的幼苗按隨機(jī)區(qū)組分置溫度為26度，光照時(shí) 間為14h/d的溫室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)期間及時(shí)補(bǔ)充滅菌水。
[0030] ⑶待花生生長(zhǎng)到花期時(shí)，用葉綠素計(jì)SPAD-502P1US測(cè)葉片葉綠素含量。生長(zhǎng)45天 后收獲，立即測(cè)量地上部株高、鮮重、干重、根瘤重、根瘤固氮活性?；ㄉ龉痰钚詸z測(cè) 采用乙炔還原法。。測(cè)量結(jié)果如下：
[0031] 表1花生根瘤菌盆栽實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0032]
[0033] 由表1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，花生根瘤菌(Bradyrhizobium sp. )nC61059具有明 顯的促生和固氮能力，跟其他菌株相比固氮能力優(yōu)勢(shì)明顯。
[0034] 施用過(guò)花生根瘤菌(Bradyrhizobium sp. )nC61059的花生植株與對(duì)照組相比，單 株葉綠素含量提尚12.28%，單株鮮重提尚40.60%，單株固氣活性提尚695%。
[0035] 為了進(jìn)一步確定本實(shí)施根瘤菌菌株YIC61059的系統(tǒng)進(jìn)化地位，通過(guò)對(duì)其16SrRNA 基因進(jìn)行擴(kuò)增構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)。PCR反應(yīng)采用通用引物：正向引物27F和反向引物 1492R1CR反應(yīng)體系為：反應(yīng)體系50yL體積，反應(yīng)液組成：lyL DNA模板，25yL2 XMastarMix， lyL 27F，lyL 1492R，超純水補(bǔ)足至SOyl^PCR擴(kuò)增程序:95°C5min;30個(gè)循環(huán)(94°Clmin，56 °C lmin，72°C 1.5min); 72°C5min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.0 %瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)合格后送北京奧科 鼎盛生物科技有限公司測(cè)序。將測(cè)到的DNA序列進(jìn)行人工矯正后，使用NCBI中的BIAST軟件 在線比對(duì)，經(jīng)過(guò)比對(duì)，本實(shí)施菌株與參比菌株Bradyrhizobium liaoningense USDA 3622τ 相似度為99.9%，所以斷定這株菌株為慢生根瘤菌屬，在上述盆栽實(shí)驗(yàn)中與花生有較好的 結(jié)瘤效果，于是可以確定它為花生根瘤菌。
[0036] 慢生根瘤菌（Bradyrhizobium sp. )"nC61059 16S rRNA序列
[0037]
[0038] 3高效固氮花生根瘤菌YIC61059的菌劑制備與應(yīng)用
[0039]⑴實(shí)驗(yàn)時(shí)間為7月上旬至10月中旬。小區(qū)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)圖如附圖1。將實(shí)驗(yàn)小區(qū)土地平 整并起壟，壟間距約1.6m。參照實(shí)施例2中的菌株活化方法將本實(shí)施菌株活化培養(yǎng)制成根瘤 菌劑。
[0040] 挑取顆粒飽滿、大小均勻的花生種子，在陰涼無(wú)陽(yáng)光處將花生種子放入活化的接 種菌液中浸泡20min。
[0041] 實(shí)驗(yàn)組將粘有根瘤菌劑的種子均勻播種至試驗(yàn)田中，行間距為40cm，株距10cm，播 種深度為5cm。實(shí)驗(yàn)對(duì)照組均不施加根瘤菌劑，直接將種子播種至整理好的試驗(yàn)田中，行距、 株距、種植深度都與實(shí)驗(yàn)組相同。其中施肥對(duì)照組按每667m 2施過(guò)磷酸鈣1.5kg，硫酸鉀 8.0kg，尿素4.8kg用量施加肥料。
[0042]播種后立即用大水漫灌，及時(shí)噴施除草劑乙草胺。50%乙草胺每667m2用量100~ 150mL，噴施時(shí)按規(guī)定用量加水混勻后均勻噴施于壟面。
[0043] 將大壟中雙行的花生覆膜，膜寬100cm，厚度為0.005~0.006mm，透光率為70%~ 90%，膜與壟面貼實(shí)無(wú)褶皺，減少雜草的生長(zhǎng)。
[0044] ⑵田間管理
[0045] 花生始花期植株生長(zhǎng)旺盛，有效花大量開(kāi)放，大批果針陸續(xù)入土，應(yīng)及時(shí)檢查將覆 膜揭開(kāi)以免導(dǎo)致下針困難，結(jié)果率、飽果率降低?；ㄉ鼍痰芰^強(qiáng)，固氮量基本可 滿足自身需求?；ㄉL(zhǎng)期間要及時(shí)清除田間雜草。
[0046]花生既怕干旱又怕漬水，要以土壤含水量保持60%為宜，切忌土壤含水量過(guò)高，過(guò) 度干旱也易降低花生產(chǎn)量。應(yīng)根據(jù)降雨量的多少及時(shí)補(bǔ)充水量和排澇工作。
