦油組合物也被氧 化至一定程度，如通過低水平的未在自然界中發(fā)現(xiàn)的聚合磷脂以及某些醛類的存在所證 明。
[0063] 從本發(fā)明的方法獲得的富含極性脂質(zhì)的磷蝦油組合物還表現(xiàn)出改變的蝦青素含 量。蝦青素因氧化和加熱而被降解，并且在加工過程中蝦青素二酯:單酯的比率因非質(zhì)子溶 劑洗滌而偏移。二酯形式在磷蝦體內(nèi)占優(yōu)勢。通過測量487nm與390nm處的吸收之間的比率， 可測定蝦青素含量的這種偏移程度。在一些實(shí)施方案中，蝦青素單酯:蝦青素二酯的比率大 于約2:1、3:1、4:1、5:1或10:1。在其它實(shí)施方案中，蝦青素單酯:蝦青素二酯的比率的范圍 優(yōu)選為約2:1至100:1、3:1至50:1、4:1至20:1、5:1至20:1或10:1至50:1。在一些實(shí)施方案 中，所述富含極性脂質(zhì)的組合物包含小于約50、40、30、20、10或511^/1^化口1]1)的奸青素二酯。 在本文中所述的提取和洗滌方法中使用非質(zhì)子溶劑還可導(dǎo)致未在磷蝦體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的脂肪酸 酯諸如脂肪酸乙酯的產(chǎn)生。本文中所述方法的優(yōu)勢在于這些脂肪酸酯通常通過洗滌步驟除 去至極低水平。因此，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含少于約1.0%、0.5%、0.1%、 0.05%或0.01%w/w的脂肪酸酯，優(yōu)選乙酯（即，乙酯-或其它酯的重量/富含極性脂質(zhì)的組 合物的總重量）。在一些實(shí)施方案中，所述組合物具有痕量脂肪酸酯(優(yōu)選乙酯）的下限，并 且在一些實(shí)施方案中，包含超過約0.001 %或0.005%的脂肪酸酯，諸如脂肪酸乙酯。
[0064] 在一些實(shí)施方案中，所述富含極性脂質(zhì)的組合物的特征優(yōu)選地在于包含至少 70 %、80 %、85 %、90 %或95 %w/w的磷脂（即，磷脂的重量/固體的富含極性脂質(zhì)的組合物的 總重量）。在一些實(shí)施方案中，所述固體的富含極性脂質(zhì)的組合物的特征在于包含少于約 3%、2%、1%、0.5%或0.1%w/w的溶血磷脂（即，溶血磷脂的重量/固體的富含極性脂質(zhì)的 組合物的總重量）。
[0065] 在一些實(shí)施方案中，所述洗滌的富含極性脂質(zhì)的提取物、富含極性脂質(zhì)的沉淀和 固體的富含極性脂質(zhì)的組合物的進(jìn)一步特征在于包含具有以下結(jié)構(gòu)的磷脂化合物的混合 物：
[0066]
[0067] 其中R1和R2選自由以下組成的組:脂肪酸部分和-H，并且R3為Η或選自膽堿、乙醇 胺、肌醇或絲氨酸部分，磷脂化合物的混合物在位置R3上包含超過約85%或90%的膽堿部 分（即，mol %，膽堿部分的摩爾數(shù)/磷脂化合物的總摩爾數(shù))和超過約30%w/w的ω-3脂肪酸 部分（g卩，ω-3脂肪酸部分的重量/磷脂化合物的重量），其中超過約90%w/w的ω-3脂肪酸 部分（g卩，ω-3脂肪酸部分的重量/脂肪酸部分的總重量)在位置R2上。在一些實(shí)施方案中， 所述組合物的特征在包含少于約3%、2%、1%、0.5%或0.1 %w/w的溶血磷脂（即，溶血磷脂 的重量/固體的富含極性脂質(zhì)的組合物的總重量）。
[0068]在一些實(shí)施方案中，ω -3脂肪酸部分優(yōu)選選自由以下組成的組:二十碳五烯酸、二 十二碳六烯酸及其組合。在一些實(shí)施方案中，所述ω -3脂肪酸部分選自由以下組成的組:二 十碳三烯酸(ΕΤΕ; 20:3(η-3);全-順式-11，14，17-二十碳三烯酸）；二十碳四烯酸(ΕΤΑ; 20:4 (η-3);全-順式-8，11，14，17-二十碳四烯酸）；二十碳五烯酸(ΕΡΑ; 20:5(η-3);全-順式-5， 8，11，14，17-二十