[0047]當(dāng)中下部葉片轉(zhuǎn)黃脫落，多數(shù)莢果果殼硬化，種子顆粒飽滿、光潤(rùn)、呈現(xiàn)品種特有 的色澤時(shí)收獲。收獲時(shí)對(duì)花生主側(cè)根長(zhǎng)度和果實(shí)鮮重進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。收獲后及時(shí)晾曬，稱量 果實(shí)干重，統(tǒng)計(jì)果實(shí)百仁重和千克仁數(shù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)結(jié)果如圖2,3及表2。
[0048] 表2為接種菌株YIC61059種植花生的田間小區(qū)試驗(yàn)中花生的百粒重和千克仁數(shù)。
[0049]
[0050] 統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，接種本實(shí)施菌株YIC61059的小區(qū)花生主根和側(cè)根長(zhǎng)度均較不施肥 處理的花生大。同時(shí)與不施肥的花生相比，接種YIC61059的花生單株果實(shí)鮮重增加了 18.98%，單株果實(shí)干重增加24.48%，促生增產(chǎn)效果明顯，且與施肥處理相比差距不顯著。 接種本實(shí)施菌株YIC61059的花生百粒重均大于不施肥和施肥處理的花生，同時(shí)千克仁數(shù)也 小于其他兩個(gè)對(duì)照處理。此數(shù)據(jù)結(jié)果表明接種YIC61059能夠有效提高花生果仁品質(zhì)，增加 果實(shí)飽滿程度。
[0051 ]因此，本實(shí)施菌株YIC61059在花生的種植應(yīng)用中能夠顯著促進(jìn)花生的生長(zhǎng)及果實(shí) 產(chǎn)量品質(zhì)的提高，達(dá)到顯著增產(chǎn)的目的;此外，本實(shí)施菌株根瘤菌劑是綠色環(huán)保的微生物肥 料，其在花生種植上的應(yīng)用和推廣能夠有效降低生產(chǎn)成本，提高作物產(chǎn)量、改善作物品質(zhì)， 減少環(huán)境污染，并在一定程度上改善土壤的理化性狀，促進(jìn)農(nóng)業(yè)的長(zhǎng)遠(yuǎn)和可持續(xù)發(fā)展。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種花生慢生根瘤菌，其特征在于:慢生根瘤菌(Bradyrhizobium sp. )YIC61059,該 菌株已于2015年10月15日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心（簡(jiǎn)稱 CGMCC，地址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)），其保藏編號(hào)為CGMCC No. 11507。2. 按權(quán)利要求1所述的花生根瘤菌的應(yīng)用，其特征在于:所述根瘤菌在促進(jìn)花生生長(zhǎng)中 的應(yīng)用。3. 按權(quán)利要求2所述的花生慢生根瘤菌的應(yīng)用，其特征在于:所述根瘤菌在促進(jìn)花生種 植中作為產(chǎn)量增產(chǎn)劑的應(yīng)用。4. 按權(quán)利要求2或3所述的花生慢生根瘤菌的應(yīng)用，其特征在于:將所述慢生根瘤菌于 TY液體培養(yǎng)基中28 °C，180rpm搖床震蕩培養(yǎng)2-3天，待菌液0D6Q(^ 1.0;將所得菌液直接噴灑 在花生種子表面，而后將噴灑有菌液的花生種子直接播種，即可使花生產(chǎn)量得以增長(zhǎng)。
【專利摘要】本發(fā)明屬應(yīng)用微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的說(shuō)是一種花生慢生根瘤菌YIC61059及其應(yīng)用。慢生根瘤菌(Bradyrhizobium？sp.)YIC61059，該菌株已于2015年10月15日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào))，其保藏編號(hào)為CGMCC？No.11507。本發(fā)明菌株生長(zhǎng)速度快，共生固氮能力強(qiáng)，在溫室和大田環(huán)境下能夠顯著促進(jìn)花生的生長(zhǎng)，提高花生的產(chǎn)量；可用于制作高效根瘤菌劑，減少化肥使用造成的環(huán)境污染，實(shí)現(xiàn)增產(chǎn)、節(jié)氮、生態(tài)的協(xié)調(diào)一致，因此本發(fā)明在花生種植業(yè)上有廣闊的應(yīng)用前景。CGMCC No.1150720151015
【IPC分類】A01P21/00, C12N1/20, A01N63/00, C12R1/41
【公開(kāi)號(hào)】CN105567615
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610141897
【發(fā)明人】解志紅, 吳海龍, 李巖, 劉衛(wèi), 任承鋼, 姜南, 楊金保
【申請(qǐng)人】中國(guó)科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所
【公開(kāi)日】2016年5月11日
【申請(qǐng)日】2016年3月14日